仝莉莉；秦鄂德；杨佩英；李同据；于曼；欧武
进行临床标本肺炎衣原体(Chlamydia Pneumoniae, CP)的分离，标本接种前转运、储存及营养液选择等，均是影响培养阳性率的重要因素。本研究选用3株CP标准毒株K6、K7、CM1模拟临床标本的转运过程，对在SPG(Sucrose-phosphate-glutamic acid buffer)、含SPG(10%FBS)、CP培养分离用营养液IMDM(10%FBS)及标准转运培养基M4中转运后的毒力进行比较，并对保存于上述培养液中已知CP含量的菌株进行复苏后毒力的比较，同时对液体因素及传代条件进行了观察。
作者：刘钢；王树欣；胡翼云；江载芳；杨永弘；杨新吉 刊期： 2001年第03期
肠粘膜屏障X功能受损、肠道生物屏障破坏、机体免疫功能降低是促进细菌移位的主要原因。应用双歧杆菌改善肠道生物屏障减轻细菌移位的发生是近几年来新的研究热点。双歧杆菌是人体肠道中的重要生理性细菌，具有益生、营养、免疫等作用，对维持肠道生物屏障起主导作用。双歧杆菌与宿主肠上皮细胞的粘附是其发挥生理作用的第一步，铜绿假单胞菌是肠道细菌移位的常见菌，其粘附于肠粘膜细胞是其移位的首要条件。为了更系统地探讨双歧杆菌粘附后生物保护作用，我们以青春双歧杆菌(B.ado0926)体外粘附培养鼠肠上皮细胞株IEC-6，观察其是否具有抑制铜绿假单胞菌(ATCC 27853)粘附和侵袭的作用为双歧杆菌对肠粘膜屏障的生物保护作用的机制提供实验依据。
作者：陈军；常山；张雅萍；肖光夏 刊期： 2001年第03期
目的通过对广东省90年代以来流行的登革病毒分子流行病学研究，初步了解我国毒株的可能来源。方法采用RT-PCR方法扩增广东省不同年份分离的登革病毒(DEN)1型和2型NS1部分基因片段，然后进行克隆测序。测序后的基因片段与国际上已知的多个DEN1和DEN2相应的序列进行比较，并以核苷酸的差异在6%以上作为基因亚型分型的标准。结果①广州1991年分离的DEN1（GD03/91）与潮洲1995年分离的DEN1（GD23/95）同源性很高，为97%，属同一基因亚型，而两者与从潮洲1997年分离的DEN1（GD14/97）同源性均为93%，分属不同的基因亚型。基因系统树分析提示：GD03/91和GD23/95可能来自东南亚或瑙鲁等地，GD14/97可能来自新加坡。②佛山市1993年分离的DEN2（GD06/93）和南海市1998年分离的DEN2（GD01/98）同源性为93%，分属不同的基因亚型。基因系统树分析提示：GD01/98与泰国流行株ThNH-P28/93株共享序列非常接近，核苷酸同源性为98%，氨基酸同源性为100%，因此推测GD01/98可能来源于泰国。结论广东省90年代以来流行的登革热来源于不同的传染源。
作者：方美玉；赵文忠；蒋廉华；陈翠华；刘建伟；白志军；田小东；林立辉 刊期： 2001年第03期
目的克隆MHCⅡ类反式激活因子(classⅡtransactivator, CⅡTA)基因并进行初步功能测试，为CⅡTA的应用研究奠定基础。方法 RT-PCR扩增CⅡTA基因，将其克隆到pGEM-T载体上并进行酶切和测序鉴定；用EcoRⅠ、XhoⅠ将CⅡTA定向克隆到表达载体pcDNA3上，用脂质体转染法将pcDNA3/CⅡTA转入HeLa细胞；流式细胞术观察细胞表面HLA-DR/DQ的表达变化。结果成功克隆CⅡTA基因，CⅡTA基因的转入使HeLa细胞表面表达HLA-DR/DQ分子。结论转入 CⅡTA能使HeLa细胞表面表达MHCⅡ类分子表达，CⅡTA参与调控MHCⅡ类基因的转录和表达。
作者：欧启水；林琳；黄立东；陆佩华；周光炎 刊期： 2001年第03期
