陈惠华；谭晓刚；王妍；徐元基；杜芝燕；陆应麟
目的:构建具有高敏感性和高特异性的microRNA前体(pre-miRNA)识别模型.方法:根据300例经实验验证的人pre-miRNA和300例从3'UTR折成茎环结构的片段中随机选取的阴性样本,基于支持向量机方法构建了区分pre-miRNA和pseudo pre-miRNA的分类器MiRscreen.为提高分类器的性能,我们采用遗传算法搜索影响分类器性能的2个重要参数C和γ.结果与结论:该分类器对训练集的敏感性为99.33%,特异性为100%,对剩余的91例人pre-miRNA和91例3′UTR中的pseudo pre-miRNA敏感性和特异性分别达到91.21% (83/91) 和93.41% (85/91).在除人以外的其他20种动物和病毒的1 353例pre-miRNA中,MiRscreen正确判断出其中的1 192例,敏感性达到88.10%,其中马雷克病病毒、猕猴淋巴隐病毒、EB病毒、猿猴病毒40、非洲爪蟾、狗、绵羊和猕猴共计8个物种的敏感性达到100%;在随机抽取的100条RefSeq基因折叠形成的556例pseudo pre-miRNA和随机抽取的797例人19号染色体折叠形成的pseudo pre-miRNA(共计1 353例混合阴性样本)中,MiRscreen的特异性达到85.14%(1 152/1 353).与其他6种同类方法相比,MiRscreen在敏感性和特异性方面均具有较好的性能,分类精度高,达到86.62%,比其他方法高6%以上;MiRscreen的AUC值达到0.938,也明显高于其他方法.
作者：侯妍妍；李华；应晓敏；李伍举 刊期： 2008年第03期
电子顺磁共振(EPR)波谱技术是研究含有未成对电子物质的有力工具.本文阐述了氮氧自由基结合EPR技术在药代动力学方面的研究进展,特别是EPR用于直接或结合自旋标记技术、自旋捕集剂间接检测药物产生的氮氧自由基等方面.
作者：宋雪伟；程远国 刊期： 2008年第03期
目的:探讨携带肝细胞生长因子基因的减毒鼠伤寒沙门菌对TNBS诱发大鼠实验性结肠炎模型外周血T细胞亚群和免疫球蛋白的影响.方法:50只Wistar大鼠经TNBS灌肠诱发溃疡性结肠炎模型,并随机分为4组:Ty治疗组、Typl-HGF治疗组、Typl-GFP观察组、模型对照组,除模型对照组20只外,其余每组10只;另设生理盐水灌肠的正常对照组10只.造模后第3天各组灌胃进行治疗,依次给予1×109cfu的Ty、Typl-HGF、Typl-GFP菌液,每只0.5 ml,隔日1次,模型和正常对照组给予同体积的100 g/L NaHCO3.3次和6次灌胃后1周,各组分别采集全血,用流式细胞仪检测各组CD4+T、CD8+T 、IgM、IgG1、IgA水平;Typl-GFP组观察目的基因的组织表达.结果:灌胃3次和6次后模型对照组与正常对照组相比CD4+T细胞均无明显变化,但CD8+T 细胞下降明显(P<0.01),CD4+/CD8+ T比值明显升高(P<0.05);Typl-HGF组3次灌胃后CD4+T低于模型组(P<0.05),6次灌胃后CD4+T、CD4+/CD8+ T比值均明显低于模型对照组和Ty组(P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.05).灌胃3次和6次后模型对照组与正常对照组相比IgM、IgG1、IgA均明显增加(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01);灌胃3次和6次Ty组与同期模型对照组、Typl-HGF组相比IgM明显增加(P<0.01,P<0.01),而6次Typl-HGF组与模型对照组相比IgM、IgG1明显降低(P<0.05,P<0.05).在荧光显微镜下可观察到Typl-GFP菌液灌胃后在结肠组织GFP强表达.结论:大鼠实验性结肠炎发病过程中,机体免疫功能处于亢进状态,Typl-HGF能够抑制T细胞增殖和B淋巴细胞抗体的产生,它可能代表了一种新的药物用于治疗结肠炎疾病.
