学术投稿

人腺苷激酶在大肠杆菌中的表达与纯化

黄湘;马瑞娟;孙敏英;杨学习

关键词:腺苷激酶, 表达, 纯化, 包涵体, 复性
摘要:目的 诱导人腺苷激酶组组蛋自在大肠杆菌中表达,并对表达的重组蛋白进行纯化.方法 将由人腺苷激酶基因开放阅读框与原核表达载体pET30a(+)连接构建的重组蛋白表达载体pET30a(+)/ADK转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞.1 mmol/L的IPTG诱导重组蛋白表达.离心收集菌体后结合使用溶菌酶、冻融和超声破碎的方法裂解菌体.用含2 mol/L和4 mol/L尿素的结合缓冲液洗涤包涵体去除部分杂蛋白.随后用含8 mol/L尿素的结合缓冲液变性溶解剩余包涵体沉淀.用Ni-NTA柱通过亲和层析纯化重组蛋白,用含8 mol/L尿素的洗脱缓冲液洗脱.收集样品透析复性.结果 成功构建人腺苷激酶原核表达载体且目的 蛋白以包涵体形式表达.经包涵体洗涤、变性溶解,亲和层析及分步透析复性获得纯度达85%以上的重组蛋白.结论 人腺苷激酶表达载体的成功构建以及重组蛋白的纯化.为进一步进行其结构和功能的研究奠定了基础.
热带医学杂志相关文献
  • 肠道病毒71型60 mer寡核苷酸探针的设计

    目的 设计肠道病毒71型(EV71)诊断芯片的寡核苷酸探针.方法 使用NCBI获取全基因组序列,利用BLAST系统对基因序列进行比对,获取特异性序列;利用Array designer 4.2对其进行寡核苷酸探针设计.结果 设计出12条60 mer寡核苷酸探针,为芯片的制备做准备.结论 将BLAST系统和Array designer 4.2软件相结合,能快速有效地设计出诊断芯片的探针.

    作者:夏巍;马文丽;肖维威;郑文岭 刊期: 2010年第01期

  • 一起酒楼聚餐所致的霍乱暴发调查分析

    目的 分析一起霍乱暴发疫情特征与影响因素,为今后预防霍乱暴发提供科学依据.方法 调查所有聚餐人员及接触者,按<霍乱防治手册>确定病例.结果 调查就餐者813人,发现病例4例(病原学诊断3例,临床诊断1例),带菌者116例,病原学确认均为0139血清型.感染率为14.76%,带菌率为14.27%,罹患率为0.49%;所有感染者均有同一就餐史,未就餐者未感染.结论 本次疫情为霍乱爆发,感染率高.发病原因可能为食用的甲鱼或虾污染霍乱弧菌所致.

    作者:肖邦忠;李勤;龙江;夏宇;赵寒 刊期: 2010年第01期

  • LEEP治疗310例宫颈病变的临床观察

    目的 探讨宫颈环形高频电波刀电切术(LEEP)治疗宫颈病变的临床应用价值.方法 对液基细胞学(TCT)检查、阴道镜宫颈多点活检诊断为宫颈病变的310例患者进行LEEP术,其中慢性官颈炎280例,宫颈湿疣5例,CIN Ⅰ-Ⅱ级22例,CINⅢ级3例,切除组织全部送病检.同时观察手术时间、手术出血量及手术疗效.结果 LEEP术后2个月慢性宫颈炎95%完全愈合,CIN术后2个月88%愈合,3个月后CIN患者100%愈合.手术前后病理诊断相吻合率为99%(307/310),仅3例有差异,其中1例术前CIN Ⅱ,术后CIN Ⅲ;1例术前CIN Ⅲ,术后为原位癌;1例术前宫颈炎,术后为HPV感染.310例患者中,1例CINⅢLEEP术后病理报告为原位癌,LEEP切下之标本切缘未见病灶,患者本人要求子宫切除.结论 LEEP术是目前治疗宫颈病变的佳方法,且可提供完整的病检标本,对宫颈微浸润癌及原位癌的早期诊断价值高,是预防宫颈浸润癌的有效手段.