目的观察丙型肝炎病人外周血B细胞长期存活状态下其中是否仍有丙型肝炎病毒（HCV）存在，探讨建立HCV体外复制细胞模型的可能性。方法利用EB病毒转化B淋巴细胞技术，建立丙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC ）HCV阳性传代细胞株（LCL），并应用细胞培养、染色体显示、流式细胞荧光染色、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组化、原位RT-PCR及电镜等技术研究其分子生物学和免疫学特性。结果（1） LCL细胞核型47，XX，+mar，细胞表面CD19、CD20抗原阳性，CD21分子消失。（2）传代培养细胞中HCV RNA正链持续12个月阳性，而培养上清中则呈间断性阳性，无明显规律。HCV RNA负链在LCL细胞中也呈间断阳性。HCV基因分型为Ⅱ型株。（3）免疫组化、原位PCR和电镜发现HCV抗原蛋白、HCV RNA和病毒颗粒均存在于LCL细胞浆中；电镜发现HCV病毒颗粒呈圆球型，双层膜结构，定位于细胞胞质空泡内。直径多为45～70nm，个别为110nm。结论 HCV可以在EB病毒转化病人B细胞株中长期存活、复制和分泌。
作者：程计林；仝文斌；冯百芳；陶其敏；朱伟；刘宝玲；陈良标；陈佩兰 刊期： 2001年第03期
几乎所有的细胞因子均可由各种不同类型细胞在体外由有丝分裂原、钙离子载体、佛波醇酯（PMA）等物质诱导产生，从而为各种因子调控机理的研究提供了方便。传统的生物测定技术、酶联免疫法等只能检测分泌在体液或细胞培养上清中的因子，也不能确切分析产生各类因子的细胞类型。而流式细胞术（Flow cytometry，FCM）以单细胞分析为基础，通过特异性染色技术，可快速及准确地多参数定性和定量细胞膜、浆、核内多种物质，从而精确判断各细胞亚群中因子的表达情况〔2〕。本研究用PMA和钙离子载体（ionomycin，IONO）共刺激人外周血单个核细胞，通过monensin阻断、三聚甲醛（paraformaldehyde）固定、皂角素（saponin）破膜等方法，借助抗CD3、抗IL-2单克隆抗体，用FCM同时检测CD3+细胞和胞内IL-2阳性的细胞，分析了不同PMA及IONO浓度条件下，IL-2阳性CD3+细胞的百分率，为细胞亚群中各种因子的测定和研究提供了实验依据。
作者：孙瑛勋；裴武红；于鸣；黎燕；沈倍奋 刊期： 2001年第03期
幽门螺杆菌(Helicobactor pylori, Hp)作为慢性胃炎和消化性溃疡的重要致病因素已得到证实。近年来有关细胞因子在Hp致病过程中的作用已引起了人们的关注〔1〕。但IL-10、IL-12、IFN-γ在Hp感染的十二指肠溃疡（DU）中的作用，目前国内尚未见报道。本研究旨在探讨其临床意义。材料与方法 病例选择：36例活动性DU患者，男19例，女17例，年龄23～68岁，经胃镜及病理检查证实。应用洛赛克20mg、克拉霉素500mg和替硝唑500mg，每日2次，治疗1周，停药4～6周后复查胃镜，每位患者做2次胃镜检查时，在球部溃疡边缘或愈合后溃疡疤痕处活检粘膜组织1～2块，并在胃窦距幽门2～3cm处钳取粘膜组织3块备用。同时以16例健康体检或胃息肉胃镜切除术后复查者为对照。
作者：余跃；谭鸿；贺降福；张勇；吴素芬；黄仕和 刊期： 2001年第03期
我们收治儿童过敏性紫癜(AP)累及关节、胃肠、肾、心、肝、肺、脑中2个或2个以上器官受损的多器官损害44例，男23例，女21例，平均发病年龄8.91岁±2.57岁。诊断和器官损害标准符合实用儿科学有关章节。另选90名健康儿童作为对照组，男46名，女44名，平均年龄8.86岁±4.39岁。两组研究对象均为祖籍三代居住内蒙，无血缘关系和风湿性疾病及其家族史。以经典饱和酚/氯仿法从静脉血中提取DNA。应用PCR-SSP技术进行HLA-DQA1等位基因型别分析(方法见：Olerup等.应用PCR-SSP进行HLA-DQA1和DQB1基因分型.组织抗原杂志，1993)以β珠蛋白为内对照物。PCR条件为：预变性92℃ 2min；变性92℃ 30s；退火61℃ 45s；延伸70℃1min；共32个循环，后于70℃，延伸10min。扩增产物在琼脂糖凝胶上电泳，经紫外光透射检出DNA条带，确定其基因型，并分别出基因频率。各组间基因频率比较采用卡方或Fisher检验。当P<0.05时，依Woolf公式计算出相对危险率RR以及病因分数EF和预防分数PF。
作者：任少敏；仝林虎；睢俊卿；李维才；闫文瑛；锡林高娃；高忠献 刊期： 2001年第03期
