杨红军；原新茹；邱泽武；张虹；陈芝；牛文凯；孙成文
目的:构建新型高效真核表达载体,实现人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低分子量尿激酶(Iin-UK)在CHO细胞中的高表达.方法:利用常规分子生物学方法,通过对neo基因的表达进行不同程度的弱化,构建了一系列新型真核表达载体,以Iin-UK融合基因为目的基因,比较这些真核表达载体实现外源基因高表达的能力,然后挑选高表达的克隆,通过MTX加压扩增,以提高Iin-UK融合基因的拷贝数及表达水平.结果与讨论:构建了5种新型真核表达载体,并筛选出优化的真核表达载体,通过MTX加压扩增,实现了Iin-UK融合基因在CHO细胞中的高表达,表达量达到10 μg/(106细胞·24h ).
作者：刘志刚；林建波；张国强；安怀杰；徐桂清；俞炜源 刊期： 2004年第03期
目的:建立产气肠杆菌(A)随机扩增多态性DNA(APD)技术基因分型谱.方法:以优化的反应体系和单一随机引物对临床分离的108株EA进行RAPD法基因分型并绘制基因分型图谱.结果:08株临床分离EA共得72种RAPD型.结论:APD技术可将临床分离的EA分为72型.
作者：叶明亮；肖鹏云；王全立 刊期： 2004年第03期
抗体在疾病诊断、治疗和预防方面发挥着举足轻重的作用.随着抗体工程技术的不断发展,抗体已经成为生物制药领域中的热点.而抗体工程发展所面临的两大难点问题之一就是如何提高基因工程抗体的亲和力.本文综述了有关基因工程抗体体外抗体亲和力成熟方面的新进展.
作者：林周；黎燕；沈倍奋 刊期： 2004年第03期
目的:探索含有BRCT结构域的P53分子结合蛋白53BP1调控P53转录活性的机制.方法:通过PCR的方法获得缺失不同结构域的53BP1基因突变体53BP1Δ1,53BP1Δ2,53BP1Δ3与53BP1Δ4,并采用双荧光素酶报告基因系统分析了它们对P53蛋白转录活性的影响.结果与结论:野生型53BP1蛋白可以明显提高P53的转录活性,其C端的BRCT结构域与核定位信号的存在为必不可少,而N端与P202蛋白相互结合结构域的存在也可以促进P53的转录活性,提示53BP1蛋白不同功能结构域之间的协同作用是保证其行使正常生理功能的前提条件.
作者：单冉东；梅柱中；宋宜；董燕；孙国敬；刘斌；田宝磊；张应玖；孙志贤 刊期： 2004年第03期
目的:对工程菌DH5α(pMG604)的批次补料培养和连续补料培养工艺进行研究.方法:通过摇瓶试验筛选适合重组人干细胞因子工程菌DH5α(pMG604)生长和产物表达的基础培养基,在此基础上进行了分批补料批培养和连续补料批培养的研究.结果:30 L发酵罐分批补料批培养,菌密度为11.9(D600),rhSCF表达水平为42%.5 L发酵罐连续补料批培养,终菌密度为148(D600),rhSCF表达水平为31%.
作者：吴军；巩新；唱韶红；赵志虎；马清钧 刊期： 2004年第03期
目的:克隆人黑素瘤分化相关基因(melanoma differentiation associated gene,mda-7/IL-24),并在大肠杆菌中表达.方法:从PHA刺激培养的人外周血淋巴细胞提取总RNA,根据mda-7/IL-24基因序列设计引物,用PCR法扩增mda-7/IL-24基因.将mda-7/IL-24基因插入表达载体pET-28a(+)中,构建表达载体pET-28a-mda-7/IL-24,用IPTG诱导目的蛋白在E.coli中表达.通过Western印迹分析对表达产物进行鉴定.结果:经RT-PCR从人外周血分离的淋巴细胞中扩增到mda-7/IL-24 cDNA,序列分析与文献报道一致;SDS-PAGE分析表明,经0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导4 h后在E.coli中有大量mda-7/IL-24融合蛋白表达,相对分子质量约为28×103,融合蛋白约占诱导菌总蛋白的30%;Western印迹分析提示,诱导表达产物能与His单抗发生特异性反应.结论:从人外周血淋巴细胞中获得了mda-7/IL-24的全长cDNA,融合蛋白在E.coli中获得高效表达.
