林周；黎燕；沈倍奋
目的:探索含有BRCT结构域的P53分子结合蛋白53BP1调控P53转录活性的机制.方法:通过PCR的方法获得缺失不同结构域的53BP1基因突变体53BP1Δ1,53BP1Δ2,53BP1Δ3与53BP1Δ4,并采用双荧光素酶报告基因系统分析了它们对P53蛋白转录活性的影响.结果与结论:野生型53BP1蛋白可以明显提高P53的转录活性,其C端的BRCT结构域与核定位信号的存在为必不可少,而N端与P202蛋白相互结合结构域的存在也可以促进P53的转录活性,提示53BP1蛋白不同功能结构域之间的协同作用是保证其行使正常生理功能的前提条件.
作者：单冉东；梅柱中；宋宜；董燕；孙国敬；刘斌；田宝磊；张应玖；孙志贤 刊期： 2004年第03期
目的:表达具有中和活性的抗基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体.方法:用RT-PCR法克隆具有中和活性的抗基孔肯亚病毒鼠源单克隆抗体CHIK-IF1的轻重链可变区基因,克隆人IgG1恒定区基因组基因,构建了轻重链嵌合基因和表达质粒pCdhfr1L,pcDNA3.1H,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞,用ELISA检测培养上清中嵌合抗体的表达,MTX加压筛选表达量高的克隆,扩大培养收集上清并纯化,纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western 印迹检测和抗原结合活性的检测.结果与结论:在CHO细胞中成功表达了抗基孔肯亚病毒的嵌合抗体,为制备抗基孔肯亚病的被动免疫制剂奠定了良好的基础.
作者：李建民；陈薇；安小平；樊英茹；郝晓萌；李冰；陈万荣；刘树玲；童贻刚 刊期： 2004年第03期
目的:将肽库筛选到的正调控金黄色葡萄球菌(金葡菌)外毒素分泌的关键分子RAP(RNA Ⅲ activating protein)的结合肽与人IgG1抗体Fc片段(hFcγ1)融合表达,检测其干扰金葡菌外分泌毒素产生的活性.方法:根据噬菌体肽库筛选到的RAP结合肽序列,选用大肠杆菌偏爱的密码子合成基因片段,将其融合在人IgG1抗体Fc片段基因序列的5′端,构建pET-rapbp-fc融合表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达.以包涵体形式存在的目的蛋白经变性、复性后,ELISA实验分别证实其与抗人IgG抗体及纯化RAP的结合活性.以MDBK细胞株为模型,MTT实验观察融合蛋白对金葡菌196菌株外分泌毒素水平的影响.结果与结论:融合基因在大肠杆菌中获得表达.复性后,融合蛋白的Fc片段及结合肽部分分别能够与抗人IgG抗体及RAP结合,且能在一定程度上降低金葡菌196株上清中的毒素水平.
作者：李少华；杨光；李洁；丁红梅；柳川；沈倍奋；邵宁生 刊期： 2004年第03期
近4年来,我科用复方倍他米松注射液(得宝松)皮损内注射治疗瘢痕疙瘩、结节性痒疹、限局性顽固性斑秃,取得了较满意的临床疗效,现将结果报道如下.
作者：李渝；郭华；韩莉；余慧侠 刊期： 2004年第03期
目的:研究不同浓度丙泊酚(异丙酚)对内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA表达的影响.方法:分离巯基乙酸盐诱导的小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为7组.A组:阴性对照组;B组:阳性对照组,脂多糖(LPS)10 ng/ml孵育细胞;C组:单用丙泊酚组,500 μg/ml孵育细胞;D,E,F,G组:丙泊酚+LPS组,不同浓度丙泊酚(0.5,5,50,500 μg/ml)孵育2 h后加入LPS 10 ng/ml继续孵育1～4 h.用RT-PCR法检测巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA的水平.结果:在内毒素诱导下,腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA的水平均显著增高;丙泊酚对LPS刺激后TNF-α,IL-6 mRNA表达水平的增高有抑制作用,并呈浓度依赖性;但对LPS刺激下IL-8 mRNA表达水平增高的影响无统计学意义.结论:丙泊酚能在转录水平抑制内毒素刺激下小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子的产生.
