洪昊；苏伟；董念国；史嘉玮
目的 研究中药肝复乐对肝纤维化大鼠肝细胞神经递质受体表达的调节作用,探讨其抗肝纤维化的机制.方法 将40只Wistar大鼠分为3组:正常对照组10只、肝复乐组15只及模型组15只.用CCl4皮下注射制备大鼠肝纤维化模型,采用光镜及电镜观察肝组织病理学改变;运用半自动生化分析仪测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清7谷丙转氨酶(GGT),放射免疫法测定血清层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)的含量,免疫组织化学SP法检测各组肝组织M1、N型胆碱能受体(M1-AChR、N-AChR),α1、β2型肾上腺素能受体(α1-AR、β2-AR)的表达水平.结果 肝复乐组病理改变较模型组明显改善;肝复乐组Mt-AChR、N-AChR的表达较模型组显著降低(均P<0.05),而α1-AR、β2-AR的表达较模型组显著升高(均P<0.05).结论 肝复乐能通过抑制肝组织M1-AChR、N-AChR的表达,促进α1-AR、β2-AR的表达,从而调节神经递质在肝纤维化中的作用.
作者：孙雪梅；刘红艳；王光林；段瑞娴；程勇卫；吴翠环；唐望先 刊期： 2009年第02期
目的 研究糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D(GPI-PLD)基因转染并过度表达对肺癌细胞株A549生物学特征的影响.方法 用脂质体转染法将GPI-PLD真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPI-PLD转入A549细胞,以未转染的A549细胞及转染空载体pcDNA3.1(+)的细胞为对照,筛选出阳性细胞克隆.以胎盘碱性磷酸酶(PLAP)为底物,定量检测GPI-PLD活性,RT-PCR法确定GPI-PLD mRNA表达水平,细胞计数绘制生长曲线,锥虫蓝排斥法观察补体介导的细胞毒(CDC)杀伤率,分光光度法测定PLAP活性,ELISA检测癌胚抗原(CEA)的表达情况.结果 阳性细胞克隆GPI-PLD酶活性水平比对照组升高约3倍,GPI-PLD mRNA表达水平显著增加,GPI-PLD基因过度表达可促进GPI锚定的蛋白质如CEA和PLAP等被大量水解释放入培养液,导致细胞增殖能力减弱,对补体杀伤的敏感性增强.结论 成功将GPI-PLD基因转染入A549细胞,并在细胞中稳定表达.GPI-PLD过表达能抑制肿瘤细胞增殖,增强肿瘤细胞对补体杀伤的敏感性.
作者：石新云；黄明清；黄洁 刊期： 2009年第02期
目的 观察七叶内酯(esculetin)对大鼠血管平滑肌细胞(rVSMCs)增殖的影响并探讨其主要机制.方法 体外培养rVSMCs,观察不同浓度七叶内酯作用不同时间对rVSMCs增殖的影响.细胞计数及MTT检测rVSMCs的增殖;Western blot检测细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、蛋白激酶B(Akt)和Caspase-9的表达.结果 细胞计数和MTT结果均表明,随着药物浓度的增加(5、25、100μmol/L)和作用时间的延长(24、48、72 h),七叶内酯抑制rVSMCs增殖的作用逐渐增强,与空白对照组相比差异均有统计学意义;各浓度组七叶内酯均能显著抑制Akt、ERK1/2的磷酸化,促进Caspase-9的活化,并呈现出剂量依赖性.结论 在一定范围内,七叶内酯可呈剂量和时间依赖性抑制rVSMCs的增殖,其主要机制可能是抑制了Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK和Ras-P13K-Akt信号转导通路.
