程龙；阎晓初；杨占宇；章容；段光杰；杨智清；许森林
目的 观察大鼠肢体缺血再灌注后关节软骨中基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)的表达变化,探讨其在关节软骨损伤中的作用.方法 采用Wistar大鼠左后肢缺血再灌注动物模型,动物分为假手术组、缺血8 h组、缺血再灌注后3、7、14、30、60 d组.用免疫组化S-P法测定关节软骨MMP-13和Ⅱ型胶原(COLⅡ)的表达和分布变化,并观察缺血再灌注后胫骨关节软骨光镜和电镜的病理学变化.结果 假手术组及缺血8 h组关节软骨基质较均匀、致密;缺血再灌注组关节软骨表面凹凸不平,软骨基质疏松,骨细胞排列紊乱,以30 d和60 d组为明显.软骨中的MMP-13在缺血再灌注3 d后显著高于假手术组和缺血8 h组(P＜0.01),以14 d为高;而COLⅡ却显著低于假手术组和缺血8 h组(P＜0.01),呈进行性降低.结论 肢体缺血再灌注后关节软骨内MMP-13表达增多,导致软骨基质中COLⅡ持续降解减少、关节软骨胶原网络结构破坏,可能是断肢再植后关节功能恢复不理想的重要原因之一.
作者：张伟旭；周继红；王成琪；周建伟 刊期： 2007年第06期
自发性食管破裂(spontaneous rupture of esophagus,SRE)是指由于非外伤性所致的食管全层裂开,常是由于食管内压突然并且迅速增高造成的,又称为Boerhaave综合征.该病发病率低,仅1/6 000[1],但一旦发病,病情进展快,误诊率、病死率均较高,是胸外科临床少见而严重的急症之一.为减少该病误诊率及病死率,提高对自发性食管破裂诊治水平,现总结本院和河南省南阳医学高等专科学校附属医院1990-2004年收治的食管破裂患者的治疗经验,现报告如下.
作者：王会恩；杨军；柳立军；王志康；周绍辉；张华 刊期： 2007年第06期
目的 检测移植肝组织浸润淋巴细胞的免疫表型,分析不同表型淋巴细胞数量及其分布与并发症的关系.方法 应用CD8、CD4、CD3、CD20、CD45RO及CD45RA单抗对108例次移植肝活检组织进行免疫组化染色,对比形态学观察,分析不同区域浸润淋巴细胞的免疫表型.结果 排斥组62例次,非排斥组46例次.排斥组汇管区CD3+、CD8+、CD20+细胞浸润程度均显著高于非排斥组(P＜0.01),两组间各型淋巴细胞在小叶内浸润程度均无显著差异(P＞0.05).排斥反应组中,CD8+细胞浸润程度显著高于CD4+细胞(P＜0.05).排斥组CD3+、CD8+、CD45RO+细胞胆管或血管浸润率显著高于非排斥组(P＜0.01).排斥组中,汇管区CD8+和CD45RO+细胞浸润程度与排斥反应组织学分级显著相关(r值分别为7.481,9.103,P＜0.01).结论 移植肝活检组织中淋巴细胞免疫学分型对排斥反应的诊断和鉴别诊断具有一定的指导意义.
作者：程龙；阎晓初；杨占宇；章容；段光杰；杨智清；许森林 刊期： 2007年第06期
目的 应用RNAi技术沉默血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)基因,探讨其对人结肠癌细胞系HCT116裸鼠移植瘤生长及其血管生成的影响.方法 将自行构建的以VEGF基因为靶向表达短发夹状RNA的重组质粒(pAVU6+27-VEGF-siRNA)转染到结肠癌HCT116细胞株中(C组),以空质粒(pAVU6+27)转染为阴性对照(B组),经G418筛选出阳性克隆细胞,未转染质粒的HCT116细胞株为空白对照(A组),建立裸小鼠皮下移植瘤模型.通过测量移植瘤的质量、体积观察移植瘤生长;免疫组化检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(microvessel density,MVD)改变.结果 C组肿瘤瘤块的体积(0.169±0.009)cm3和质量(0.192±0.022)g明显小于A、B组(P＜0.05).A、B组荷瘤组织中VEGF均表达强阳性,表达位于肿瘤细胞的细胞质及细胞膜上,呈棕黄色.C组荷瘤组织中VEGF呈弱阳性表达,组间差异显著(P＜0.05).C组荷瘤组织中MVD明显小于两对照组,组间差异显著(P＜0.05).VEGF表达与MVD呈显著正相关(r=0.810,P＜0.01).结论 应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人结肠癌细胞系HCT116裸小鼠移植瘤的生长,其机制与其抑制移植瘤中VEGF的表达和瘤组织内血管生成有关.
