学术投稿

诱导小鼠颊黏膜成纤维细胞形成诱导性多潜能干细胞

尹映竹;梁国斌;刀力;张新春;覃峰;杨凌

关键词:诱导多功能干细胞, 成纤维细胞, 细胞重编程, 再生
摘要:目的 研究小鼠颊黏膜成纤维细胞(BF)重编程形成诱导性多潜能干细胞(iPSC)的诱导方法 .方法应用携带有Oct4、Sox2和Klf4基因的逆转录病毒诱导小鼠BF重编程形成iPSC.观察iPSC克隆形态;进行碱性磷酸酶(ALP)染色、核型分析;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及细胞免疫荧光术检测内/外源性多能基因和干细胞标志物的表达;体外、体内分化实验检测iPSC多向分化潜能.结果 iPSC呈典型胚胎干细胞(ESC)样克隆生长,边界清晰;细胞ALP染色阳性,核型正常.内源性Dppa3、Nanog、Rex1、Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因表达量与ESC接近,未检测到外源性Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因表达.干细胞标志物Oct4、Sox2和Nanog表达呈阳性.在体外,iPSC可被诱导向成骨、成脂、成软骨方向分化;体内可分化成多种组织,形成畸胎瘤.结论 成功诱导BF重编程形成iPSC,为牙再生医学相关研究提供种子细胞来源.
中华口腔医学研究(电子版)杂志相关文献
  • 重组人乳铁蛋白诱导人口腔癌Tca8113细胞自噬及凋亡

    目的 研究重组人乳铁蛋白(rhLF)对人口腔癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测不同浓度的rhLF作用细胞不同时间对其增殖的影响,并分别用不同浓度的rhLF处理细胞后观察其对集落克隆形成的影响;不同浓度的rhLF处理细胞后线粒体膜电位的变化.采用免疫荧光技术检测rhLF处理前后自噬体的形成情况.免疫蛋白印迹法(Western blot)检测不同浓度rhLF处理细胞后细胞自噬相关蛋白P62和LC3表达变化,AnnexinⅤ-PI双染色检测rhLF对细胞凋亡的影响;Western blot检测不同浓度的rhLF处理细胞后聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达变化.所有数据采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学分析.结果 rhLF对口腔癌Tca8113细胞的增殖及存活有明显的增殖抑制作用,并呈药物浓度和时间依赖性,且各药物处理组与对照组相比有统计学意义(P<0.05).rhLF抑制口腔癌Tca8113细胞克隆形成;JC-1荧光检测显示口腔癌Tca8113细胞经rhLF处理后其线粒体膜电位下降;rhLF处理后形成自噬体,不同浓度rhLF处理细胞后细胞自噬相关蛋白P62表达下降及LC3-Ⅱ表达增加,0、100、200μg/ml的rhLF处理口腔癌Tca8113细胞48 h的凋亡率为3.9%、8.2%、42.6%,组间差异有统计学意义(P<0.05).Western blot结果显示,rhLF处理口腔癌Tca8113细胞后PARP、Caspase-3被激活.结论 rhLF能显著抑制Tca8113细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡途径的激活应激有关.

    作者:肖莉;张继斌;李宝霞 刊期: 2017年第06期

  • 客观结构化临床考试在儿童口腔医学本科教学中的应用

    目的 探索将客观结构化临床考试(OSCE)应用于儿童口腔医学教学中的效果.方法 选取第四军医大学口腔医院口腔医学系本科八年制学生30人和五年制学生60人,对其进行OSCE考试和传统理论考试,并对学生的满意度进行问卷调查.使用SPSS 18.0软件对学生成绩进行t检验,对问卷结果 以频数、百分比进行统计学描述.结果五年制学生OSCE成绩为(61.68±5.22)分,八年制OSCE成绩为(58.13±6.54)分,差异无统计学意义(t=0.564,P=0.579);五年制学生理论成绩为(87.90±4.52)分,高于八年制理论成绩[(82.56±4.44)分],差异有统计学意义(t=2.712,P=0.013).OSCE成绩和理论考试成绩有较好一致性.71.11%的学生对OSCE评价较高.结论 OSCE能够客观、真实、全面评估学生的综合素质,在儿童口腔医学本科教学中可取得良好效果,值得进一步推广.

