李渝；郭华；韩莉；余慧侠
毒鼠强(tetramine, TEM)中毒发生率在近几年有逐年上升的趋势,一旦抢救不及时可因惊厥导致呼吸衰竭而死亡.由于其理化性质稳定,在机体内可长期积蓄,排泄较慢,如不在早期尽快将其清除,将可能损伤神经系统.血液灌流是借助体外循环,将血液引入装有固态吸附剂的容器中,以直接吸附清除血液中某些外源性或内源性的毒物,达到直接、快速净化血液,清除毒素的一种治疗方法.我们对 17 例毒鼠强中毒患者进行了50次血液灌流(hemoperfusion,HP),现介绍如下.
作者：杨红军；原新茹；邱泽武；张虹；陈芝；牛文凯；孙成文 刊期： 2004年第03期
目的:为了实现蚓激酶基因片段F-3,F-5在真核细胞COS-7中的表达,获得具有生物学活性的重组蚓激酶蛋白.方法:将F-3,F-5与分泌表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建重组表达质粒pcDNA-3和pcDNA-5,利用COS-7细胞进行基因F-3和F-5的瞬时表达;纤维蛋白平板法对培养液上清进行活性检测.结果:蚓激酶基因片段F-3,F-5在真核细胞COS-7 中实现了表达;SDS-PAGE显示蛋白质条带,纤维蛋白平板法检测培养液上清有明显的纤溶活性.结论:蚓激酶基因片段F-3,F-5可在真核细胞COS-7中分泌表达,表达产物具有一定的纤溶活性.
作者：曹承华；董国清；苑晓玲；善亚军；赵振虎；陈家佩；从玉文 刊期： 2004年第03期
RNA干扰是内源性或外源性双链RNA诱发的mRNA水平上的基因沉默机制,具有高度特异性.21 nt干扰性小RNA在哺乳动物细胞中可以诱导强有力的特异性RNAi作用,这一突破性研究进展开创了人类疾病治疗的新天地,RNAi技术用于人类疾病治疗已受到极大关注,尤其在AIDS、乙型肝炎和丙型肝炎等病毒感染性疾病和肿瘤治疗中的应用研究为活跃,并取得了令人鼓舞的成果.本文对siRNA的设计和制备的基本思路,及其在病毒性疾病和肿瘤治疗中的研究进展作一综述.
作者：李月敏；姜明红；钱其军；宋三泰 刊期： 2004年第03期
目的:构建arresten cDNA的分泌型真核表达载体,将其转染人胃癌SGC-7901细胞,探讨arresten体外抑制血管内皮细胞生长的活性.方法:利用PCR法将小鼠Ig κ链信号序列的60个碱基拼接至arresten cDNA的氨基端,并克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),然后以脂质体法将重组pcDNA3.1(+)-arresten转染SGC-7901细胞,Western印迹检测arresten的分泌表达,后,提取SGC-7901细胞培养上清,采用内皮细胞增殖抑制试验鉴定上清中arresten活性.结果:成功构建了arresten cDNA的分泌型真核表达载体,获得可表达arresten的SGC-7901细胞系,真核表达的arresten具有抑制血管内皮细胞增殖的活性.结论:arresten是一种有效的血管生成抑制剂,其cDNA的真核表达载体的成功构建为针对人类胃癌的arresten抗血管基因治疗研究奠定基础.
作者：卢灿荣；陈凛；林晨；吴世凯 刊期： 2004年第03期
目的:将肽库筛选到的正调控金黄色葡萄球菌(金葡菌)外毒素分泌的关键分子RAP(RNA Ⅲ activating protein)的结合肽与人IgG1抗体Fc片段(hFcγ1)融合表达,检测其干扰金葡菌外分泌毒素产生的活性.方法:根据噬菌体肽库筛选到的RAP结合肽序列,选用大肠杆菌偏爱的密码子合成基因片段,将其融合在人IgG1抗体Fc片段基因序列的5′端,构建pET-rapbp-fc融合表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达.以包涵体形式存在的目的蛋白经变性、复性后,ELISA实验分别证实其与抗人IgG抗体及纯化RAP的结合活性.以MDBK细胞株为模型,MTT实验观察融合蛋白对金葡菌196菌株外分泌毒素水平的影响.结果与结论:融合基因在大肠杆菌中获得表达.复性后,融合蛋白的Fc片段及结合肽部分分别能够与抗人IgG抗体及RAP结合,且能在一定程度上降低金葡菌196株上清中的毒素水平.
