张嵘；周宏伟；陈功祥；周铁丽
一、概述临床检验结果准确,具有跨时空的可比性,是防病治病的需要,也一直是临床检验领域的工作目标.目前临床检验普遍采用商品常规方法,方法原理、品种多种多样.不可能也不应该要求所有实验室使用同一方法进行临床检验,实现检验结果准确可比的有效手段是建立和保证不同方法结果的计量学溯源性,其过程简单理解,就是使常规检验与参考系统相联系的过程.
作者：陈文祥 刊期： 2007年第04期
铜绿假单胞菌(Pa)是引起医院内感染常见的条件致病菌之一,近年来Pa耐药率在不断增加,多重耐药菌株也逐渐增多,但产AmpC酶Pa株的报道较为鲜见[1],本研究对3株多重耐药Pa进行DHA基因扩增和序列分析.
作者：童海江；钱小毛；赵仲农；王亚玲 刊期： 2007年第04期
目的 建立一种荧光多聚酶链反应测定线粒体乙醛脱氢酶-2 Glu504Lys多态性的方法.方法 以水解探针技术(TaqMan)为基础,设计相应的引物和荧光探针,PCR反应的Mg2+浓度和探针浓度进行优化,同时对本方法的灵敏度和精密度进行了研究,通过PCR产物直接测序对准确度进行评价.结果 优化后的Mg2+和探针浓度分别为2.5 mmol/L和1.0 μmol/L,批内循环阈值(Ct)值的变异系数为1.38%(n=20),批间Ct值的变异系数为1.48%(n=20);在25 μl反应体系中,人基因组DNA在5.0×102～5.0×106 pg浓度范围内可以得到满意的结果.本法确定150份标本的基因型与PCR产物直接测序法比较,结果完全一致.结论 本方法快速、灵敏、可靠,适合于临床实验室和大规模测定线粒体乙醛脱氢酶-2Glu504Lys多态性.
作者：梁立武；胡红焱；王发强；杨晓莉；焦小杰；刘元明；王海燕 刊期： 2007年第04期
目的 建立单引物二次PCR法对重组质粒中HBV前C-C基因进行4处点突变,并与传统环状突变法进行对比.方法 将变异点合成在一对互补引物中,先加入单条引物行PCR扩增,再以产物为模板,加入另一单条引物行PCR扩增.PCR产物加入Dpn Ⅰ酶,切除其中变异前的模板质粒,转化入大肠埃希菌DH5α,卡那霉素培养基筛选阳性菌落增菌测序.结果 对该质粒而言,采用单引物二次PCR法预期位点均发生变异,成功率高于传统环状突变法.4个变异后质粒与模板条带位置基本一致,4个质粒的拟变异位点均如预期变异成功,而其他氨基酸无变异.结论 单引物二次PCR法进行重组质粒基因突变较传统环状突变法成功率有所提高.
作者：张敏；辛绍杰；段学章；侯俊；胡燕；沈宏辉；貌盼勇 刊期： 2007年第04期
目的 建立和评价多重PCR-反向线点杂交方法(multiplex PCR/reverse line blot hybridization,mPCR/RLB)检测B族溶血性链球菌(GBS)9个耐药及耐药相关基因[erm(A/TR)、erm(B)、mef(A/E)、tet(M)、tet(O)、aphA-3、aad-6、int-Tn和mreA]的方法.方法 针对GBS的9个耐药及耐药相关基因分别设计9对引物及寡核苷酸探针.多重PCR同时扩增9个目的基因,获得生物素标记的PCR产物后,反向线点杂交同时检测上述9个基因.为明确mPCR/RLB方法的特异性和敏感性,对其中318株菌株的9个基因分别进行单个基因PCR扩增,比较两种检测方法结果.结果 用mPCR/RLB方法成功检测512株GBS分离株的9个耐药相关基因,除8株int-Tn和21株mef单个基因PCR阳性的菌株,RLB结果表现为单探针杂交外,其余菌株所有耐药基因RLB检测结果和单个基因PCR完全一致.结论 我们建立的多重PCR/RLB方法具有良好的敏感性和特异性,为GBS耐药基因的流行病学调查和监控提供了一个良好的检测工具.
