学术投稿

柴胡ISSR-PCR反应体系的建立与优化

隋春;魏建和;陈士林;杨新全;杨成民

关键词:柴胡, 基因组DNA提取, ISSR-PCR
摘要:目的 建立适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系;筛选适宜引物,并确定佳退火温度.方法 CTAB法提取叶片DNA,通过单因子实验分别找出合适的ISSR-PCR反应条件,利用梯度PGR确定引物佳退火温度.结果 适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系为25μl总体积中含有1×taq酶缓冲液,2.0 mmol/L MgCl2,各0.15 mmol/L的dNTPs.0.3 μmol/L引物,1.5 U Taq酶(上海生工),20 ng模板DNA,2%去离子甲酰胺.在100条引物中筛选出30条扩增条带清晰且条带数目较多的引物,佳退火温度为49.9~63.6℃(因引物不同而异).结论 建立了柴胡ISSR-PCR反应体系,筛选出30条引物并确定了佳退火温度,为应用ISSR技术鉴定柴胡种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础.
时珍国医国药杂志相关文献
  • 刍议《中医诊断学》PBL教学法的应用

    PBL教学法是以学生为中心、以u问题解决为中心的教学方法.中医诊断学应用PBL教学法有其必要性和可行性,教学效果良好,但要注意选择适当的内容,中医诊断学PBL教学法的应用亦有其局限性.

    作者:唐亚平 刊期: 2008年第08期

  • 中药内服结合穴位埋线治疗黄褐斑33例临床观察

    目的 观察中药内服结合穴位埋线治疗黄褐斑的疗效.方法 随机将65例患者分为治疗组(33例)和对照组(32例),治疗组使用中药内服结合穴位埋线疗法,对照组内服维生素C片、维生素E胶囊.结果 治疗组与对照组相比,有显著性差异(P<0.05).结论 中药结合穴位埋线疗法对黄褐斑有较好疗效.

    作者:钟宏量;蒙珊 刊期: 2008年第08期

  • 七缬和胃胶囊处方的组方研究

    目的 对苗药七缬和胃胶囊进行初步的组方研究,为新药开发打基础.方法 运用混料均匀设计将组成七缬和胃胶囊的3个成分配制成9种不同的复方,通过冰醋酸导致小鼠疼痛、剪尾法测定凝血时间的方法对各成分所占比例进行筛选.结果 该方程相关系数r=0.930 29,P=0.049 4,通过回归方程筛选出镇痛、止血效果好的复方配比.结论 应用均匀设计确定复方佳配比的方法是可行的,通过实验结果得出的七叶一枝花浸膏、宽叶缬草挥发油乳化液、宽叶缬草水提物浸膏粉的佳配比为5:89:6(质量百分比).

    作者:武孔云;黄勇其;李星;冯华;梁光义 刊期: 2008年第08期

  • 冠心康颗粒质量标准的初步研究

    目的 建立冠心康颗粒的质量标准.方法 采用薄层色谱(TLC)鉴别处方中的赤芍、降香、川芎,用高效液相色谱(HPLC)法测定丹参中丹参素钠的含量.结果 在TLI图谱中可检出赤芍、降香、川芎的特征斑点;丹参素钠线性范围在0.9~9.0μg,r=0.994,精密度实验脚=0.7%;平均回收率为99.2%.结论 所采用的方法准确、可靠,可行性及重复性良好,能有效控制该制剂的质量.

    作者:韦文俊;罗远 刊期: 2008年第08期

  • 益母草不同采摘期、不同用药部位中含盐酸水苏碱的比较研究

    目的 对不同采摘期、不同用药部位益母草中所含盐酸水苏碱进行比较比较,找出合理的用药方案.方法 薄层色谱(TLC)法以正丁醇-盐酸-醋酸乙酯(8:3:1)为展开剂,稀碘化铋钾试液为显色剂.结果 童子益母草根、茎、叶、全草中盐酸水苏碱含量都很高,尤其以叶中为多,茎中略少,干益母草叶(包括花)中盐酸水苏碱含量较高,其次是全草,茎则含量较低.结论 如果以水苏碱作为益母草的用药目的则童子益母草优于干益母草,干益母草中叶优于茎.

    作者:熊南燕;刘艳丽;孔增科 刊期: 2008年第08期

  • 中医证候的基因芯片研究近况

    用现代科学技术研究中医证候是中医研究的重要课题.文章简要介绍了用基因芯片探讨中医证候本质的研究近况,主要包括肾阳虚证、虚寒证、心阳虚证、肺虚证、脾虚证和寒热证差异基因表达谱的研究,从而为从基因水平上阐释中医证候的本质特征和进一步建立中医证候的基因组学做了有意义的探索.

    作者:杨裕华;李震 刊期: 2008年第08期

  • 高效液相色谱法测定银曲胶囊中银杏总黄酮醇苷的含量

    目的 银曲胶囊中银杏总黄酮醇苷的含量测定.方法 用高效液相色谱法(HPLC)和DAD紫外检测器测定银曲胶囊中总黄酮醇苷的含量.结果 槲皮素浓度在9.60~76.80μg/ml,山柰素在7.33~58.62μg/ml,异鼠李素在1.76~14.08 μg/ml之间浓度与峰面积呈良好的线性关系.结论 根据3批样品的检测结果,规定银曲胶囊中总黄酮醇苷的含量不低于6 mg/粒.

