学术投稿

DiI荧光标记的软骨细胞与支架材料复合后的观察

纪玲;武延格;孙学峰;王正;杨林

关键词:组织工程, 软骨细胞, DiI荧光标记
摘要:目的:通过Dil荧光染料标记观察软骨细胞在聚乳酸/乙醇酸共聚物支架(PLGA)体外和体内培养环境中的生长状态,为研究组织工程化软骨探索一种理想的软骨细胞示踪方法.方法:体外分离培养大鼠剑突软骨细胞,应用DiI标记软骨细胞,通过MTT法测定细胞的增殖活性.DiI荧光标记的软骨细胞种植于PLGA支架上分两组:一组体外培养1周,另一组体外培养1周后,再植入同系大鼠大网膜体内培养1周.分别取出细胞一支架复合物,在荧光显微镜下观察体外和体内条件下软骨细胞的荧光表达情况.结果:应用DiI标记不影响软骨细胞的增殖,MTT测定结果显示标记组和对照组的A值未见显著性差异(P>0.05).标记后的软骨细胞显示环状红色荧光,胞核未着色.体外培养和体内培养的软骨细胞一支架复合物,均可在荧光显微镜下观察到红色荧光表达.结论:DiI荧光染料能够有效标记软骨细胞,标记的细胞一支架复合物可直接在荧光显微镜下进行观察,可作为体外和体内构建组织工程软骨的较好的示踪方法.
暨南大学学报(自然科学与医学版)杂志相关文献
  • 老年急性冠脉综合征患者的细胞免疫功能变化

    目的:通过检测老年急性冠脉综合征(ACS)病人血清中的细胞因子γ-干扰素(IFN-γ),免疫细胞表面抗原分子CD3~+、CD4~+、CD8~+的浓度水平,探讨老年ACS病人的细胞免疫功能改变.方法:36例ACS患者为实验组,40例正常对照组老年人的外周静脉血,酶联免疫吸附法(ELISA)测定IFN-γ含量,采用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶染色法(APAAP)测定T淋巴细胞亚群细胞数.结果:实验组IFN-γ含量和CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+比值低于对照组(P=0.001),而CD8~+则高于对照组(P=O.001),差异均有显著性意义.结论:老年ACS患者体内细胞免疫功能的改变可能对ACS的形成和发展产生了一定的影响,T淋巴细胞亚群比值和IFN-γ含量变化可作为老年ACS严重程度的监测指标.

    作者:叶少武;张康;唐剑;莫丕立;黎志革;陈永雄;陆兆华;彭晓燕;陀健琳 刊期: 2009年第06期

  • OX40L在小鼠B16黑素瘤细胞中表达及对活化淋巴细胞凋亡影响

    目的:构建OX40L的真核表达载体,分析其在B16细胞中的表达,研究OX40L对活化T淋巴细胞凋亡的影响.方法:以小鼠C57BL/6脾脏的cDNA为模板,PER扩增小鼠OX40L基因,构建真核表达载体pVAX1-OX40L,转染B16细胞后,荧光染色检测OX40L的表达;利用AnnexinV-PE凋亡试剂盒,检测B16黑素瘤细胞-淋巴细胞体外混合培养中对活化淋巴细胞凋亡的影响.结果:成功构建OX40L的真核表达载体,并转染B16细胞中,流式细胞术和激光共聚焦显微术均可检测到OX40L表达于B16细胞表面.淋巴细胞体外混合培养显示,表达OX40L的B16细胞组活化淋巴细胞的凋亡率为6.57%,而空质粒转染组为17.24%.结论:OX40L能表达于B16细胞表面,并能显著抑制活化淋巴细胞凋亡.

    作者:高琦;徐丽慧;郭贺;欧阳东云;王笑迎;何贤辉 刊期: 2009年第06期

  • 超抗原SEA体外对Jurkat T淋巴细胞增殖活性与表面超微结构的影响

    目的:通过显微形态观察和功能检测分析超抗原(SEA)对Jurkat T淋巴细胞的影响.方法:应用CCK-8法,原子力显微镜(AFM)体外检测Jurkat T淋巴细胞增殖活性、及其细胞膜超微结构的改变.结果:与对照组比较,不同浓度的SEA随着作用时间的增加,细胞膜超微结构与Ra值明显发生改变.Jurkat T淋巴细胞经过质量浓度为0.1-100 mg/L SEA,作用48 h期间,Jurkat T细胞的表面超微结构(平均粗糙度,Ra)和增殖活性(A值)变化非常明显.其中,质量浓度10 mg/L SEA作用24 h,Jurkat T淋巴细胞表面结构变化明显,而细胞增殖活性在48 h达强.结论:SEA作为超抗原作用于Jurkat T淋巴细胞后,Jurkat T淋巴细胞的活化表现出表面形态结构改变先于代谢水平的改变,较后者更灵敏.