    作者:宋冬冬;赵婧;彭伟 刊期: 2010年第01期

  • 细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠脾细胞增殖变化的研究

    目的 探讨细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠的囊重抑制率及脾细胞增殖的变化.方法 将细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔内接种和口服灌胃4种途径免疫BALB/c小鼠,免疫后8周每鼠用50个Eg原头节攻击感染,感染后25周剖杀小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;取脾,分离脾细胞,用Eg粗抗原(EgAg)或刀豆素A(ConA)刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫小鼠脾细胞增殖反应,同时设有空载体、Bb和MRS对照.结果 以上4种疫苗接种组小鼠的囊重抑制率分别为45.33%、41.33%、70.67%和62.67%;疫苗接种组的脾细胞明显增殖:鼻腔内接种和口服免疫组的脾细胞增殖显著高于皮下和肌肉注射组.结论 细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生特异性的细胞免疫反应.

    作者:周必英;陈雅棠;李文桂;杨梅 刊期: 2010年第01期

  • 广州市番禺区人群b型流感嗜血杆菌多糖抗体水平调查

    目的 了解番禺区全年龄组人群抗b型流行性感冒(流感)嗜血杆菌荚膜多糖(Hib-PRP)自然抗体水平和儿童免疫后抗体水平.方法 用酶联免疫吸附试验检测509份不同年龄组健康人群和80份健康儿童血清的抗Hib多糖抗体.结果 人群血清抗Hib-PRP抗体总阳性率为69.4%,随着年龄的增长,抗体水平逐渐上升,31岁以上的人群血清抗Hib-PRP抗体阳性率达到80%以上;儿童完成全程免疫后,抗体水平增长,12~36月儿童的抗体阳性率达到78.9%,但未完成全程免疫的儿童,抗体阳性率较低.结论 番禺区人群抗Hib多糖自然抗体水平较高,未完成全程免疫的儿童抗体阳性率较低.

    作者:许晓茵;李功理;李美霞 刊期: 2010年第01期

  • 慢性乙肝患者肝脏Fibroscan测量值与实验室检查及影像学检查之间关系的分析

    目的 分析瞬时弹性成像(fibroscan)对慢性乙肝患者肝脏硬度测量值与血清纤维化指标、肝功能、血常规、HBV状态及肝脏影像学检查之间的相关性.方法 对68例慢性乙肝患者使用Fibroscan测量肝脏硬度,并同时检测血清纤维化指标(HA、LN、IV-col、PIIIP)血常规、肝功能(ALT、AST、GGT、TBIL及A/G)以及行影像学检查.分析弹性测量值与肝纤指标、转氨酶以及B超或CT结果之间以上指标的相关性.结果 弹性测量值与HA、LN、IV-col、AST、GGT呈正相关(r分别为0.662,0.558,0.562,0.695,0.686).Fibroscan值在HBeAg阳性及阴性组之间无明显差异(P=0.583).在31例影像学正常组患者中,肝脏硬度测量值为7.895±4.007,21例光点增粗中硬度测量值为10.357±4.602,16例肝硬化组为18.342±4.347,正常组与光点增粗组之间比较差异有统计学意义(P=0.038).正常组与肝硬化组比较差异有统计学意义(P=0.00),但光点增粗组与肝硬化组之间差异无统计学意义(P=0.066).结论 Fibroscan测量值与肝功能损伤的程度及血清肝纤维化指标明显相关.

