学术投稿

AG490对成骨细胞和破骨细胞之间相互作用的影响

程鑫;万启龙;李祖兵

关键词:共同培养技术, 核因子κB受体活化因子, AG490, 成骨向分化, 破骨向分化
摘要:目的 体外建立MC3T3-E1细胞与RAW 264.7细胞间接共培养体系,观察AG490对共培养体系中破骨细胞形成的影响.方法 MC3T3-E1细胞经矿化诱导培养后,与RAW 264.7细胞进行间接共培养,经一定浓度AG490(1、5、10μmol/L)分别处理后,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,氮偶联法检测成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测成骨细胞相关基因骨保护素(OPG)、Ⅰ型胶原(COL1)、ALP、骨钙素(OCN)的表达,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和苏木素染色检测破骨细胞的形成,蛋白印迹法(Western blot)检测破骨细胞中RANK的表达.采用单因素方差分析和双因素方差分析对数据进行统计分析.结果 AG490下调MC3T3-E1细胞矿化过程中OPG、COL1、ALP、OCN mRNA的表达(FOPG=30.120,POPG,AG4901μmol/L=0.021、POPG,AG4905μmol/L=0.221、POPG,AG49010μmol/L=0.003;FALP=67.352,PALP,AG4901μmol/L=0.034、PALP,AG4905μmol/L=0.001、PALP,AG49010μmol/L=0.156;FCOL1=28.158,PCOL1,AG4901μmol/L=0.054、PCOL1,AG4905μmol/L=0.002、PCOL1,AG49010μmol/L=0.4;FOCN=125.375,POCN,AG4901μmol/L<0.001、POCN,AG4905μmol/L<0.001、POCN,AG49010μmol/L<0.001).与RAW264.7细胞单独培养作为对照组相比,MC3T3-E1细胞与RAW 264.7细胞间接共培养明显促进成熟破骨细胞的形成,AG490在这个过程中对破骨细胞的形成起到抑制作用(F=85.391,P共培养组-对照组<0.001,P共培养+AG490组-共培养组=0.035),同时与对照组相比,明显抑制破骨细胞中RANK蛋白的表达(FRANK=376.25,PRANK,AG4901μmol/L=0.468、PRANK,AG4905μmol/L=0.003、PRANK,AG49010μmol/L<0.001).结论 AG490抑制MC3T3-E1细胞成骨向分化,并通过影响OPG/RANKL/RANK信号轴的传递抑制成骨细胞与破骨前体细胞间接共培养过程中破骨细胞的形成.
中华口腔医学研究(电子版)杂志相关文献
  • 虚拟实验室Simodont系统用于口腔医学窝洞预备教学的效果评价

    目的 评价分析虚拟实验室Simodont系统应用于口腔医学临床窝洞预备教学的效果.方法 选择中国医科大学口腔医学院口腔临床医学专业本科生30人为研究对象,经统一理论培训后,简单随机抽样法分为3组,每组10人,男女均等,其中C组为对照组,F组为仿头模组使用传统塑料牙在仿头模上进行练习,M组为穆格(Moog)组在Simodont系统进行练习.并且于训练之前、期间和之后分别进行测试,检验窝洞预备技能掌握情况.根据恒磨牙Ⅱ类洞窝洞预备要求,由教师目测评估结合数字化评估系统进行评分.两种方法获取的评估结果 分析采用Kruskal Wallis检验以及多重比较,检验水准α=0.05.结果实验组学生经过不同程度的练习之后技能都得到了提高,M组练习的学生进步更加明显,TEST3成绩分别为C组3.8±2.2、F组5.2±1.9、M组7.4±1.4,差异有统计学意义(tCF=2.79,PCF=0.021;tCM=4.65,PCM=0.001;tFM=3.01,PFM=0.013).数字化评估结果与教师目测评分结果一致,F组与M组的成绩经过2个阶段练习后均得到了提高(χ2F=39.56,PF<0.001;χ2M=41.73,PM<0.001),M组成绩显著优于对照组及仿头模组(χ2CM=31.16,PCM=0.001;χ2FM=24.89,PFM=0.006).结论 Simodont系统有利于口腔医学生手法技能的提高,加强窝洞预备实验课的教学效果,值得在临床前教学中加以推广应用.