目的研究核酶在细胞外切割HCV的作用。方法设计核酶cDNA序列。构建核酶重组质粒及HCV核心区基因cDNA重组质粒。分别进行体外转录，并加入γ-32P ATP以标记HCV RNA。将核酶RNA、HCV核心区RNA、RNA酶抑制剂及反应缓冲液混合温育，以核酶RNA切割HCV RNA。通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影来分析结果。结果β-半乳糖苷酶表型筛选均可见蓝色及白色菌落生长；核酶重组质粒直接测序结果见预期核苷酸序列；HCV重组质粒限制性酶切分析见410bp条带。核酶切割反应显示：反应时间为15和30*!min时可见453、307、146nt 3条带；反应时间为60min时仅见307及146nt 2条带。结论核酶重组质粒构建成功，所设计核酶对HCV有切割作用。
作者：丁芹；龚国忠；郑宣鹤；游学科 刊期： 2001年第03期
猪苓多糖是我国中药中的扶正固本药物，对某些肿瘤生长有抑制作用，但其机理尚未明确。本实验确定了猪苓多糖注射液对小鼠S180瘤的生长有抑制作用，并检测了猪苓多糖注射液对荷瘤小鼠脾细胞淋转、NK活性及脾组织IL-5 mRNA表达的影响，以期初步揭示猪苓多糖注射液的抑瘤作用机理。材料与方法 动物：BALB/c纯系小鼠，雌雄各半，8～12周龄，体重18～20克，一级动物，河北省实验动物中心提供，合格证号：04-0039。 细胞株：①肿瘤细胞株：S180瘤株为本校微生物免疫教研室张元杏教授惠赠。②NK敏感细胞株：YAC-1小鼠胸腺瘤细胞系，由本校实验动物中心吕占军教授惠赠。
作者：杜肖娜；何宏涛；王润田；刘殿武；王惠芬 刊期： 2001年第03期
目的探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）和慢性髓性白血病（CML）易感性与HLA-DRB1基因多态性之间的关联性，找出急性淋巴细胞白血病和慢性髓性白血病的易感基因。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）DNA分型技术对56例ALL患者、48例CML患者和105例健康对照进行了HLA-DRB1基因分型。结果 ALL患者组与HLA-DR7基因关联,基因频率为24.1%，RR =2.56，χ2=7.34，P<0.01；CML患者组与HLA-DR4基因关联，基因频率为22.9%，RR =5.076，χ2=17.88，P<0.01；其他等位基因频率在实验组与对照组间差异无显著性。结论提示在河南汉族人群中，HLA-DR7与ALL有关联，HLA-DR4与CML有关联。
作者：曹孟德；陈宗德；苏堤；秦东春；岳保红；苏天水；燕桂香；盛光耀 刊期： 2001年第03期
目的对6A8 α-甘露糖苷酶基因作染色体定位，比较6A8 α-甘露糖苷酶mRNA在人多种免疫细胞株的表达。方法用Fish原位杂交作染色体定位，用RT-PCR检测mRNA表达。结果 6A8 α-甘露糖苷酶基因定位于人第13号染色体长臂的31～32区。6A8 α-甘露糖苷酶mRNA在B细胞株SKW 6高表达，在B细胞株3D5、BJAB、CESS、Daudi、Nalm 6中度表达，在B细胞株Navalm，T细胞株GM、Jurkat，组织细胞瘤细胞株U937弱表达，在T细胞株Peer，慢性髓性白血病细胞株K562极弱表达。结论 6A8 α-甘露糖苷酶基因定位于人第13号染色体长臂的31～32区，其mRNA表达水平在各种人免疫细胞株不同。
作者：刘音；史耕先；王壮志；曾蠧；马凤蓉；李波；赵方萄；朱立平 刊期： 2001年第03期
目的对新近分离的导致1999年福建省登革热流行的登革2型病毒FJ-10株进行基因组全序列测定及系统发生树分析。方法利用RT-PCR和5′、3′RACE法扩增FJ-10株cDNA，并进行克隆测序。利用DNASTAR软件的Clustal方法绘制系统发生树。结果 FJ-10株基因组全长10723个核苷酸，有1个单一开放读码框架（ORF,第97～10269nt），编码3391个氨基酸，5′和3′非编码区长度分别为96和454个核苷酸。通过与标准株NGC株和我国其他地区分离株DEN2-04、43、44株比较，核苷酸同源性分别为94.0%、92.8%、93.9%和93.9%，氨基酸同源性分别为97.9%、97.2%、97.7%和97.9%。以47株登革2型病毒E/NS1连接区240个核苷酸序列进行系统发生树分析，福建株与印度尼西亚和斯里兰卡分离株亲缘关系较近，同属于第Ⅳ基因型。结论 FJ-10株基因组全序列一级结构与其他登革2型病毒类似，其基因型不同于我国其他地区分离株DEN2-04、43和44株。
