学术投稿

GM-CSF-tk融合基因转导人神经母细胞瘤株SH-SY5Y的抗瘤作用

张骏;王新娟;张蕾;许进力;王笑健;蔺新力

关键词:粒细胞巨噬细胞集落刺激因子, 胸苷激酶, 基因转移, 神经母细胞瘤, 肿瘤细胞, 培养的/药物作用
摘要:目的:将单纯疱疹病毒胸苷激酶和粒细胞-单核细胞集落刺激因子融合基因(Lxpsp-hGM-CSF-Hytk)转导人恶性神经母细胞瘤株SH-SY5Y,观察外源融合基因的表达及其对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:FuGENE6介导将含融合基因的逆转录病毒表达载体和仅含潮霉素磷酸转移酶基因的对照载体分别转染逆转录病毒包装细胞系PA317.以适量病毒上清转导SH-SY5Y,RT-PCR方法检测融合基因的存在;细胞因子依赖株TF-1的生长状况及丙氧鸟苷(GCV)杀伤实验鉴定融合基因的表达.结果:将重组病毒产生细胞PA317-GM-CSF-Hytk和PA317-Hy的病毒上清2ml分别转导SH-SY5Y,60 mg·L-1的潮霉素进行筛选,得到了稳定传代的阳性细胞集落SY5Y-GMHytk,SY5Y-Hy.RT-PCR检测阳性细胞集落中有外源的GM-CSF存在.用阳性细胞集落上清培养TF-1细胞,细胞成活.SY5Y,SY5Y-GMHytk,SY5Y-Hy 3种细胞的生长曲线无明显差别,但用不同浓度GCV分别作用于此3种细胞显示:0.03~300 mg·L-1的GCV对SY5Y-GMHytk有明显的杀伤作用(IC50=3 mg·L-1),而对另外两种细胞几乎无毒性作用(IC50>300 mg·L-1).30 mg·L-1GCV作用96 h后可杀死80%以上的SY5Y-GMHytk细胞.结论:应用逆转录病毒介导,将融合基因GMCSF-tk成功地导入了SH-SY5Y肿瘤细胞株,并观察到外源融合基因的表达及HSV-tk/GCV体系对肿瘤细胞的杀伤作用.
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    为探讨正常子宫内膜和子宫内膜癌细胞中谷胱甘肽S转移酶-π(glutathoine Stransferase-,GST-π)和拓扑异构酶-Ⅱ(topoismerase-π,TOPO-Ⅱ)的表达水平及其临床意义,我们随机选取本院子宫内膜癌手术标本50例,年龄34~72岁,术后病理诊断按FIGO标准;并选取20例正常子宫内膜组织作对照.用SP免疫组织化学方法检测50例子宫内膜癌细胞中CST-π和TOPO-Ⅱ的表达情况,探讨其与相关临床病理资料的关系.结果表明正常子宫内膜和子宫内膜癌细胞中GST-π的阳性表达率分别为76%和35%,二者比较,差异有显著性(P<0.01);TOPO-Ⅱ的阳性表达率分别为60%和26%,二者比较,差异有显著性(P<0.05),表明子宫内膜癌组织中GST-π表达增高,TOPO-Ⅱ表达降低;此外,TOPO-Ⅱ表达与子宫内膜癌细胞ER表达有关(P<0.05).