作者：曾宪玉；王辉；王玮蓁；段逸群；孔繁荣；Gwendolyn L.Gilbert 刊期： 2007年第04期
目的 研究颗粒溶素(granulysin,GNLY)、颗粒酶B(granzyme B,GrB)及穿孔素(perforin,PF)三种免疫效应分子在原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)外周血中的表达并探讨其与PBC的关系.方法 以正常健康人和肝炎后肝硬化患者为对照,用实时荧光定量RTPCR方法检测PBC患者PBMC中GNLY、GrB及PF mRNA的含量.用ELISA方法检测PBC患者血清中GNLY表达情况并分析其与肝功能的相关性.结果 PBC组GNLY、GrB mRNA平均拷贝数显著高于健康对照组(P＜0.01)和疾病对照肝炎后肝硬化组(P＜0.001),而PF mRNA与对照组相比差异无统计学意义.PBC患者血清中的GNLY蛋白表达显著高于健康对照组(P＜0.01)和乙型肝炎后肝硬化组(P＜0.01).血清中GNLY浓度与血清GGT、ALP的浓度呈正相关(P＜0.01).结论 PBC患者GNLY、GrB mRNA和含量显著高于对照组,同时ELISA方法检测出PBC患者血清中GNLY蛋白含量显著高于对照组,GNLY、GrB表达与PBC的发病存在一定的关联性,为临床PBC病情的监控提供可靠依据.
作者：钱(王争)；姚定康；吴传勇；蒋廷旺；陈波；周晔；王燕；邓安梅；仲人前 刊期： 2007年第04期
目的 建立一种简便、灵敏、稳定的直接光度法测定血清铜.方法 在非离子型表面活性剂聚氧乙烯失水山梨醇油酸单脂(Tween-80)及聚氧乙烯异辛基苯基醚(Triton X-100)存在下,用水溶性试剂2-(5-硝基-2-吡啶偶氮)-5-[N-正丙基-N-(3-磺酸丙基)氨基]苯酚二钠(Nitro-PAPS)作显色剂直接光度法测定血清铜.结果 该方法测定血清铜,显色络合物大吸收波长为570 nm,线性范围达63.0μmol/L,表观摩尔吸光系数为7.95×104L/(mol·cm).回收率为98.6%～103.1%,批内CV为2.1%～3.3%,批间CV为2.7%～3.8%,与原子吸收分光光度法比较相关良好,Y=1.01X-0.27,r=0.998 2,P＞0.05,68名健康成年人血清铜含量为9.7～24.1 μmol/L((x)±2s).结论 该法血清用量少,不必去蛋白,具有操作快速、简便、结果灵敏可靠等优点,适用于血清铜的手工测定和自动分析.
作者：周铁丽；赵长容；肖洪武；连国军；曹建明 刊期： 2007年第04期
布氏杆菌病是由布氏杆菌感染引起的,以长期发热、关节疼痛、肝脾肿大和慢性化为特征的传染病.布氏杆菌为细胞内寄生菌,可在单核巨噬细胞内长期生存,造成机体多脏器损伤,导致疾病的慢性化.布氏杆菌的这些特点决定了其临床表现的复杂性,在血液系统方面,除常见症状如肝、脾、淋巴结肿大外,还可有白细胞减少、贫血和血小板减少等表现.2005年以来,我们接触到一些在血液科初诊的患者,其中有12例进行了骨髓细胞学检查,通过细胞形态学的观察,我们发现该病在骨髓细胞学方面有一些较为特征性的变化,对该病的辅助诊断和血液系统疾病的鉴别诊断均具有一定的应用价值,现总结报告如下.
作者：刘立峰；郑慧丽；赵金玲；关波；王喜尧；罗红；李晓娟 刊期： 2007年第04期
由于全血细胞计数(CBC)和白细胞分类计数(DC)在临床诊疗中广泛应用,其复检(review)规则近年来已受到国内外业界的高度重视.为此,我们将国际血液学复检专家组和美国临床和实验室标准协会(CLSI)新提出的自动血细胞计数和白细胞分类计数的复检规则予以介绍.