作者：武百山；刘占坡；王刚 刊期： 2004年第03期
目的:建立简便、灵敏的测定血浆儿茶酚胺的方法.方法:利用离子对萃取法提取血浆中的儿茶酚胺,用高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD)进行检测,测定其回收率、线性范围、精密度及低检测限,并测定和比较了大鼠和小鼠血浆中儿茶酚胺浓度.结果:肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)的加样回收率分别为(103.2±4.9)%,(106.1±6.3)%和(101.1±9.0)%.日内和日间精密度分别小于14.4%和11.6%.该方法测定E和NE在0.5～16 ng范围内,DA在0.25～8 ng范围内含量与峰高比之间呈良好的线性关系,相关系数为0.9980～0.9999,低检测限分别为:E 0.25 ng,NE 0.30 ng,DA 0.20 ng.大鼠血浆中E浓度明显高于小鼠,NE和DA浓度无明显差异.结论:本法用于检测血浆中儿茶酚胺水平具有简便、灵敏、快速、准确的特点,适合于小动物血浆中儿茶酚胺浓度的测定.
作者：陆春苓；周文霞；程军平；张永祥 刊期： 2004年第03期
目的:观察甾体皂苷化合物(化合物9714)对血栓形成、血小板聚集及血液流变学的影响.方法:采用动静脉旁路血栓形成模型,测定化合物9714对血栓形成的影响;采用比浊法,测定其对大鼠血小板聚集的影响;采用大鼠急性血淤模型,测定其对血液流变学的影响.结果:化合物9714 10,20,40 mg/kg组均能明显减轻血栓的干重及湿重;可抑制ADP、胶原诱导的大鼠血小板聚集;降低急性血淤大鼠的全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集性,以及增强红细胞变形性.结论:化合物9714通过抑制血小板聚集、改善血液流变学来发挥其抗血栓形成作用.
作者：邓云；马百平；徐秋萍；熊呈琦；张爱林；赵阳；吴彦 刊期： 2004年第03期
目的:建立产气肠杆菌(A)随机扩增多态性DNA(APD)技术基因分型谱.方法:以优化的反应体系和单一随机引物对临床分离的108株EA进行RAPD法基因分型并绘制基因分型图谱.结果:08株临床分离EA共得72种RAPD型.结论:APD技术可将临床分离的EA分为72型.
作者：叶明亮；肖鹏云；王全立 刊期： 2004年第03期
目的:通过观察血清脂肪酶(LIPA)活性与甘油三酯(TG)的相关性,探讨正常人群不明原因血清LIPA活性升高的机制.方法:正常查体人群605例,分为A组(年龄＜30岁,n=50 ),B组(年龄为31～59岁,n=159)和C组(年龄＞60岁,n=396).清晨空腹静脉抽血.用美中互利Vitros 250全自动干化学分析仪测定血清LIPA活性,同时以Roche公司TG试剂盒,在日立7600全自动生化分析仪上测定血清TG浓度.结果:LIPA与TG在A组不具有相关性,在B组具有相关性(r=0.4959,y=79.13x+25.60),在C组也具有相关性(r=0.4179,y=51.39x+107.93).结论:中老年人群中,血清LIPA的升高与TG升高具有一定相关性,而青年组则未见此改变.
作者：尹俊青；赵莉萍；周和平；贾兴旺；田亚平；汪德清 刊期： 2004年第03期
抗体在疾病诊断、治疗和预防方面发挥着举足轻重的作用.随着抗体工程技术的不断发展,抗体已经成为生物制药领域中的热点.而抗体工程发展所面临的两大难点问题之一就是如何提高基因工程抗体的亲和力.本文综述了有关基因工程抗体体外抗体亲和力成熟方面的新进展.
作者：林周；黎燕；沈倍奋 刊期： 2004年第03期
目的:为了实现蚓激酶基因片段F-3,F-5在真核细胞COS-7中的表达,获得具有生物学活性的重组蚓激酶蛋白.方法:将F-3,F-5与分泌表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建重组表达质粒pcDNA-3和pcDNA-5,利用COS-7细胞进行基因F-3和F-5的瞬时表达;纤维蛋白平板法对培养液上清进行活性检测.结果:蚓激酶基因片段F-3,F-5在真核细胞COS-7 中实现了表达;SDS-PAGE显示蛋白质条带,纤维蛋白平板法检测培养液上清有明显的纤溶活性.结论:蚓激酶基因片段F-3,F-5可在真核细胞COS-7中分泌表达,表达产物具有一定的纤溶活性.