    作者:桂黎明;魏丽惠;富琪;屠铮;周蓉;虞有志 刊期: 2001年第01期

  • 牛磺酸减少大鼠肠套叠的发生

    目的:在细菌脂多糖(LPS)诱导的大鼠肠套叠模型上,观察牛磺酸在肠套叠发生中的作用.方法:高脂高糖喂养大鼠后,腹腔注射LPS制作肠套叠模型;Greiss法测定血浆和结肠平滑肌组织硝酸盐和亚硝酸盐(NOx)的含量,放射免疫法测定血浆和组织环磷酸腺苷(cGMP)含量.结果:LPS(10 mg/kg.ip)处理后6 h诱发大鼠肠套叠发生率达40%.应用LPS的同时给予牛磺酸,肠套叠的发生率为16.7%,与单纯脂多糖组相比下降58.25%(P<0.01).大鼠给予LPS,无论是否发生肠套叠,血浆和结肠平滑肌组织NOx、cGMP含量均升高.结肠平滑肌组织总一氧化氮合酶(tNO5)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)增高,而内皮型一氧化氮合酶(eNOS)下降.大鼠给予牛磺酸后,血浆和结肠组织NOx、cGMP的含量分别降低23.7%(P<0.01),20.6%(P<0.01)和37.2%,22.9%(P<0.01).结肠组织的tNOS、iNOS的活性分别降低23.2%和24.2%(P<0.01),而cNOS的活性增高57.1%(P<0.01).结论:牛磺酸可减少肠套叠的发生,其机制可能与抑制NO产生的不同环节有关.

    作者:王平;雷宇;佟利家;王晓红;齐永芬;唐朝枢 刊期: 2001年第01期

  • 生物信息学概述

    生物信息学是一门新兴的学科,它是应用计算机和信息技术搜集、储存、分析、整理各种生物医学信息,并予以管理和利用的一门科学.随着分子生物学研究的进展,当前生物信息学主要是研究和分析基因和蛋白质的遗传结构和功能的生物信息,以解释和认识生命的起源、进化、发育、遗传的本质,破译隐藏在DNA序列中的遗传语言及其意义,这亦称为经典的或狭义的生物信息.此外,它亦研究和分析人体所有细胞、组织、器官的生理、病理、药理过程的各种生物信息,为人类疾病的预测、诊断、预防和治疗提供合理和有效的途径.这亦称为广义的生物信息学或医学生物信息学.经典生物学是医学生物信息学的基础和核心,医学生物信息学是经典生物信息的发展和应用,两者是密不可分的,都是以计算机为工具,对生物信息进行储存、检索、分析的科学.

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  • 人大肠癌中Ⅰ型膜型金属蛋白酶mRNA的表达

    目的:探讨Ⅰ型膜型金属蛋白酶(membrane-type matrix metalloproteinase 1,MT1-MMP)mRNA的表达与人类大肠癌的关系.方法:用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对38例大肠癌中MT1-MMP mRNA的表达进行检测.结果:86.8%(33/38)的大肠癌中MT1-MMP mRNA的表达高于相应正常黏膜(P<0.01),癌/ 膜的中位数为1.63(Min=0.70,Max=11.00),其表达水平与大肠癌的浸润深度呈正相关(P<0.05).结论:MT1-MMP高表达可能在大肠癌对周围组织的浸润过程中具有重要作用,可以作为反映大肠癌侵袭能力的生物学标志物.

    作者:潘义生;万远廉;刘玉村;郭源;魏群 刊期: 2001年第01期

  • GM-CSF-tk融合基因转导人神经母细胞瘤株SH-SY5Y的抗瘤作用

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    作者:张骏;王新娟;张蕾;许进力;王笑健;蔺新力 刊期: 2001年第01期

  • 关节炎大鼠背根神经节细胞的膜电生理学特征

    目的:研究炎症大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞的膜电生理学特征,试图解释炎症痛敏的机制.方法:应用全细胞膜片箝电流箝制技术,对急性分离的大鼠DRG细胞进行电流箝制.以完全弗氏佐剂诱发大鼠关节炎,分别取炎症痛急性期(24~72 h)和慢性期(2~3周)大鼠腰5、腰6 DRG细胞进行研究.结果:炎症痛急性期小型DRG细胞与对照组比动作电位的阈值增加8%(P<0.01),小型及中型DRG细胞的动作电位的时程加宽75%和68%(P<0.01),小细胞的细胞膜固有电阻增加25%(P<0.05);炎症痛慢性期大鼠小DRG细胞动作电位的阈值增加(7%,P<0.01),时程增加23%(P<0.01),固有电阻下降24%(P<0.01),而中型DRG细胞膜电特性无显著变化.结论:DRG细胞动作电位的时程加宽,促进了伤害性信息引起DRG细胞突触前膜Ca2+内流介导的递质释放,这可能是引发动物炎症痛敏的主要原因.

