学术投稿

小鼠NR4A1基因小分子干扰RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定

薛凯;李梅;刁飞扬;凌静;崔毓桂;刘嘉茵

关键词:RNA干扰, 重组腺病毒载体, 核受体NR4A1, 多囊卵巢综合征
摘要:目的:构建表达小鼠NR4A1基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒载体. 方法:根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64 bp寡核苷酸.pShuttle-H1穿梭质粒经BglⅡ、HindⅢ双酶切后,与退火的寡核苷酸进行连接,构建穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA.PmeⅠ酶切pShuttle-H1-siRNA, 然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组.PacⅠ酶切线性化重组质粒pAdEasy-H1-siRNA后转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增.Western blot检测NR4A1基因的表达. 结果:穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA经双酶切和测序证实构建成功,进一步构建了表达小鼠NR4A1基因的siRNA重组腺病毒载体,重组腺病毒AdH1-siRNA/NR4A1感染小鼠睾丸间质细胞瘤细胞(MLTC-1)后显著抑制目的蛋白表达(抑制率为70%~90%). 结论:成功构建了表达小鼠NR4A1基因的siRNA重组腺病毒载体AdH1-siRNA/NR4A1,并在MLTC-1中验证其抑制NR4A1蛋白表达,为进一步研究NR4A1基因在多囊卵巢综合征(PCOS)中的作用奠定了基础.
医学研究生学报杂志相关文献
  • 胆固醇的跨膜外向转运及调控

    组织细胞胆固醇的外向跨膜转运要有ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、ABCG1、B族I型清道夫受体(SR-BI)、载脂蛋白AⅠ(apoAⅠ)/高密度脂蛋白(HDL)等多种膜蛋白的共同参与,并且受过氧化物酶增殖活化受体(PPAR)及肝X受体(LXR)的调控.文中就参与胆固醇跨膜转运过程的膜蛋白与调控因子的结构和功能作一综述.

    作者:史连义;姜玲玲 刊期: 2009年第02期

  • 超声生物显微镜对原发性闭角型青光眼合并白内障患者眼前节结构变化的观察

    目的:应用超声生物显微镜(UBM)观察原发性闭角型青光眼合并白内障患者超声乳化摘除联合人工晶体植入术前后的眼前节结构变化. 方法:对50例78只眼原发性闭角型青光眼合并白内障患者,实施单纯白内障超声乳化摘除联合人工晶体植入术,手术前及术后1个月进行UBM检查,观察眼前节结构的变化,同时监测手术前后的眼压和术后疗效. 结果:UBM检查结果显示,所有患者手术后中央前房深度(ACD)、房角开放距离500(AOD500)、小梁虹膜夹角、小梁睫状体距离(TCPD)与术前比较,差异均有非常显著性统计学意义(P<0.01);巩膜睫状体夹角与术前比较,差异有显著性统计学意义(P<0.05),虹膜厚度(IT)、虹膜悬韧带距离(IZD)、虹膜晶状体夹角与术前比较无显著性差异(P>0.05).在脱离药物治疗后,手术后眼压稳定在正常范围(10~21mmHg),视力均好于手术前. 结论:单纯性白内障超声乳化联合人工晶体植入术可使房角尚未完全粘连的原发性闭角型青光眼患者的眼房角开放、前房加深,有效控制眼压.利用UBM检查可快速、有效、准确地观察眼前节结构,有助于早期进行手术.

    作者:曹春林;黄振平;王理理;薛春燕;史继新 刊期: 2009年第02期

  • 左卡尼汀对大鼠缺血心肌细胞的作用

    目的:研究左卡尼汀预处理对大鼠缺血心肌细胞超微结构的影响及L-型Ca2+通道的作用. 方法:将大鼠随机分为对照组、左卡尼汀组、曲美他嗪组,每组10只,建立缺血模型.光镜及透射电镜观察心肌细胞结构改变;应用膜片钳技术观察L-型钙通道Ca2+内流的变化. 结果:左卡尼汀对大鼠心肌细胞超微结构有保护作用;对缺血心室肌细胞L-型钙通道较对照组及曲美他嗪组有明显的阻滞作用. 结论:左卡尼汀可减轻缺血心肌损伤的程度及范围,保护线粒体,稳定其氧化供能;抑制心室肌细胞L-型钙通道,减少Ca2+的内流,降低钙超载的损伤,从而发挥对缺血心肌的保护作用.