作者：马群风；江红；刘锟；朱捷；郑晓飞 刊期： 2004年第03期
目的:讨论甲状腺肢端病(TA)的影像学表现及诊断,以提高对该病的认识.方法:复习1例典型甲状腺肢端病的临床及X线表现.结果:X线片示双侧掌骨、指骨、跖骨、尺桡骨及胫腓骨呈特征性TA骨膜反应.患者有清楚的甲状腺功能亢进病史及治疗史,有眼球突出和胫前黏液水肿,ECT检查符合甲状腺功能亢进表现.结论:甲状腺肢端病是一种罕见的自身免疫性甲状腺疾病,需与肥大性骨关节病相鉴别.
作者：陆虹；王艳萍；施清宇；李凤雏；李功杰；任拴群 刊期： 2004年第03期
目的:制备一种高效T载体,并检测其克隆PCR产物的效率.方法:构建质粒pGH-T,它包含2个Xcm Ⅰ酶切位点,并在两位点间插入一段约600 bp的DNA序列.用Xcm Ⅰ彻底消化质粒pGH-T后,回收线性化大片段,即得T载体.利用此T载体克隆人端锚聚合酶(tankyrase)HPS结构域的PCR产物,并用限制酶切鉴定克隆的结果.结果:自制T载体可高效克隆PCR产物,其效率可达80%～100%.结论:自制T载体对PCR产物的克隆效率与商品完全相同,但使用方便且价格低廉.
作者：杨明；付汉江；江红；朱捷；罗瑛；郑晓飞 刊期： 2004年第03期
尽管2003年上半年全球爆发的严重急性呼吸综合征(SARS)经世界卫生组织证实为一种SARS-冠状病毒(SARS-CorV)引起,但临床的一些证据表明还不能排除有其他微生物的作用.2003年3月,我们从北京第一例SARS患者A及其母亲的痰漱液和咽拭子标本中分别分离出BYD1和BLD1两株呼肠病毒(reovirus, ReoV)[1],随后又从患者A的父亲(死于SARS)的尸检脾组织样本中同时分离出SARS-CorV和ReoV.更有意义的是,在电镜下于同一个细胞中观察到这两种病毒,即ReoV和SARS-CorV,表明SARS-CorV和ReoV存在着共感染的可能[1] .由于ReoV与肺部感染密切相关,动物模型实验表明可引起动物病毒性肺炎和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)[2,3],我们也初步建立了ReoV BYD1株感染食蟹猴的实验动物模型[4].为观察从SARS患者标本中分离的ReoV 对豚鼠的致病性以及与SARS的关系,本研究分别以ReoV BYD1株、SARS-CorV BJF株单独感染豚鼠,以及两种病毒混合感染豚鼠,观察豚鼠的临床体征和相关器官组织的病理学变化,期望揭示新分离的ReoV致病机制及其在SARS中所起的作用.
作者：朱虹；何君；何诚；甘永华；黄如统；端青 刊期： 2004年第03期
目的:观察甾体皂苷化合物(化合物9714)对血栓形成、血小板聚集及血液流变学的影响.方法:采用动静脉旁路血栓形成模型,测定化合物9714对血栓形成的影响;采用比浊法,测定其对大鼠血小板聚集的影响;采用大鼠急性血淤模型,测定其对血液流变学的影响.结果:化合物9714 10,20,40 mg/kg组均能明显减轻血栓的干重及湿重;可抑制ADP、胶原诱导的大鼠血小板聚集;降低急性血淤大鼠的全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集性,以及增强红细胞变形性.结论:化合物9714通过抑制血小板聚集、改善血液流变学来发挥其抗血栓形成作用.