作者：戴榕；郑琼莉；徐全胜；祝炜 刊期： 2009年第02期
作者： 刊期： 2009年第02期
目的 分析<华中科技大学学报(医学版)>引文的数量特征及其蕴含的情报价值,揭示学报作者对文献信息的掌握及利用规律,为进一步提高<华中科技大学学报(医学版)>论文的学术质量提供量化依据和合理建议.方法 采用文献计量学方法,对2004～2006年18期<华中科技大学学报(医学版)>引文量、引文类型、引文语种进行定量分析,并计算其自引率及普赖斯指数.结果 3年引文率为100%,篇均引文8.32条.主要的引文类型分别为期刊(95.35%)、图书(4.27%)和特种文献(0.39%);引文语种主要是英语和汉语,各占79.96%和19.98%;自引率1.01%;普赖斯指数52.62%.结论 该刊的平均引文量已接近我国自然科学核心期刊论文的平均引文量;作者群具有较强的情报控制能力;自引率在稳步增加;普赖斯指数接近甚至超过平均值;英文期刊仍是主要的情报源.
作者：邹立君 刊期： 2009年第02期
目的 研究压力对体外培养的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)中神经微丝的影响,探讨高眼压性青光眼中细胞骨架蛋白的表达变化.方法 建立体外加压培养纯化的Sprague-Dawley(SD)乳鼠视网膜神经节细胞模型,采用抗大鼠Thy1.1单克隆抗体免疫荧光细胞化学染色法鉴定RGCs的纯度.将纯化培养的SD乳鼠RGCs分别在0、20、40、60及80 mmHg的压力下培养.免疫组织化学方法检测神经微丝蛋白-H(NF-H)的表达,并用图像分析系统对各组NF-H表达进行分析测定.结果 ①纯化后的视网膜神经节细胞纯度为96%.②压力为20 mmHg时,实验组RGCs中NF-H表达与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),且NF-H在视网膜神经节细胞中的分布相对均一;压力为40、60及80 mmHg时,实验组RGCs中NF-H表达与对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.01),且NF-H在视网膜神经节细胞中分布紊乱.结论 纯化的RGCs可以在体外存活并生长,一定的压力(≥40 mmHg)可影响RGCs中细胞骨架蛋白的表达.
作者：钟杰；张虹 刊期： 2009年第02期
目的 探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)诊断羊水间期细胞非整倍体的临床应用价值.方法 收集547例孕妇中唐氏综合征筛查阳性者28例及3例具有其他产前诊断指征的孕妇,共计31例患者的羊水,应用13/21号染色体特异性双色探针对羊水间期细胞进行FISH检测,以羊水培养细胞常规G显带核型分析作为FISH检测结果对照.结果 31例标本中1例发生母血严重污染,其余30份标本均杂交成功(包括1例混浊羊水).FISH检测结果发现典型21三体1例,未发现13三体.FISH诊断结果与核型分析结果一致.结论 FISH产前诊断羊水间期细胞非整倍体准确率与核型分析一致,与核型分析相比,FISH具有快速、所需样本量少且结果直观易辨的优势,有较高的临床应用价值.
作者：夏革清；张丽萍；谢宝国；吴超英 刊期： 2009年第02期
目的 探讨骨髓问充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠的疗效及其在脑内存活、迁徙、分化规律.方法 将造模成功的PD大鼠随机分为两组,将增强型绿色荧光蛋白(en-hanced green fluorescent protein,EGFP)标记的MSCs及PBS分别移植入两组PD模型纹状体.术后每周进行旋转试验,第1周和第9周行脑神经元特异性核蛋白(Neun)、胶质细胞源性蛋白(GFAP)及酪氨酸羟化酶(TH)的免疫组化鉴定,第9周行Western blot检测两组模型纹状体内TH的表达.结果 移植前MSC组及PBS组旋转次数分别为(8.2±0.6)、(8.3±0.6)圈/min,差异无统计学意义(P>0.05);术后第3周分别为(7.5±0.5)、(8.1±0.6)圈/min,差异有统计学意义(P<0.05),并持续至术后第9周.移植后第1周MSCs主要分布于针道附近.第9周则迁徙至两侧大脑半球,以移植侧半球为主.远迁徙至胼胝体的末端.小脑及脑于未见移植细胞.全脑未见畸胎瘤的形成.术后第1周免疫组化染色仅见GFAP和Neun表达.第9周GFAP、Neun仍有表达,以GFAP居多,同时在纹状体内还可见少量TH表达,提示MSCs在脑内主要分化为胶质细胞.部分为神经元.少数分化为多巴胺能神经元(dopaminergic neuron.DN).PBS组免疫组化染色未见上述蛋白的表达.Western blot检测仅MSCs组大鼠纹状体有TH的表达.结论 MSCs移植入纹状体后可分化为DN,从而改善PD症状,其移植治疗PD大鼠模型可能是安全有效的.