作者：李少华；杨光；李洁；丁红梅；柳川；沈倍奋；邵宁生 刊期： 2004年第03期
目的:制备一种高效T载体,并检测其克隆PCR产物的效率.方法:构建质粒pGH-T,它包含2个Xcm Ⅰ酶切位点,并在两位点间插入一段约600 bp的DNA序列.用Xcm Ⅰ彻底消化质粒pGH-T后,回收线性化大片段,即得T载体.利用此T载体克隆人端锚聚合酶(tankyrase)HPS结构域的PCR产物,并用限制酶切鉴定克隆的结果.结果:自制T载体可高效克隆PCR产物,其效率可达80%～100%.结论:自制T载体对PCR产物的克隆效率与商品完全相同,但使用方便且价格低廉.
作者：杨明；付汉江；江红；朱捷；罗瑛；郑晓飞 刊期： 2004年第03期
目的:研究不同浓度丙泊酚(异丙酚)对内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA表达的影响.方法:分离巯基乙酸盐诱导的小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为7组.A组:阴性对照组;B组:阳性对照组,脂多糖(LPS)10 ng/ml孵育细胞;C组:单用丙泊酚组,500 μg/ml孵育细胞;D,E,F,G组:丙泊酚+LPS组,不同浓度丙泊酚(0.5,5,50,500 μg/ml)孵育2 h后加入LPS 10 ng/ml继续孵育1～4 h.用RT-PCR法检测巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA的水平.结果:在内毒素诱导下,腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA的水平均显著增高;丙泊酚对LPS刺激后TNF-α,IL-6 mRNA表达水平的增高有抑制作用,并呈浓度依赖性;但对LPS刺激下IL-8 mRNA表达水平增高的影响无统计学意义.结论:丙泊酚能在转录水平抑制内毒素刺激下小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子的产生.
作者：武百山；刘占坡；王刚 刊期： 2004年第03期
目的:构建表达肠毒素大肠杆菌(ETEC)定居因子CS6的重组质粒,并在大肠杆菌DH5α中高效表达.方法:利用基因工程的方法,将含有CS6基因的质粒pMG233用限制性内切酶ClaⅠ酶切,得到长约3.1 kb的CS6片段(含有CS6结构基因及调控基因的DNA片段);并与用限制性内切酶ClaⅠ酶切的表达载体质粒pBV321连接,得到含有CS6片段的重组质粒pMG235,转化至大肠杆菌DH5α.结果:SDS-PAGE、Western印迹及免疫荧光观察的结果表明,重组菌DH5α/pMG235可高效表达相对分子质量为14 600的CS6抗原蛋白,并在重组菌表面表达,表达产物可被抗CS6多克隆抗体识别.结论:重组菌可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6.
作者：罗刚；杨晓；李淑琴；张兆山 刊期： 2004年第03期
目的:观察甾体皂苷化合物(化合物9714)对血栓形成、血小板聚集及血液流变学的影响.方法:采用动静脉旁路血栓形成模型,测定化合物9714对血栓形成的影响;采用比浊法,测定其对大鼠血小板聚集的影响;采用大鼠急性血淤模型,测定其对血液流变学的影响.结果:化合物9714 10,20,40 mg/kg组均能明显减轻血栓的干重及湿重;可抑制ADP、胶原诱导的大鼠血小板聚集;降低急性血淤大鼠的全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集性,以及增强红细胞变形性.结论:化合物9714通过抑制血小板聚集、改善血液流变学来发挥其抗血栓形成作用.
作者：邓云；马百平；徐秋萍；熊呈琦；张爱林；赵阳；吴彦 刊期： 2004年第03期
自从1994年Zhang首次克隆出肥胖基因(obese gene,ob基因)之后,有关ob基因的研究已有很多报道.本文着重对ob基因的结构与生理功能,缺氧时ob基因的诱导性表达调控,低氧与肥胖的关系作一综述.
作者：杨应忠；范文红；范明；格日力 刊期： 2004年第03期
目的:构建携带肝细胞生长因子(HGF)的逆转录病毒载体,并建立高效、稳定生产HGF的包装细胞株.方法:以pcDNA3.0-HGF质粒为模板进行PCR反应扩增出HGF基因全长序列,亚克隆至逆转录病毒载体pMSCVneo构建重组逆转录病毒质粒,以脂质体介导转染包装细胞PT67,经G418筛选,进而挑选抗性集落扩大培养后,用靶细胞NIH3T3测定病毒滴度,筛选出高效产毒细胞株.扩大培养后进行RT-PCR鉴定HGF mRNA的表达.扩大培养NIH3T3细胞抗性集落(NIH3T3/HGF),并用细胞培养上清进行人肝癌细胞系HepG2的扩散试验.结果:PCR反应扩增出2 200 bp的HGF基因,构建了重组逆转录病毒表达载体pMSCV-HGF,测序鉴定正确.经脂质体介导转染包装细胞、G418筛选和NIH3T3测定病毒滴度,筛选出具有高病毒滴度(8.8×107 cfu /ml)的细胞集落,扩大培养后建立高效表达HGF的包装细胞株PT/HGF,RT-PCR证实HGF基因在PT/HGF中有转录.NIH3T3/HGF培养上清可使HepG2细胞扩散,形态改变.结论:成功构建了携带HGF的逆转录病毒载体pMSCV-HGF,并建立了稳定、高效生产有活性的HGF的产毒细胞株PT/HGF.