作者：邓云；马百平；徐秋萍；熊呈琦；张爱林；赵阳；吴彦 刊期： 2004年第03期
目的:筛选无毒棉籽水提物有效部位(CTN)中抗抑郁活性成分.方法:提取大脑皮质突触膜,以CTN或其中5个黄酮类单体成分(分别为CTN-4,CTN-7,CTN-8,CTN-9和CTN-10)与突触膜共孵,放射免疫法测定腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC)活性.结果:与阳性药丁螺环酮(5-HT1A受体部分激动剂)类似,CTN及CTN-4,7,8,9,10均可剂量依赖性激活突触膜AC,其中CTN-8在5个黄酮类单体中活性强.结论:黄酮类化合物槲皮素-3-O-芹菜糖基芦丁糖苷(即CTN-8)可能是CTN中强的抗抑郁活性成分之一,并且可能是5-HT1A受体激动剂.
作者：李云峰；刘艳芹；杨明；王恒林；赵毅民；罗质璞 刊期： 2004年第03期
目的:构建arresten cDNA的分泌型真核表达载体,将其转染人胃癌SGC-7901细胞,探讨arresten体外抑制血管内皮细胞生长的活性.方法:利用PCR法将小鼠Ig κ链信号序列的60个碱基拼接至arresten cDNA的氨基端,并克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),然后以脂质体法将重组pcDNA3.1(+)-arresten转染SGC-7901细胞,Western印迹检测arresten的分泌表达,后,提取SGC-7901细胞培养上清,采用内皮细胞增殖抑制试验鉴定上清中arresten活性.结果:成功构建了arresten cDNA的分泌型真核表达载体,获得可表达arresten的SGC-7901细胞系,真核表达的arresten具有抑制血管内皮细胞增殖的活性.结论:arresten是一种有效的血管生成抑制剂,其cDNA的真核表达载体的成功构建为针对人类胃癌的arresten抗血管基因治疗研究奠定基础.
作者：卢灿荣；陈凛；林晨；吴世凯 刊期： 2004年第03期
目的:研究不同浓度丙泊酚(异丙酚)对内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA表达的影响.方法:分离巯基乙酸盐诱导的小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为7组.A组:阴性对照组;B组:阳性对照组,脂多糖(LPS)10 ng/ml孵育细胞;C组:单用丙泊酚组,500 μg/ml孵育细胞;D,E,F,G组:丙泊酚+LPS组,不同浓度丙泊酚(0.5,5,50,500 μg/ml)孵育2 h后加入LPS 10 ng/ml继续孵育1～4 h.用RT-PCR法检测巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA的水平.结果:在内毒素诱导下,腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA的水平均显著增高;丙泊酚对LPS刺激后TNF-α,IL-6 mRNA表达水平的增高有抑制作用,并呈浓度依赖性;但对LPS刺激下IL-8 mRNA表达水平增高的影响无统计学意义.结论:丙泊酚能在转录水平抑制内毒素刺激下小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子的产生.
作者：武百山；刘占坡；王刚 刊期： 2004年第03期
目的:选择并建立异种聚合血红蛋白抗原性检测方法,为评价异种聚合血红蛋白对人有无抗原性提供参考.方法:从速发型超敏反应、体液免疫反应、细胞免疫反应和抗原交叉反应检测聚合牛血红蛋白对异种动物的抗原性.结果:家兔及豚鼠未发生速发型超敏反应.多次免疫后,家兔血清中总IgG无明显变化,但特异性IgG水平显著升高.B淋巴细胞转化检测表明,B淋巴细胞增殖活性增强,但与对照组相比无显著差异(P＞0.05).聚合牛血红蛋白、人血红蛋白、兔血红蛋白抗原交叉反应结果显示,聚合牛血红蛋白与人血红蛋白存在抗原交叉反应,提示聚合牛血红蛋白与人血红蛋白在抗原结构上有同源性.结论:该聚合牛血红蛋白与人血红蛋白在抗原结构上有同源性,除用其免疫的实验组动物血清特异性抗体水平显著升高外,其他检测指标无显著变化.根据免疫学理论,无论某异物刺激机体产生何种免疫应答反应,都应视为该异物存在抗原性,因此提示该聚合血红蛋白存在抗原性.