作者：曹承华；董国清；苑晓玲；善亚军；赵振虎；陈家佩；从玉文 刊期： 2004年第03期
尽管2003年上半年全球爆发的严重急性呼吸综合征(SARS)经世界卫生组织证实为一种SARS-冠状病毒(SARS-CorV)引起,但临床的一些证据表明还不能排除有其他微生物的作用.2003年3月,我们从北京第一例SARS患者A及其母亲的痰漱液和咽拭子标本中分别分离出BYD1和BLD1两株呼肠病毒(reovirus, ReoV)[1],随后又从患者A的父亲(死于SARS)的尸检脾组织样本中同时分离出SARS-CorV和ReoV.更有意义的是,在电镜下于同一个细胞中观察到这两种病毒,即ReoV和SARS-CorV,表明SARS-CorV和ReoV存在着共感染的可能[1] .由于ReoV与肺部感染密切相关,动物模型实验表明可引起动物病毒性肺炎和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)[2,3],我们也初步建立了ReoV BYD1株感染食蟹猴的实验动物模型[4].为观察从SARS患者标本中分离的ReoV 对豚鼠的致病性以及与SARS的关系,本研究分别以ReoV BYD1株、SARS-CorV BJF株单独感染豚鼠,以及两种病毒混合感染豚鼠,观察豚鼠的临床体征和相关器官组织的病理学变化,期望揭示新分离的ReoV致病机制及其在SARS中所起的作用.
作者：朱虹；何君；何诚；甘永华；黄如统；端青 刊期： 2004年第03期
自从1994年Zhang首次克隆出肥胖基因(obese gene,ob基因)之后,有关ob基因的研究已有很多报道.本文着重对ob基因的结构与生理功能,缺氧时ob基因的诱导性表达调控,低氧与肥胖的关系作一综述.
作者：杨应忠；范文红；范明；格日力 刊期： 2004年第03期
目的:分析不同类型原代白血病细胞IL-6R基因及IL-6R蛋白的表达情况.方法:采用RT-PCR方法对取自29例白血病患者的原代白血病细胞和8例健康人外周血单个核细胞的IL-6R基因表达情况进行了分析,并应用原位杂交技术和免疫组织化学方法对细胞表面的IL-6受体蛋白进行了检测.结果:20例急性髓细胞白血病均明显表达IL-6R mRNA;9例急性淋巴细胞白血病中有2例为阳性,其余7例为阴性;8例正常人PBMC中6例阴性,2例有弱表达.免疫组化和原位杂交结果与RT-PCR实验结果相一致.结论:IL-6R可作为急性髓系白血病免疫治疗的候选靶位点.
作者：朱宏丽；卢学春；范辉；辛宏；庄晓萌；姚善谦 刊期： 2004年第03期
基于基因组的疫苗研发途径被称为逆向疫苗学,它不仅省时、经济,而且可为传统方法难于或根本无法开展的疫苗研究提供新的解决方法.逆向疫苗学的研究过程始于硅片,用计算机预测疫苗的所有抗原,不依赖于抗原是否丰富,也不需要微生物是否能够体外培养.本文介绍逆向疫苗学的概况,特别是近年来在研制某些病原菌新疫苗方面的进展.
作者：张兆山 刊期： 2004年第03期
目的:构建新型高效真核表达载体,实现人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低分子量尿激酶(Iin-UK)在CHO细胞中的高表达.方法:利用常规分子生物学方法,通过对neo基因的表达进行不同程度的弱化,构建了一系列新型真核表达载体,以Iin-UK融合基因为目的基因,比较这些真核表达载体实现外源基因高表达的能力,然后挑选高表达的克隆,通过MTX加压扩增,以提高Iin-UK融合基因的拷贝数及表达水平.结果与讨论:构建了5种新型真核表达载体,并筛选出优化的真核表达载体,通过MTX加压扩增,实现了Iin-UK融合基因在CHO细胞中的高表达,表达量达到10 μg/(106细胞·24h ).
