程龙；阎晓初；杨占宇；章容；段光杰；杨智清；许森林
目的 利用酵母双杂交技术筛选线粒体促凋亡因子野生型Smac/DIABLO的相互作用蛋白.方法 ①设计促凋亡因子野生型Smac/DIABLO引物,利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增野生型Smac/DIABLO基因片段,构建酵母真核表达载体pDBLeu-Smac/DIABLO.②pDBLeu-Smac/DIABLO诱饵质粒转化酵母MaV203,Western blot检测融合蛋白在酵母中的正确表达,自激活作用的检测并确定抑制His基础表达的3AT浓度.③对成人肝cDNA文库的筛选.选择能同时激活His、Ura、LacZ 3个报告基因的克隆为阳性,利用回转实验和GST-pull down对阳性克隆进行鉴定.结果 成功构建pDBLeu-Smac/DIABLO载体,转化酵母细胞MaV203,无细胞毒性,无自激活作用,3AT浓度为25 mmol/L.经回转实验和GST-pull down证实了线粒体促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1之间具有相互作用.结论 Smac/DIABLO可能通过与核受体NR4A1的相互作用来影响核受体NR4A1对细胞生存或者凋亡的调控.
作者：张翠莉；杨晓明；成海恩；刘涛；王应雄 刊期： 2007年第06期
目的 采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫颈癌细胞株CaSki细胞中,经G418筛选,RT-PCR检测E6基因的表达;将细胞接种到BALB/c裸鼠背部皮下,同时将该质粒注射到人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的裸鼠中,观察肿瘤出现时间及体积变化;观察肿瘤组织的病理改变.结果 成功筛选到持续表达E6 siRNA的CaSki细胞,经RT-PCR检测该细胞中HPV16 E6基因表达降低;裸鼠成瘤实验结果显示,处理后的CaSki细胞成瘤能力明显降低,抑瘤率为71.4%;注射质粒进行基因治疗后,裸鼠肿瘤生长受到抑制,肿瘤的体积与质量明显低于CaSki细胞组,差异具有显著性(P＜0.05).病理检查结果显示,经pGensil-CH2处理的肿瘤生长不佳,细胞分裂像少见,组织内有较多坏死区域.结论 沉默CaSki细胞中HPV16 E6基因的表达能明显降低宫癌细胞的成瘤作用.
作者：成海恩；张溢；张翠莉；潘巍巍；石华；易发平；郭风劲；宋方洲 刊期： 2007年第06期
目的 利用RNA干扰技术,以COX-2为靶基因,构建靶向COX-2基因的短发夹RNA(shRNA)重组表达质粒并进行鉴定分析.方法 设计、合成1对COX-2编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,经退火形成互补双链,通过定向克隆至质粒pGenesil-1,构建shRNA真核表达载体.转化JM109大肠杆菌,提取质粒进行酶切鉴定和测序分析;RT-PCR和Western blot检测重组表达质粒对COX-2 mRNA和蛋白表达的抑制效果.结果 酶切证实目的DNA定向克隆至载体上,测序分析结果与目的序列相同.RT-PCR和Western blot结果显示,与未转染组比较,pshRNA-COX-2重组表达质粒对β-actin基因无明显影响,而对COX-2有明显抑制作用.COX-2 mRNA和蛋白表达的抑制率分别为66.9%和50.3%.结论 成功构建的靶向干扰COX-2基因重组质粒能够显著抑制COX-2基因表达.
作者：杨义明；刘预；涂植光；张钰倩 刊期： 2007年第06期
目的 应用RNAi技术沉默血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)基因,探讨其对人结肠癌细胞系HCT116裸鼠移植瘤生长及其血管生成的影响.方法 将自行构建的以VEGF基因为靶向表达短发夹状RNA的重组质粒(pAVU6+27-VEGF-siRNA)转染到结肠癌HCT116细胞株中(C组),以空质粒(pAVU6+27)转染为阴性对照(B组),经G418筛选出阳性克隆细胞,未转染质粒的HCT116细胞株为空白对照(A组),建立裸小鼠皮下移植瘤模型.通过测量移植瘤的质量、体积观察移植瘤生长;免疫组化检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(microvessel density,MVD)改变.结果 C组肿瘤瘤块的体积(0.169±0.009)cm3和质量(0.192±0.022)g明显小于A、B组(P＜0.05).A、B组荷瘤组织中VEGF均表达强阳性,表达位于肿瘤细胞的细胞质及细胞膜上,呈棕黄色.C组荷瘤组织中VEGF呈弱阳性表达,组间差异显著(P＜0.05).C组荷瘤组织中MVD明显小于两对照组,组间差异显著(P＜0.05).VEGF表达与MVD呈显著正相关(r=0.810,P＜0.01).结论 应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人结肠癌细胞系HCT116裸小鼠移植瘤的生长,其机制与其抑制移植瘤中VEGF的表达和瘤组织内血管生成有关.