作者：哈小琴；刘登瑞；吕同德；高明太；白海；吴祖泽 刊期： 2008年第03期
目的:建立Schlafen2(Slfn2)基因稳定表达的细胞系以进一步研究其生物学功能.方法:构建pEGFP- Slfn2真核表达载体;瞬时转染pEGFP- Slfn2载体及其对照载体于NIH/3T3细胞,观察细胞中Slfn2基因的表达及分布;稳定转染pEGFP-Slfn2及其对照空载体于NIH/3T3细胞,G418筛选获得抵制的细胞株,用Northern印迹进一步鉴定Slfn2在各细胞株中的表达情况;利用细胞生长曲线和Transwell细胞侵袭实验检测Slfn2对细胞增殖及迁移能力的影响.结果:本研究获得了稳定表达Slfn2的细胞株,该基因表达的蛋白在细胞核及细胞浆均有分布;稳定表达该基因的细胞株的增殖及迁移能力均显著降低.结论:Slfn2基因可能是一个潜在的肿瘤抑制基因.
作者：刘梦伊；周乔丹；胡迎春；方玲；于雷；张煦；刘昕；潘兴斌；吴德昌；霍艳英 刊期： 2008年第03期
目的:构建含有亲和标记His-tag的DAB389 (Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,便于融合蛋白质的纯化.方法:利用含有His-tag序列、Factor Xa酶切识别序列、白喉毒素N端序列的基因作上游引物,含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2互补序列基因作下游引物,以pET28a/DAB389(Gly4Ser)2EGF为模板,PCR扩增目的基因片段,并插入到原核表达载体pET28a中,构建了重组表达载体pET28a/亲和标记DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,融合蛋白在BL21(λDE3)中以可溶形式表达,通过硫酸铵盐析、亲和层析纯化、脱盐、Factor Xa酶切得到重组蛋白纯品.结果:扩增的片段与理论值一致,序列分析正确;目的蛋白表达量约占菌体总蛋白量的30.6%;纯化得到纯度为94.36%的重组蛋白.结论:成功构建了含有His-tag的DAB389 (Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,减少了纯化步骤,为进一步研究重组毒素、简便纯化途径奠定基础.
作者：李泽鸿；张国利；岳玉环；朱平 刊期： 2008年第03期
目的:构建PTD-NGF融合基因,检测表达的重组蛋白生物学活性和跨膜转运功能.方法:提取小鼠大脑组织RNA逆转录后,钓取β-NGF基因.PCR技术构建PTD-NGF融合基因,插入表达质粒pBV220后,转化大肠杆菌DH5α进行表达与纯化.稀释法复性后,SDS-PAGE及Western印迹鉴定表达重组蛋白.PC12细胞分化培养检测融合蛋白的生物学活性.重组蛋白与HepG2细胞共孵育,免疫组化检测其跨膜功能.结果:PTD-NGF融合基因测序正确,表达产物与目的蛋白大小相符,能与NGF抗体发生结合反应.纯化后蛋白纯度可约达90%以上,重组蛋白经复性可诱导PC12细胞出现明显分化,并能跨膜进入HepG2细胞内部.结论:成功构建了融合基因,表达的重组蛋白具有显著的生物学活性及跨膜转运功能.
作者：李仁德；王园园；王金凤；蔡欣；邹民吉；刘中成；周磊磊；邢微微；龙民慧；王嘉玺；徐东刚 刊期： 2008年第03期
目的:构建猪链球菌2型89K毒力岛上的双组分信号转导系统(TCSTS)gene0906-0907的插入失活突变株,分析其活性,为进一步研究猪链球菌假想毒力因子在致病过程中的作用提供实验基础.方法:以猪链球菌2型05ZYH33基因组为模板,扩增gene0906-0907反应调节子gene0907内部的440 bp片段为同源臂,并克隆到自杀载体pSET4s上,构建出插入失活载体pSET4s-P0907,将pSET4S-P0907转化05ZYH33,筛选出质粒整合到染色体gene0907内部的插入失活突变株05ZY△0907,PCR方法验证突变体.对突变株和野生株的生物学特性和小鼠致病性进行了初步比较.结果与结论:成功构建了89K TCSTS gene0906-0907插入失活突变株05ZY△0907,突变株的生物学特性和对小鼠的致病性与野生株相比差异不显著.
