学术投稿

人外周血单核细胞3种不同转染方法的比较

叶双梅;阚淳一;杨丽兰;杨洁;马全富;吴明富;卢运萍;王世宣

关键词:外周血, 单核细胞, 腺病毒, 慢病毒, 基因转染
摘要:目的 采用3种不同方法转染原代人外周血单核细胞,以寻找一种简便、高效的单核细胞转染方法.方法 采用人淋巴细胞分离液从健康人外周血中分离出单个核细胞,锥虫蓝拒染法检测细胞存活率.单个核细胞在孔板内培养2 h后吸弃悬浮的淋巴细胞,获得贴壁的单核细胞.分别采用Lipofectamine 2000介导载体质粒(PEGF-N1),慢病毒(NC-GFP-LV)及腺病毒(Adv-GFP)3种方法转染单核细胞,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,并收集细胞上流式细胞仪检测GFP阳性细胞的比例.结果 通过人淋巴细胞分离液分离的单个核细胞的活细胞率>95%,获得的单核细胞数量多,贴壁牢,形态均一.转染48 h后,Lipofectamine 2000介导载体质粒及慢病毒转染的单核细胞无绿色荧光,流式细胞仪检测GFP阳性细胞均<1%,腺病毒转染的单核细胞可见较强绿色荧光,GFP阳性细胞约占10%.结论 腺病毒,而不是Lipofectamine 2000或慢病毒,能有效地将外源基因导入单核细胞内表达.
华中科技大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 重型颅脑损伤患者血清NSE检测及其临床意义

    目的 探讨血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)作为重型颅脑损伤患者神经损伤特异标志物的可行性.方法 选取96例重型颅脑损伤患者(GCS≤8)和25例健康体检者作为研究对象,入院时,按格拉斯哥昏迷评分(GCS)将患者分为特重型组(GCS 3~5分)和重型组(GCS 6~8分);按CT检查结果将患者依损伤类型分为3组:脑挫裂伤和(或)脑内、硬膜下血肿组,弥漫性轴索损伤和脑干损伤组,硬膜外血肿组.采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清NSE的浓度.结果 颅脑损伤患者入院初血清NSE含量较正常对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01);特重型组患者入院初血清NSE含量高于重型组,差异有统计学意义(P<0.01);3种不同类型的颅脑损伤患者之间血清NSE含量差异有统计学意义(P<0.01).动态检测结果显示,血清NSE含量在伤后第3天达到峰值,然后缓慢下降.结论 NSE是判断脑损伤程度比较客观的指标,其含量越高,表示脑损伤程度越重,且可区分不同类型的脑损伤,可作为早期检测重型颅脑损伤的特异性指标.

    作者:李俊;刘红朝;张刚利;谢蕊繁;郭东生;雷霆 刊期: 2011年第02期

  • 成人失神癫痫的临床及脑电图特征分析

    目的 探讨成人失神癫痫的临床及脑电图特征.方法 采用目前国际公认的成人失神癫痫诊断标准,收集2006 年1月至2007年3月期间就诊于华中科技大学同济医学院附属同济医院癫痫中心的成人失神癫痫患者5例,详细记录其一般资料及临床特征,并行清醒/睡眠脑电图记录,分析对比患者成人期典型失神发作的特征变化、脑电图特征及对治疗的反应性.结果 与儿童失神癫痫相比,成人失神癫痫患者的发作时间短暂,意识丧失程度轻微,发作频率明显降低,脑电图可表现为棘慢波节律变快,不对称,阵发性快节律,及放电局灶化趋势.结论 成人失神癫痫是一类特殊的癫痫综合征,具有普通失神癫痫发作的共性,同时也有自身的个性特征,应引起临床关注.