    作者:王艳红;朱晓华;李斯文;李施施;张皓;史秀娣;马红梅 刊期: 2017年第02期

  • 地塞米松调控牙本质基质蛋白1在成骨细胞中的表达

    目的 研究地塞米松诱导成骨细胞(MC3T3-E1)中牙本质基质蛋白1(DMP1)的表达变化情况.方法 利用实时荧光定量PCR反应技术检测不同浓度的地塞米松处理MC3T3-E1细胞后不同时间段细胞中DMP1基因表达变化,通过单因素方差分析法在每个浓度和48 h下对实验组和对照组进行表达差异比较.利用蛋白印迹法(Western blot)检测10-6 g/L的地塞米松处理MC3T3-E1细胞后不同时间段的细胞中DMP1蛋白表达变化.结果 不同浓度地塞米松分别处理MC3T3-E1成骨细胞DMP1基因表达水平在24、48和72 h均较对照组0 h显著降低(P<0.05),48 h组较24和72 h组显著降低(P<0.05);48 h下10-6 g/L组较10-7 g/L组显著降低(P<0.05),而与10-5组相比较没有差异(P>0.05).10-6 g/L地塞米松处理MC3T3-E1成骨细胞后,不同时间点的DMP1蛋白表达量均较0 h降低.结论 地塞米松抑制成骨细胞MC3T3-E1中DMP1的表达,提示地塞米松可能是通过调控DMP1的表达而影响成骨细胞的骨形成.

    作者:夏昕;阮毅;陈绛媛;李博亚;孔祥波;伍虹 刊期: 2017年第02期

  • 钛表面聚合物静电作用固定骨形态发生蛋白2的实验研究

    目的 探索以纳米金颗粒结合静电吸附方法 及化学反应将骨形态发生蛋白2(BMP-2)固定于钛(Ti)种植体表面的技术,为钛表面改性提供新的生物处理技术.方法利用化学方法合成负电聚合物BPP[BA-Pasp(MEA-DDP)-Pasp(DAP-CA)].直径10 mm、厚度0.3 mm的钛箔随机分为3组,分别进行处理:(1)纯Ti抛光组;(2)Ti/BPP组,磁控溅射法在纯钛表面喷涂纳米金颗粒,并连接BPP聚合物;(3)Ti/BPP/BMP-2组,在Ti/BPP组基础上通过静电吸附连接BMP-2蛋白.扫描电镜(SEM)观察各组表面形貌,检测表面亲水性、粗糙度和表面电位.荧光标记观察BMP-2连接及分布情况,并比较异硫氰酸荧光素(FITC)-BMP-2与Ti/BPP连接前后荧光强度的变化.Elisa法测试Ti及Ti/BPP表面BMP-2的整合率.单因素方差分析及独立样本t检验对数据进行统计分析,Bonferroni法进行两两比较.结果 荧光标记和SEM结果均显示BMP-2可有效连接在纯钛表面,FITC-BMP-2与Ti/BPP连接前荧光强度为124.000±0.968,连接后荧光强度为84.060±0.495,差异具有统计学意义(F=37.727,P<0.001).以Ti组电势为0时,Ti/BPP组表面电势为-31.2 mV,连接BMP-2蛋白后表面电势明显上升至+9.3 mV.Ti/BPP表面连接BMP-2整合率[(14.883±0.916)%]高于纯Ti抛光表面[(5.990±0.306)%;F=6.000,P<0.001].Ti/BPP组与Ti/BPP/BMP-2组表面亲水性明显高于Ti组,而三组表面粗糙度无明显差异.结论 联合运用纳米金颗粒及负电聚合物可有效将BMP-2固定于纯钛表面.

    作者:代国荣;张新春;万文清;王焱 刊期: 2017年第02期

  • 骨劈开联合引导骨再生技术用于上前牙窄牙槽嵴种植修复一例

    骨劈开术联合引导骨再生(GBR)技术通常用于上颌前牙区牙槽嵴宽度为3~5 mm时增加牙槽嵴的宽度,以达到满意后期种植美学修复.本文报道1例上前牙缺牙区牙槽嵴宽度<3 mm病例,通过骨劈开联合GBR技术延期种植获得理想的美学修复效果.