作者：李文君；袁媛；郑玉玲；王恒樑；姜永强 刊期： 2008年第03期
肾血管性高血压(renal vascular hypertension,RVH)是由单侧或双侧肾动脉主干或分支狭窄所致,多发性大动脉炎、纤维肌性发育不良和动脉粥样硬化是其常见病因.当病变管腔直径下降至70%时,肾血流的下降导致肾脏严重缺血,继而引起难治性高血压.近年来,在我国,随着动脉粥样硬化患病率增加,动脉粥样硬化所致RVH 呈逐年增加趋势.我院2006年7月收治1例多发性大动脉炎引起双侧肾动脉狭窄(renal artery stenosis,RAS)伴严重RVH患者,采用自体肾移植术治疗,取得了良好疗效,现报道如下,并复习有关文献予以讨论.
作者：许元斌；陈立军；赵立；曲楠；孙震鹏 刊期： 2008年第03期
目的:探讨14-3-3ζ对肺癌细胞转移的抑制作用.方法:以人肺巨细胞癌低转移细胞株为模型,利用RNAi技术研究14-3-3ζ被干涉后肿瘤细胞恶性表型的变化,探讨14-3-3ζ与肿瘤转移的相关性.结果:本研究发现14-3-3ζ被干涉后细胞的集落形成能力明显提高,黏附能力明显降低,细胞迁移、侵袭能力明显提高.结论:14-3-3ζ可能抑制肺癌细胞的转移.
作者：陈惠华；谭晓刚；王妍；徐元基；杜芝燕；陆应麟 刊期： 2008年第03期
1 病例报告患者女性,45岁,发现左上臂肿物10年,术后局部复发伴疼痛、肿胀并进行性加重11个月,于2007年3月12日入我院.入院查体:左上臂下段外侧可见一长约20 cm的弧行手术疤痕,愈合良好,疤痕上方可触及一约10 cm×8.5 cm的肿物,质硬、固定、轻度压痛,局部皮温较高伴肿胀明显,沿手术疤痕中点测量上臂周径为31 cm,上方1 cm处周径为32 cm.左前臂近肘关节处轻度肿胀,疤痕下方可及一直径约3 cm的肿物,性质相同.左肘关节被动屈曲位,大伸展度为135°,活动显著受限.其他神经系统查体未见显著异常.局部超声及CT、MRI等检查均提示:左肘关节外上、下方富血供不规则占位.原手术病理切片经我院及解放军总医院会诊,均认为是神经纤维瘤.入院诊断结果:左上肢神经纤维瘤,术后复发.
作者：杨武威；李静；杨涛 刊期： 2008年第03期
目的:构建上游可以表达肿瘤抗原复合物,下游表达人GM-CSF和B7.1免疫协同增效分子的双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7.方法:通过搭桥PCR获得人GM-CSF和B7.1融合基因,插入已构建好的DNA疫苗载体pVAX1-IRES的下游,瞬时转染293T细胞,通过流式细胞术和间接免疫荧光检测融合基因的表达.此外,还在载体上游插入肿瘤抗原复合物,进一步验证该载体对肿瘤抗原的表达情况.结果:酶切鉴定和序列分析表明,GM/B7融合基因与设计完全一致,在体外细胞检测中获得表达,而且上游的抗原基因也可以顺利表达.结论:该载体的构建成功可以为肿瘤基因疫苗研制提供免疫增效载体.
作者：刘宁；阎瑾琦；冉多良；贾锐；张亮；王浩；于继云 刊期： 2008年第03期
目的:比较并探讨日本脑炎病毒Beijing-1株和登革2型病毒43株对宿主细胞内IFN-α介导的信号转导通路抑制作用的机制.方法:采用含萤火虫荧光素酶(Luciferase,Luc)报告基因的重组载体pISRE-Luc,通过检测IFN刺激应答元件(IFN-stimulated response element, ISRE)活性对病毒感染细胞内IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路的抑制作用进行定量分析.利用间接免疫荧光法观察在IFN-α作用下病毒感染细胞内STAT1分子的分布情况.进一步采用Western印迹分别检测在这两种病毒感染状态下宿主细胞内STAT1、JAK1和TYK2的磷酸化水平.结果:感染日本脑炎病毒和登革病毒的细胞在IFN-α作用下,ISRE活性与对照组相比均显著下降,而且日本脑炎病毒对宿主细胞内ISRE活性的抑制程度明显强于登革病毒;进一步研究发现,日本脑炎病毒可通过抑制JAK1和TYK2两种激酶的活性,降低STAT1的磷酸化水平,阻碍STAT1的核转运;而登革病毒则只抑制TYK2激酶的活化,降低STAT1的磷酸化及核转运水平.结论:日本脑炎病毒和登革病毒可通过不同的作用机制抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路.