    作者:康慧聪;胡琦;许峰;刘晓艳;刘艳;李巷;刘志广;王媛;唐坤;朱遂强 刊期: 2011年第02期

  • BRMS1对卵巢癌细胞c13*转移侵袭的影响及机制

    目的 探讨乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)对c13*细胞转移侵袭、粘附的影响及机制.方法 由质粒PCMV-HA-BRMS1中扩增目的基因BRMS1,将其插入pcDNA3.1(+)质粒中,构建pcDNA3.1(+)-BRMS1质粒.经酶切及测序鉴定正确后,转染c13*细胞,PCR、Real-time PCR、Western blot检测BRMS1的表达;划痕实验、Transwell实验、粘附实验检测c13*细胞运动、侵袭、粘附能力;Western blot检测整合素β1、p-AKT、AKT表达.结果 成功构建了pcDNA3.1(+)-BRMS1质粒;转染目的基因的c13*细胞中,BRMS1的mRNA和蛋白表达均显著增加,细胞运动、侵袭、粘附能力降低,整合素β1及p-AKT表达均下降,AKT表达无改变.结论 成功构建pcDNA3.1(+)-BRMS1质粒.BRMS1可能通过抑制整合素β1/AKT通路,抑制卵巢癌c13*细胞的运动、侵袭和粘附能力.

    作者:饶玉梅;方勇;韩志强;卢运萍 刊期: 2011年第02期

  • 钛表面聚吡咯涂层的体外及体内血液相容性研究

    目的 评价钛表面聚吡咯涂层的体外及体内血液相容性,探讨其在人工心血管装置中应用的可行性.方法 采用电化学合成方法在钛表面制备聚吡咯涂层,首先对该涂层表征及与钛基底之间的结合强度进行测定,然后进行体外溶血实验、动态凝血实验、凝血时间测定、血小板粘附实验、补体激活实验和兔颈总动脉腔内植入实验,评价其体外和体内血液相容性,以未涂层的钛或(和)聚四氟乙烯作平行对照.结果 钛表面聚吡咯涂层具有良好的机械性能且与人血液高度相容;其体外血液相容性与聚四氟乙烯相当,且体外和体内血液相容性优于钛.结论 经聚吡咯涂层后的钛其体内及体外血液相容性均得到显著改善,显示了在人工心血管装置上的应用前景.

    作者:刘成珪;谢艾妮;凡建平;伏鹏;孟刘坤;郭兴蓬;张凯伦 刊期: 2011年第02期

  • 脊柱手术操作与医源性脊髓损伤的相关性分析及应对策略

    目的 探索脊柱手术中常见操作与医源性脊髓损伤的相关性,并提出应对策略.方法 从参与单位抽取符合标准的病例作为研究组;以医院和原发疾病为配比因素,按1∶3的比例配比对照组病例.对各研究因素先后作一元及多元Logistic回归分析,找出有统计学意义者并确定其相关性.结果 甲基强的松龙、神经电生理监护仪是保护因素(P<0.05,OR<1);椎管内使用双极电凝器、椎管内使用骨蜡或明胶海绵、控制性降压、结扎或栓塞节段动脉、三维矫形操作,块状植骨是危险因素(P<0.05,OR>1).结论 在脊柱手术中应尽量采取保护因素,避免危险因素,减少医源性脊髓损伤的发生.

    作者:陈奇;李锋;吴巍;方忠;张勇;姚广清;罗伟 刊期: 2011年第02期

  • 腹腔镜输卵管切除术后持续性异位妊娠3例报告

    异位妊娠是妇科的常见病和急症,随着异位妊娠的发病率逐年上升及腹腔镜的广泛运用,术后出现持续性异位妊娠的病例报道逐渐增多,特别是保守性手术后.但是,输卵管根治术后也可引起持续性异位妊娠,临床上少有报道,往往被忽视,终发生较为严重的后果,给患者带来痛苦,甚至引起医患纠纷 .2005年5月至2009年 5月我院诊治输卵管妊娠行腹腔镜输卵管切除术1 052例,其中发生持续性异位妊娠3例,发生率0.28%,现报道如下,并结合文献分析其发生原因、监测及处理方法,以期对此类疾病的防治提供参考和帮助.