    作者:贺钧;谢志刚;李自良 刊期: 2017年第02期

  • miR-362-5p靶向DKK1促进舌鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭

    目的 检测miR-362-5p在人舌鳞状细胞癌(TSCC)组织及细胞系中的表达,探讨miR-362-5p对TSCC细胞增殖和侵袭能力的影响,及其可能的作用机制.方法 利用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术检测TSCC组织及细胞系中miR-362-5p的表达水平;将miR-362-5p mimic、antagomiR-362-5p和阴性对照组分别转入人TSCC细胞SCC-9和UM1中,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)以及Transwell法检测转染后各组细胞增殖及侵袭能力的改变,蛋白印迹法(Western blot)以及TOP/FOP双荧光报告检测Wnt信号通路活性.两组间均数的比较采用Student′s t检验,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 相对于正常舌黏膜组织及细胞,TSCC组织和细胞系中miR-362-5p的表达水平显著上调(P<0.001).SCC-9和UM1细胞中转染antagomiR-362-5p或miR-362-5p mimic能显著抑制(tSCC-9=26.53,PSCC-9=0.0083;tUM1=24.45,PUM1=0.0094)或上调(tSCC-9=-257.87,PSCC-9=0.0008;tUM1=-270.44,PUM1=0.0007)miR-362-5p表达水平.下调miR-362-5p表达能降低SCC-9和UM1细胞的增殖(tSCC-9=32.44,PSCC-9=0.0009;tUM1=22.32,PUM1=0.0013)和侵袭能力(tSCC-9=39.55,PSCC-9=0.0008;tUM1=23.78,PUM1=0.0092),而上调其表达则可增强细胞的增殖(tSCC-9=-23.35,PSCC-9=0.0084;tUM1=-17.47,PUM1=0.0138)和侵袭能力(tSCC-9=-26.23,PSCC-9=0.0072;tUM1=-18.69,PUM1=0.0145).同时,miR-362-5p能够负性调控Dickkopf1(DKK1)的表达,增强Wnt/β-catenin信号通路.结论 TSCC组织及细胞系中miR-362-5p的表达上调,其可能通过抑制DKK1表达增强Wnt/β-catenin信号通路,促进TSCC细胞的增殖和侵袭.

    作者:周媛;唐海阔;胡飚 刊期: 2017年第02期

  • 儿童下颌骨朗格汉斯细胞组织细胞增生症的CT表现:附10例报告

    目的 回顾性研究儿童下颌骨朗格汉斯细胞组织细胞增生症(LCH)的计算机体层摄影术(CT)表现,探讨CT在诊断LCH中的价值.方法 收集中山大学附属第一医院自2006年1月至2016年7月中经手术病理证实的儿童下颌骨LCH患者的CT资料,同时在SinoMed数据库上以中文关键词及PubMed数据库上以对应英文搜索语句对2016年及之前的文献进行无限定条件智能搜索,获取全文并人工进行筛选,对获得病例进行描述性统计分析.结果 共获得18例病例,其中10例来自中山大学附属第一医院,8例来自文献.儿童下颌骨LCH的CT影像多表现为平扫期均匀软组织密度影(13/18),边缘多清晰(14/18),下颌骨皮质呈穿凿样破坏(17/18),可有明显的骨膜新生骨(11/18)但仅有轻微的边缘骨硬化带(5/18);牙根无推移或仅轻微受压推移,可伴牙囊破坏、牙根吸收(3/18).增强扫描可见肿物轻至中度均匀强化(10/10),部分边缘可见环型强化带(5/10).结论 CT在儿童下颌骨LCH的诊断中有重要的辅助作用,有助于该病的综合判断和正确治疗.