作者：陈琳；张亚东；卜凤荣；章金刚 刊期： 2004年第03期
毒鼠强(tetramine, TEM)中毒发生率在近几年有逐年上升的趋势,一旦抢救不及时可因惊厥导致呼吸衰竭而死亡.由于其理化性质稳定,在机体内可长期积蓄,排泄较慢,如不在早期尽快将其清除,将可能损伤神经系统.血液灌流是借助体外循环,将血液引入装有固态吸附剂的容器中,以直接吸附清除血液中某些外源性或内源性的毒物,达到直接、快速净化血液,清除毒素的一种治疗方法.我们对 17 例毒鼠强中毒患者进行了50次血液灌流(hemoperfusion,HP),现介绍如下.
作者：杨红军；原新茹；邱泽武；张虹；陈芝；牛文凯；孙成文 刊期： 2004年第03期
目的:建立一种适合较大量微生物代谢物抑制K562细胞生长的体外筛选方法,筛选对K562细胞具有抑制作用,而对正常细胞Vero无明显抑制作用的土壤放线菌提取物.方法:放线菌培养液加入乙醇后,置于96孔板中,经过减压除去溶剂后,用MTT法检测各样品对K562及Vero细胞的抑制作用.结果与结论:从446种土壤放线菌提取物中筛选获得5种提取物对K562细胞具有明显的抑制作用,而对Vero细胞生长抑制作用较弱.
作者：胡艳红；张庆林；曹菊荣；龚萍；肖凤君；毕建进；王晓娜；王正平；吴祖泽 刊期： 2004年第03期
RNA干扰是内源性或外源性双链RNA诱发的mRNA水平上的基因沉默机制,具有高度特异性.21 nt干扰性小RNA在哺乳动物细胞中可以诱导强有力的特异性RNAi作用,这一突破性研究进展开创了人类疾病治疗的新天地,RNAi技术用于人类疾病治疗已受到极大关注,尤其在AIDS、乙型肝炎和丙型肝炎等病毒感染性疾病和肿瘤治疗中的应用研究为活跃,并取得了令人鼓舞的成果.本文对siRNA的设计和制备的基本思路,及其在病毒性疾病和肿瘤治疗中的研究进展作一综述.
作者：李月敏；姜明红；钱其军；宋三泰 刊期： 2004年第03期
基于基因组的疫苗研发途径被称为逆向疫苗学,它不仅省时、经济,而且可为传统方法难于或根本无法开展的疫苗研究提供新的解决方法.逆向疫苗学的研究过程始于硅片,用计算机预测疫苗的所有抗原,不依赖于抗原是否丰富,也不需要微生物是否能够体外培养.本文介绍逆向疫苗学的概况,特别是近年来在研制某些病原菌新疫苗方面的进展.
作者：张兆山 刊期： 2004年第03期
目的:从能感染HCV的人肝癌细胞HepG2中克隆出人LDLR基因,构建其真核表达质粒,并在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中进行表达.方法:从HepG2中提取总RNA,采取逆转录PCR(RT-PCR)方法得到人LDLR的cDNA.将获得的人LDLR基因克隆到真核表达载体pcDNA3中,进行酶切和序列鉴定.将重组质粒pcDNA3-hLDLR和空载体转入Hepa1-6,G418筛选,并用RT-PCR和FACS检测人LDLR基因转录和蛋白的表达.结果:人LDLR的cDNA已插入载体pcDNA3构建成真核表达质粒pcDNA3-hLDLR,双酶切和测序表明,克隆的人LDLR与已登录GenBank的序列存在核苷酸多态性,但编码的氨基酸序列完全一致,该序列的GenBank登录号为gi|21629647|gb|AY114155.1,并且真核表达质粒的构建正确.用脂质体介导的方法转入Hepa1-6后,用RT-PCR和FACS检测表明,细胞可表达人LDLR.结论:成功地构建了真核表达质粒pcDNA3-hLDLR,为进一步研究HCV和人LDLR的相互作用,以及建立可能的HCV细胞感染模型奠定了基础.
作者：吕丽萍；贾帅争；王海平；詹林盛；王全立 刊期： 2004年第03期
近4年来,我科用复方倍他米松注射液(得宝松)皮损内注射治疗瘢痕疙瘩、结节性痒疹、限局性顽固性斑秃,取得了较满意的临床疗效,现将结果报道如下.
作者：李渝；郭华；韩莉；余慧侠 刊期： 2004年第03期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