    作者:句新科;汪璐璐;张彩娣;邢向辉;王小竞 刊期: 2017年第06期

  • 牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导人牙髓细胞炎症反应中微小RNA的表达谱变化

    目的 研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)诱导人牙髓细胞(hDPC)炎症反应中微小RNA(miRNA)表达谱的变化.方法 体外分离培养hDPC,10μg/ml Pg-LPS处理hDPC 0、3、6、12、24 h,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和ELISA检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)、IL-8 mRNA及蛋白表达量.Illumina HiSeqTM 2500测序检测Pg-LPS刺激前后miRNA表达模式,筛选差异miRNA并预测其靶基因,对靶基因进行KEGG通路和GO功能富集分析.采用t检验或单因素方差分析等进行统计分析.结果 Pg-LPS刺激hDPC,IL-6和IL-8的mRNA表达量及细胞上清蛋白含量显著升高,其中IL-6和IL-8 mRNA在3 h表达升高明显,分别为(7.4±1.1)、(61.6±20.8)倍,差异有统计学意义(tIL-6=-9.268,PIL-6=0.001;tIL-8=-5.047,PIL-8=0.037).IL-6和IL-8的分泌呈时间依赖性增加,24 h时含量分别为(44±19)、(4016±670)pg/ml,差异有统计学意义(tIL-6=-3.621,PIL-6=0.022;tIL-8=-4.902,PIL-8=0.008).hDPC经LPS刺激后共检测出680个miRNA表达有变化,其中2个下调的miRNA和18个上调的miRNA为差异miRNA,功能富集分析显示差异miRNA参与调控多条炎症或损伤修复相关的信号通路如Wnt信号通路、TGF-β信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等.结论 Pg-LPS可诱导hDPC发生炎症反应,此过程中miRNA表达谱发生变化,提示miRNA可能参与Pg-LPS诱导的hDPC炎症反应.

    作者:莫泽欢;徐琼 刊期: 2017年第06期

  • 诱导小鼠颊黏膜成纤维细胞形成诱导性多潜能干细胞

    目的 研究小鼠颊黏膜成纤维细胞(BF)重编程形成诱导性多潜能干细胞(iPSC)的诱导方法 .方法应用携带有Oct4、Sox2和Klf4基因的逆转录病毒诱导小鼠BF重编程形成iPSC.观察iPSC克隆形态;进行碱性磷酸酶(ALP)染色、核型分析;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及细胞免疫荧光术检测内/外源性多能基因和干细胞标志物的表达;体外、体内分化实验检测iPSC多向分化潜能.结果 iPSC呈典型胚胎干细胞(ESC)样克隆生长,边界清晰;细胞ALP染色阳性,核型正常.内源性Dppa3、Nanog、Rex1、Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因表达量与ESC接近,未检测到外源性Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因表达.干细胞标志物Oct4、Sox2和Nanog表达呈阳性.在体外,iPSC可被诱导向成骨、成脂、成软骨方向分化;体内可分化成多种组织,形成畸胎瘤.结论 成功诱导BF重编程形成iPSC,为牙再生医学相关研究提供种子细胞来源.

    作者:尹映竹;梁国斌;刀力;张新春;覃峰;杨凌 刊期: 2017年第06期

  • 三种热处理镍钛系统预备弯曲根管效率及碎屑推出比较

    目的 研究比较ProTaper Next(PTN)、K3XF和HyFlex CM(HF)3种热处理镍钛机动系统预备弯曲根管至不同工作宽度时的根尖碎屑推出情况及预备效率.方法 收集未行根管治疗、牙根完整、根尖发育完全、无牙根内外吸收或根管钙化的恒磨牙,选择弯曲度为20°~45°、初尖锉号数为10#的独立根管72个,按照镍钛系统(PTN、K3XF、HF)随机分为3组,每组再按工作宽度(25#、30#、40#)分为3个亚组(n=8).记录各组完成根管预备的时间,收集并称量各组推出根尖孔的牙本质碎屑量.采用单因素方差分析对数据进行统计分析,Tukey post hoc test进行两两比较.结果 PTN预备根管至25#、30#、40#时的碎屑推出量分别为(0.37±0.09)、(0.43±0.14)、(0.42±0.15)mg,K3XF预备至25#、30#、40#时的碎屑推出量分别为(0.47±0.13)、(0.50±0.16)、(0.47±0.15)mg,HF预备至25#、30#、40#时的碎屑推出量分别为(0.88±0.19)、(0.91±0.20)、(0.80±0.15)mg.预备至同一工作宽度时,HF组根尖碎屑推出量大于PTN组和K3XF组(F25=28.700,P25<0.001;F30=19.292,P30<0.001;F40=15.190,P40<0.001).终末工作宽度增大时,3种镍钛系统的碎屑推出量均无显著增加(P>0.05).预备根管至25#和30#时,3组器械预备时间差异无统计学意义(P>0.05).预备至40#,PTN组用时[(173.1±18.0)s]比K3XF组[(220.5±29.7)s]和HF组[(227.6±22.3)s]少,差异具有统计学意义(F=12.369,P=0.001).结论 与HF相比,PTN和K3XF预备弯曲根管时碎屑推出较少.当预备至较大工作宽度时,PTN的预备效率较高.