作者：吕伟；牛婧；张超；刘涛；郝迎学；刘伟；余佩武 刊期： 2007年第06期
目的 观察大鼠肢体缺血再灌注后关节软骨中基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)的表达变化,探讨其在关节软骨损伤中的作用.方法 采用Wistar大鼠左后肢缺血再灌注动物模型,动物分为假手术组、缺血8 h组、缺血再灌注后3、7、14、30、60 d组.用免疫组化S-P法测定关节软骨MMP-13和Ⅱ型胶原(COLⅡ)的表达和分布变化,并观察缺血再灌注后胫骨关节软骨光镜和电镜的病理学变化.结果 假手术组及缺血8 h组关节软骨基质较均匀、致密;缺血再灌注组关节软骨表面凹凸不平,软骨基质疏松,骨细胞排列紊乱,以30 d和60 d组为明显.软骨中的MMP-13在缺血再灌注3 d后显著高于假手术组和缺血8 h组(P＜0.01),以14 d为高;而COLⅡ却显著低于假手术组和缺血8 h组(P＜0.01),呈进行性降低.结论 肢体缺血再灌注后关节软骨内MMP-13表达增多,导致软骨基质中COLⅡ持续降解减少、关节软骨胶原网络结构破坏,可能是断肢再植后关节功能恢复不理想的重要原因之一.
作者：张伟旭；周继红；王成琪；周建伟 刊期： 2007年第06期
尺骨鹰嘴骨折是一种波及肘关节面的常见骨折,如果复位及固定不当,将影响肘关节的活动功能.我院自1999年7月至2005年7月对35例尺骨鹰嘴骨折患者采用重建钢板内固定,并行早期功能锻炼,使骨折愈合和关节功能的恢复有明显效果.
作者：周续祥；李长军；丁培根；刘业 刊期： 2007年第06期
目的 寻求一种简便高效的人子宫内膜上皮细胞和间质细胞分离、纯化与鉴定方法,建立稳定的子宫内膜细胞体外培养体系.方法 简化Ryan等的子宫内膜细胞原代培养方法的取材,分离和培养条件,分离出高纯度的子宫内膜上皮细胞和间质细胞进行体外培养和传代.结果 培养成功的子宫内膜上皮细胞与间质细胞均可稳定传代,体外生长10～50 d,纯度均达90%以上.结论 该方法简便高效,可建立稳定的人子宫内膜细胞体外培养体系.
作者：陈诚；常青；梁志清；艾国平；张丽龙 刊期： 2007年第06期
目的 采用肝血管瘤介入治疗的不同方法,探讨利多卡因在肝血管瘤介入治疗中的价值.方法 将36例肝血管瘤病例分为两组,A组(19例)在动脉栓塞前,先经动脉灌注利多卡因,再将利多卡因与平阳霉素、碘油混合后碘油和药物的乳化剂注人;B组(17例)为对照组,动脉栓塞过程中,不用利多卡因.观察治疗过程中患者的反应和病灶碘油和药物的乳化剂的填充情况.结果 两组中重度不良反应比例不同,利多卡因组为10.5%,对照组为41.2%.病灶碘油和药物的乳化剂的完全填充率利多卡因组为100%,对照组为79.2%.结论 肝血管瘤介入治疗过程中,应用利多卡因可以提高介入治疗的成功率,降低不良反应,取得较好疗效.