    作者:陈颖茜;范淼;陈丹;Sagar Pandey;李秀红 刊期: 2017年第02期

  • 下颌骨缺损分类进展

    下颌骨作为人体形态、结构及功能为复杂的骨骼之一,肿瘤、囊肿、感染、放射性骨坏死等多种原因均可导致其不同程度的缺损.下颌骨缺损具有复杂性,不同部位、范围的缺损,将产生不同程度的形态、功能损害,对应的修复重建难度也不同.一个科学、合理的下颌骨缺损分类体系,对于病情评估、指导修复重建、预测预后等均有重要意义.目前,国内外下颌骨缺损分类方法有十余种之多,但尚无一种分类得到广泛的认同和应用.本文将对既往提出的分类方法进行简要比较及综述,同时探讨一个理想的下颌骨缺损分类应具有的特点.

    作者:李静远;廖贵清 刊期: 2017年第02期

  • 锁骨上动脉岛状瓣修复颌面部肿瘤术后缺损的临床研究

    目的 探讨锁骨上动脉岛状瓣在颌面部肿瘤术后缺损的临床应用.方法 回顾性研究2015年9月至2016年12月汕头大学医学院第二附属医院口腔科应用锁骨上动脉岛状瓣修复颌面部肿瘤术后缺损15例患者的临床资料,其中舌癌8例、口咽癌2例、颊癌4例、口底癌1例.UICC临床分期:T2N0M02例、T3N0M07例、T3N1M04例、T4N1M01例、T4N2M01例.皮瓣大小4 cm×5 cm~7.5 cm×10 cm.结果 1例皮瓣完全坏死,2例皮瓣边缘部分坏死,其余13例全部存活,修复重建效果良好.结论 锁骨上动脉岛状瓣可靠、稳定,是颌面部肿瘤术后缺损修复重建的理想选择.

    作者:陈仕生;姚小武;卢子正;林敏校 刊期: 2017年第02期

  • AG490对成骨细胞和破骨细胞之间相互作用的影响

    目的 体外建立MC3T3-E1细胞与RAW 264.7细胞间接共培养体系,观察AG490对共培养体系中破骨细胞形成的影响.方法 MC3T3-E1细胞经矿化诱导培养后,与RAW 264.7细胞进行间接共培养,经一定浓度AG490(1、5、10μmol/L)分别处理后,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,氮偶联法检测成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测成骨细胞相关基因骨保护素(OPG)、Ⅰ型胶原(COL1)、ALP、骨钙素(OCN)的表达,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和苏木素染色检测破骨细胞的形成,蛋白印迹法(Western blot)检测破骨细胞中RANK的表达.采用单因素方差分析和双因素方差分析对数据进行统计分析.结果 AG490下调MC3T3-E1细胞矿化过程中OPG、COL1、ALP、OCN mRNA的表达(FOPG=30.120,POPG,AG4901μmol/L=0.021、POPG,AG4905μmol/L=0.221、POPG,AG49010μmol/L=0.003;FALP=67.352,PALP,AG4901μmol/L=0.034、PALP,AG4905μmol/L=0.001、PALP,AG49010μmol/L=0.156;FCOL1=28.158,PCOL1,AG4901μmol/L=0.054、PCOL1,AG4905μmol/L=0.002、PCOL1,AG49010μmol/L=0.4;FOCN=125.375,POCN,AG4901μmol/L<0.001、POCN,AG4905μmol/L<0.001、POCN,AG49010μmol/L<0.001).与RAW264.7细胞单独培养作为对照组相比,MC3T3-E1细胞与RAW 264.7细胞间接共培养明显促进成熟破骨细胞的形成,AG490在这个过程中对破骨细胞的形成起到抑制作用(F=85.391,P共培养组-对照组<0.001,P共培养+AG490组-共培养组=0.035),同时与对照组相比,明显抑制破骨细胞中RANK蛋白的表达(FRANK=376.25,PRANK,AG4901μmol/L=0.468、PRANK,AG4905μmol/L=0.003、PRANK,AG49010μmol/L<0.001).结论 AG490抑制MC3T3-E1细胞成骨向分化,并通过影响OPG/RANKL/RANK信号轴的传递抑制成骨细胞与破骨前体细胞间接共培养过程中破骨细胞的形成.

    作者:程鑫;万启龙;李祖兵 刊期: 2017年第02期

中华口腔医学研究(电子版)杂志

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主管:中华人民共和国卫生和计划生育委员会

主办:中华医学会