    作者:顾燕;刘萌;张现涛;邵文豪 刊期: 2008年第08期

  • 转基因何首乌毛状根化学成分的研究

    目的 研究转基因何首乌毛状根中的化学成分.方法 采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱等方法分离何首乌毛状根中的化学成分,并根据理化性质和波谱数据鉴定其化学结构.结果 从何首乌毛状根60%乙醇提取物中分离得到了12个化合物.利用理化性质及波谱技术确定其结构分别为:2,3,5,4'~四羟基反式二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄糖苷(1)、没食子酸(2)、没食子酸甲酯(3)、3,5-二羟基苯甲酸(4)、丁香酸(5)、对羟基苯甲酸(6)、胡萝卜苷(7)、B-谷甾醇(8)、豆甾醇(9)、烟酸(10)、碳直链十七酸(11)、碳直链三十一酸(12).结论 上述12个化合物均为首次从转基因何首乌毛状根中分离得到;化合物3,4,5,6为首次从该种植物中分离得到.

    作者:严春艳;马娜;王金林;于荣敏 刊期: 2008年第08期

  • 分光光度法测定中草药中硒(Ⅳ)的含量

    目的 采用分光光度法测定硒(Ⅳ)的含量.方法 在硝酸介质中,用Se(Ⅳ)催化KBrO3氧化亚甲蓝的褪色反应.LogA0/A与硒的含量呈现出良好的线形关系.结果 方法的测定范围在0~5μg·dm-3,灵敏度0.352 7μg·dm-3.此体系可选择多种阳离子,如:Cu2+,K+,Fe3+等可在测定Se(Ⅳ)时共存.结论 用于中草药中Se(Ⅳ)的测定,效果较好.

    作者:于朝云;丁良;杨慧;唐志远 刊期: 2008年第08期

  • 中西医结合抗肿瘤的免疫学机制研究进展

    从非特异性免疫及特异性免疫两个方面对中西医结合抗肿瘤机制进行了综述.

    作者:刘开扬;张洪泉 刊期: 2008年第08期

  • 反相高效液相色谱梯度洗脱法测定七叶神安胶囊中人参皂苷Rb3的含量

    目的 建立反相高效液相色谱梯度洗脱法测定七叶神安胶囊中人参皂苷Rb3的含量.方法 色谱柱为Hypersil C18(5 μm,4.6 mm ×200 mm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱:0~14 min,19→33;14~16 min,33→49,流速为1.0ml/min,检测波长为203 nm,柱温为30℃.结果 人参皂苷Bb3进样量在1.769 6~10.617 6μg(r=0.999 9)的范围内线性关系良好,平均回收率为98.22%,RSD=1.26%.结论 该方法简便、准确、重现性好,可用于七叶神安胶囊的质量控制.

    作者:王晖;袁海铭;陈梅荣 刊期: 2008年第08期

  • 补阳还五汤加减治疗脑梗塞33例

    补阳还五汤有益气活血行淤、扩张脑血管、改善腩循环之功能,对气虚血淤为主的脑梗塞治疗有较好的疗效.笔者临床运用本方治疗脑梗塞33例,总有效率达93.6%.报道如下.

    作者:梁向新;王君 刊期: 2008年第08期

  • 玛咖提取物的激素样活性实验研究

    目的 初步研究玛咖提取物的激素样活性作用.方法 采用雄性去势小鼠,经灌胃玛咖不同提取物22 d后.观察各组小鼠前列腺和精囊腺的重量并测定血清中睾丸酮的含量.用幼龄雌性小鼠,灌胃玛咖醇提物10 d后,观察各组小鼠子宫、卵巢重量以及阴道上皮角化细胞.结果 玛咖提取物可以显著提高雄性去势小鼠前列腺和精囊腺重量,但并不升高血清睾丸酮水平.玛咖醇提取物对雌性幼年小鼠子宫、卵巢重量以及阴道上皮角化细胞没有显著影响.结论 玛咖具有弱的雄激素样作用,但对幼年雌性小鼠未显示雌激素样活性.

    作者:张永忠;程华 刊期: 2008年第08期

  • 榕树叶总黄酮超声提取工艺条件的研究

    目的 为充分利用榕树叶资源,研究超声提取榕树叶总黄酮的工艺条件.方法 以总黄酮含量为考察指标,采用正交设计的方法研究超声波辅助提取榕树叶总黄酮的工艺条件.结果 影响榕树叶总黄酮超声提取效果的主次因素为:乙醇浓度>溶剂量>提取次数>超声时间,榕树叶总黄酮佳提取工艺为16倍量70%乙醇超声提取3次,40 min/次.结论 优化的提取方法效率高,稳定性好,提取总黄酮含量可达2.42%.