    作者:孔庆碧 刊期: 2011年第02期

  • 转染pCE-GFP的重组骨髓间充质干细胞对Walker-256细胞的体外抗肿瘤作用

    目的 转染pCE-GFP质粒至大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs),研究重组BMSCs(rBMSCs)对Walker-256细胞的体外抗肿瘤作用.方法 贴壁培养法分离获得BMSCs,Lipofectamine 2000转染pCE-GFP质粒至BMSCs,rBMSCs经肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)处理促进分化.采用ELISA法检测rBMSCs培养上清中白蛋白和甲胎蛋白水平;MTT法检测rBMSCs培养上清对Walker-256细胞生长增殖的影响;RT-PCR法检测rBMSCs培养上清对Walker-256细胞Bcl-2和Bax mRNA表达的影响;采用细胞共培养跨膜迁移实验,观察rBMSCs趋化能力的改变.结果 rBMSCs培养上清对大鼠Walker-256细胞增殖抑制作用较BMSCs强,差异有统计学意义(P<0.05);经HGF处理的 rBMSCs组作用强于未经HGF处理的rBMSCs组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).经HGF处理的rBMSCs组与其他3组比较,Bax mRNA表达显著上调(P<0.05);Bcl-2 mRNA表达在各组中未见明显改变.rBMSCs的趋化能力增强,与BMSCs组比较差异有统计学意义(P<0.05),且经HGF处理的rBMSCs组趋化能力强于未经HGF处理的rBMSCs组(P<0.05).结论 经HGF处理的rBMSCs通过调控Walker-256细胞的增殖和凋亡作用及增强对肿瘤细胞的趋化能力而发挥抗肿瘤作用.

    作者:冯刚;张丽娟;罗利琼 刊期: 2011年第02期

  • 淋病奈瑟菌共同抗原表位在淋病快速检测中的临床应用价值

    目的 研究淋病奈瑟菌共同抗原表位在淋病快速检测中的临床应用价值.方法 根据各型淋病奈瑟菌外膜蛋白PIB上共同抗原表位的氨基酸序列合成一段多肽(WSWLF),并将其与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联构成完全抗原WSWLF-KLH,免疫动物,收集抗血清,ELISA和Western blot检测WSWLF-KLH免疫原性和特异性,并用于临床已确诊的169例淋病患者血清的检测及与传统金标准方法进行对比.结果 实验室ELISA检测表明,WSWLF-KLH具有免疫原性,免疫动物能刺激机体产生较强的体液免疫反应,兔血清抗体和豚鼠血清抗体效价高分别达到1∶3 200和1∶25 600;抗血清能与淋病奈瑟菌临床株特异性结合,与葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌和真菌等其它微生物之间没有交叉反应.Western blot结果显示,抗血清能识别淋病奈瑟菌裂解物,产生特异性条带,相对分子质量为37 300.临床实验结果显示,抗血清的淋病检出率与传统的金标准方法结果相似率为93.49%.结论 淋病奈瑟菌共同抗原表位具有免疫原性,免疫血清能与大多数淋病奈瑟菌结合,该抗原表位作为快速检测试剂有较高的临床应用价值.

    作者:胡春华;李玲;陈雷;郑新华;李刚;刘道忠;裴娇;廖芳 刊期: 2011年第02期

  • TOLL样受体2在大鼠肺移植缺血再灌注损伤期的时序性表达及意义

    目的 探讨大鼠肺移植术后早期移植肺中Toll样受体2(TLR2)的表达情况及其意义.方法 三套管法建立大鼠左肺原位移植模型,应用实时荧光定量逆转录多聚酶链反应动态观察TLR2 mRNA在移植肺中的表达水平,采用免疫印迹技术和免疫组织化学技术检测TLR2蛋白的表达,同时用ELISA法检测肺组织中TNF-α和IL-8的表达变化.结果 左肺原位移植术后,再灌注4 h即有TLR2 mRNA表达上调趋势,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).再灌注12 h和24 h组 TLR2 mRNA表达量达峰值,明显高于对照组(P<0.01).再灌注48 h组TLR2 mRNA表达量下调,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).TLR2蛋白在再灌注12 h和24 h组呈高表达(P<0.01).免疫组织化学染色显示阳性细胞主要是肺泡上皮细胞和肺泡巨噬细胞.TNF-α和IL-8在移植肺各时间点均高表达(P<0.05),在12 h至24 h细胞因子含量达高峰.结论 TLR2 mRNA和蛋白在大鼠左肺原位移植术后缺血再灌注损伤期表达上调,参与肺移植术后缺血再灌注损伤的病理生理过程.