    作者:陈丽娟;李颖;荆翠平;胡春梅 刊期: 2009年第02期

  • 生长激素、谷氨酰胺、改良膳食对短肠综合征患者的治疗作用

    目的:验证生长激素(GH)及谷氨酰胺(Gln)的应用是否可以缩短短肠综合征患者的肠外营养(PN)治疗时间和用量. 方法:选取16名依赖PN的短肠综合征患者,随机分为3个实验组:A组为对照组,口服Gln (0.6g·kg-1·d-1)+GH安慰剂+改良膳食,B组给予Gln安慰剂+GH(8U)+改良膳食,C组给予Gln+GH+改良膳食(n=6).PN采用临床标准方案.4周后,GH及GH安慰剂停止服用,Gln及Gln安慰剂仍继续服用3个月. 结果:B组与A组相比,治疗时间明显缩短,PN用量明显减少(P<0.05).C组治疗时间短(P<0.01).3个月后,只有C组可以维持治疗效果. 结论:GH+Gln+改良膳食治疗的短肠综合征患者可以间断给予PN或减少PN的用量及频率.

    作者:曾兆林;迟强;彭威 刊期: 2009年第02期

  • Wnt signaling in liver physiology and pathology

    1 Wnt/β-catenin signalingThis signaling pathway is known to play key roles during development and in maintaining homeostasis in many adult tissues. Its aberrant activation is associated with cancers in many tissues such as breast, colon, pancreas, skin and liver.

    作者: 刊期: 2009年第02期

  • 甘露糖结合凝集素与炎性肠病相关性的研究进展

    甘露糖结合凝集素(MBL)属于凝集素家族,是机体先天性免疫的重要成分,有激活补体系统、调理吞噬等作用,并与许多免疫相关性疾病有关.炎性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病,目前普遍认为其发病机制与自身免疫损害密切相关.近年研究表明,MBL基因的多态性导致了其血清水平的个体差异,且与炎性肠病的发病率、临床症状、病程等具有相关性.文中综述了MBL及其与炎性肠病间相关性的研究进展.

    作者:吴瑛;汪芳裕 刊期: 2009年第02期

  • 昂丹司琼、地塞米松预防腹腔镜胆囊切除术术后恶心呕吐和病人自控镇痛治疗的临床观察

    目的:比较昂丹司琼和地塞米松预防全麻下腹腔镜胆囊切除术和术后曲马朵病人自控镇痛(PCA)引起的的恶心、呕吐的临床效果. 方法:选择147例ASAⅠ~Ⅲ级行腹腔镜胆囊切除术女患者,随机分成5组:麻醉诱导前10min静注等渗盐水(P组,n=30例),昂丹司琼组(O组,n=29例),昂丹司琼+地塞米松(OD组,n=29例),昂丹司琼+地塞米松+PCA全量(OD +PCA全量组,n=29例),昂丹司琼+地塞米松+PCA半量(OD +PCA半量组,n=30例).记录各组恶心、呕吐发生次数和疼痛评分. 结果:O组和OD组的恶心呕吐发生率均明显低于P组(P<0.05);OD组的恶心呕吐发生率也低于O组,但两者无统计学差异;PCA组的疼痛评分明显低于O组与OD组(P<0.05),而恶心呕吐的发生率与O组、OD组间无明显差异;PCA半量组的恶心呕吐发生率低于PCA全量组,但两者无统计学差异. 结论:昂丹司琼和地塞米松两者合用预防全麻下腹腔镜胆囊切除术引起恶心、呕吐效果佳;术后曲马朵PCA不会增加腹腔镜胆囊切除术患者恶心呕吐的发生率;半量曲马朵PCA腹腔镜胆囊切除术患者恶心呕吐的发生率低于全量PCA.