作者：胡琦；康慧聪；刘晓艳；许峰；李巷；朱遂强 刊期： 2009年第02期
目的 观察黑质内注入脂多糖(LPS)后对黑质小胶质细胞主要组织相容性复合物Ⅱ(MHC Ⅱ)表达的影响.方法 采用立体定向技术向大鼠单侧黑质内注入LPS建立帕金森病动物模型.分别于注药后1、7、14、60 d时采用免疫组化法检测MHC Ⅱ阳性细胞;Western blot检测黑质小胶质细胞MHC Ⅱ蛋白的表达;双标荧光染色法检测p47phox(NADPH氧化酶标志物)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在MHC Ⅱ阳性小胶质细胞的表达.结果 注射LPS后I d.注射侧黑质区始出现MHC Ⅱ阳性细胞,7 d时达高峰,14 d时减少,60 d时仅见少量的阳性细胞.Western blot检测结果也有类似的趋势.双标荧光染色法检测到p47phox和iNOS在MHCⅡ阳性小胶质细胞均有表达.结论 黑质内单次注射LPS可激活黑质小胶质细胞并表达MHC Ⅱ;LPS可诱导MHC Ⅱ阳性小胶质细胞同时表达iNOS和NADPH氧化酶.
作者：王普清；孙圣刚；张允健；乔娴 刊期： 2009年第02期
目的 研究解偶联蛋白-2(uncoupling protein-2,UCP-2)基因在肝细胞急性损伤过程中的作用.方法 构建小鼠UCP-2基因过表达慢病毒载体;二步胶原酶灌注法分离培养小鼠原代肝细胞;慢病毒感染肝细胞,使肝细胞中UCP-2基因表达上调;荧光显微镜镜检确定感染效率.Real time PCR检测UCP-2表达;肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用于病毒感染肝细胞24 h后.检测细胞上清液中谷丙转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;碘化丙啶(PI)染色流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡因子Caspase 3的活化.结果 Real time PCR检测证实目的 细胞中UCP-2表达上调;TNF-α作用后病毒感染的实验组上清液中ALT和LDH水平、细胞凋亡率、凋亡因子Caspase 3活化程度均高于对照组(均P<0.05).结论 UCP-2基因过度表达可加重肝细胞急性损伤.
作者：万赤丹；程锐；王春友；王宏博；王帅；刘涛 刊期： 2009年第02期
目的 探讨后腹腔镜治疗肾囊肿时结合使用硬化剂,以减少肾囊肿复发率.方法 不同硬化剂体外处理肾囊肿壁,观察不同时间段囊肿壁硬化效果,选择适当硬化剂.86例单纯性肾囊肿,其中单纯采用后腹腔镜去顶术38例,采用后腹腔镜去顶术并术中结合硬化剂治疗48例.平均随访时间22个月(6～36个月),B超复查囊肿大小.结果 单纯采用后腹腔镜去顶术组平均手术时间(36.6±15.3)min,住院时间(5.3±1.6)d,长期随访复发4例(复发率10.5%);采用后腹腔镜术中结合硬化剂组平均手术时间(38.2±13.8)min,住院时间(5.6±1.4)d,长期随访无复发.结论 肾囊肿后腹腔镜去顶术中结合使用硬化剂,除具有创伤小、出血少和康复快等优点外,能有效降低远期复发率.