    作者:张倩华;高文军;程倩娜;郭炜;黎清波;卫敏 刊期: 2010年第01期

  • 东莞市基层领导干部艾滋病知识调查分析

    目的 了解东莞市基层领导干部的艾滋病防治知识、流行趋势判断和策略态度,分析影响因素,为改进策略提供依据.方法 采用统一的问卷,组织领导干部集中开展自答式匿名问卷调查.结果 领导干部艾滋病防治知识的知晓率为77.6%,只有46.1%认为疫情严重,而且有继续扩散和蔓延的可能,11.9%建议成立1个艾滋病村,集中居住和管理,8.7%主张公布感染者的个人信息,防止别人被其感染.如果自己所处单位有人感染艾滋病,16.9%要求其以辞工、病退或内退等方式离开单位,16.4%认为公布其感染情况,并建议全单位进行一次健康筛查.结论 东莞市基层领导干部艾滋病知识掌握程度较高,但某些领导干部防治态度和意识比较保守.今后应加强对领导干部的政策普及、政策开发、政策倡导.

    作者:方晓君;张巧利 刊期: 2010年第01期

  • IL-18和IL-10在慢性丙型肝炎抗病毒疗效中的早期预测作用

    目的 观察慢性丙型肝炎患者干扰素联合利巴韦林治疗过程中血清白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-10(IL-10)水平的变化,探讨它们在慢性丙型肝炎抗病毒疗效中的早期预测作用.方法 采用酶联免疫吸附(ELISA)检测30例正常人,82例慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗前、治疗4周、治疗24周血清中IL-18和IL-10的水平,同时检测肝功能和HCV RNA(定量PCR法).结果 慢性丙型肝炎患者治疗前血清IL-18和IL-10的水平显著高于正常人(P<0.01),其值与谷丙转氨酶(ALT)活性呈显著正相关.抗病毒有效者,在不同时间点血清IL-18和IL-10的水平均较治疗前显著下降(P<0.05),其中,完全应答组细胞因子水平治疗前后改变更显著,而无效者改变不明显.结论 IL-18和IL-10在慢性丙型肝炎发病中起一定作用,早期检测IL-18和IL-10的水平对干扰素联合利巴韦林抗病毒的疗效预测有重要意义.

    作者:应若素;刘惠媛;石裕明;范慧敏;龙英姿;姚细安;唐漾波 刊期: 2010年第01期

  • 广州市2008年霍乱疫情监测结果分析

    目的 阐明广州市2008年霍乱疫情和霍乱监测现状.方法 对广州市2008年霍乱疫情报告信息系统和监测系统的监测数据及信息进行统计与分析.结果 2008年全市报告2例散发霍乱病例,均为本地病例,无输入性病例报告,报告病例数较2007年(8例)降低75%.肠道门诊病人登记数和检索病例数占同期医院门诊比例分别1.95‰和0.44‰,肠道门诊检索数占登记数的比例全市平均22.68%,外环境常规和应急监测共检出6份阳性标本,其中小川型4份,稻叶型和0139各1份,霍乱主要毒力基因检测结果均为阴性.结论 2008年广州市霍乱监测及时发现两起散发霍乱疫情,经及时调查和处理,疫情未造成扩散和蔓延.监测信息做到及时上报和反馈,信息传递顺畅,全市霍乱监测系统运行状况良好.

    作者:罗雷;康燕;李美霞;魏跃红 刊期: 2010年第01期

  • 日本血吸虫Sj23疫苗研究进展

    血吸虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,研制疫苗防治该病已成为目前研究的热点领域.本文主要针对日本血吸虫膜蛋白(Sj23)的重组抗原、蛋白质疫苗、DNA疫苗、树突状细胞疫苗等方面的研究进展作综述.