    作者:王家顺;张俊;王建军;汪文东;丁静民;郭喜喜 刊期: 2011年第02期

  • 涂阳肺结核患者诊断延误及影响因素分析

    目的 对2009年10~12月武汉市结核病防治所住院的痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性(涂阳)肺结核患者诊断延误及其影响因素进行研究.方法 采用自行设计的问卷,对224例涂阳肺结核患者进行面访式调查.采用Wilcoxon符号秩和检验对首诊延误、卫生系统延误及诊断延误分别进行单因素分析,用逐步logistic 回归法对3种延误分别进行多因素分析.结果 首诊延误、卫生系统延误及诊断延误中位数分别为8、12及35 d;首诊延误的危险因素为:男性(OR=2.134,95%可信区间1.115~4.083),初中及以下文化(OR=1.879,95%可信区间1.048~3.368),无咯血(OR=2.194,95%可信区间1.056~4.559)及结核知识得分低(OR=4.060,95%可信区间2.232~7.385);卫生系统延误危险因素为:首诊为区以下医疗单位(OR=2.938,95%可信区间1.339~6.446),保护因素为:就诊次数≤1次(OR=0.056,95%可信区间0.025~0.126);诊断延误危险因素为结核知识得分低(OR=3.036,95%可信区间1.654~5.572),自卑及自我羞耻感水平高(OR=2.012,95%可信区间1.103~3.676),保护因素为:就诊次数≤1次(OR=0.216,95%可信区间0.117~0.396).结论 武汉市住院涂阳肺结核患者存在一定的诊断延误,但延误水平不高.应加强对人群特别是文化程度低的人群的结核相关知识宣教;加强基层医务人员对结核病的警觉性并提高诊断能力;应避免患者反复多次就诊于同一水平医疗机构,从而缩短诊断延误时间.

    作者:段琼红;钟荣;汪鹏;吕静;王齐;叶临湘 刊期: 2011年第02期

  • 人外周血单核细胞3种不同转染方法的比较

    目的 采用3种不同方法转染原代人外周血单核细胞,以寻找一种简便、高效的单核细胞转染方法.方法 采用人淋巴细胞分离液从健康人外周血中分离出单个核细胞,锥虫蓝拒染法检测细胞存活率.单个核细胞在孔板内培养2 h后吸弃悬浮的淋巴细胞,获得贴壁的单核细胞.分别采用Lipofectamine 2000介导载体质粒(PEGF-N1),慢病毒(NC-GFP-LV)及腺病毒(Adv-GFP)3种方法转染单核细胞,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,并收集细胞上流式细胞仪检测GFP阳性细胞的比例.结果 通过人淋巴细胞分离液分离的单个核细胞的活细胞率>95%,获得的单核细胞数量多,贴壁牢,形态均一.转染48 h后,Lipofectamine 2000介导载体质粒及慢病毒转染的单核细胞无绿色荧光,流式细胞仪检测GFP阳性细胞均<1%,腺病毒转染的单核细胞可见较强绿色荧光,GFP阳性细胞约占10%.结论 腺病毒,而不是Lipofectamine 2000或慢病毒,能有效地将外源基因导入单核细胞内表达.