作者：耿丽卿；秦鄂德；赵卫；胡志君；苑锡同；于曼；李晓萸；杨佩英 刊期： 2001年第03期
在HBsAg的ELISA法检测中，因试剂盒间的敏感度差异，常出现HBsAg含量在0.5～2.0ng/ml的低值弱阳性而被判为阴性的现象。为此，我们选用上海科华生物技术公司的ELISA法试剂盒，将近3年随访的50例HBsAg低值弱阳性乙肝患者的标本作如下分析。 采用RIA法测定HBsAg为弱阳性标本50例，HBsAg含量为1.581±0.325(眘???)??PCR????HBV???3????????3?????????-Hbe??HBc?HBcAg????????????(CIC)????????35.00%???????????????2.91?.42??50???????ALT?12.34?.59U/L?AST?11.52?.35U/L?GGT?14.34?.25U/L?
作者：姜玉章；余亚新 刊期： 2001年第03期
目的探讨猴病毒40（SV40）与人脑肿瘤发病的关系。方法采用聚合酶链反应 (PCR) 和原位杂交(ISH)同时检测30例正常人脑组织和198例人脑肿瘤组织以及SHG44和BT325两株人脑胶质瘤细胞系中SV40 DNA序列；并对SV40 DNA阳性肿瘤组织采用免疫共沉淀和Western blot检测大T抗原 (Tag) 的表达及Tag-RB复合物的存在。结果人脑肿瘤组织PCR SV40 DNA阳性率为48.5%（96/198），其中胶质瘤47.2% (42/89)，脑膜瘤48.8% (21/43)，脑垂体腺瘤51.4%(18/35)，神经鞘瘤43.8% (7/16)，先天性肿瘤53.3% (8/15)，正常人脑组织PCR SV40 DNA阳性率为 6.7% (2/30)。SHG44及BT325两株细胞中也分别检测出SV40的DNA序列。人脑肿瘤组织SV40 DNA阳性率显著高于正常人脑组织(P<0.01)。经ISH，仅在96例PCR SV40 DNA阳性的人脑肿瘤组织中检出87例阳性，2例SV40 DNA阳性的正常人脑组织中1例ISH阳性，SHG44及BT325两株细胞ISH SV40 DNA均阳性。SV40 DNA定位于肿瘤细胞核，阳性细胞呈弥漫或片灶状分布。96例SV40 DNA阳性脑瘤组织Tag表达阳性75例，所有Tag表达阳性瘤组织均发现Tag与RB形成特异性复合物。结论人脑肿瘤组织中存在SV40感染，提示SV40感染与人脑肿瘤有关；在人脑肿瘤组织中Tag广泛表达，Tag可能是SV40在人脑肿瘤发生发展中起作用的重要因素；SV40 Tag与RB 形成特异性复合物Tag-RB，导致RB活性丧失，可能是SV40致人脑肿瘤发生的一个重要机理。
作者：步星耀；梁庆华；范鲁鼎；冯祖荫；章翔；易声禹 刊期： 2001年第03期
将表达FasL的睾丸Sertoli细胞与肾细胞共同移植，联合应用环孢素（CsA）观察抗排斥效果，以探讨一条同种异体肾移植中移植体保护的新途径。 供受体为不同种系Wistar雄性大白鼠。用酶消化法制备供体睾丸Sertoli细胞及肾细胞。采用流式细胞仪检测FasL及Fas。按以下法建立同种异体移植模型：A组10只，仅移植肾细胞；B组16只，移植2种细胞（B左），任取其中6只大鼠（B右），右侧肾包膜下同时植入肾细胞，对比观察；C组10只，植入2种细胞，但Sertoli细胞注射前已用抗FasL抗体封闭。D组10只，植入2种细胞，并且使用CsA。术后20d免疫组化及计算机图象分析观察移植物中g-PG，TUNEL法观察移植物中凋亡细胞。
作者：孙晓青；赵鸿；薛松；郑骏年；连保罗；谢叔良 刊期： 2001年第03期
