李云峰；刘艳芹；杨明；王恒林；赵毅民；罗质璞
目的:选择并建立异种聚合血红蛋白抗原性检测方法,为评价异种聚合血红蛋白对人有无抗原性提供参考.方法:从速发型超敏反应、体液免疫反应、细胞免疫反应和抗原交叉反应检测聚合牛血红蛋白对异种动物的抗原性.结果:家兔及豚鼠未发生速发型超敏反应.多次免疫后,家兔血清中总IgG无明显变化,但特异性IgG水平显著升高.B淋巴细胞转化检测表明,B淋巴细胞增殖活性增强,但与对照组相比无显著差异(P＞0.05).聚合牛血红蛋白、人血红蛋白、兔血红蛋白抗原交叉反应结果显示,聚合牛血红蛋白与人血红蛋白存在抗原交叉反应,提示聚合牛血红蛋白与人血红蛋白在抗原结构上有同源性.结论:该聚合牛血红蛋白与人血红蛋白在抗原结构上有同源性,除用其免疫的实验组动物血清特异性抗体水平显著升高外,其他检测指标无显著变化.根据免疫学理论,无论某异物刺激机体产生何种免疫应答反应,都应视为该异物存在抗原性,因此提示该聚合血红蛋白存在抗原性.
作者：陈琳；张亚东；卜凤荣；章金刚 刊期： 2004年第03期
目的:构建表达肠毒素大肠杆菌(ETEC)定居因子CS6的重组质粒,并在大肠杆菌DH5α中高效表达.方法:利用基因工程的方法,将含有CS6基因的质粒pMG233用限制性内切酶ClaⅠ酶切,得到长约3.1 kb的CS6片段(含有CS6结构基因及调控基因的DNA片段);并与用限制性内切酶ClaⅠ酶切的表达载体质粒pBV321连接,得到含有CS6片段的重组质粒pMG235,转化至大肠杆菌DH5α.结果:SDS-PAGE、Western印迹及免疫荧光观察的结果表明,重组菌DH5α/pMG235可高效表达相对分子质量为14 600的CS6抗原蛋白,并在重组菌表面表达,表达产物可被抗CS6多克隆抗体识别.结论:重组菌可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6.
作者：罗刚；杨晓；李淑琴；张兆山 刊期： 2004年第03期
目的:克隆人黑素瘤分化相关基因(melanoma differentiation associated gene,mda-7/IL-24),并在大肠杆菌中表达.方法:从PHA刺激培养的人外周血淋巴细胞提取总RNA,根据mda-7/IL-24基因序列设计引物,用PCR法扩增mda-7/IL-24基因.将mda-7/IL-24基因插入表达载体pET-28a(+)中,构建表达载体pET-28a-mda-7/IL-24,用IPTG诱导目的蛋白在E.coli中表达.通过Western印迹分析对表达产物进行鉴定.结果:经RT-PCR从人外周血分离的淋巴细胞中扩增到mda-7/IL-24 cDNA,序列分析与文献报道一致;SDS-PAGE分析表明,经0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导4 h后在E.coli中有大量mda-7/IL-24融合蛋白表达,相对分子质量约为28×103,融合蛋白约占诱导菌总蛋白的30%;Western印迹分析提示,诱导表达产物能与His单抗发生特异性反应.结论:从人外周血淋巴细胞中获得了mda-7/IL-24的全长cDNA,融合蛋白在E.coli中获得高效表达.
作者：马群风；江红；刘锟；朱捷；郑晓飞 刊期： 2004年第03期
基于基因组的疫苗研发途径被称为逆向疫苗学,它不仅省时、经济,而且可为传统方法难于或根本无法开展的疫苗研究提供新的解决方法.逆向疫苗学的研究过程始于硅片,用计算机预测疫苗的所有抗原,不依赖于抗原是否丰富,也不需要微生物是否能够体外培养.本文介绍逆向疫苗学的概况,特别是近年来在研制某些病原菌新疫苗方面的进展.