作者：彭黎明；邱广斌；赵威；朱忠勇 刊期： 2007年第04期
目的 利用PML-RARα融合基因作为标志物,应用实时荧光定量PCR技术,监测急性早幼粒细胞白血病(APL)微小残留病(minimal residual disease,MRD)患者体内病毒的状态,探讨预测APL复发风险的方法.方法 利用本实验室建立的定量检测APL患者PML-RARα融合基因的方法,对25例处于初诊、完全缓解(complete remission,CR)、复发等不同阶段的APL患者进行了PML-RARα融合基因的定量检测,并对其中6例患者的MRD状态进行了动态监测.结果 应用荧光定量PCR技术分析患者初诊、CR和复发状态的PML-RARα基因对数值(lg)水平,结果 显示有统计学意义(x2=6.847,P＜0.05);随访期患者的PML-RARα对数值(lg)水平变化较大:初诊时较高(-0.61±0.79),CR时下降(-1.31±0.62),复发时又出现上升(-0.57±0.44),提示若该患者在CR时的对数值呈现上升趋势,患者复发的机率大.结论 应用实时荧光定量(RQ)-PCR技术定量检测PML-RARα融合基因,对监测APL患者MRD状态具有临床适用性,随访期的MRD动态追踪监测具有预后价值.
作者：袁宏；王楠；李士军；王晶；朱鸿；肖晓光；黄敏 刊期： 2007年第04期
目的 制定血细胞分析仪血涂片复检的标准并加以评价,以求准确、合理、有效使用血细胞分析仪.方法 根据医院及XE-2100血细胞分析仪特点制定血涂片复检的标准,通过对1 368份标本血涂片进行显微镜检查,评价仪器提示与手工检查的一致性和标准执行的可行性.结果 仪器提示血小板减少与血涂片显微镜镜检结果相比较Kappa值0.95,U=35.19,P＜0.01,显示两者一致性满意;提示未成熟粒细胞、异常淋巴细胞、核左移、血小板聚集的仪器结果与镜检结果比较,Kappa值分别为0.64、0.60、0.52、0.60,U值分别为24.9、22.2、21.98、17.65,P＜0.01,提示两者一致性尚可;而提示原始粒细胞、有核红细胞的仪器结果与镜检结果比较,Kappa值分别为0.39、0.36,U值分别为13.54、8.24,P＜0.01,显示两者一致性尚不够理想.依据标准复检血涂片,敏感度为81.9%,特异度为100%,准确性为95.5%.结论 本复检标准敏感度高、特异性强,表明符合本复检标准的标本均需要严格按照操作规程进行显微镜镜检,以免造成漏诊、误诊现象.
作者：陈小剑；王晓欧；李绵绵；黄晓彤；朱丽丹 刊期： 2007年第04期
先天性白血病(congnnical leukemia,CL)是指从出生至生后8周诊断的白血病[1],我们遇到3例,现报告如下.
作者：赵志钢；李彬；张晓梅；吴晓；陈东红；武蓉珍；陈益飞 刊期： 2007年第04期
目前临床上用于酵母菌鉴定的方法主要有色原底物显色鉴定法、API 20C AUX和Vitek 2 Compact YBC方法.其中色原底物显色鉴定法操作简单,但是能够鉴定的菌株范围有限,API 20C AUX方法菌株鉴定范围广但操作复杂,BBLMycotube方法操作比API 20C AUX方法简单,与色原底物显色鉴定法相比耗时相似,菌种鉴定范围更广.
作者：陈翠珠；徐英春；窦红涛；谢秀丽；陈民钧 刊期： 2007年第04期
目的 对北京地区脑膜炎奈瑟菌进行耐药性监测.方法 采用临床及试验标准协会推荐的肉汤稀释法,测定12种抗菌药物的低抑菌浓度.结果 2004年11月至2006年3月收集的67株菌株对头孢曲松、阿奇霉素、头孢噻肟、美洛培南和利福平敏感,对甲氧苄啶/磺胺耐药.全部菌株对青霉素、氨苄西林和氯霉素均不耐药,但是分别有41、7和11株耐药性介于中介值;对环丙沙星有5株敏感,19株介于中介,43株耐药(占64.2%);对左氧氟沙星有8株敏感,3株介于中介,56株耐药(占83.6%);对四环素有19株敏感,3株介于中介,45株耐药(占67.2%).结论 青霉素、氨苄西林、头孢曲松、氯霉素、头孢噻肟和美洛培南仍是治疗流行性脑脊髓膜炎(流脑)的有效抗生素,而利福平和阿奇霉素可作为密切接触者的预防性用药.