    作者:贾宏彬;嵇晴;张利东;周志强;徐建国 刊期: 2009年第02期

  • 人Toll样受体2细胞外区基因重组腺病毒穿梭载体的构建及鉴定

    目的:克隆人Toll样受体2(TLR2)细胞外区基因,并构建含有目的基因的重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-TLR2. 方法:应用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中扩增TLR2细胞外区基因,克隆入pUCm-T载体并转化大肠埃希菌感受态DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及DNA测序分析后,用KpnⅠ和HindⅢ双酶切,将目的片段定向克隆至经相同处理的pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒中,双酶切鉴定并测序验证. 结果:RT-PCR扩增得到约1 000bp的目的基因片段,TA克隆后测序鉴定与GenBank中的序列一致,经酶切连接成功地将目的基因插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中. 结论:成功克隆了人TLR2细胞外区基因,并构建了含目的基因的重组腺病毒穿梭载体.

    作者:孙守勋;李强;石妍;刘静;蒲晓允 刊期: 2009年第02期

  • 神经胶质细胞与神经病理性疼痛

    神经病理性疼痛是一种常见的慢性疼痛,其发生机制复杂,不易治疗,严重影响患者的生活质量,给社会带来巨大的卫生资源压力和经济负担.近年来,人们逐渐认识到神经胶质细胞主导的神经炎症及免疫反应在神经病理性疼痛发生和维持中的重要作用,现就神经胶质细胞与神经病理性疼痛的关系及其调控神经病理性疼痛治疗现状作一综述.

    作者:刘健;李伟彦 刊期: 2009年第02期

  • 利塞膦酸钠胶囊治疗绝经后骨质疏松症

    目的:观察利塞膦酸钠胶囊治疗绝经后骨质疏松症的有效性及安全性. 方法:采用随机、双盲、安慰剂平行对照方法,入选患者随机分入试验组和对照组,试验组晨起口服利塞膦酸钠胶囊,对照组口服安慰剂,2组均在晚间口服维生素D3/碳酸钙(凯思立D片),疗程为12个月.治疗前、治疗6个月、12个月时,测量腰椎和髋部骨密度、摄胸腰椎侧位X线片,并观察心电图、血常规、尿常规、肝肾功能等安全性指标. 结果:共入组42例,在治疗6个月和12个月时,试验组腰椎骨密度的变化与对照组比较均有统计学意义,但2组髋部骨密度之间的变化无统计学意义.观察期间所有患者均无脆性骨折发生,安全性观察指标无异常变化. 结论:利塞膦酸钠胶囊治疗绝经后骨质疏松症是安全有效的,用药6个月内即能明显增加患者腰椎骨密度.

    作者:郭郡浩;姚茹冰;赵智明;刘玉秀;郑均;蔡辉 刊期: 2009年第02期

  • 荧光原位杂交技术在实体瘤诊断中的应用

    作为一种新型的细胞分子遗传学技术, 荧光原位杂交(FISH)是利用荧光标记DNA探针来检测细胞内染色体异常的非放射性原位杂交技术,可检测基因缺失、扩增、异位等异常,并结合组织形态学,提高病理诊断的准确性.文中主要综述其在实体瘤诊断方面的一些应用.

    作者:杜军;周晓军 刊期: 2009年第02期

  • 抑制视网膜新生血管药物的研究进展

    视网膜新生血管存在于多种常见眼病的发展过程中,其发生及发展对眼的视功能有极大的威胁.药物抑制视网膜新生血管有助于对此类疾病的治疗.文中对研究视网膜新生血管的动物模型及药物研究进展作一综述.