    作者:郜世隽;林晨;龚超群;杨力建;李扬秋;蔡继业;田红霞;高永鹏 刊期: 2009年第06期

  • 重组hFGF-7腺病毒对角质形成细胞的生物学效应

    目的:研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子7(hFGF-7)对人皮肤角质形成细胞(HaCat)的生物学效应.方法:通过倍比稀释和感染实验,测定重组腺病毒rAd-hFGF-7的滴度;流式细胞术检测重组腺病毒感染HaCat细胞的感染效率;MTT法检测rAd-hFGF-7对HaCat细胞增殖的影响;重组腺病毒对HaCat细胞周期的影响通过流式细胞术进行检测.结果:高滴度重组腺病毒可高效感染HaCat细胞,其促细胞增殖作用随着重组腺病毒MOI值的增加而增强,当MOI值为50时,感染细胞进入S期和G_2期的细胞比率显著增加.结论:重组腺病毒rAd-hFGF-7可促进HaCat细胞的增殖,改变HaCat细胞周期.

    作者:吴晓萍;曾耀英 刊期: 2009年第06期

  • DiI荧光标记的软骨细胞与支架材料复合后的观察

    目的:通过Dil荧光染料标记观察软骨细胞在聚乳酸/乙醇酸共聚物支架(PLGA)体外和体内培养环境中的生长状态,为研究组织工程化软骨探索一种理想的软骨细胞示踪方法.方法:体外分离培养大鼠剑突软骨细胞,应用DiI标记软骨细胞,通过MTT法测定细胞的增殖活性.DiI荧光标记的软骨细胞种植于PLGA支架上分两组:一组体外培养1周,另一组体外培养1周后,再植入同系大鼠大网膜体内培养1周.分别取出细胞一支架复合物,在荧光显微镜下观察体外和体内条件下软骨细胞的荧光表达情况.结果:应用DiI标记不影响软骨细胞的增殖,MTT测定结果显示标记组和对照组的A值未见显著性差异(P>0.05).标记后的软骨细胞显示环状红色荧光,胞核未着色.体外培养和体内培养的软骨细胞一支架复合物,均可在荧光显微镜下观察到红色荧光表达.结论:DiI荧光染料能够有效标记软骨细胞,标记的细胞一支架复合物可直接在荧光显微镜下进行观察,可作为体外和体内构建组织工程软骨的较好的示踪方法.

    作者:纪玲;武延格;孙学峰;王正;杨林 刊期: 2009年第06期

  • 643例药品不良反应分析

    目的:分析我院药品不良反应(ADR)的发生特点,为合理用药提供参考.方法:对我院近4年的药品不良反应(ADR)报告进行回顾性分析.分析项目包括:发生ADR患者的性别、年龄等基本情况;给药途径;涉及的药品种类及不良反应描述.结果:本组ADR以皮肤及其附件的损害常见(44.79%),其次是输液样反应(15.40%)、消化系统(12.29%)及心血管系统损害(10.89%).结论:涉及的药物以抗菌药物所占比例高,其次为中成药.

    作者:陈琳;李俊杰;杨为;冯鸣燕 刊期: 2009年第06期

  • 大蒜多糖B对免疫抑制小鼠免疫活性的调节

    目的:研究大蒜多糖B(GP-B)对免疫抑制小鼠体内免疫活性的调节作用.方法:用氢化可的松(HC)皮下注射制造免疫功能抑制的动物模型,以左旋咪唑作为阳性药物对照.给模型小鼠分别灌胃生理盐水、多糖溶液,连续12 d,灌胃多糖溶液质量分数分别为1 600、800和400 mg/kg.通过流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+的百分比,计算胸腺指数和脾脏指数,检测脾细胞增殖情况及腹腔巨噬细胞吞噬功能等实验对大蒜多糖B的免疫学活性进行研究.结果:以大蒜多糖B质量分数为800 ms/kg灌胃的小鼠CD_3~+CD_4~+T细胞百分率以及CD_4~+/CD_8~+比值明显增高(P<0.05),同时免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性显著增强(P<0.05).但该浓度的GP-B降低了CD_3~+CD_8~+细胞百分比(P<0.05),且对脾T淋巴细胞转化率无促进作用.结论:大蒜多糖B对免疫抑制小鼠的T淋巴细胞亚群及巨噬细胞的吞噬功能具有正向调节作用.