    作者:蔡世飞;李文桂 刊期: 2010年第01期

  • 强直性脊柱炎患者外周血T细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达

    目的 探讨强直性脊柱炎患者外周血T细胞凋亡相关蛋白的表达以及T细胞凋亡状况,分析其在疾病免疫发病机制的作用.方法 CT检查患者骶髂关节并分级.尼龙棉柱法分离患者外周血T细胞,PI染色结合流式细胞术检测T细胞凋亡率.免疫组化法检测T细胞促凋亡蛋白FADD、Caspase-3、Caspase-8和抗凋亡蛋白FLIP表达.结果 与健康对照相比,强直性脊柱炎患者外周血T细胞凋亡率明显降低(P<0.05);促凋亡蛋白FADD、Caspase-3、Caspase-8百分率均明显降低(P<0.05),抗凋亡蛋白FLIP百分率明显升高(P<0.05).结论 强直性脊柱炎患者外周血T细胞凋亡蛋白及抗凋亡蛋白表达异常和T细胞凋亡不足与患者免疫学发病机制相关.

    作者:赵丹;杨小猛;苏卓娃;马文松 刊期: 2010年第01期

  • 816株真菌感染分布及药敏分析

    目的 了解本院医院感染真菌分布的特点及对常用抗真菌药物的耐药情况.方法 CHROMagar显色培养基及ATB真菌试剂盒进行鉴定;药敏试验采用纸片扩散K-B法.结果 2008年1月至2009年6月我院临床共分离真菌816株,其中白色念珠菌(占53.2%)是引起真菌感染的常见菌种,其次是热带念珠菌(21.6%)、光滑念珠菌(15.6%)、近平滑念珠菌(5.0%)和克柔念珠菌(2.3%).药敏试验结果显示各种真菌对两性霉素B、制霉菌素的敏感性高,分别达98%和99%,其次是氟康唑、伊曲康唑.结论 真菌感染率呈逐年上升趋势,耐药率也逐渐增高.因此应及时对送检标本进行真菌培养和药敏试验,合理使用抗真菌药物,减少医院感染多重耐药和深部真菌感染的发生.

    作者:陈晶;耿穗娜;芮勇宇;裘宇容;苏冰 刊期: 2010年第01期

  • 曼氏血吸虫己糖激酶(SmHK)蛋白质结构与功能的生物信息学预测

    目的 应用生物信息学技术预测曼氏血吸虫己糖激酶(SmHK)的结构和功能,为进一步功能研究提供信息.方法 从GenBank获取SmHK及其他物种HK全长cDNA序列及氨基酸序列,应用NCBI、Expasy等在线生物信息学网站及VectorNTI软件包,对所获氨基酸序列的保守功能域及基序、蛋白质理化参数、亚细胞定位、亲水性、B细胞线性表位、二级结构及拓扑结构、三级结构建模分析及预测.结果 SmHK编码451氨基酸残基,理论分子量为50 446.01 Da,具有完整HK-1及HK-2保守功能域.与结构和功能有关的位点高度保守,与宿主(人、鼠)的同源性为30%,与人等脊椎动物有较近的进化关系;有多个潜在的抗原表位、多个磷酸化位点及1个跨膜结构.三级结构分子建模显示该蛋白两基团间有一裂隙,葡萄糖、ATP结合位点及ATP催化区位于该裂隙中或周围,跨膜区与其两端的碱性氨基酸形成一阴离子通道.结论 SmHK与结构和功能相关的位点高度保守,与宿主有较近的进化关系,推测该蛋白可能通过跨膜区锚定在线粒体外膜上,主要功能位点位于蛋白裂隙中或周围,多个磷酸化位点说明其参与多种细胞功能的调节,在调节能量代谢中起重要作用,是潜在的疫苗候选分子和药物作用靶标.

    作者:吕刚;赵世勇;李静晶;范志刚;芦亚君 刊期: 2010年第01期

  • 时间分辨荧光免疫分析技术在寄生虫病诊断中的应用

    时间分辨荧光免疫分析(Time-resolved fluomimmunoassay,TRFIA)是一种新型的体外超微量分析技术,被公认为是目前灵敏度高的分析方法之一,并以其独特的优势近些年迅速发展,已延伸至生物医学、临床医学研究的各个领域.本文就该技术的研究进展及在某些寄生虫病检测诊断中的相关应用作一简要综述.