    作者:薛春燕;黄振平 刊期: 2009年第02期

  • 4种自身抗体对间接免疫荧光法检测抗中性粒细胞胞质抗体的影响

    目的:观察抗核抗体、抗线粒体抗体、抗高尔基体抗体和抗核糖体P蛋白抗体对间接免疫荧光(IIF)法检测抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)结果的影响. 方法:用IIF法检测4种自身抗体阳性血清可能出现的ANCA荧光图谱;用ELISA法确认上述4种血清的靶抗原. 结果:用乙醇固定的中性粒细胞检测ANCA受自身抗体的影响较大,甲醛固定的中性粒细胞受到的影响较小,同时应用猴肝切片可将这4种自身抗体与ANCA区别. 结论:联合应用猴肝切片与乙醇和甲醛固定的中性粒细胞抗原片,有助于准确判断ANCA结果.

    作者:罗冰;王艾丽;虞伟;刘国瑞;李梅 刊期: 2009年第02期

  • 切除修复交叉互补酶1在非小细胞肺癌中的表达及其对术后铂类辅助化疗的影响

    目的:探讨切除修复交叉互补酶1(ERCC1)在Ⅰ~Ⅲ期非小细胞肺癌(NSCLC)的表达及对术后铂类辅助化疗效果的影响. 方法:应用免疫组化SP方法检测59例Ⅰ~Ⅲ期手术切除、术后铂类辅助化疗NSCLC患者的肿瘤组织中ERCC1的表达.采用χ2检验,Kaplan-Meier生存曲线和COX回归分析,比较ERCC1表达对Ⅰ~Ⅲ期NSCLC手术并术后辅助化疗患者的生存期的影响. 结果:59例患者中,ERCC1表达阳性组31例(52.5%),手术后辅助化疗的总体生存期为20.4个月;ERCC1表达阴性组28例,生存期为36.7个月.Kaplan-Meier生存曲线显示ERCC1阴性组在阳性组之上;Log-Rank检验,两者生存差异具有统计学意义(P=0.019).COX多因素回归示TNM分期和ERCC1表达是该组患者的独立预后因子. 结论:Ⅰ~Ⅲ期NSCLC ERCC1表达阴性组可从铂类辅助化疗中获益,ERCC1可作为独立预后因子.

    作者:吴颖;宋勇;刘红兵 刊期: 2009年第02期

  • 氩氦刀联合全身化疗治疗中晚期非小细胞肺癌的Meta分析

    目的:系统评价氩氦刀联合全身化疗治疗中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的可行性和应用价值. 方法:采用Cochrane系统评价方法,系统检索PUBMED、EBMASE、OVID、CNKI等数据库及相关试验的5.0软件进行Meta分析.共纳入4个研究,423例中晚期NSCLC患者,分为氩氦刀联合全身化疗组(188例)和氩氦刀组(235例). 结果:氩氦刀组与氦刀联合全身化疗组比较,治疗NSLCL近期有效率合并OR值为2.09,95%CI为[1.40~3.14],1年生存率合并RR为1.30 (0.98, 1.72).氩氦刀联合全身化疗的近期疗效与氩氦刀比较,可提高近期临床缓解率,但不能改善1年生存率. 结论:氩氦刀联合全身化疗治疗中晚期NSCLC患者可提高近期疗效,但远期疗效有待观察.需多中心大样本随机对照试验进一步证实.

    作者:费贤树;宋勇;施毅 刊期: 2009年第02期

  • 麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的犬肾传代细胞凋亡的影响

    目的:探讨麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的犬肾传代(MDCK)细胞凋亡的影响. 方法:运用原位末端标记技术和流式细胞术分别检测大无毒限量的麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的MDCK细胞凋亡百分率与细胞周期变化的影响. 结果:麻杏石甘汤能显著降低A型流感病毒感染的MDCK细胞的凋亡百分率,下调其G1/G0期细胞比例,上调其S期、G2/M期细胞比例以及细胞增殖指数(PI)值. 结论:麻杏石甘汤通过调整流感病毒感染的MDCK细胞的细胞周期,降低细胞凋亡百分率而发挥抗流感病毒作用.