作者：李运柱；李文洲；陈琳；余家俊；彭松；胡卫锋；李国灏；冯滔；张伟；郭枫 刊期： 2009年第02期
目的 构建携带HBx基因的非复制型重组腺病毒载体,并感染小鼠肾小球足细胞株MPC5,使目的 基因HBx在该细胞株有效表达.方法 由质粒PCI-neo-HBx中扩增目的 基因HBx.插入至pShuttle-CMV(-)穿梭质粒中,而后再与pAdxsi质粒酶切连接为重组腺病毒质粒pAd-HBx,经酶切及测序鉴定正确后,以Pac Ⅰ酶切线性化转染293细胞进行包装扩增得到Ad-HBx.以Ad-HBx感染MPC5细胞,Western blot检测感染后目的 蛋白HBx的表达.结果 重组腺病毒载体经限制性内切酶酶切、电泳和基因测序鉴定,证实Ad-HBx构建成功;当MOI=50时.MPC5细胞即可100%被重组腺病毒感染,且持续至感染后72 h仍有较强水平的表达;感染Ad-HBx的MPC5细胞可稳定表达HBx蛋白.结论 成功构建了Ad-HBx,并能在MPC5细胞中稳定表达,为进一步研究HBx基因在乙型肝炎病毒相关性肾炎发病中的作用奠定了基础.
作者：张瑜；周建华 刊期： 2009年第02期
目的 观察烟酰胺(Nia)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的体外培养的退变兔椎间盘组织内细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响.方法 构建兔椎间盘组织凝胶培养模型,分为正常对照组(不加入药物),烟酰胺组(加入0.5 mg/ml烟酰胺),退变组(加入10 ng/ml IL-1β)和治疗组(加入10 ng/ml IL-1β及0.5 mg/ml烟酰胺).培养2周后对各组标本分别行TUNEL染色,Fas、Caspase 3、Bcl-2、HIF-1α、GLUT-1及VEGF免疫组化染色.结果 TUNEL染色示治疗组阳性细胞染色率较退变组有所下降.Fas、Bcl-2染色示治疗组阳性细胞率均与退变组接近(均P>0.05).Caspase 3染色示治疗组阳性细胞率较退变组明显降低(P<0.05).HIF-1α、VEGF染色示治疗组阳性细胞率较退变组均明显降低(均P<0.01).GLUT-1染色示治疗组阳性细胞率较退变组轻微下降(P>0.05).结论 烟酰胺可以抑制IL-1β诱导的椎间盘细胞凋亡,改善IL-1β导致的椎间盘能量代谢障碍.
作者：徐蔚蔚；邵增务；熊蠡茗；杨述华；俞旭东；郭兵；谢卯 刊期： 2009年第02期
目的 体外实验研究核转运因子2(NTF2)对视网膜新生血管的抑制作用.方法 以血管内皮生长因子(VEGF)刺激体外培养人视网膜血管内皮细胞,并分为转染重组腺相关病毒2-NTF2(rAAV2-NTF2)的实验组和转染等量空白rAAV2的对照组,利用流式细胞仪和Boyden小室观察NTF2对激活状态的人视网膜血管内皮细胞增殖和迁徙的作用.结果 流式细胞仪检测结果显示实验组在G1期的细胞比例为(49.57±0.43)%,对照组为(27.21±0.86)%,两者差异有统计学意义(P<0.05)./30yden小室实验检测迁徙细胞数,实验组和对照组分别为(13.85±1.5)和(34.6±2.5)(n=6,P<0.05),说明NTF2能抑制人视网膜血管内皮细胞的增殖和迁徙.结论 NTF2对视网膜新生血管具有抑制作用.