目的研究人骨髓瘤细胞系U266中的白细胞介素6(IL-6)信号转导途径及彼此之间的相互调控方式。方法首先采用凝胶阻滞电泳（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）方法观察分别参与两条IL-6信号转导途径的转录因子STAT3和NF-IL-6在U266细胞中的诱导激活状态并确定该细胞中的IL-6信号转导通路；继而采用转基因或化学试剂处理方法，特异性上调或下调其中一条IL-6信号途径的活化，并同时观察另外一条信号途径的激活状态。结果 1．以上两种转录因子分别参与的IL-6信号转导途径--JAK/STAT和Ras/NF-IL-6，它们都能够在U266细胞中诱导激活；2．在高剂量IL-6（1～100ng/ml）刺激范围之内，一条IL-6信号途径活化水平的升高可同时导致另一条信号途径活化水平的下降。结论在一定IL-6刺激剂量范围内，U266细胞中两条IL-6信号途径的诱导激活存在着相互拮抗作用。
作者：宋伦；黎燕；沈倍奋 刊期： 2001年第03期
是介导细胞凋亡的主要系统，我们应用逆转录-PCR方法，对37例慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Fas和FasL的表达进行检测，初步探讨其在慢性乙型肝炎患者活化诱导的外周血淋巴细胞凋亡中的作用。对象与方法 病例来源：我院1998～1999年37例慢性乙型肝炎患者，男26例，女11例，年龄16～60岁。诊断按1995年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎标准〔1〕。活动期：ALT>100U/L，乙肝标志物：HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性，HBV DNA阳性。排除HAV、HCV、HDV、HEV感染，及近3个月应用糖皮质激素等影响细胞凋亡药物的患者。
作者：邢同京；章廉；骆抗先；何海棠 刊期： 2001年第03期
目的利用噬菌体随机15肽库确定SLE相关多肽。方法从系统性红斑狼疮（SLE）病人血清中纯化抗dsDNA多克隆抗体，以此为筛选配基，对噬菌体随机15肽库进行亲和筛选。结果经3轮筛选，每轮的投入/产出比逐轮升高，提示筛选具有良好的富集效果。第3轮筛选后选其中18个克隆进行结合试验，结果显示有6个仅与SLE病人血清反应而不与正常人血清反应，经DNA序列测定，发现其中5个克隆序列相同，通过该序列推出插入的外源短肽序列，合成并纯化该肽段。用此肽段分别与20例SLE病人及20例正常人血清反应，结果差异有显著性。结论该肽段可能是与SLE相关的抗原多肽。
作者：施明；陶永涛；沈倍奋；柯磆；唐福林；张奉春；姚志建 刊期： 2001年第03期
目的分析和比较不同胎龄新生儿免疫球蛋白重链（IgH）基因CDR3序列特征，探讨新生儿成熟度对CDR3序列多样性的影响。方法从10例胎龄25～30周的极不成熟儿、12例胎龄31～36周的不成熟儿和11例胎龄37～41周的成熟儿脐血B细胞中抽提模板DNA，使用巢式PCR技术扩增IgH基因、然后对扩增物进行克隆和CDR3序列测定。结果①在极不成熟儿、不成熟儿和成熟儿，CDR3长度分别为29.4±7.8、32.4±9.2和40.8±10.7bp，其中的N区-D基因片段-N区（NDN）长度分别为13.5±5.6、16.1±7.8和22.0±8.5bp。②极不成熟儿和不成熟儿优先使用DP73和DP75，成熟儿优先使用VH5、DP73和DP75；随着胎龄的增加，DP73和DP75的使用率下降，而VH5的使用率上升。③对于D基因片段的使用，极不成熟儿主要是DN、DQ52和DXP，不成熟儿和成熟儿主要是DXP、DLR和DN。④所有新生儿中，JH4的使用率高，其次是JH6，但随着胎龄增加，JH4和JH6的使用率下降。⑤极不成熟儿、不成熟儿和成熟儿中，分别63.3%、68.8%和92.0%的克隆有开放性阅读框，其长度为303bp，编码101个氨基酸残基。结论新生儿的早期生长发育阶段，IgH基因的VH-D-JH重排机制已处于活化状态，但其多样性有限；新生儿体液免疫系统的发育是一个渐进的过程，具有不同成熟度的新生儿CDR3重排基因既有异型性又有相似性
作者：肖昕；熊爱华；周晓光 刊期： 2001年第03期
中华微生物学和免疫学杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