    作者:邓传欢;吴英松;徐劲 刊期: 2010年第01期

  • 福建北部政和县斯氏并殖吸虫病新疫区调查

    目的 了解福建北部政和县病例所在地肺吸虫流行情况.方法 对病例所在乡村进行人群感染情况以及传播宿主调查.结果 政和县西表村人群皮试阳性率7.53%(28/372),其中5~岁与21~岁年龄组皮试阳性率分别为9.76%(12/123)和6.43%(16/249);男、女性皮试阳性率分别为9.50%(17/179)和5.70%(11/193),年龄组及男女性别皮试阳性率无显著差别.皮试阳性者的ELSAS阳性检出率为35.71%(10/28),其中5~岁与21~岁组ELESA血清抗体阳性率分别为66.67%(8/12)和12.50%(2/16),两年龄组ELESA血清抗体阳性率具显著性差异.小桥拟钉螺与建欧拟小豆螺的斯氏并殖吸虫尾蚴感染率分别为1.02%和0.08%.福建华溪蟹和福建博特溪蟹的斯氏并殖吸虫尾蚴感染率分别为80.6%和33.3%.结论 政和县存在高度感染的斯氏并殖吸虫病流行区,青少年为本病的防治重点.

    作者:魏焕旺;程由注;曾永平;江典伟;林陈鑫 刊期: 2010年第01期

  • 深圳市福田区2008年急性出血性结膜炎疫情分析

    目的 了解深圳市福田区2008年急性出血性结膜炎发病情况及流行特征,为预防控制该病提供科学依据.方法 采用描述性流行病学方法对全区2008年急性出血性结膜炎的疫情资料进行分析.结果 福田区2008年报告急性出血性结膜炎病例105例,无死亡病例,年报告发病率为8.75/10万;全年4~6月为发病高峰;全区各街道均有疾病报告;病例的职业分布主要在其他23例(21.91%)、商业服务人员18例(17.14%)、干部职员13例(12.38%);发病年龄高峰集中于20~45岁,发病72例,占发病总数的68.57%;男性略多于女性,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 健全传染病预警机制,开展急性出血性结膜炎社区监测和卫生宣教管理工作,提高居民的个人防病和保健意识是预防疾病流行的首选策略.强化集体单位、公共场所的卫生消毒管理是切断传播途径的重点环节.及时准确地隔离治疗病人是控制流行的重要措施.

    作者:肖骞;司徒潮满;黄慈林;石向辉;范苏云;段丽娜;牛姬飞 刊期: 2010年第01期

  • 己酮可可碱对兔单肺通气期间TNF-α、NO及SOD干预作用的研究

    目的 观察已酮可可碱对实验兔单肺通气肺损伤的影响.方法 20只新西兰白兔麻醉后气管切开行单侧主支气管插管机械通气后,随机分为对照组(单肺通气组n=10);实验组(单肺通气+己酮可可碱静脉滴注组n=10),采用容量控制机械通气模式(Vt=8 ml/kg,f=30次/min)通气3 h.分别于麻醉后及单肺通气3 h后抽取血样行动脉血气分析测定氧合指数.实验完成后处死白兔,取其肺叶组织测量肺湿/干重比(W/D),检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,观察肺组织病理形态学变化.结果 与对照组比较,实验组氧合指数提高(P<0.05);W/D降低(P<0.05):BALF中TNF-α、NO含量均下降(均P<0.05)、SOD活力水平明显升高(P<0.01);病理损伤程度较轻.结论 己酮可可碱可改善单肺通气功能,减轻肺损伤程度,对兔单肺通气所致肺损伤起到一定的保护作用.