作者：李斌；赵敏红；李贵刚；徐玲娟；向艳；毛晓春 刊期： 2009年第02期
目的 探讨利用甲基化酶抑制剂(肼屈嗪)和组蛋白脱乙酰化酶抑制剂(丙戊酸)干预胆管癌细胞后,对P16和RASSFIA基因表达的影响.方法 将胆管癌细胞QBC939分为4组,丙戊酸组、肼屈嗪组、两药合用组以及空白组,分别以相应药物(终浓度10 mmol/L)作用48 h.空白组加入等量的含10%血清的RPMI 1640培养液.利用PCR、Westernblot和甲基化特异性PCR检测处理后的P16、RASSF1A基因及蛋白的表达和它们启动子区甲基化状态.结果 空白组P16基因及蛋白微量表达,RASSF1A基因及蛋白无表达;单用丙戊酸不能使两基因mRNA及蛋白表达增加,而单用肼屈嗪可以增加两基因mRNA及蛋白表达,两种药物合用使两基因mRNA及蛋白表达量明显高于单用一种药物组(均P<0.01);单用肼屈嗪、两药合用分别可使P16基因和RASSF1A基因启动子区部分和完全去甲基化,而单用丙戊酸无此效果.结论 两种药物在恢复沉默抑癌基因表达上有协同作用,有望成为胆管癌治疗的新选择.
作者：李宏；陈绍勤；舒艺；陈勇军；邹声泉 刊期： 2009年第02期
目的 评价实时超声造影对脂肪肝背景下肝脏局灶性病变(FLL)的诊断价值.方法 采用低机械指数实时谐波超声造影技术,对常规超声不能确诊的脂肪肝背景下的69个局灶性病变进行了超声造影检查,将超声造影结果同增强CT、增强MRI及病理诊断进行对比,分析超声造影检查的诊断价值.结果 超声造影检查后,1例肝紫癜被误诊,1例肝血管瘤被误诊.超声造影对恶性FLL的敏感性、特异性、诊断符合率分别为100%(9/9)、96.7 %(58/60)、97.1%(67/69).结论 超声造影可作为脂肪肝背景下FLL鉴别诊断的重要方法.
作者：邓远；李开艳；罗鸿昌；陈云超 刊期： 2009年第02期
目的 设计以髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)为靶点的短发夹状RNA(shRNA).构建携带此shRNA的重组质粒,探讨脂质体转染该重组质粒对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响.方法 设计3对针对Mcl-1基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体psiRNA-hHlneo-Mcl,用阳离子脂质体法将重组质粒转染至人肝癌细胞株HepG2中,通过RT-PeR及Western blot方法检测转染前后Mcl-1 mRNA及蛋白表达情况,筛选能高效抑制Mcl-1基因表达的shRNA重组质粒并应用MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖和凋亡变化的情况.结果 成功构建含shRNA片段的重组质粒,依次命名为pMclsi-1、pMclsi-2、pMclsi-3.经测序证实.插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致.重组质粒转染HepG2细胞后,Mcl-1基因的mRNA水平及蛋白水平明显下调,其中以pMclsi-1重组质粒下调效应强.MTT检测显示pMclsi-1可明显抑制HepG2细胞增殖,流式细胞仪测定转染后24 h细胞凋亡率为6.5%,48 h细胞凋亡率为15.6%,显著高于对照组(3.9%,P<0.05).结论 采用RNAi技术可特异阻断Mcl-1基因的表达,Mcl-1基因有促进细胞增生及抑制凋亡的作用.