    作者:岳丽;王辉;黄雪松;沈伟哉 刊期: 2009年第06期

  • 人颞肌亚部化及其肌内神经分布研究

    目的:查明人颞肌肌内神经、肌梭的配布特征以及相互关系,为临床成功进行肌移植提供解剖学依据.方法:20侧成人尸体颢肌标本,每具尸体选1侧,共10侧采用改良Sihler氏神经染色观察颞肌肌内神经分布.另10侧标本,依据颞肌肌纤维排列方向分前、中、后3部份,分别制作组织块,HE染色后应用图像分析仪对颞肌肌梭的形态结构、空间构象以及分布密度进行体视学分析.结果:改良Sihler氏神经染色显示颞肌有3条独立的神经分支呈放射状由颢肌下缘向肌远端分布.颞肌肌梭分布呈不均质性.在颞肌前部近喙突处神经分支密集区,肌梭分布密度高,空间构象多样;而在颞肌后部以及颞肌的远端缺乏肌梭的分布.结论:颞肌可划分为3个功能完整和独立的肌亚部.

    作者:张跃蓉;刘静 刊期: 2009年第06期

  • 小腰大边型封堵器堵闭膜部瘤室间隔缺损68例观察

    目的:探讨小腰大边封堵器堵闭室间隔膜部瘤缺损(PPVS)的不同部位的疗效及并发症.方法:对68例室间隔缺损(VSD)伴膜部瘤患者进行小腰大边封堵器介入治疗,术中左室造影,根据瘤体形态分为4种类型,选择4~14 mm封堵器选择不同部位进行封堵.术后24 h、1个月、3个月、6个月、12个月予以胸片、心电图、经胸超声心动图检查.结果:本组68例采用细腰大边封堵器进行封堵室间隔缺损(VSD)的患儿中,62例成功(91%).术后24 h复查超声心动图,8例少量残余分流.术后1年复查残余分流消失.9例传导阻滞患者心电图3个月内均恢复正常.结论:小腰大边封堵PPVS是安全和可行的方法,并发症少,但需正确判断膜部瘤的大小、形态、位置及瓣膜功能.

    作者:高虹;董少红;张智伟;罗林杰;石继军;陈科奇;王树水;李俊杰 刊期: 2009年第06期

  • ERK_(1,2)抑制剂联合5-FU对B16细胞增殖和凋亡的影响

    目的:观察ERK_(1,2)抑制剂联合5-Fu对B16细胞增殖和凋亡的影响,并探讨作用机制.方法:用MTT法观察ERK_(1,2)抑制剂、5-FU和联合用药对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率,用RT-PCR观察ERK_(1,2)抑制剂、5-Fu和联合用药对bcl-2和caspase-9的表达的影响.结果:ERK_(1,2)抑制剂联合5-Fu组在抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,均较对照组、单独用药组作用增强,并且下调bcl-2和上调easpase-9的表达.结论:ERK_(1,2)抑制剂联合5-Fu有协同抑制B16细胞增殖,促进凋亡的作用,其机制可能与诱导细胞凋亡,下调bcl-2和上调caspase-9的表达有关.

    作者:谭雪梅;郑辉;洪学军 刊期: 2009年第06期

  • 小剂量短波紫外线加超短波治疗系统性红斑狼疮患者带状疱疹感染

    目的:观察小剂量短波紫外线加超短波治疗系统性红斑狼疮(SLE)患者带状疱疹感染的疗效及安全性.方法:30例患者随机分为两组,治疗组采用小剂量短波紫外线加超短波治疗,对照组单独采用口服阿昔洛韦片与外涂阿昔洛韦软膏治疗.结果:治疗组有效率高于对照组(均P<0.05),其止痛、止疱、结痂时间、总病程比对照组明显缩短(P<0.01),带状疱疹后遗神经痛发生率比对照组明显减少(P<0.05),治疗组治疗前后SLE活动性未发生明显改变(P>0.05).结论:小剂量短波紫外线加超短波治疗SLE患者带状疱疹感染疗效高,病程缩短,可减少后遗神经痛的发生率,且未增加SLE的活动性.