作者：吕伟；牛婧；张超；刘涛；郝迎学；刘伟；余佩武 刊期： 2007年第06期
目的 利用RNA干扰技术,以COX-2为靶基因,构建靶向COX-2基因的短发夹RNA(shRNA)重组表达质粒并进行鉴定分析.方法 设计、合成1对COX-2编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,经退火形成互补双链,通过定向克隆至质粒pGenesil-1,构建shRNA真核表达载体.转化JM109大肠杆菌,提取质粒进行酶切鉴定和测序分析;RT-PCR和Western blot检测重组表达质粒对COX-2 mRNA和蛋白表达的抑制效果.结果 酶切证实目的DNA定向克隆至载体上,测序分析结果与目的序列相同.RT-PCR和Western blot结果显示,与未转染组比较,pshRNA-COX-2重组表达质粒对β-actin基因无明显影响,而对COX-2有明显抑制作用.COX-2 mRNA和蛋白表达的抑制率分别为66.9%和50.3%.结论 成功构建的靶向干扰COX-2基因重组质粒能够显著抑制COX-2基因表达.
作者：杨义明；刘预；涂植光；张钰倩 刊期： 2007年第06期
我们对本院变态反应性疾病诊疗中心1998年5月至2005年11月就诊的5 969例哮喘儿童行变应原皮内试验的结果进行了分析,主要探讨常见变应原对重庆市小儿哮喘的过敏状况,以期为今后该地区哮喘的防治工作提供指导依据.
作者：王模奎；黄英；刘恩梅；陈坤华；戴继宏；蒋永惠；李芙蓉 刊期： 2007年第06期
目的 建立一种准确、快速、简便的无创性胎儿性别鉴定技术.方法 应用实时定量PCR技术(Taqman探针法)检测35例孕妇血浆中胎儿DNA的Y染色体特异序列SRY基因,每例血浆样本DNA均用3个PCR管同时进行检测.结果 利用母体血浆中SRY基因定量PCR分析的灵敏度为94.7%,特异性为100%.结论 母亲血浆DNA中SRY基因定量检测是一种高度敏感性和比较可靠的胎儿性别鉴定技术,为性连锁遗传病提供一种无创性产前诊断方法.
作者：易萍；李力；夏季；俞丽丽；陈伟；陈竹钦 刊期： 2007年第06期
目的 通过生物信息学分析人C5L2受体的配体结构域,并进一步利用生物分子相互作用测定技术(biomolecular interaction analysis,BIA)研究其与配体C5a分子间的相互作用.方法 以人C5L2蛋白的氨基酸序列为基础,利用网络分析软件以及Goldkey计算机分析软件对人C5L2蛋白二级结构及亲水性、抗原性、可及性、柔韧性、表位等参数进行综合分析,确定可能与rhC5a结合的区域肽段序列,Fmoc方法固相多肽合成候选的结合位多肽,采用IAsys Plus生物传感器系统,以rhC5a为固定相,分别以这些候选结合位多肽为流动相,测定与rhC5a的结合力.结果 合成多肽N2(第12～22位)、C3(第265～275位)可与C5a发生特异性结合,结合率分别为53%和23%.结论 人C5L2分子第3～22、179～183、190～195、265～275位等区域满足各项指标,可能是其配体C5a的结合域.