作者：王韫芳；南雪；岳文；李艳华；闫舫；裴雪涛 刊期： 2004年第03期
目的:建立一种适合较大量微生物代谢物抑制K562细胞生长的体外筛选方法,筛选对K562细胞具有抑制作用,而对正常细胞Vero无明显抑制作用的土壤放线菌提取物.方法:放线菌培养液加入乙醇后,置于96孔板中,经过减压除去溶剂后,用MTT法检测各样品对K562及Vero细胞的抑制作用.结果与结论:从446种土壤放线菌提取物中筛选获得5种提取物对K562细胞具有明显的抑制作用,而对Vero细胞生长抑制作用较弱.
作者：胡艳红；张庆林；曹菊荣；龚萍；肖凤君；毕建进；王晓娜；王正平；吴祖泽 刊期： 2004年第03期
目的:分析不同类型原代白血病细胞IL-6R基因及IL-6R蛋白的表达情况.方法:采用RT-PCR方法对取自29例白血病患者的原代白血病细胞和8例健康人外周血单个核细胞的IL-6R基因表达情况进行了分析,并应用原位杂交技术和免疫组织化学方法对细胞表面的IL-6受体蛋白进行了检测.结果:20例急性髓细胞白血病均明显表达IL-6R mRNA;9例急性淋巴细胞白血病中有2例为阳性,其余7例为阴性;8例正常人PBMC中6例阴性,2例有弱表达.免疫组化和原位杂交结果与RT-PCR实验结果相一致.结论:IL-6R可作为急性髓系白血病免疫治疗的候选靶位点.
作者：朱宏丽；卢学春；范辉；辛宏；庄晓萌；姚善谦 刊期： 2004年第03期
目的:从能感染HCV的人肝癌细胞HepG2中克隆出人LDLR基因,构建其真核表达质粒,并在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中进行表达.方法:从HepG2中提取总RNA,采取逆转录PCR(RT-PCR)方法得到人LDLR的cDNA.将获得的人LDLR基因克隆到真核表达载体pcDNA3中,进行酶切和序列鉴定.将重组质粒pcDNA3-hLDLR和空载体转入Hepa1-6,G418筛选,并用RT-PCR和FACS检测人LDLR基因转录和蛋白的表达.结果:人LDLR的cDNA已插入载体pcDNA3构建成真核表达质粒pcDNA3-hLDLR,双酶切和测序表明,克隆的人LDLR与已登录GenBank的序列存在核苷酸多态性,但编码的氨基酸序列完全一致,该序列的GenBank登录号为gi|21629647|gb|AY114155.1,并且真核表达质粒的构建正确.用脂质体介导的方法转入Hepa1-6后,用RT-PCR和FACS检测表明,细胞可表达人LDLR.结论:成功地构建了真核表达质粒pcDNA3-hLDLR,为进一步研究HCV和人LDLR的相互作用,以及建立可能的HCV细胞感染模型奠定了基础.
作者：吕丽萍；贾帅争；王海平；詹林盛；王全立 刊期： 2004年第03期
目的:构建新型高效真核表达载体,实现人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低分子量尿激酶(Iin-UK)在CHO细胞中的高表达.方法:利用常规分子生物学方法,通过对neo基因的表达进行不同程度的弱化,构建了一系列新型真核表达载体,以Iin-UK融合基因为目的基因,比较这些真核表达载体实现外源基因高表达的能力,然后挑选高表达的克隆,通过MTX加压扩增,以提高Iin-UK融合基因的拷贝数及表达水平.结果与讨论:构建了5种新型真核表达载体,并筛选出优化的真核表达载体,通过MTX加压扩增,实现了Iin-UK融合基因在CHO细胞中的高表达,表达量达到10 μg/(106细胞·24h ).
作者：刘志刚；林建波；张国强；安怀杰；徐桂清；俞炜源 刊期： 2004年第03期
目的:探索含有BRCT结构域的P53分子结合蛋白53BP1调控P53转录活性的机制.方法:通过PCR的方法获得缺失不同结构域的53BP1基因突变体53BP1Δ1,53BP1Δ2,53BP1Δ3与53BP1Δ4,并采用双荧光素酶报告基因系统分析了它们对P53蛋白转录活性的影响.结果与结论:野生型53BP1蛋白可以明显提高P53的转录活性,其C端的BRCT结构域与核定位信号的存在为必不可少,而N端与P202蛋白相互结合结构域的存在也可以促进P53的转录活性,提示53BP1蛋白不同功能结构域之间的协同作用是保证其行使正常生理功能的前提条件.