    作者:叶双梅;阚淳一;杨丽兰;杨洁;马全富;吴明富;卢运萍;王世宣 刊期: 2011年第02期

  • 定量监测AML1-ETO融合基因表达水平在急性髓系白血病治疗中的临床价值

    目的 探讨急性髓系白血病治疗过程中AML1-ETO融合基因表达水平的变化规律.方法 采用基于TaqMan探针的RQ-PCR技术,以AML1-ETO融合基因为靶分子,定量监测15例急性髓系白血病患者初诊和随访时融合基因的表达水平,分析该基因表达水平的变化与临床特征的相关性.结果 患者初诊时,AML1-ETO融合基因的表达水平为198%~788%,该基因的表达水平与相应的骨髓幼稚细胞比例及患者年龄、性别、初诊外周血白细胞计数、血红蛋白量和血小板计数之间均无相关性(P>0.05);长期缓解(>1年)患者该基因表达水平降至0.001%~0.01%;复发患者该基因表达水平较缓解时升高,并提前于骨髓细胞形态学复发;AML1-ETO融合基因表达水平大于0,并不能提示临床复发.结论 应用RQ-PCR技术对AML1-ETO融合基因进行定量监测,是判断和追踪该基因阳性的白血病患者疗效的良好指标,可以较好地反映患者微小残留病的动态变化.

    作者:吴学琼;孟力;田野;刘文励;周剑峰;李春蕊 刊期: 2011年第02期

  • 二甲双胍对代谢综合征患者葡萄糖代谢率及脂肪因子水平的影响

    目的 探讨代谢综合征(MS)患者葡萄糖代谢率(M)、脂肪水平变化及二甲双胍治疗对其的影响.方法 筛选36~60岁MS患者15例和健康对照组20例.采用高胰岛素-正常血糖钳夹技术检测M,评估胰岛素抵抗(IR)程度;检测血浆、血浆抵抗素(resistin)、脂联素(adiponectin)、瘦素(leptin)浓度及空腹胰岛素(FINS)、血糖、血脂等生化指标.MS患者给予二甲双胍500 mg口服,3次/d,治疗12周,于治疗结束后重复检测M、血浆resistin、adiponectin与leptin浓度等.结果 ①MS组的腰围(WC)、体重指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、2h血糖(2hPG)、FINS及甘油三酯(TG)等均显著高于对照组,高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05).高胰岛素正常血糖钳夹试验稳态时(120~150 min),MS组的M显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).两组的血浆resistin水平无显著性差异(P>0.05);MS组的血浆leptin水平显著高于对照组,adiponectin水平显著低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01).②治疗12周后,MS组的BMI、WC、FINS、FPG及2hPG明显降低,与治疗前相比差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),TG、胆固醇(TC)、HDL-C及低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)等无显著性变化.③治疗前后M分别为(4.01±1.29)和(6.53±1.15)mg·kg-1·min-1,治疗12周后,MS组M明显升高(P<0.05).④治疗前后MS组血浆resistin,adiponectin水平无显著变化(均P>0.05),leptin水平显著降低(P<0.01).结论 二甲双胍治疗可以减轻MS患者的IR,其机制可能与体重减轻及leptin抵抗改善有关.

    作者:叶建红;黎锋;刘天;麦伟华;郎江明 刊期: 2011年第02期

  • 不同影像学检查方法在骨巨细胞瘤诊断中的应用价值

    目的 探讨不同影像学检查方法在骨巨细胞瘤诊断中的应用价值.方法 选取30例经手术病理证实的骨巨细胞瘤患者资料,分析其X线平片、CT、MRI、SPECT和PET-CT的不同表现,并与病理结果对照.结果 平片简便易行,能提供病变部位整体信息,对长骨显示较佳;CT、MRI在不规则骨巨细胞瘤的诊断、肿瘤侵犯范围以及与邻近组织结构的关系等方面均有独特优势;SPECT和PET-CT能发现较小病灶,且对病理分级为恶性或恶变的骨巨细胞瘤早期发现骨转移有较高价值.结论 综合运用X线平片、CT、MRI及SPECT和PET-CT可提高骨巨细胞瘤诊断及鉴别诊断的准确率,为临床治疗提供重要依据.