作者：张兆山 刊期： 2004年第03期
目的:构建新型高效真核表达载体,实现人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低分子量尿激酶(Iin-UK)在CHO细胞中的高表达.方法:利用常规分子生物学方法,通过对neo基因的表达进行不同程度的弱化,构建了一系列新型真核表达载体,以Iin-UK融合基因为目的基因,比较这些真核表达载体实现外源基因高表达的能力,然后挑选高表达的克隆,通过MTX加压扩增,以提高Iin-UK融合基因的拷贝数及表达水平.结果与讨论:构建了5种新型真核表达载体,并筛选出优化的真核表达载体,通过MTX加压扩增,实现了Iin-UK融合基因在CHO细胞中的高表达,表达量达到10 μg/(106细胞·24h ).
作者：刘志刚；林建波；张国强；安怀杰；徐桂清；俞炜源 刊期： 2004年第03期
目的:建立一种适合较大量微生物代谢物抑制K562细胞生长的体外筛选方法,筛选对K562细胞具有抑制作用,而对正常细胞Vero无明显抑制作用的土壤放线菌提取物.方法:放线菌培养液加入乙醇后,置于96孔板中,经过减压除去溶剂后,用MTT法检测各样品对K562及Vero细胞的抑制作用.结果与结论:从446种土壤放线菌提取物中筛选获得5种提取物对K562细胞具有明显的抑制作用,而对Vero细胞生长抑制作用较弱.
作者：胡艳红；张庆林；曹菊荣；龚萍；肖凤君；毕建进；王晓娜；王正平；吴祖泽 刊期： 2004年第03期
目的:研究SARS合并糖尿病死亡原因.方法:以我院2003年4～6月收治的SARS合并糖尿病的46例患者为研究对象,分为死亡组(A组)及治愈组(B组).比较两组的生化指标、血氧饱和度(SpO2)、胸片、多器官功能衰竭(MODS)、二重感染、激素用量、血常规以及CD3+,CD4+,CD8+T淋巴细胞计数等.结果:①A组丙氨酸转氨酶(ALT),尿素氮(BUN),血清肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)显著高于B组(P＜0.01).②A组SpO2＜95%,合并MODS,二重感染及糖皮质激素日均用量≥160 mg/d的例数均明显多于B组(P＜0.05).③A组血小板,淋巴细胞,CD3+,CD4+,CD8+T淋巴细胞计数显著低于B组(P分别＜0.01,0.05,0.001).结论:SARS合并糖尿病患者的死亡原因与肺损害、低氧血症、MODS、二重感染及激素用量密切相关.
作者：马雅辉；王力 刊期： 2004年第03期
目的:建立产气肠杆菌(A)随机扩增多态性DNA(APD)技术基因分型谱.方法:以优化的反应体系和单一随机引物对临床分离的108株EA进行RAPD法基因分型并绘制基因分型图谱.结果:08株临床分离EA共得72种RAPD型.结论:APD技术可将临床分离的EA分为72型.
作者：叶明亮；肖鹏云；王全立 刊期： 2004年第03期
尽管2003年上半年全球爆发的严重急性呼吸综合征(SARS)经世界卫生组织证实为一种SARS-冠状病毒(SARS-CorV)引起,但临床的一些证据表明还不能排除有其他微生物的作用.2003年3月,我们从北京第一例SARS患者A及其母亲的痰漱液和咽拭子标本中分别分离出BYD1和BLD1两株呼肠病毒(reovirus, ReoV)[1],随后又从患者A的父亲(死于SARS)的尸检脾组织样本中同时分离出SARS-CorV和ReoV.更有意义的是,在电镜下于同一个细胞中观察到这两种病毒,即ReoV和SARS-CorV,表明SARS-CorV和ReoV存在着共感染的可能[1] .由于ReoV与肺部感染密切相关,动物模型实验表明可引起动物病毒性肺炎和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)[2,3],我们也初步建立了ReoV BYD1株感染食蟹猴的实验动物模型[4].为观察从SARS患者标本中分离的ReoV 对豚鼠的致病性以及与SARS的关系,本研究分别以ReoV BYD1株、SARS-CorV BJF株单独感染豚鼠,以及两种病毒混合感染豚鼠,观察豚鼠的临床体征和相关器官组织的病理学变化,期望揭示新分离的ReoV致病机制及其在SARS中所起的作用.