作者：单冉东；梅柱中；宋宜；董燕；孙国敬；刘斌；田宝磊；张应玖；孙志贤 刊期： 2004年第03期
目的:选择并建立异种聚合血红蛋白抗原性检测方法,为评价异种聚合血红蛋白对人有无抗原性提供参考.方法:从速发型超敏反应、体液免疫反应、细胞免疫反应和抗原交叉反应检测聚合牛血红蛋白对异种动物的抗原性.结果:家兔及豚鼠未发生速发型超敏反应.多次免疫后,家兔血清中总IgG无明显变化,但特异性IgG水平显著升高.B淋巴细胞转化检测表明,B淋巴细胞增殖活性增强,但与对照组相比无显著差异(P＞0.05).聚合牛血红蛋白、人血红蛋白、兔血红蛋白抗原交叉反应结果显示,聚合牛血红蛋白与人血红蛋白存在抗原交叉反应,提示聚合牛血红蛋白与人血红蛋白在抗原结构上有同源性.结论:该聚合牛血红蛋白与人血红蛋白在抗原结构上有同源性,除用其免疫的实验组动物血清特异性抗体水平显著升高外,其他检测指标无显著变化.根据免疫学理论,无论某异物刺激机体产生何种免疫应答反应,都应视为该异物存在抗原性,因此提示该聚合血红蛋白存在抗原性.
作者：陈琳；张亚东；卜凤荣；章金刚 刊期： 2004年第03期
目的:研究SARS合并糖尿病死亡原因.方法:以我院2003年4～6月收治的SARS合并糖尿病的46例患者为研究对象,分为死亡组(A组)及治愈组(B组).比较两组的生化指标、血氧饱和度(SpO2)、胸片、多器官功能衰竭(MODS)、二重感染、激素用量、血常规以及CD3+,CD4+,CD8+T淋巴细胞计数等.结果:①A组丙氨酸转氨酶(ALT),尿素氮(BUN),血清肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)显著高于B组(P＜0.01).②A组SpO2＜95%,合并MODS,二重感染及糖皮质激素日均用量≥160 mg/d的例数均明显多于B组(P＜0.05).③A组血小板,淋巴细胞,CD3+,CD4+,CD8+T淋巴细胞计数显著低于B组(P分别＜0.01,0.05,0.001).结论:SARS合并糖尿病患者的死亡原因与肺损害、低氧血症、MODS、二重感染及激素用量密切相关.
作者：马雅辉；王力 刊期： 2004年第03期
目的:克隆人黑素瘤分化相关基因(melanoma differentiation associated gene,mda-7/IL-24),并在大肠杆菌中表达.方法:从PHA刺激培养的人外周血淋巴细胞提取总RNA,根据mda-7/IL-24基因序列设计引物,用PCR法扩增mda-7/IL-24基因.将mda-7/IL-24基因插入表达载体pET-28a(+)中,构建表达载体pET-28a-mda-7/IL-24,用IPTG诱导目的蛋白在E.coli中表达.通过Western印迹分析对表达产物进行鉴定.结果:经RT-PCR从人外周血分离的淋巴细胞中扩增到mda-7/IL-24 cDNA,序列分析与文献报道一致;SDS-PAGE分析表明,经0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导4 h后在E.coli中有大量mda-7/IL-24融合蛋白表达,相对分子质量约为28×103,融合蛋白约占诱导菌总蛋白的30%;Western印迹分析提示,诱导表达产物能与His单抗发生特异性反应.结论:从人外周血淋巴细胞中获得了mda-7/IL-24的全长cDNA,融合蛋白在E.coli中获得高效表达.
作者：马群风；江红；刘锟；朱捷；郑晓飞 刊期： 2004年第03期
目的:通过观察血清脂肪酶(LIPA)活性与甘油三酯(TG)的相关性,探讨正常人群不明原因血清LIPA活性升高的机制.方法:正常查体人群605例,分为A组(年龄＜30岁,n=50 ),B组(年龄为31～59岁,n=159)和C组(年龄＞60岁,n=396).清晨空腹静脉抽血.用美中互利Vitros 250全自动干化学分析仪测定血清LIPA活性,同时以Roche公司TG试剂盒,在日立7600全自动生化分析仪上测定血清TG浓度.结果:LIPA与TG在A组不具有相关性,在B组具有相关性(r=0.4959,y=79.13x+25.60),在C组也具有相关性(r=0.4179,y=51.39x+107.93).结论:中老年人群中,血清LIPA的升高与TG升高具有一定相关性,而青年组则未见此改变.
作者：尹俊青；赵莉萍；周和平；贾兴旺；田亚平；汪德清 刊期： 2004年第03期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