作者：陈晓良；周培华；张斌；余俭；龚水根；陈蓉 刊期： 2007年第06期
目的 探讨青年与老年结直肠癌的临床病理特征及其与预后的关系.方法 回顾性分析1993年7月至2003年7月收治的68例35岁以下青年结直肠癌患者与322例65岁以上老年患者的临床资料,比较分析其临床表现、病理特征、肿瘤分期、误诊比例和随访结果.结果 青年组患者以腹痛为主,占69.1%(47/68);而老年组则以便血或黏液血便为主,占53.7%(173/322).青年组的肿瘤低分化比例为48.5%,明显高于老年组的20.5%(P＜0.01).青年组的肿瘤中晚期(Dukes分期C期+D期)比例为80.9%,明显高于老年组的50.3%(P＜0.01).青年组和老年组的误诊率分别为64.7%和14.O%,差异非常显著(P＜0.01).青年组3年生存率33.9%,明显低于老年组的67.3%(P＜0.01);其中肿瘤低分化患者的3年生存率在青年组和老年组分别为15.6%和43.4%,组间差异显著(P＜0.05);中晚期患者的3年生存率在青年组和老年组分别为25.0%和51.2%,差异非常显著(P＜0.01).结论 与老年患者相比,青年结直肠癌分化更差,侵袭性更强,且易贻误诊断,预后不良.因此,应充分加强青年结直肠癌的早期诊断.
作者：赵菲；李世拥；于波；安平 刊期： 2007年第06期
目的 观察pshRNA-survivin在体内是否能抑制卵巢癌移植瘤体的生长.方法 建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,瘤内注射pshRNA-survivin,观察肿瘤生长情况.半定量RT-PCR、免疫组织化学检测移植瘤的survivin表达情况,TUNEL检测移植瘤的细胞凋亡情况.结果 pshRNA-survivin能明显抑制肿瘤组织中survivin的表达,促进肿瘤细胞的凋亡,减缓肿瘤生长速度.结论 pshRNA-survivin明显抑制了卵巢癌裸鼠移植瘤的增殖.
作者：陈莹；钟玲；王勇；邓凯贤 刊期： 2007年第06期
目的 观察雾化吸入全氟化碳(perfluorocarbon,PFC)及盐酸氨溴素(商品名沐舒坦)对兔急性肺损伤肺组织病理改变、气体交换、TNF-α mRNA及抗氧化方面的影响.方法 用油酸制备兔急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型后,将动物随机分为4组:常规机械通气(A)组、全氟化碳(B)组、沐舒坦(C)组,联合治疗(D)组.分别在ALI前、ALI及ALI后1、2、3、4 h共6个时点观察动脉血气指标的变化,实验结束后取6个不同部位的肺组织做病理切片,取2个不同部位的肺组织做TNF-α mRNA原位杂交,肺组织匀浆检测丙二醛(MDA).结果 D组PaO2及肺静态顺应性(static lung compliance,CLst)高于A组,与B组比较无差异(P＞0.05);D组病理改变轻于A组,原位杂交提示D组TNF-α mRNA原位表达低于A组和B组,自身比较结果显示:背侧肺叶TNF-α mRNA表达高于腹侧肺叶(P＞0.05).D组肺组织匀浆MDA低于A组和B组(P＜0.05).结论 PFC联合沐舒坦雾化吸入能明显改善实验兔ALI肺氧合能力,升高PaO2,改善肺静态顺应性,减少肺组织中的TNF-α mRNA表达及自由基的损害.
作者：黄志坚；李琦；宋鹏；王长征；钱桂生 刊期： 2007年第06期
目的 观察cubilin siRNA真核表达载体对人近端肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell line,HKC)cubilin基因的特异性抑制作用.方法 针对人cubilin基因设计并构建siRNA真核表达载体pSUPER EGFP-C1和pSUPER EGFP-C2,转染HKC,经荧光定量PCR(FQ-PCR)检测cubilin mRNA的表达、不同浓度的人血清白蛋白(HSA)刺激正常HKC及转染重组质粒的HKC 24 h后cubilin mRNA的表达,并通过激光共聚焦扫描荧光显微镜观察HKC对白蛋白摄取情况的变化.结果 FQ-PCR显示HSA刺激正常HKC后cubilin mRNA表达具有剂量依赖性.与正常对照组相比,两个重组质粒均可部分抑制HKC cubilin表达,抑制效率分别为66%和37%,HSA刺激转染pSUPER EGFP-C1、pSU-PER EGFP-C2的HKC后cubiin mRNA水平较正常对照组比较分别下降50%、34%,转染了重组质粒的HKC对白蛋白的摄取明显减少.结论 成功地构建了针对人cubilin基因的RNA干扰真核表达载体,表达型siRNA可抑制肾小管上皮细胞cubilin基因的表达及对白蛋白的摄取.