    作者:曾凯密;陈典;钟奇帜;韦曦 刊期: 2017年第06期

  • 苯扎氯铵对粪肠球菌感染根管的体外抑菌研究

    目的 评价苯扎氯铵作为根管冲洗液对离体牙感染根管内粪肠球菌(E.faecalis)的抑菌效果.方法 64颗因正畸减数拔除的健康前磨牙,高压灭菌后接种E.faecalis建立感染模型,接种前、后分别采用抽签法随机取出2颗作前后对照,组织学Brown&Brenn染色和扫描电镜(SEM)观察E.faecalis在根管内的感染状态.其余按不同冲洗药物随机分为6组(每组10例):0.05%苯扎氯铵溶液组、0.1%苯扎氯铵溶液组、3%过氧化氢溶液组、2.5%次氯酸钠溶液组、5.25%次氯酸钠溶液组、0.9%氯化钠溶液组.冲洗前、后分别取样作细菌学培养,计数菌落形成单位.采用t检验分析各组冲洗前后根管内细菌量差异,ANOVA法分析各组间细菌减少量的差异,比较苯扎氯铵与过氧化氢和次氯酸钠溶液对E.faecalis的抑菌效果,并用SEM观察各组冲洗后根管表面细菌感染情况.结果 (1)组织学结果显示:E.faecalis感染根管样本的牙本质小管内见蓝色深染的细菌颗粒,深度达250~1050μm;接种前样本中,根管视野干净,未见蓝色深染的细菌颗粒.SEM观察在感染根管样本中,E.faecalis成团、成串附着于根管壁,形成生物膜结构;接种前样本中,根管壁表面干净,牙本质小管和管间牙本质结构清晰可见.(2)细菌学培养结果显示:除0.9%氯化钠溶液组外,其余5组根管内E.faecalis均下降(P<0.05).0.05%和0.1%苯扎氯铵溶液冲洗前后的细菌减少量(7.90±2.18、8.30±2.21)大于3%过氧化氢溶液(5.30±2.31)和2.5%次氯酸钠溶液(6.10±1.20)组(P<0.05),但与5.25%次氯酸钠溶液(8.70±1.89)差异无统计学意义(P>0.05);0.05%和0.1%苯扎氯铵溶液组冲洗前后细菌减少量差异无统计学意义(P>0.05).SEM观察苯扎氯铵、5.25%次氯酸钠溶液冲洗后根管表面较3%过氧化氢溶液、2.5%次氯酸钠溶液冲洗后洁净.结论 苯扎氯铵对离体牙根管内E.faecalis有较强的抑菌效果.

    作者:代静;陈燕斌;陈珊;任静;李昆蔓;杨军英 刊期: 2017年第06期

  • 鬓角发际线内小切口路径内固定治疗颧骨骨折

    目的 探讨鬓角发际线内小切口治疗颧骨颧弓骨折的有效性和安全性.方法 对2014年3月至2017年1月在徐州市中心医院口腔科进行鬓角发际线内小切口路径内固定治疗的21例颧骨颧弓骨折患者进行跟踪随访,按三级标准评价手术效果,包括手术切口愈合情况、面形和功能的恢复及手术并发症.结果 所有患者手术软组织切口均Ⅰ期愈合,骨折断端达到解剖复位,面形恢复满意,开闭口功能正常,术后无神经损伤.结论 鬓角发际线内切口是治疗颧骨骨折的较好方法,术野显露广泛且切口隐蔽性好.