作者：赵慧；邓永强；陈水平；姜涛；韩剑峰；秦成峰；秦鄂德 刊期： 2008年第03期
特需药品是军队执行军事行动以及其他国家安全行动中实施医学保障的重要物质基础之一,历来受到各个国家军队的重视.美军在长期的特需药品管理中,取得了许多宝贵的经验.本文通过整合分析美军与美国食品药物管理局(FDA)的特需药品协调政策,总结其取得的经验,发现其中存在的问题,并对我军与中国国家食品药品监督管理局(SFDA)的特需药品协调政策提出建议.
作者：高云华；刁天喜 刊期： 2008年第03期
目的:研究鞘氨醇激酶1(SPK1)在氧自由基诱导心肌细胞损伤过程中的作用.方法:分离培养Wistar乳大鼠心肌细胞,用不同浓度过氧化氢(H2O2,0, 50, 100, 200, 400 μmol/L)处理细胞,检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放和细胞SPK1酶活性变化;Northern 印迹方法分析SPK1催化产物1-磷酸鞘氨醇(S1P)受体的表达.用S1P预处理心肌细胞,然后加入100 μmol/L的H2O2继续作用48 h,检测细胞培养上清中LDH的活性;用携带人SPK1基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(Ad-SPK1)感染Wistar乳大鼠心肌细胞,然后加入100 μmol/L的H2O2继续作用48 h,检测细胞培养上清中LDH的活性.分析外源性S1P或SPK1高表达对H2O2诱导心肌细胞损伤的保护作用.结果:H2O2作用于心肌细胞后,导致LDH释放增多,SPK1酶活性抑制,其作用呈剂量依赖性;H2O2刺激使S1P受体Edg-1表达水平升高,Edg-3表达水平降低.外源性S1P预处理使H2O2诱导的LDH释放减少,其作用呈剂量依赖性.与对照组相比,Ad-SPK1感染使心肌细胞SPK1酶活性明显升高,细胞培养上清中S1P含量增多,并明显抑制H2O2诱导心肌细胞LDH的释放.结论:SPK1高表达能保护H2O2导致的心肌细胞死亡,这种保护作用主要通过S1P的释放来实现.Edg-1和Edg-3可能参与SPK1对心肌细胞的保护作用.
作者：张晋；王红；陆颖；王汉斌；段海峰；王立生 刊期： 2008年第03期
目的:探讨宫血宁活性成分--重楼总皂苷(TSSP)诱导大鼠离体子宫肌条收缩的机制,考察PLA2/AA信号途径与TSSP引起的大鼠离体子宫收缩的关系.方法:应用离体子宫张力测定法,观察不同PLA2/AA信号途径抑制剂对TSSP引起的大鼠离体子宫收缩作用的影响.结果:非特异性前列腺素合成酶抑制剂可明显抑制TSSP和米索前列醇引起的子宫收缩,提示二者可能存在相似机制.环氧酶1(COX-1)抑制剂SC560,环氧酶2(COX-2)抑制剂NS-398,EP受体抑制剂AH6809和脂氧酶(5-LO)抑制剂REV5901均可对TSSP缩宫作用产生明显抑制;磷脂酶A2(PLA2)抑制剂AACOCF3也可明显抑制TSSP的缩宫作用,提示PLA2/AA信号途径与TSSP的缩宫作用密切相关.结论:TSSP对大鼠子宫平滑肌收缩活动的调节与PLA2/AA信号途径的激活有关.