作者：刘志刚；林建波；张国强；安怀杰；徐桂清；俞炜源 刊期： 2004年第03期
目的:研究SARS合并糖尿病死亡原因.方法:以我院2003年4～6月收治的SARS合并糖尿病的46例患者为研究对象,分为死亡组(A组)及治愈组(B组).比较两组的生化指标、血氧饱和度(SpO2)、胸片、多器官功能衰竭(MODS)、二重感染、激素用量、血常规以及CD3+,CD4+,CD8+T淋巴细胞计数等.结果:①A组丙氨酸转氨酶(ALT),尿素氮(BUN),血清肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)显著高于B组(P＜0.01).②A组SpO2＜95%,合并MODS,二重感染及糖皮质激素日均用量≥160 mg/d的例数均明显多于B组(P＜0.05).③A组血小板,淋巴细胞,CD3+,CD4+,CD8+T淋巴细胞计数显著低于B组(P分别＜0.01,0.05,0.001).结论:SARS合并糖尿病患者的死亡原因与肺损害、低氧血症、MODS、二重感染及激素用量密切相关.
作者：马雅辉；王力 刊期： 2004年第03期
目的:制备一种高效T载体,并检测其克隆PCR产物的效率.方法:构建质粒pGH-T,它包含2个Xcm Ⅰ酶切位点,并在两位点间插入一段约600 bp的DNA序列.用Xcm Ⅰ彻底消化质粒pGH-T后,回收线性化大片段,即得T载体.利用此T载体克隆人端锚聚合酶(tankyrase)HPS结构域的PCR产物,并用限制酶切鉴定克隆的结果.结果:自制T载体可高效克隆PCR产物,其效率可达80%～100%.结论:自制T载体对PCR产物的克隆效率与商品完全相同,但使用方便且价格低廉.
作者：杨明；付汉江；江红；朱捷；罗瑛；郑晓飞 刊期： 2004年第03期
目的:构建携带肝细胞生长因子(HGF)的逆转录病毒载体,并建立高效、稳定生产HGF的包装细胞株.方法:以pcDNA3.0-HGF质粒为模板进行PCR反应扩增出HGF基因全长序列,亚克隆至逆转录病毒载体pMSCVneo构建重组逆转录病毒质粒,以脂质体介导转染包装细胞PT67,经G418筛选,进而挑选抗性集落扩大培养后,用靶细胞NIH3T3测定病毒滴度,筛选出高效产毒细胞株.扩大培养后进行RT-PCR鉴定HGF mRNA的表达.扩大培养NIH3T3细胞抗性集落(NIH3T3/HGF),并用细胞培养上清进行人肝癌细胞系HepG2的扩散试验.结果:PCR反应扩增出2 200 bp的HGF基因,构建了重组逆转录病毒表达载体pMSCV-HGF,测序鉴定正确.经脂质体介导转染包装细胞、G418筛选和NIH3T3测定病毒滴度,筛选出具有高病毒滴度(8.8×107 cfu /ml)的细胞集落,扩大培养后建立高效表达HGF的包装细胞株PT/HGF,RT-PCR证实HGF基因在PT/HGF中有转录.NIH3T3/HGF培养上清可使HepG2细胞扩散,形态改变.结论:成功构建了携带HGF的逆转录病毒载体pMSCV-HGF,并建立了稳定、高效生产有活性的HGF的产毒细胞株PT/HGF.
作者：王韫芳；南雪；岳文；李艳华；闫舫；裴雪涛 刊期： 2004年第03期
目的:讨论甲状腺肢端病(TA)的影像学表现及诊断,以提高对该病的认识.方法:复习1例典型甲状腺肢端病的临床及X线表现.结果:X线片示双侧掌骨、指骨、跖骨、尺桡骨及胫腓骨呈特征性TA骨膜反应.患者有清楚的甲状腺功能亢进病史及治疗史,有眼球突出和胫前黏液水肿,ECT检查符合甲状腺功能亢进表现.结论:甲状腺肢端病是一种罕见的自身免疫性甲状腺疾病,需与肥大性骨关节病相鉴别.
作者：陆虹；王艳萍；施清宇；李凤雏；李功杰；任拴群 刊期： 2004年第03期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