    作者:韩琨;孟箭;王兴;辜健敏;邵翠玲 刊期: 2017年第06期

  • 折叠游离皮瓣修复口腔癌洞穿缺损术后血管危象的护理与评估

    目的 探讨建立游离折叠皮瓣修复口腔癌洞穿缺损术后血管危象的护理与评估机制.方法 选择中山大学孙逸仙纪念医院2013年8月至2016年8月间收治的37例口腔恶性肿瘤患者,行游离折叠皮瓣转移修复颌面部洞穿性缺损,按血管危象预警机制标准进行护理与评估,包括口腔内外侧皮瓣颜色、质地,外侧瓣皮温为主,综合患者全身状况.凡是在评估低于标准20%以上的立即通知医生,及早对症处理.结果 符合入组标准口腔恶性肿瘤患者共37例,在术后0~3 d内出现血管危象6例.其中出现静脉血管危象患者4例、动脉危象2例.经过医护配合及时处理皮瓣得以挽救.结论 术后根据血管危象预警机制标准在护理工作中密切观察皮瓣及全身情况,根据患者自身基础血压、正常皮温、供区肤色的对比进行评估,及时发现及早处理皮瓣血管危象,降低不良因素的影响,及早对症处理,提高皮瓣成活率.

    作者:温作珍;毛小燕;翁雪玲 刊期: 2017年第06期

  • 增龄性变化对牙本质微观结构与力学特性的影响

    目的 探讨人牙本质的增龄性变化对牙本质微观结构及压缩力学性能的影响.方法 分别收集青年组和增龄组第三恒磨牙各10颗,制备平行于牙本质小管方向和垂直于牙本质小管方向加载样本各5例.扫描电镜观察两组牙本质微观结构,并用位移法测量样本压缩力学特性,分析增龄性变化对牙本质微观结构及力学特性的影响.采用双因素方差分析进行统计学比较,检验水准为双侧α=0.05.结果 增龄组牙本质小管内沉积物明显增加,小管口直径变小,有的小管口被封闭,同时增龄性变化影响牙本质的力学性能.在弹性模量方面,青年组[(15.1±2.1)、(17.0±1.6)GPa]高于增龄组[(11.6±2.2)、(13.7±2.0)GPa],差异具有统计学意义(F=14.20,P=0.002),在不同加载方向上,平行加载组[(15.1±2.1)、(11.6±2.2)GPa]低于垂直加载组[(17.0±1.6)、(13.7±2.0)GPa],差异具有统计学意义(F=4.85,P=0.04);在弹性极限方面,青年组[(157±14)、(165±12)MPa]高于增龄组[(140±4)、(140±13)MPa],差异具有统计学意义(F=16.76,P=0.001).结论 增龄性变化影响着人牙本质的微观结构,同时牙本质压缩力学性能也随着增龄性变化而降低.

    作者:邹蕊;滕蕊;王译婕;董少杰;张辉;李晓红;牛林 刊期: 2017年第06期

  • iRoot BP Plus和MTA用于年轻恒牙直接盖髓的临床疗效观察

    目的 通过观察和对比深龋露髓的年轻恒牙应用iRoot BP Plus和矿物三氧化聚合体(MTA)直接盖髓的远期临床疗效,探讨iRoot BP Plus在年轻恒牙盖髓治疗上的优越性.方法 对7~15岁患者的30颗年轻、深龋露髓患牙(包括去腐露髓和意外露髓的年轻恒牙),随机分为iRoot BP Plus组和MTA组,每组各15颗,分别行iRoot BP Plus和MTA直接盖髓术,随访2组1年内的临床疗效(包括牙髓症状、牙髓活力、钙化桥的形成和根尖孔闭合),对比分析2组钙化桥形成率和直接盖髓成功率,百分率统计采用秩和检验,两者盖髓时间统计采用独立样本t检验.结果 术后1年,iRoot BP Plus组和MTA组治疗成功率分别为86.7%和80.0%,组间差异无统计学意义(χ2=0.240,P=0.624);而2组直接盖髓操作时间分别为(2.55±0.33)和(4.88±0.25)min,差异有统计学意义(t=-21.983,P<0.001);iRoot BP Plus组盖髓就诊次数少于MTA组,iRoot BP Plus组和MTA组术后随访3个月X线完整钙化桥形成率为80.0%和73.3%(χ2=0.186,P=0.666),6个月形成率分别为86.7%和80.0%(χ2=0.240,P=0.624),12个月形成率分别为86.7%和80.0%(χ2=0.240,P=0.624),组间差异均无统计学意义.iRoot BP Plus组患牙未见牙齿变色,MTA组患牙均观察到牙齿变色现象.结论 iRoot BP Plus直接盖髓的临床疗效与MTA相近,但iRoot BP Plus操作较为便利、就诊次数少且无牙齿变色现象,是临床上更为理想的直接盖髓剂.

    作者:黄伟曼;张栋杰;胡旭初;刘丽敏;谷海晶 刊期: 2017年第06期

中华口腔医学研究(电子版)杂志

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主管:中华人民共和国卫生和计划生育委员会

主办:中华医学会