作者：余琴；陈琼；黄焕军；宋宇虎；常莹；田德安；林菊生 刊期： 2009年第02期
目的 探讨双眼旋转性斜视发病病因、临床特点、治疗效果及预后.方法 用同视机、双马氏杆等检查诊断双眼旋转性斜视患者10例,根据病因不同采用不同治疗方法.结果 2例由颅内病变引起者转至相应科室治疗原发病;8例脑外伤引起者,4例经药物及物理保守治疗,半年后基本恢复正常双眼单视功能;3例经保守治疗半年后行双上斜肌矢状移位术;1例因种种原因未能进一步治疗.结论 近年来该病发病有增多趋势,加强对该病的认识很有必要;部分患者经药物和物理等治疗可以临床治愈;双上斜肌矢状移位术也可取得令人满意效果.
作者：王平；宋琳；李贵刚 刊期： 2009年第02期
目的 通过测定少弱精子症患者睾丸组织中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial nitric oxide syn-thase traffic inducer,NOSTRIN)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达,探讨其与少弱精子症发病的相关性.方法 采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测11例严重少弱精子症患者(病例组)和7例正常男性(正常组)睾丸组织中NOSTRIN mRNA的表达;分光光度法测定睾丸组织中eNOS的活性;应用硝酸还原酶法测定睾丸组织上清液中NO代谢产物NO2-/NO3-水平.结果 病例组患者睾丸组织中NOSTRIN mRNA呈弱表达(0.312±0.076),明显低于正常组(0.793±0.082,P<0.01);病例组患者睾丸组织eNOS活性[(33.73±3.58)U/mg]与正常组[(17.69±3.84)U/mg]比较显著增强(P<0.01);病例组患者睾丸中NO2-/NO3-水平为(48.56±8.49)μmol/L,较正常组(25.37±9.61)μmol/L显著升高(P<0.01)f病例组睾丸组织中NOSTRIN表达水平与eNOS活性呈负相关(r=-0.57,P<0.01),与NO代谢产物NO2-/NO3-同样呈负相关(r=-0.61,P<0.01).结论 少弱精子症患者睾丸组织中NOSTRIN表达水平降低,eNOS活性增强,NO2-/NO3-水平升高,可能与少弱精子症的发生有着相关性.
作者：相文佩；水丽君；温子娜；胡廉；熊承良 刊期： 2009年第02期
目的 体外研究shRNA(short hairpin RNA)沉默基因DNMTl的表达对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨DNMT1在膀胱肿瘤形成过程中的作用机制.方法 实验分为空白对照组(给予脂质体)、HK组(含无效干扰序列的质粒)及pshRNA-DNMT1组;常规培养膀胱癌T24细胞株,用脂质体Lipofeetamine 2000将构建成功的重组质粒pshRNA-DNMT1转染进入T24细胞,然后进行RT-PCR、Western blot检测各组DNMT1 mRNA及蛋白质水平变化;进行MTT,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测各组T24细胞增殖和凋亡情况.结果 重组质粒pshR-NA-DNMT1成功转染进入膀胱癌T24细胞;经RT-PCR检测pshRNA-DNMT1组DNMT1 mRNA表达减少,24、48、72h的抑制率分别是28.44%、52.48%、70.91%;转染pshRNA-DNMT1后,T24细胞中DNMT1蛋白24、48和72 h的抑制率分别为24.27%、57.79%、69.74%;在MTT检测中,pshRNA-DNMT1组的细胞增殖抑制率在24、48、72 h分别为(4.34±0.76)%,(9.87±1.54)%和(13.78±1.93)%,与空白对照组比较各时间点差异均有极显著性意义(均P<0.01);转染24、48和72 h后,pshRNA-DNMT1组细胞凋亡率分别为(3.87±0.81)%、(8.69±1.23)%和(11.46±1.24)%,与空白对照组比较差异均有极显著性意义(均P<0.01).结论 重组质粒pshRNA-DNMT1能有效降低膀胱癌细胞中DNMT1基因mRNA及蛋白的表达,并在一定程度上抑制T24细胞的增殖和促进凋亡.
作者：张士龙；曾甫清；彭世波；董继华；廖贵益；汪良 刊期： 2009年第02期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