作者：苏佳；刘泽源；赵振虎；善亚君；马百平；从玉文 刊期： 2008年第03期
目的: 探讨肺纤维化过程中细胞因子的调控网络.方法: 应用荟萃分析筛选Wistar大鼠肺纤维化过程中肺组织的相关细胞因子.通过三次样条插值,采用线性微分方程模型进行网络调控的研究.结果: 参与肺纤维化形成的相关细胞因子为IFN-γ,IL-10,IL-13,IL-18, IL-4, IL-5,IL-6,IL-8,IGF-1, MCP-1, PDGF, TGF-β1, TNF-α, MMP-2, MMP-9, EGF.构建的调控通路中重要的细胞因子节点为IFN-γ,IL-10,IL-13,IL-18, IL-6,IGF-1, PDGF, TGF-β1,TNF-α.结论:肺纤维化细胞因子网络由关键的细胞因子组成,非关键节点的细胞因子可能因致纤维化作用较小或仅参与炎症作用而未参加网络的调控.
作者：高宏生；伍瑞昌；张双德；王世鑫 刊期： 2008年第03期
目的:分析急性肺损伤中IL-6与肺表面活性蛋白-A(surfactant protein A,SP-A)和SP-B的含量变化及其相互关系,探讨急性肺损伤的发病机制.方法:用Wistar大鼠复制油酸性急性肺损伤动物模型,在不同时间点收集急性肺损伤大鼠血清标本及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF),用放射免疫法测定血清细胞因子IL-6的动态变化;采用ELISA法检测BALF中SP-A、SP-B含量的变化.结果与结论:急性肺损伤后大鼠血清中细胞因子IL-6的分泌水平显著上升(P<0.05), 而BALF中SP-A、SP-B含量显著降低,且血清中IL-6含量升高与BALF中SP-A、SP-B下降幅度呈显著负相关.结果提示急性肺损伤中IL-6分泌的升高与肺表面活性蛋白SP-A、SP-B含量的降低有显著的相关关系,炎症细胞因子IL-6 可能通过影响SP-A、SP-B的表达产生致病作用.
作者：肖燕；崔社怀；沈渝菊；周沪明；文仲光 刊期： 2008年第03期
目的:建立表达SARS冠状病毒的功能性受体人ACE2的转基因小鼠.方法:克隆人2型血管紧张素转换酶(hACE2)的cDNA,连入PCAGGS构建转基因表达载体,以显微注射的方法将5.6 kb的转基因片段引入小鼠的受精卵.采用PCR、Southern印迹、RT-PCR、Western印迹、免疫荧光染色的方法对转基因小鼠进行鉴定.结果与结论:获得了在小鼠肺组织中表达有SARS病毒功能性受体hACE2的两个转基因小鼠系,证明了SARS病毒的S蛋白能很好地和转基因小鼠肺组织中表达的hACE2受体结合,这将为SARS的研究提供一种良好的感染动物模型.
作者：刘珠果；吴晓洁；周艳荣；杨晓；黄培堂；林福玉；陈红星 刊期： 2008年第03期
目的:验证原核表达的重组肿瘤相关抗原蛋白SUR-IM与肿瘤治疗性DNA疫苗pVAX1-2PFcGB能够通过静电耦合形成复合纳米颗粒.方法:通过蛋白-DNA琼脂糖凝胶电泳阻滞实验、DNaseⅠ消化核酸的保护实验及原子力显微镜观察验证二者是否结合;此外,通过体外瞬时转染293T细胞研究蛋白质所结合的质粒是否能够在体外顺利表达.结果:证实二者确实能够通过静电耦合形成纳米级的颗粒,结合后蛋白质对DNA具有一定的保护作用,并且蛋白不会影响与之结合的质粒在细胞中的高效表达.结论:该复合纳米颗粒将蛋白质和核酸组分有机结合在一起,使肿瘤抗原、免疫佐剂及DNA肿瘤疫苗协同发挥作用,为日后进行抗肿瘤功能研究奠定了重要基础.
作者：王浩；阎瑾琦；张飒；贾锐；张亮；刘宁；王宇；宋晓国；于继云 刊期： 2008年第03期
细胞的染色体DNA损伤监控和修复机制和染色体末端的端粒保护机制是维护基因组稳定性的两大重要机制.这两个进化上高度保守的细胞生物学机制既有不同的分工和调控机制,又存在极为密切的内在联系.由于端粒和细胞DDR调控的异常与人类衰老和癌症有密切联系,因此对端粒与DDR系统的相互作用及协同性的深入研究,将对解决这些人类重大医学问题有重要影响.本文对端粒与细胞DNA损伤反应系统相互作用的研究进展进行综述.
作者：张彬；黄培堂；黄翠芬；黄君健 刊期： 2008年第03期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