作者：宋蓉；李元朝；吕凤林；吴玉章；胡承香；陈月 刊期： 2007年第06期
目的 采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫颈癌细胞株CaSki细胞中,经G418筛选,RT-PCR检测E6基因的表达;将细胞接种到BALB/c裸鼠背部皮下,同时将该质粒注射到人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的裸鼠中,观察肿瘤出现时间及体积变化;观察肿瘤组织的病理改变.结果 成功筛选到持续表达E6 siRNA的CaSki细胞,经RT-PCR检测该细胞中HPV16 E6基因表达降低;裸鼠成瘤实验结果显示,处理后的CaSki细胞成瘤能力明显降低,抑瘤率为71.4%;注射质粒进行基因治疗后,裸鼠肿瘤生长受到抑制,肿瘤的体积与质量明显低于CaSki细胞组,差异具有显著性(P＜0.05).病理检查结果显示,经pGensil-CH2处理的肿瘤生长不佳,细胞分裂像少见,组织内有较多坏死区域.结论 沉默CaSki细胞中HPV16 E6基因的表达能明显降低宫癌细胞的成瘤作用.
作者：成海恩；张溢；张翠莉；潘巍巍；石华；易发平；郭风劲；宋方洲 刊期： 2007年第06期
目的 观察cubilin siRNA真核表达载体对人近端肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell line,HKC)cubilin基因的特异性抑制作用.方法 针对人cubilin基因设计并构建siRNA真核表达载体pSUPER EGFP-C1和pSUPER EGFP-C2,转染HKC,经荧光定量PCR(FQ-PCR)检测cubilin mRNA的表达、不同浓度的人血清白蛋白(HSA)刺激正常HKC及转染重组质粒的HKC 24 h后cubilin mRNA的表达,并通过激光共聚焦扫描荧光显微镜观察HKC对白蛋白摄取情况的变化.结果 FQ-PCR显示HSA刺激正常HKC后cubilin mRNA表达具有剂量依赖性.与正常对照组相比,两个重组质粒均可部分抑制HKC cubilin表达,抑制效率分别为66%和37%,HSA刺激转染pSUPER EGFP-C1、pSU-PER EGFP-C2的HKC后cubiin mRNA水平较正常对照组比较分别下降50%、34%,转染了重组质粒的HKC对白蛋白的摄取明显减少.结论 成功地构建了针对人cubilin基因的RNA干扰真核表达载体,表达型siRNA可抑制肾小管上皮细胞cubilin基因的表达及对白蛋白的摄取.
作者：林静；何娅妮；杨聚荣；李新伦；梁海君；吴劲松；李开龙；丁涵露；张建国 刊期： 2007年第06期
目的 利用酵母双杂交技术筛选线粒体促凋亡因子野生型Smac/DIABLO的相互作用蛋白.方法 ①设计促凋亡因子野生型Smac/DIABLO引物,利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增野生型Smac/DIABLO基因片段,构建酵母真核表达载体pDBLeu-Smac/DIABLO.②pDBLeu-Smac/DIABLO诱饵质粒转化酵母MaV203,Western blot检测融合蛋白在酵母中的正确表达,自激活作用的检测并确定抑制His基础表达的3AT浓度.③对成人肝cDNA文库的筛选.选择能同时激活His、Ura、LacZ 3个报告基因的克隆为阳性,利用回转实验和GST-pull down对阳性克隆进行鉴定.结果 成功构建pDBLeu-Smac/DIABLO载体,转化酵母细胞MaV203,无细胞毒性,无自激活作用,3AT浓度为25 mmol/L.经回转实验和GST-pull down证实了线粒体促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1之间具有相互作用.结论 Smac/DIABLO可能通过与核受体NR4A1的相互作用来影响核受体NR4A1对细胞生存或者凋亡的调控.