    作者:欧阳辉;王玉苹;杨柳 刊期: 2009年第06期

  • 人溶菌酶N端与Exendin-4嵌合蛋白的基因克隆及原核表达

    目的:克隆嵌合多肽人溶菌酶N端-Exendin-4基因并进行原核表达和纯化.方法:通过重组PCR技术将人溶菌酶N端74个氨基酸的基因序列与Exendin-4多肽基因序列相连接,其间引入一段由凝血酶和二肽基肽酶识别位点组成的连接序列.以嵌合基因hLYZ(N74)-Ex4与质粒pET-32a(+)构建原核表达体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达.表达蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化、Western blotting鉴定;透析复性后,以肠激酶切割并回收目的多肽.结果:重组质粒pET-32a/hLYZ(N74)-Ex4构建正确,目的蛋白主要以包涵体形式存在,37℃诱导4h、IPTG浓度为0.6 mmol/L时表达量高,约占菌体蛋白总量的30%.Western blotting检测显示重组蛋白为单一清晰条带.重组蛋白经肠激酶切割后,回收得到高纯度的嵌合多肽.结论:成功构建hLYZ(N74)-Ex4嵌合基因的原核表达质粒,高效原核表达并获得高纯度目的蛋白.

    作者:王明;刘宇婷;潘霞明;曾可静;朱元昌;周羽竝;刘誉 刊期: 2009年第06期

  • 人脐带间充质干细胞对小鼠衰老进程中骨髓细胞集落生成的影响

    目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对小鼠衰老进程中骨髓造血干祖细胞增殖能力的影响.方法:由足月新生儿脐带分离间充质细胞(MSC)作供体,6月龄Balb/c小鼠为受体,将小鼠随机分为实验组和对照组,实验组输注MSC(5×10~5/只),每月1次,共4次;对照组输注生理盐水.干预开始后第3个月和第6个月分别比较两组的单侧股骨骨髓有核细胞计数(BMNC)、造血祖细胞集落培养(CFU-GM、CFU-E、CFU-MK)和外源性脾集落形成单位计数(CFU-S).结果:干预后第3个月时,实验组BMNC、CFU-GM和CFU-MK高于对照组,而CFU-E和CFU-S无明显差别;干预后第6个月时,实验组的上述指标均明显高于对照组,且随着衰老出现下降的速度明显慢于对照组,差异有显著性(P<0.05).结论:定期输注hUC-MSC可以相对增加宿主自身造血干祖细胞的生物学活性,从而延缓小鼠造血组织的自然衰老进程.

    作者:许婷婷;李军;周艳华;谭广销;刘革修 刊期: 2009年第06期

  • 采用反向PCR技术优化适合毕赤酵母表达的截短型HPV58型L1基因

    目的:探讨利用反向聚合酶链反应(反向PCR)技术根据毕赤酵母偏爱密码子优化截短型人乳头瘤病毒58型(HPV58)L1基因的研究.方法:设计PCR引物扩增截短型HPV58L1目的基因,将其克隆入毕赤酵母分泌表达载体pPICZαC;测序并对目的基因进行序列分析;根据毕赤酵母偏爱密码子利用反向PCR技术设计引物对目的基因进行扩增.结果:扩增了截短型HPV58L1基因并将其克隆入毕赤酵母分泌表达载体pPICZαC中;根据毕赤酵母偏爱密码子优化了截短型HPV58L1基因.结论:成功构建经密码子优化截短型HPV58L1基因的毕赤酵母分泌表达载体pPICZαC-HPV58L1.

    作者:马团;宇丽;李发涛;周羽竝 刊期: 2009年第06期

  • Elf-1基因在急性髓细胞性白血病中的表达情况

    目的:建立实时定量PCR检测Elf-1基因表达水平的方法,了解急性髓细胞性白血病(AML)患者外周血Elf-1基因表达水平.方法:采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测33例AML患者:M2型17例、M3型6例、M5型10例和20例健康人外周血的单核细胞的Elf-1表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用公式2~(-△Ct)×100%计算Elf-1基因表达水平.结果:AML组Elf-1表达水平(13.518±19.197)%明显高于健康对照组(2.044±1.321)%(P<0.01),不同AML亚型之间Elf-1的表达水平没有显著性差异(P=0.52),但各亚型AML的Elf-1的表达水平均与健康对照组比较均有显著性差异(P<0.01).结论:建立SYBR Green Ⅰ荧光实时定量PCR分析外周血Elf-1表达水平的方法,检测急性髓细胞性白血病Elf-1基因高表达情况.

    作者:沈琦;郑海涛;陈少华;杨力建;李扬秋 刊期: 2009年第06期

  • 西吡氯铵含漱液与碘甘油治疗急性智齿冠周炎的对比观察

    目的:观察西吡氯铵含漱液局部应用治疗智齿冠周炎的临床效果,并与碘甘油治疗作对比.方法:依照入选标准选择下颌智齿冠周炎患者100例,分为两组,分别局部使用西吡氯铵含漱液(A组)及碘甘油(B组),连续3天比较其疗效.结果:西吡氯铵含漱液局部应用治疗智齿冠周炎与碘甘油组治疗效果无显著性差别(P>0.05).结论:使用西吡氯铵含漱液治疗急性智齿冠周炎具有疗效确实、易用、安全等优点.