作者：林静；何娅妮；杨聚荣；李新伦；梁海君；吴劲松；李开龙；丁涵露；张建国 刊期： 2007年第06期
目的 探索流感病毒在细胞中培养的适宜条件.方法 采用MEK细胞、FRhK-4细胞、MDCK细胞分别接种甲型流感病毒H1N1型、H3N2型和乙型流感病毒疫苗毒株,观察3种毒株在不同培养条件下的细胞病变、血凝滴度.结果 3株流感病毒接种细胞在33℃培养72 h后出现拉网、圆缩、脱落等现象;FRhK-4细胞和MDCK细胞对流感病毒较敏感.胞龄为48 h的细胞,在NaHCO3的终浓度为1.4%o,TPCK-胰酶浓度为1.0μg/ml的病毒维持液培养流感病毒为适条件.结论 寻找到了细胞流感病毒的适宜条件.
作者：范东瀛；陈俊英；张新文；李卫东；廖国阳 刊期： 2007年第06期
目的 探讨基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)对小鼠骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖迁移的影响及AMD3100对其的干预效应.方法 分别用不同浓度的SDF-1α刺激EPCs,观察SDF-1α的促增殖效应再用不同浓度的AMD3100干预5 ng/ml SDF-1α的促增殖效应及单用AMD3100与EPCs孵育,观察AMD3100对EPCs增殖的影响.MTT比色法检测EPCs的增殖情况.用1、10 ng/ml SDF-1α诱导EPCs迁移,或先用10ng/ml AMD3100与EPCs孵育,再做SDF-1α诱导的/无SDF-1α诱导的迁移实验.用改良的Boyden小室测定EPCs迁移能力.结果 SDF-1α剂量依赖性增强EPCs增殖能力,10 ng/ml AMD3100即完全阻断5 ng/ml SDF-1α的促进EPCs增殖效应,单用AMD3100孵育可抑制EPCs增殖,与阴性对照组比较差异显著(P＜0.01);单用AMD3100孵育抑制EPCs迁移,与阴性对照组比较差异显著(P＜0.01).结论 SDF-1α可增强EPCs增殖迁移能力,AMD3100可完全阻断其促增殖和诱导迁移效应,单用AMD3100抑制EPCs增殖迁移.
作者：尹扬光；黄岚；赵晓辉；于世勇；方玉强；赵景红 刊期： 2007年第06期
目的 探讨电子束CT(electron beam computed tomography,EBCT)和超声心动图在先天性心脏病(简称先心病)诊断中的价值.方法 32例经临床及经胸超声心动图(transthoracic echocardiography,TTE)诊断为先心病的患者进行EBCT心血管造影检查,与导管法心血管造影检查和手术结果进行对照.结果 32例患者中,EBCT总体诊断符合率87.5%(28/32),TTE诊断符合率78.1%(25/32).EBCT对心外及大血管与房室连接诊断准确率为96.6%(57/59),明显优于TTE的66.1%(39/59).而TTE对心内畸形的诊断准确率为97.7%(43/44),高于EBCT的81.8%(36/44).EBCT与TTE两者结合,可将诊断准确率提高为96.9%(31/32).结论 EBCT对先天性心脏病有重要的诊断价值,尤其对心外及大血管与房室连接关系诊断准确率较高.将EBCT与TTE检查相结合,可大大提高对各种先心病的诊断准确率.