    作者:陈科;杜绪仓;汪敬群 刊期: 2011年第02期

  • 环磷腺苷治疗对心力衰竭患者血浆脑钠肽的影响

    目的 通过检测环磷腺苷对心力衰竭患者血浆脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)水平的影响,探索其治疗心衰的作用机制.方法 将94例慢性心力衰竭患者随机分为环磷腺苷组和对照组.两组均给予慢性心力衰竭的常规治疗,环磷腺苷组加用环磷腺苷注射液.检测两组患者治疗前及治疗14 d后左室射血分数(LVEF)、血浆BNP水平并进行比较.结果 治疗后两组患者LVEF值较治疗前增加、血浆BNP水平较治疗前降低(P<0.01).环磷腺苷组血浆BNP浓度降低程度比对照组显著(P<0.05).结论 环磷腺苷可降低血浆BNP浓度,改善慢性心力衰竭患者心功能.

    作者:袁强 刊期: 2011年第02期

  • TNBS诱导大鼠实验性结肠炎的致病机制

    目的 探讨三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠实验性结肠炎的致病机制.方法 18只雄性SD大鼠随机分为3组,每组6只:正常组、模型组、美沙拉嗪组.除正常对照组未行造模外,其余两组大鼠均采用TNBS造模.模型组不设干预,正常饮食;美沙拉嗪组给予美沙拉嗪混悬液0.42 g/(kg·d)灌胃;治疗15 d后观察大鼠的结肠病理组织学改变,用免疫组化染色法观察大鼠结肠组织IL-17、β2AR、β-arrestin2、NF-κBp65的表达;用Western blot法检测大鼠脾淋巴细胞β2AR,β-arrestin2和NF-κBp65蛋白的表达;用RT-PCR法检测大鼠结肠组织STAT6 mRNA的表达.结果 美沙拉嗪组大鼠的腹泻、黏液脓血便症状得到较快改善,大鼠黏膜组织损伤也明显改善.与正常组相比,模型组大鼠NF-κBp65和STAT6 mRNA表达增多(P<0.01),β2AR和β-arrestin2的表达减少(P<0.01);与模型组比较,美沙拉嗪组大鼠脾淋巴细胞NF-κBp65和STAT6 mRNA表达减少(P<0.01),而β2AR和β-arrestin2的表达增多(P<0.01).IL-17在正常组和美沙拉嗪组呈低表达,而在模型组呈高表达.结论 IL-17、β2AR、β-arrestin2、NF-κBp65、STAT6在TNBS诱导大鼠实验性结肠炎的致病过程中发挥重要调节作用.

    作者:张夏毅;沈霖;范恒;梁丽;廖奕 刊期: 2011年第02期

  • 肝门部胆管癌中Shh和Ptch的表达与肿瘤侵袭性及根治术后复发的关系

    目的 研究Hedgehog信号通路核心蛋白Sonic hedgehog(Shh)和Patched(Ptch)在肝门部胆管癌中的表达及与肿瘤侵袭性和根治性切除术后肿瘤复发的关系,探讨其相关分子机制.方法 采用免疫组织化学技术检测44例肝门部胆管癌、7例胆管炎性病变组织中Shh和Ptch的表达,分析Shh、Ptch与肝门部胆管癌临床病理特征及根治术后复发的关系.应用Kaplan-Meier法对肿瘤根治术后至肿瘤复发时间跨度进行单因素分析,并经Log-rank 检验;选择可能对肝门部胆管癌患者预后产生影响的临床病理指标进行量化,依次引入COX风险比例模型进行多因素回归分析.结果 肝门部胆管癌Shh和Ptch阳性表达强度明显高于胆管炎性病变组织;Shh和Ptch表达与肝门部胆管癌侵袭性呈正相关;Shh和Ptch表达与肝门部胆管癌根治术后早期复发呈正相关;单因素生存分析显示Shh和Ptch高表达组肝门部胆管癌患者根治术后复发时间更短(P<0.01);多因素回归分析显示Shh和Ptch表达是影响肝门部胆管癌患者根治术后复发的独立因素.结论 Shh和Ptch表达与肝门部胆管癌根治术后短期复发有关,Shh和Ptch可以作为预测胆管癌根治术后复发的独立影响因子.