    作者:李真;马珏;李红英;马薇涛;赵国栋 刊期: 2010年第01期

  • 加味镇眩颗粒对高血压大鼠心肌基质金属蛋白酶-2和微血管密度的影响

    目的 观察加味镇眩颗粒对自发性高血压大鼠(SHR)血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、心肌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达水平和微血管密度(MVD)的影响.方法 将50只SHR大鼠随机分为加味镇眩颗粒高剂量组、加味镇眩颗粒中剂量组、加味镇眩颗粒低剂量组、卡托普利组、SHR对照组,经过12周的干预,分别测定动物血压变化,血浆Ang Ⅱ含量、免疫组织化学法检测心肌MMP-2蛋白表达水平、心肌微血管密度.结果 治疗组均可降低SHR血压、血浆Ang Ⅱ含量、心肌MMP-2蛋白表达水平.增加SHR心肌微血管密度.与SHR组相比差异具有统计学意义(P<0.05),中药组中,加味镇眩颗粒高剂量组效果好.与卡托普利组相比,高剂量组在12周末降压效果相当(P>0.05),且更能降低心肌MMP-2蛋白表达水平(P<0.05),增加SHR心肌微血管密度(P<0.05).结论 加味镇眩颗粒可降低SHR血压,可能与降低血浆血管紧张素Ⅱ含量,下调心肌MMP-2蛋白表达水平,改善SHR大鼠心肌微血管稀疏的作用有关.

    作者:苗治国;陈宝田;吕聪枝 刊期: 2010年第01期

  • 广州市海珠区76例婴儿麻疹病例分析

    目的 对广州市海珠区76例婴儿麻疹病例进行分析,以了解其不断增多的原因,制定防制策略.方法 将国家疾病监测信息报告管理系统中上报的该区婴儿麻疹病例采集静脉血测麻疹IgM抗体,并问卷调查,然后进行分析.结果 76例病例中,有55例麻疹抗体阳性,21例抗体阴性.阳性病例中,小于8月龄26例(47.3%),而≥8月龄(麻疹免初月龄)的29例病例中有麻疹疫苗(MV)接种史的占31.0%,其中本地病例接种率为63.6%,外地病例为11.1%,差异有统计学意义(χ2=6.518,P<0.05).病例调查前后的诊断一致率为81.6%(χ2=25.47,P<0.05);医院未抽血检验的达19例(25.0%),其误诊率达31.6%.结论 抽血送检率低、误诊率较高、外地儿童增多且其MV及时接种率低、存在免疫失败、母传抗体低使未到MV初免月龄的婴儿发病增多等是导致该区婴儿麻疹病例不断增多的原因.

    作者:杨波;栾玉明;潘捷云 刊期: 2010年第01期

  • 鼻内镜鼻窦术后醋酸曲安奈德注射迎香穴的疗效和安全性

    目的 研究鼻内镜鼻窦手术后醋酸曲安奈德注射迎香穴的疗效和安全性.方法 在住院准备行手术的慢性鼻窦炎鼻息肉病人中随机设置对照组A、B和研究组各50例,对照组A术后予常规处理,对照组B术后强的松30 mg口服14 d,研究组术后第1天用醋酸曲安奈德注射双侧迎香穴1次(每侧各20 mg),在术后第3、6、12个月进行症状和鼻内镜评分,监测血糖和胃肠道症状等副作用.结果 术后第3个月研究组和对照组B的症状和鼻内镜评分都显著优于对照组A(P<0.05),但这两组间差异无统计学意义(P>0.05),第6、12个月症状和鼻内镜评分三组差异无统计学意义(P>0.05).术后第15天,对照组B血糖高于另外两组(P<0.05),术后第30天,三组间差异无统计学意义(P>0.05).3例对照组B患者和1例研究组患者出现胃肠不适,在抗酸治疗后症状消失.未观察到有其他并发症的发生.结论 鼻内镜鼻窦手术后醋酸曲安奈德注射迎香穴可促进症状和术腔恢复,安全性好.

    作者:谢希翔;刘洪斌 刊期: 2010年第01期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会