作者：张铁钢；和京果；陈丽娟；贺雄；邵祝军；杨洁；庞星火；陈志海；赵辉；王慧珠 刊期： 2007年第04期
诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)又称为TR6,是20世纪末发现的新肿瘤坏死因子(TNF)受体.DcR3不仅有抗凋亡作用,而且还能调控免疫细胞的活性与分化,及下调机体免疫系统,并与肿瘤免疫逃逸密切相关[1].目前,有关原发性肺癌中DcR3基因表达研究报道存在争议.本研究通过对原发性肺癌患者血清和手术肺癌组织中DcR3基因扩增和表达水平的研究,以探讨DcR3基因扩增和表达之间的关系及其临床意义.
作者：钟智强；兰小鹏；杨湘越；李卫滨；张鲁榕；朱忠勇 刊期： 2007年第04期
心脏标志物在临床应用已经有50多年的历史.早在1954年,AST(旧称GOT)就作为第一种用于诊断心肌梗死(MI)的心脏标志物被应用于临床.半个多世纪以来,陆续又有许多心脏标志物先后应用于临床,在心脏疾病的诊断、危险性评估、疗效观察、预后估计等方面起了重要作用.
作者：潘柏申 刊期： 2007年第04期
目的 应用双向电泳及质谱技术对野生型及变异型白细胞介素13(IL-13)刺激后的ASMC总蛋白进行差异比较研究,借此分析差异表达蛋白与支气管哮喘的关系,为哮喘的治疗提供新的靶标.方法 用固相pH双向电泳分离,分别给予野生型IL-13及变异型IL-13刺激的ASMC总蛋白组成分,找出异常IL-13处理后与野生型IL-13处理后有明显差别的蛋白斑点,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF)进行鉴定部分差异蛋白质.结果 获得了分辨率高,重复性好的电泳图谱,在野生型IL-13刺激组和变异型IL-13刺激组分别平均有(840±21)个和(892±17)个蛋白点(n=3)被检测,匹配的点数为(685±19)个,选取5个未匹配点做质谱分析,鉴定其中3个分别为stathmin 1,Ribosomal protein p0,NADH dehydrogenase.结论 本研究结果显示不同处理组的ASMC总蛋白表达存在差异,这些差异蛋白有可能为阐明野生型IL-13及其变异体引发哮喘机制提供新的实验证据.
作者：姜晓峰；郭晓英；梁红艳；杜雪飞；辛瑜；薛丽；傅松滨 刊期： 2007年第04期
目的 探讨冠心病患者外周血CD+4CDnull28 T淋巴细胞的数量以及其表达穿孔素情况.方法 空腹采肘静脉血,采用流式细胞分析仪测定68例急性冠脉综合征(ACS),56例稳定型心绞痛(SAP)患者和65名健康人循环CD+4CDnull28 T淋巴细胞亚群扩增情况.结果 ACS患者循环CD+4CDnull28 T淋巴细胞数量(11.6%)显著高于SAP患者(2.84%)和健康者(0.59%);CD+4 Perforin+ T淋巴细胞数量(12.0%)也明显高于SAP组(3.06%)和对照组(0.25%).结论 ACS患者CD+4CDnull28 T淋巴细胞显著增加且表达穿孔素,这些细胞浸润到斑块处,可能通过细胞毒功能破坏血管内皮细胞而导致斑块破裂,从而参与ACS的发生.
作者：黄立娟；崔颖；孙文英；杜桂芹；李璐璐 刊期： 2007年第04期
由中华医学会检验分会全国血液学复检专家小组、中华检验医学杂志编辑委员会于2006年9月10日在北京举行了工作会议.中华医学会检验医学分会主任委员、中华检验医学杂志总编辑丛玉隆教授主持了会议,中华医学会杂志社袁桂清副社长,中华检验医学杂志编辑部史红主任,北京大学深圳医院检验科彭黎明教授,卫生部临床检验中心血液室彭明婷研究员,北京协和医院张时民副主任技师,上海同济大学附属第十人民医院李智主任医师,华中科技大学附属荆州医院王昌富教授,解放军第二○二医院邱广斌副主任技师等参加了本次会议.
作者：中华医学会检验分会全国血液学复检专家小组；中华检验医学杂志编辑委员会 刊期： 2007年第04期
作者： 刊期： 2007年第04期
中华检验医学杂志
主管:中华医学检验杂志
主办：中国科学技术协会