    作者:江漫红;刘凯 刊期: 2009年第06期

  • TURP结合抗雄激素干预治疗中晚期前列腺癌36例

    目的:观察经尿道前列腺电切术(TURP)结合睾丸切除去势术及联合非甾体类抗雄激素治疗对前列腺癌伴尿道压迫梗阻患者的治疗作用.方法:中、晚期前列腺癌患者36例,经尿道前列腺电切术、睾丸切除去势术及联合氟他胺阻断雄激素治疗,主要观察手术前、后残余尿量(Ru)、大尿流率(Qmax)、血清前列腺特异抗原(PSA)改变.结果:术后5 d拔除导尿管,排尿通畅.术后12个月,RU由术前的(130.0±15.2)mL降至(22.0±3.8)mL(P<0.01),Qmax由术前的(10.2±0.6)mL/s增至(21.2±2.2)mL/s(P<0.01).随访观察12~48月,血PSA降至2.8~18.6 ng/mL,平均10.7 ng/mL.术前发现6例骨转移经治疗后骨痛明显减轻,同位素骨扫描检查6例骨转移破坏均未见发展.结论:晚期前列腺癌压迫尿道致排尿困难时采用TURP可缓解膀胱出口梗阻症状,为抗雄激素治疗创造条件,睾丸切除联合口服氟他胺治疗可限制肿瘤的生长发展、巩固TURP的疗效.

    作者:俞弘颀;赵雪志;陈齐峰;孙清;张洲州;单玉喜 刊期: 2009年第06期

  • 全内脏转位并肝癌行右半肝切除一例

    全内脏转位是一种少见的先天性疾病,根据调查人群的不同,其发生率在1/1000至1/10000之间.而全内脏转位合并肝癌患者在临床中十分罕见,大多数外科医生对此种情况经验较少,现将本院全内脏转位并多发性原发性肝癌行经皮肝动脉化疗栓塞(TACE)后行右半肝切除一例报告如下,旨在探讨临床上对全内脏转位内脏转位患者实施手术前进行全面的术前检查与评估的重要性.

    作者:刘志龙;曹明溶;龚瑾;张帆 刊期: 2009年第06期

  • 缺氧后小鼠脑匀浆提取液对儿童MSCs分化为神经细胞的影响

    目的:观察缺氧后不同时段小鼠脑匀浆提取液对儿童骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的影响,为筛选MSCs的佳移植时间提供依据.方法:制作缺氧小鼠模型;并制取缺氧不同时间段脑匀浆提取液;诱导儿童MSCs;比较MSCs分化为神经元样细胞的阳性率.结果:缺氧后1、4,7、10、13 d小鼠脑匀浆提取液均可将MSCs诱导成神经元样细胞,经免疫学鉴定NES染色强阳性;但各组阳性率不同,以缺氧10 d后阳性率(21.02±3.38)%高,与其他各组比较有统计学差异(P<0.05).结论:缺氧后小鼠脑匀浆提取液可诱导儿童MSCs分化为神经元样细胞,缺氧后10 d的分化率高.

    作者:康颖;罗向阳;黄云燕;李栋方;何展文;岑丹阳 刊期: 2009年第06期

  • HPV16、18型E6/E7融合基因痘苗病毒表达载体的构建

    目的:构建一种含人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型E6/E7融合基因痘苗病毒表达载体.方法:PCR扩增HPV16型、18型E6、E7基因,克隆到pSC-A载体中,通过定点突变方法,分别构建成含E6/E7融合基因的质粒,即pSC-A.HPV16 E6/E7和pSC-A-HPV18 mE6/E7,并将二者连接成载体pSC-A-HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E(pSC-T,HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E7:T),后以痘苗病毒表达载体pJ38为转移载体,构建质粒pJ38-HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E7(pJ38-T),对所有重组质粒进行酶切鉴定和测序分析.结果:E6/E7融合基因成功克隆到pJ38上.结论:成功构建表达HPV E6/E7融合基因重组痘苗病毒载体,为研制宫颈癌治疗性疫苗奠定基础.

    作者:陈富强;邓金桂;兰新平;孙业红;李体远 刊期: 2009年第06期

暨南大学学报(自然科学与医学版)杂志

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主管:广东省教育厅

主办:暨南大学