    作者:陈洪涛;蔡丹昭;林立波 刊期: 2008年第08期

  • 柴胡有效成分提取工艺的研究

    目的 确定柴胡有效成分提取的佳工艺.方法 以柴胡中挥发油吸收度和柴胡皂苷a的含量为指标,采用单因素实验筛选主要因素和水平,再以正交实验筛选柴胡有效成分提取佳工艺.结果 佳工艺参数为40℃温浸,收集相当于药材2倍量蒸馏液,继用8倍量含5%氨水的95%乙醇回流1 h提取柴胡皂苷,可使挥发油吸收度达0.941,柴胡皂苷a的含量达0.32%.结论 该工艺为柴胡有效成分的提取提供了可靠依据,且工艺务件稳定可靠,重复性好.

    作者:肖功胜;杨云;孙维英;冯云霞;朱振华 刊期: 2008年第08期

  • 青钱柳不同外植体组织培养及褐变防止的研究

    目的 探索青钱柳快速繁殖途径和褐变的防止方法.方法 分别在不同季节采取青钱柳的嫩芽、带节茎段和嫩叶作为外植体,对外植体进行4种不同方式的处理后,接种到不同激素种类和激素组合的培养基中进行培养.结果 春季取材更易诱导出愈伤组织和新芽;诱导茎段出芽的佳培养基为B5+BA3.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+IBA0.01 mg/L;适宜于嫩叶、嫩芽愈伤组织诱导的培养基分别为:B5+BA5.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+IBA0.1 mg/L和B5+2.4-D1.0mg/L+BA0.1mg/L;外植体先于4℃低温预处理5 d和直接用烧红的手术7J快速切割外植体后再进行接种可有效减少外植体的褐变.结论 青钱柳组织培养可诱导芽的产生和愈伤组织的形成.

    作者:吴群英;徐庆;李丽亚;梁荣感;龚受基 刊期: 2008年第08期

  • 慢性乙型肝炎患者的生存质量与其中医辨证分型的关系探讨

    目的 测量并评价慢性乙型肝炎湿热蕴脾证和肝郁脾虚证患者的生存质量(QOL).方法 采用SF-36量表,对40例慢性乙型肝炎湿热蕴脾证患者,40例慢性乙型肝炎肝郁脾虚证患者和40例正常对照进行QOL测量与评价.结果 湿热蕴脾证组与肝郁脾虚证组和正常组比较QOL总分明显下降,有统计学意义(P<0.05),肝郁脾虚证组得分低,与湿热蕴脾证组比较有统计学意义(P<0.05);湿热蕴脾证组与正常对照组比较QOL各项得分均下降,以BP,GH,VT,SF,MH明显,有统计学意义(P<0.05);肝郁脾虚证组与湿热蕴脾证组比较,QOL各项得分均下降,除VT下降不甚明显外,其余得分均明显低于湿热蕴脾证组,有统计学意义(P<0.05);肝郁脾虚证组与正常对照组比较,QOL各项得分均明显下降,有统计学意义(P<0.05).结论 湿热蕴脾证组、肝郁脾虚证组和正常对照组比较,患者的生活质量下降,生理、心理、社会机能受到很大影响;湿热蕴脾证组患者由于情感问题所造成的职能限制较轻微;肝郁脾虚证组虽然其与湿热蕴脾证组相比肝损害较轻,病情相对稳定但生活质量却明显低于湿热蕴脾证组.

    作者:尹德辉;林丹 刊期: 2008年第08期

  • 社区儿童预防接种工作中的健康教育

    随着科学技术的发展和社会的进步,免疫(预防)接种已成为预防控制传染病的重要手段.而社区儿童免疫接种工作具有服务面广,工作量大,时间持久,环节多,技术性强,必须有儿童家长和监护人参与.

    作者:陈秋霞 刊期: 2008年第08期

  • SITS在实验性心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

    目的 阐明SITS所产生的心肌保护作用.方法 建立缺氧/复氧损伤(A/R)模型及SITS预适应模型,测定心肌细胞的搏动频率、细胞存活率以及细胞培养液中LDH的变化.结果 SITS预处理能明显提高A/R损伤后细胞存活率,减少LDH的漏出.与A/R组相比均有显著性差异(P<0.01).结论 SITS预处理对心肌细胞A/R具有保护作用.此研究为寻找特异性阻断剂,探讨心肌保护药物的新靶点提供理论与实验依据.

    作者:彭少君;晏渠如 刊期: 2008年第08期

  • 华桑种质资源桑叶总黄酮含量的分析

    目的 分析不同华桑种质资源桑叶总黄酮含量的差异,为桑叶资源的利用提供科学依据.方法 采用甲醇提取,分光光度法测定.结果 测定的10份华桑种质资源中,保靖4号桑叶总黄酮含量高,为(71.67±2.96)mg/g;德江15号桑叶总黄酮含量低,为(44.56±1.66)mg/g.结论 华桑桑叶总黄酮含量较高,同属华桑的不同桑种质桑叶总黄酮含量差异极显著,但同一原生境的种质桑叶总黄酮含量相近.

    作者:刘利;潘一乐 刊期: 2008年第08期

时珍国医国药杂志

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主管:湖北省黄石市卫生局

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