作者：朱虹；何君；何诚；甘永华；黄如统；端青 刊期： 2004年第03期
目的:分析多层螺旋CT(multislice spiral CT,MSCT) 对肺动脉栓塞的肺血管分布及肺内改变的诊断价值.方法:回顾分析12例肺动脉栓塞患者的增强MSCT图像.将受累肺动脉分为中央型、周围型、混合型;肺叶水平动脉内充盈缺损分为完全型、部分充缺,并观察对比相应区域肺内改变.结果:肺动脉栓塞周围型2例,混合型10例;受累肺叶动脉25支,9支完全充盈缺损,16支部分充缺.随就诊检查时间的延长,部分充缺的比例有所增大.12例中肺内出现实变3例,出现频率为25%,其中1例诊断为肺炎,胸腔积液4例.结论:MSCT可以明确诊断肺动脉栓塞,多平面重建有助于其确诊.肺动脉栓塞的肺内改变发生率不高且无特异性,要以观察到栓塞的肺血管分布区一致为依据,肺内阴影的定性应结合临床及追随观察.
作者：方捷；杨立；张爱莲；李功杰；任栓群 刊期： 2004年第03期
目的:分析不同类型原代白血病细胞IL-6R基因及IL-6R蛋白的表达情况.方法:采用RT-PCR方法对取自29例白血病患者的原代白血病细胞和8例健康人外周血单个核细胞的IL-6R基因表达情况进行了分析,并应用原位杂交技术和免疫组织化学方法对细胞表面的IL-6受体蛋白进行了检测.结果:20例急性髓细胞白血病均明显表达IL-6R mRNA;9例急性淋巴细胞白血病中有2例为阳性,其余7例为阴性;8例正常人PBMC中6例阴性,2例有弱表达.免疫组化和原位杂交结果与RT-PCR实验结果相一致.结论:IL-6R可作为急性髓系白血病免疫治疗的候选靶位点.
作者：朱宏丽；卢学春；范辉；辛宏；庄晓萌；姚善谦 刊期： 2004年第03期
自从1994年Zhang首次克隆出肥胖基因(obese gene,ob基因)之后,有关ob基因的研究已有很多报道.本文着重对ob基因的结构与生理功能,缺氧时ob基因的诱导性表达调控,低氧与肥胖的关系作一综述.
作者：杨应忠；范文红；范明；格日力 刊期： 2004年第03期
抗体在疾病诊断、治疗和预防方面发挥着举足轻重的作用.随着抗体工程技术的不断发展,抗体已经成为生物制药领域中的热点.而抗体工程发展所面临的两大难点问题之一就是如何提高基因工程抗体的亲和力.本文综述了有关基因工程抗体体外抗体亲和力成熟方面的新进展.
作者：林周；黎燕；沈倍奋 刊期： 2004年第03期
目的:通过观察血清脂肪酶(LIPA)活性与甘油三酯(TG)的相关性,探讨正常人群不明原因血清LIPA活性升高的机制.方法:正常查体人群605例,分为A组(年龄＜30岁,n=50 ),B组(年龄为31～59岁,n=159)和C组(年龄＞60岁,n=396).清晨空腹静脉抽血.用美中互利Vitros 250全自动干化学分析仪测定血清LIPA活性,同时以Roche公司TG试剂盒,在日立7600全自动生化分析仪上测定血清TG浓度.结果:LIPA与TG在A组不具有相关性,在B组具有相关性(r=0.4959,y=79.13x+25.60),在C组也具有相关性(r=0.4179,y=51.39x+107.93).结论:中老年人群中,血清LIPA的升高与TG升高具有一定相关性,而青年组则未见此改变.
作者：尹俊青；赵莉萍；周和平；贾兴旺；田亚平；汪德清 刊期： 2004年第03期
毒鼠强(tetramine, TEM)中毒发生率在近几年有逐年上升的趋势,一旦抢救不及时可因惊厥导致呼吸衰竭而死亡.由于其理化性质稳定,在机体内可长期积蓄,排泄较慢,如不在早期尽快将其清除,将可能损伤神经系统.血液灌流是借助体外循环,将血液引入装有固态吸附剂的容器中,以直接吸附清除血液中某些外源性或内源性的毒物,达到直接、快速净化血液,清除毒素的一种治疗方法.我们对 17 例毒鼠强中毒患者进行了50次血液灌流(hemoperfusion,HP),现介绍如下.