    作者:卢芳国;何迎春;肖子曾;伍参荣;张薇;申可佳;周兴;周意香 刊期: 2009年第02期

  • 护生临床实习中法律意识的培养教育

    为探讨如何培养护生在临床护理实习过程中的法律意识,达到预防差错纠纷、保障病人安全目标,通过采取实习初期加强法律知识的教育、实习中期强化法律知识、实习后期加强护理安全警示等应对措施,使护生在带教老师的督导下,全方位认识到遵法、守法、用法的必要性.

    作者:仲继红;胡容;钱慧;王小峰;陈雪莲;朱学敏 刊期: 2009年第02期

  • 胰腺实性-假乳头状瘤的影像学表现和鉴别诊断

    目的:胰腺实性-假乳状瘤是一种好发于年轻妇女少见的低度恶性肿瘤,Frantz于1959年首先报道了本病,其组织发生来源尚未确定.文中探讨胰腺实性-假乳头状瘤的影像学表现,提高对该病的认识和诊断水平. 方法:回顾分析经手术及病理证实的5例胰腺实性-假乳头状瘤的临床及影像资料. 结果:5例患者均为年轻女性,表现为胰腺区巨大囊实性肿块,包膜大多完整,增强后强化明显,与胰腺分界清晰.胰腺实性-假乳头状瘤在T1WI、T2WI上呈混杂信号,肿块体积均较大,邻近结构受压移位.造影增强后肿瘤实质动脉期呈轻度强化,门静脉期呈明显强化,囊性部分增强前后均呈低密度.1例肿块内伴有条状钙化;1例伴有胰管轻度扩张;5例均未见肝内外胆管扩张. 结论:胰腺实性-假乳头状瘤的影像表现有一定特征,结合临床特征,可与其它有类似影像学表现的胰腺肿瘤相鉴别.

    作者:王华斌;李苏建;王中秋;卢光明 刊期: 2009年第02期

  • 乳腺癌保乳术后调强放疗与常规放疗的剂量学比较

    目的:利用三维治疗计划系统(3DTPS),比较乳腺癌保乳术后常规放疗(CRT)与调强放疗(IMRT)剂量学分布的优劣,为乳腺癌保乳术后IMRT的临床推广应用提供依据. 方法:对10例乳腺癌保乳术后患者,利用3DTPS分别设计CRT计划和IMRT计划.处方剂量均为50Gy/25F.用剂量体积、剂量分布图及靶区剂量分布均匀性指数评估CRT与IMRT计划的优劣. 结果:CRT和IMRT两种放疗计划PTV的V95%、V105%、V110%、V115%分别为(98.3±1.9)%、(42.7±15.1)%、(8.2±8.7)%、(2.2±5.3)%和(98.5±1.0)%、(8.6±4.5)%、(0±0.4)%、0,V95%无统计学差异(P>0.05),V105%、V110%有统计学差异(P<0.05);CRT与IMRT的剂量分布均匀性指数分别为1.30±0.14与1.12±0.03,有统计学意义(P<0.05);IMRT与CRT比较,心脏V30、V40分别降低了70.69%、93.33%,肺V20、V30分别降低了17.96%、14.86%,均有统计学差异(P<0.05). 结论:对乳腺癌保乳术后的PTV,CRT和IMRT计划均有较好覆盖,但IMRT较CRT适形度好,剂量分布均匀.IMRT有效降低了心、肺等正常组织的照射剂量.

    作者:曹远东;高恒东;孙新臣;葛小林;林茜;邵玉琴;马春阳;李益坤;雍霞;隋辉 刊期: 2009年第02期

  • 胸外科手术致急性肺损伤的研究进展

    随着胸外科的发展,围手术期并发的急性肺损伤,已日益引起临床工作者的重视.术中多种因素会导致急性肺损伤,现就胸外科手术中急性肺损伤的发病机制及其治疗措施研究进展作一综述.

    作者:陈建;许林 刊期: 2009年第02期

医学研究生学报杂志

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主管:南京军区联勤部卫生部

主办:南京军区南京总医院