作者：张翠莉；杨晓明；成海恩；刘涛；王应雄 刊期： 2007年第06期
目的 观察pshRNA-survivin在体内是否能抑制卵巢癌移植瘤体的生长.方法 建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,瘤内注射pshRNA-survivin,观察肿瘤生长情况.半定量RT-PCR、免疫组织化学检测移植瘤的survivin表达情况,TUNEL检测移植瘤的细胞凋亡情况.结果 pshRNA-survivin能明显抑制肿瘤组织中survivin的表达,促进肿瘤细胞的凋亡,减缓肿瘤生长速度.结论 pshRNA-survivin明显抑制了卵巢癌裸鼠移植瘤的增殖.
作者：陈莹；钟玲；王勇；邓凯贤 刊期： 2007年第06期
目的 探讨高温与脂多糖(LPS)复合应激大鼠血浆TNF-α、IL-6以及氧自由基MDA含量、SOD活力等指标的变化规律.方法 将雄性SPF级Wistar大鼠分为:常温生理盐水组(C组)、高温生理盐水组(H组)、常温LPS组(L组)、高温LPS组(HL组).HL、L组动物经尾静脉注射LPS 10 mg/kg(浓度为1 mg/ml),H、C组动物经尾静脉注射0.9%NaCl 10 ml/kg.检测动物应激0、40、80、120 min时血浆TNF-α、IL-6、MDA含量及SOD活力的变化.结果 ①HL组于应激40 min时血浆TNF-α、IL-6水平即显著升高,TNF-α峰值(80 min)显著高于其他各组TNF-α水平,IL-6表达水平极度升高,显著高于同时相各组.②应激40 min时HL组动物血浆MDA水平显著升高,SOD活力水平显著下降,与同时相各组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 高温与LPS复合应激可能促发、扩大全身炎症反应综合征.
作者：李志梁；赵廷宝；刘宏华 刊期： 2007年第06期
通过植入性鞘内药物输注系统(implanted intrathecal drug delivery system,IDDS)进行鞘内给予阿片类药物来治疗顽固性疼痛,是其他镇痛方法无效之后的一种治疗手段[1,2].我科与麻醉科合作,对1例顽固性疼痛患者实施了该治疗,现报告如下.
作者：刘海鹏；杨辉；杨天德；黄其林 刊期： 2007年第06期
目的 探索流感病毒在细胞中培养的适宜条件.方法 采用MEK细胞、FRhK-4细胞、MDCK细胞分别接种甲型流感病毒H1N1型、H3N2型和乙型流感病毒疫苗毒株,观察3种毒株在不同培养条件下的细胞病变、血凝滴度.结果 3株流感病毒接种细胞在33℃培养72 h后出现拉网、圆缩、脱落等现象;FRhK-4细胞和MDCK细胞对流感病毒较敏感.胞龄为48 h的细胞,在NaHCO3的终浓度为1.4%o,TPCK-胰酶浓度为1.0μg/ml的病毒维持液培养流感病毒为适条件.结论 寻找到了细胞流感病毒的适宜条件.
作者：范东瀛；陈俊英；张新文；李卫东；廖国阳 刊期： 2007年第06期
无痛人工流产常由于子宫颈被牵拉、扩张、负压吸引、刮匙对宫壁的影响,及同时采用快速、短效静脉麻醉药丙泊酚与起效迅速、作用时间短、镇痛作用强的纯阿片受体激动药芬太尼合用,使受术者出现心动过缓、心律紊乱、血压下降,严重者可发生心跳骤停.本研究比较观察了阿托品对无痛人工流产期间心率改变的影响,现报告如下.
作者：王玲英；杨小霖 刊期： 2007年第06期
目的 研究不同分化程度喉鳞状细胞癌黏膜组织蛋白质组的差异表达.方法 用固相pH梯度双向凝胶电泳分离不同分化程度喉癌黏膜组织总蛋白质,行考马斯亮蓝染色,Image Master 2D软件分析所获得的双向凝胶电泳图谱,找出差异表达的蛋白质点.结果 获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱,发现13种蛋白质与喉癌分化密切相关.其中有7种蛋白质在高分化喉癌组织中表达上调,6种蛋白质表达明显下调.结论 利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离不同分化喉鳞状细胞癌黏膜组织总蛋白质,建立了重复性较强的不同分化喉鳞状细胞癌黏膜组织蛋白质组表达图谱,且两者蛋白质的表达明显不同,可能与喉癌不同分化程度的发病机制有关.