作者：李可；邹利光；孙清荣；文利；梁开运；廖翠薇 刊期： 2007年第06期
目的 研究不同分化程度喉鳞状细胞癌黏膜组织蛋白质组的差异表达.方法 用固相pH梯度双向凝胶电泳分离不同分化程度喉癌黏膜组织总蛋白质,行考马斯亮蓝染色,Image Master 2D软件分析所获得的双向凝胶电泳图谱,找出差异表达的蛋白质点.结果 获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱,发现13种蛋白质与喉癌分化密切相关.其中有7种蛋白质在高分化喉癌组织中表达上调,6种蛋白质表达明显下调.结论 利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离不同分化喉鳞状细胞癌黏膜组织总蛋白质,建立了重复性较强的不同分化喉鳞状细胞癌黏膜组织蛋白质组表达图谱,且两者蛋白质的表达明显不同,可能与喉癌不同分化程度的发病机制有关.
作者：周建荣；魏莲枝；李银平；傅仲学 刊期： 2007年第06期
目的 建立一种准确、快速、简便的无创性胎儿性别鉴定技术.方法 应用实时定量PCR技术(Taqman探针法)检测35例孕妇血浆中胎儿DNA的Y染色体特异序列SRY基因,每例血浆样本DNA均用3个PCR管同时进行检测.结果 利用母体血浆中SRY基因定量PCR分析的灵敏度为94.7%,特异性为100%.结论 母亲血浆DNA中SRY基因定量检测是一种高度敏感性和比较可靠的胎儿性别鉴定技术,为性连锁遗传病提供一种无创性产前诊断方法.
作者：易萍；李力；夏季；俞丽丽；陈伟；陈竹钦 刊期： 2007年第06期
无痛人工流产常由于子宫颈被牵拉、扩张、负压吸引、刮匙对宫壁的影响,及同时采用快速、短效静脉麻醉药丙泊酚与起效迅速、作用时间短、镇痛作用强的纯阿片受体激动药芬太尼合用,使受术者出现心动过缓、心律紊乱、血压下降,严重者可发生心跳骤停.本研究比较观察了阿托品对无痛人工流产期间心率改变的影响,现报告如下.
作者：王玲英；杨小霖 刊期： 2007年第06期
目的 研究水红花子醇提物的抗氧化活性.方法 用·OH生成系统Fe2++抗坏血酸诱导大鼠心、肝、肾组织匀浆脂质过氧化,用TBA比色法测定MDA含量;用NBT还原法测酵母多糖A刺激大鼠中性白细胞产生的O-2;用分光光度法测H2O2诱发的大鼠红细胞溶血度.结果 6.3、12.5、25、50、100、200 μg/L EFPO能不同程度抑制Fe2++抗坏血酸诱导的大鼠心、肝、肾脂质过氧化产物MDA生成,其抑制心、肝、肾MDA生成的IC50分别为31.8、32.5、40.2 μg/L,量效关系均呈负相关,r分别为-0.886、-0.874及-0.918(P＜0.01);能不同程度抑制酵母多糖A刺激中性粒细胞生成O-2,IC50为31.9μg/L,量效关系呈负相关,r为-0.873(P＜0.01);能不同程度抑制H2O2诱发的红细胞氧化溶血,IC50为56.2μg/L,量效关系呈负相关,r为-0.888(P＜0.01).结论 水红花子醇提物通过清除·OH、O-2及H2O2发挥抗氧化活性.
作者：葛斌；张振明；许爱霞；高湘；雷晓燕 刊期： 2007年第06期
目的 研究在毕赤酵母(Pichia Pastoris)系统中人TALL-1基因的分泌表达,获得具有生物活性的重组TALL-1.方法 将人TALL-1基因插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的酵母表达载体pPIC9K中,用Sac Ⅰ将重组质粒线性化,电转化Pichia Pastoris GS115感受态细胞,筛选阳性整合子并进行甲醇诱导表达,采用MTY对表达产物进行初步的生物活性检测.结果 经过诱导表达条件的优化,人TALL-1在酵母培养基BMMY中实现了分泌表达;免疫印迹和酶联免疫检测结果显示,重组产物可以结合其特异抗体;生物学活性检测证实其可抑制Hela细胞增殖.结论 在毕赤酵母系统中实现了人TALL-1的分泌表达,具有生物学活性的重组TALL-1分子可以用于进一步的结构与功能研究.
作者：王蒙；杨媛；杨峥嵘；李广阔；刘晓红；粟永萍；程天民 刊期： 2007年第06期
第三军医大学学报杂志
主管:第三军医大学
主办：第三军医大学