作者：杨红军；原新茹；邱泽武；张虹；陈芝；牛文凯；孙成文 刊期： 2004年第03期
RNA干扰是内源性或外源性双链RNA诱发的mRNA水平上的基因沉默机制,具有高度特异性.21 nt干扰性小RNA在哺乳动物细胞中可以诱导强有力的特异性RNAi作用,这一突破性研究进展开创了人类疾病治疗的新天地,RNAi技术用于人类疾病治疗已受到极大关注,尤其在AIDS、乙型肝炎和丙型肝炎等病毒感染性疾病和肿瘤治疗中的应用研究为活跃,并取得了令人鼓舞的成果.本文对siRNA的设计和制备的基本思路,及其在病毒性疾病和肿瘤治疗中的研究进展作一综述.
作者：李月敏；姜明红；钱其军；宋三泰 刊期： 2004年第03期
目的:对工程菌DH5α(pMG604)的批次补料培养和连续补料培养工艺进行研究.方法:通过摇瓶试验筛选适合重组人干细胞因子工程菌DH5α(pMG604)生长和产物表达的基础培养基,在此基础上进行了分批补料批培养和连续补料批培养的研究.结果:30 L发酵罐分批补料批培养,菌密度为11.9(D600),rhSCF表达水平为42%.5 L发酵罐连续补料批培养,终菌密度为148(D600),rhSCF表达水平为31%.
作者：吴军；巩新；唱韶红；赵志虎；马清钧 刊期： 2004年第03期
目的:从能感染HCV的人肝癌细胞HepG2中克隆出人LDLR基因,构建其真核表达质粒,并在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中进行表达.方法:从HepG2中提取总RNA,采取逆转录PCR(RT-PCR)方法得到人LDLR的cDNA.将获得的人LDLR基因克隆到真核表达载体pcDNA3中,进行酶切和序列鉴定.将重组质粒pcDNA3-hLDLR和空载体转入Hepa1-6,G418筛选,并用RT-PCR和FACS检测人LDLR基因转录和蛋白的表达.结果:人LDLR的cDNA已插入载体pcDNA3构建成真核表达质粒pcDNA3-hLDLR,双酶切和测序表明,克隆的人LDLR与已登录GenBank的序列存在核苷酸多态性,但编码的氨基酸序列完全一致,该序列的GenBank登录号为gi|21629647|gb|AY114155.1,并且真核表达质粒的构建正确.用脂质体介导的方法转入Hepa1-6后,用RT-PCR和FACS检测表明,细胞可表达人LDLR.结论:成功地构建了真核表达质粒pcDNA3-hLDLR,为进一步研究HCV和人LDLR的相互作用,以及建立可能的HCV细胞感染模型奠定了基础.
作者：吕丽萍；贾帅争；王海平；詹林盛；王全立 刊期： 2004年第03期
近4年来,我科用复方倍他米松注射液(得宝松)皮损内注射治疗瘢痕疙瘩、结节性痒疹、限局性顽固性斑秃,取得了较满意的临床疗效,现将结果报道如下.
作者：李渝；郭华；韩莉；余慧侠 刊期： 2004年第03期
目的:筛选无毒棉籽水提物有效部位(CTN)中抗抑郁活性成分.方法:提取大脑皮质突触膜,以CTN或其中5个黄酮类单体成分(分别为CTN-4,CTN-7,CTN-8,CTN-9和CTN-10)与突触膜共孵,放射免疫法测定腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC)活性.结果:与阳性药丁螺环酮(5-HT1A受体部分激动剂)类似,CTN及CTN-4,7,8,9,10均可剂量依赖性激活突触膜AC,其中CTN-8在5个黄酮类单体中活性强.结论:黄酮类化合物槲皮素-3-O-芹菜糖基芦丁糖苷(即CTN-8)可能是CTN中强的抗抑郁活性成分之一,并且可能是5-HT1A受体激动剂.
作者：李云峰；刘艳芹；杨明；王恒林；赵毅民；罗质璞 刊期： 2004年第03期
军事医学杂志
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