作者：周建荣；魏莲枝；李银平；傅仲学 刊期： 2007年第06期
目的 探讨MUC2反义脱氧寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)抑制人胃癌细胞株SGC7901黏蛋白MUC2的表达及其对癌细胞蛋白水解酶表达的影响.方法 采用脂质体作为载体,将载体与MUC2基因的串联重复区互补,经硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸(ASODN)导入MUC2蛋白高表达的胃癌细胞株SGC7901,采用RT-PCR、流式细胞仪、免疫组织化学等方法检测MUC2 ASODN对胃癌细胞凋亡和蛋白水解酶的表达.结果 RT-PCR结果显示,SGC7901细胞转染MUC2 ASODN 48 h后,MUC2的mRNA表达与对照组相比明显降低(P＜0.01).流式细胞仪分析MUC2 ASODN处理SGC7901细胞48 h后,G0/G1期细胞百分比下降,S期细胞百分比明显增加,且能诱导细胞凋亡,凋亡细胞占4.38%,与对照组比较(P＜0.01).免疫组化S-P法检测转染MUC2 ASODN胃癌细胞、组织蛋白酶D、MMP-2表达显著下降(P＜0.05).结论 MUC2可促进癌细胞产生蛋白水解酶,使用人工合成MUC2 ASODN在体外能有效抑制胃癌细胞株SGC7901蛋白水解酶的表达,并能诱导凋亡.
作者：罗文军；易永芬；张晓艳；林晓 刊期： 2007年第06期
目的 探讨基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)对小鼠骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖迁移的影响及AMD3100对其的干预效应.方法 分别用不同浓度的SDF-1α刺激EPCs,观察SDF-1α的促增殖效应再用不同浓度的AMD3100干预5 ng/ml SDF-1α的促增殖效应及单用AMD3100与EPCs孵育,观察AMD3100对EPCs增殖的影响.MTT比色法检测EPCs的增殖情况.用1、10 ng/ml SDF-1α诱导EPCs迁移,或先用10ng/ml AMD3100与EPCs孵育,再做SDF-1α诱导的/无SDF-1α诱导的迁移实验.用改良的Boyden小室测定EPCs迁移能力.结果 SDF-1α剂量依赖性增强EPCs增殖能力,10 ng/ml AMD3100即完全阻断5 ng/ml SDF-1α的促进EPCs增殖效应,单用AMD3100孵育可抑制EPCs增殖,与阴性对照组比较差异显著(P＜0.01);单用AMD3100孵育抑制EPCs迁移,与阴性对照组比较差异显著(P＜0.01).结论 SDF-1α可增强EPCs增殖迁移能力,AMD3100可完全阻断其促增殖和诱导迁移效应,单用AMD3100抑制EPCs增殖迁移.
作者：尹扬光；黄岚；赵晓辉；于世勇；方玉强；赵景红 刊期： 2007年第06期
目的 寻求一种简便高效的人子宫内膜上皮细胞和间质细胞分离、纯化与鉴定方法,建立稳定的子宫内膜细胞体外培养体系.方法 简化Ryan等的子宫内膜细胞原代培养方法的取材,分离和培养条件,分离出高纯度的子宫内膜上皮细胞和间质细胞进行体外培养和传代.结果 培养成功的子宫内膜上皮细胞与间质细胞均可稳定传代,体外生长10～50 d,纯度均达90%以上.结论 该方法简便高效,可建立稳定的人子宫内膜细胞体外培养体系.
作者：陈诚；常青；梁志清；艾国平；张丽龙 刊期： 2007年第06期
第三军医大学学报杂志
主管:第三军医大学
主办：第三军医大学