    作者:魏洪亮;丁志强;俞亚红 刊期: 2011年第02期

  • 热性惊厥对大鼠海马齿状回谷氨酸受体功能的影响

    目的 了解热性惊厥导致神经损伤的详细机制,以筛选更有效的治疗药物.方法 选取出生10 d的新生雄性Wistar大鼠建立热性惊厥模型.通过大鼠脑片灌流和全细胞记录的膜片钳技术检测了热性惊厥时海马齿状回颗粒细胞3种谷氨酸受体的兴奋性突触后电流(EPSC):分别由NMDA和AMPA受体介导的EPSC和混合EPSC.并与正常对照组大鼠进行比较.结果 对照组大鼠齿状回的混合EPSC为(138±23)pA,而热性惊厥组混合EPSC为(186±29)pA,较前者明显上升(P<0.05).同时发现热性惊厥组齿状回由NMDA受体介导的EPSC也较对照组明显升高,两者分别为(92±14)pA和(60±10)pA(P<0.05).但由AMPA受体介导的EPSC热性惊厥组与对照组相比无明显改变,两者分别为(65±17)pA和(68±11)pA(P>0.05).结论 热性惊厥选择性使齿状回NMDA受体兴奋性增加,但不影响AMPA功能,这构成了热性惊厥神经损伤的一个重要环节.

    作者:张炼;罗小平 刊期: 2011年第02期

  • 髓系来源抑制细胞及其在肿瘤免疫耐受中的作用

    由于晚期肿瘤患者的免疫功能处于抑制状态,许多在动物实验中建立的肿瘤免疫疗法(如肿瘤疫苗等)应用于临床后疗效甚微.肿瘤衍生的细胞因子能诱导多种抑制性细胞,抵抗机体抗肿瘤的天然免疫和适应性免疫应答.这些免疫抑制细胞包括调节性T细胞(Treg)、肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)、肥大细胞、Ⅱ型NKT细胞及髓系来源抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)等,一种或多种抑制性细胞可同时存在于肿瘤患者体内,其中,MDSC几乎存在于所有肿瘤患者体内,而且数量多,体内分布广,免疫抑制作用强,是介导肿瘤免疫逃逸的主要细胞群体[1-3].本文将就近十年研究报道的MDSC的特征、诱生及募集、免疫抑制功能和机制,以及针对MDSC的靶向治疗等方面作一综述.

    作者:邓青春;李晓燕;李柏华;王晶;李卓娅;尹丙姣 刊期: 2011年第02期

  • pvdQ基因对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响

    目的 观察pvdQ(PA2385)基因对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响.方法 构建pvdQ基因表达质粒pME6032-pvdQ,鉴定后,采用电穿孔法将其转入PAO1野生株中,构建pvdQ高表达株.同时将空质粒pME6032采用电穿孔法转入PAO1野生株中,构建pME6032空质粒株,采用Real-time PCR检测各株pvdQ mRNA的表达.采用结晶紫染色法,观察PAO1野生株、pvdQ高表达株和pvdQ突变株培养24、48和72 h时生物膜的生长情况.结果 Real-time PCR证实成功构建pvdQ高表达株.结晶紫染色的结果显示:培养24 h时 PAO1野生株、pvdQ高表达株和pvdQ突变株形成的生物膜厚度差异无统计学意义(P>0.05);培养48 h 和72 h时与PAO1野生株比较,pvdQ高表达株生物膜明显变薄(P<0.05),pvdQ突变株生物膜明显增厚(P<0.05).结论 铜绿假单胞菌PAO1野生株、pvdQ突变株和pvdQ高表达株体外形成生物膜的能力有显著性差异,pvdQ基因可能影响铜绿假单胞菌体外形成生物膜的能力.

    作者:王丽丽;龚凤云;谢旭华;夏超;陈佳;宋莹;申爱霞;邢铭友;许东;宋建新 刊期: 2011年第02期

华中科技大学学报(医学版)杂志

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主办:华中科技大学