    作者:王学庆;万有;于英心;韩济生 刊期: 2001年第01期

  • 沉痛悼念王志均院士

    中国科学院资深院士,我国著名的生理学家和教育家,我国消化生理学的开拓者和奠基人之一,中国生理学会名誉理事长,原北京医科大学基础医学研究所所长、生理学系主任,中国共产党党员,九三学社社员,原北京市政协委员,原<北京医科大学学报>编委王志均教授因病医治无效,于2000年12月24日凌晨2时10分在北京逝世,享年90周岁.王志均院士为祖国的科学事业和教育事业、为中国生理学的发展付出了毕生的心血,作出了卓越的贡献.王志均先生的功绩和美誉,将永远铭刻在中国生理科学的发展史上;他的爱国精神和学者风范,将永远铭记在我们心中!

    作者: 刊期: 2001年第01期

  • 长波紫外线诱发M13mp2噬菌体基因突变的碱基特异性

    目的:分析长波紫外线(near-ultravilet,UVA)诱发M13mp2噬菌体lacZa基因区域突变的碱基特异性.方法:用UVA光源照射处理M13mp2噬菌体样品,选择突变株,用dye-temiinator方法测定lacZα基因区域的DNA序列.结果:UVA照射引起的突变以鸟嘌呤的颠换为主(62%),与太阳光诱发突变类型相似,但与中波紫外线诱发的突变类型不同.结论:太阳光照射诱发鸟嘌呤的颠换可能为UVA的作用.

    作者:郝卫东;尚兰琴 刊期: 2001年第01期

  • 脑动静脉畸形治疗方法的选择——附61例分析

    目的:探讨脑动静脉畸形(artenovenouis malformation,AVM)的临床表现,治疗方法的选择和手术并发症的防治.方法:总结分析近10年收治的61例脑动静脉畸形患者的临床资料.结果:显微神经外科手术治疗共50例,其中Spetzler Ⅰ~Ⅲ级患者病灶全切率为93.8%(45/48).手术后并发症为:术后一过性神经功能障碍患者占10%(5/50),较严重的神经功能障碍占10%(5/50),无手术死亡.9例行血管内栓塞治疗和/或放疗.2例观察.结论:显微外科手术是脑AVM的主要治疗方法,对于Spetz1er-Martin Ⅰ-Ⅲ级的脑AVM,要尽量争取早期手术切除,其切除率高而致残率低.Ⅳ级以上的患者应行综合治疗:外科手术、血管内栓塞和放疗.

    作者:尤玉才;张晓华;张彦芳;王象昌 刊期: 2001年第01期

  • p27、cyclin E、Rb蛋白在胃癌中的表达及临床意义

    目的:探讨p27、cyclin E和Rb蛋白在胃癌中的表达及其与胃癌病理参数之间的关系.方法:用免疫组化技术(SP法)对10例非瘤病变患者的正常胃黏膜和40例胃癌和癌旁黏膜标本进行染色,分析p27、cyclin E和Rb蛋白表达及其与预后的关系.结果:p27、cyclin E和Rb蛋白在正常胃黏膜与瘤旁黏膜表达差异无统计学意义;p27在胃癌中表达降低,cyclin E蛋白在胃癌中表达增高,呈过度表达,Rb组间差异无统计学意义.p27、cyclin E和Rb蛋白表达与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、预后等胃癌病理参数之间具有相关性.结论:p27、cyclin E和Rb蛋白异常表达与胃癌的发生、发展有关,并可能作为胃癌预后的指标.

    作者:刘玉村;高付生;高红桥;王振军;万远廉 刊期: 2001年第01期

  • 层粘连蛋白在小鼠胚胎早期发育期间的表达与分布

    目的:研究发育不同阶段早期小鼠胚胎中层粘连蛋白(1aminin,LN)的表达与分布变化,以进一步探讨LN与胚胎细胞分化及着床的关系.方法:取植入前发育不同阶段的单个小鼠胚卵,应用免疫荧光间接法和酶免疫组织化学ABC等方法观察早期胚胎中LN的表达时间、强弱及分布状况.结果:从原核期、Ⅱ细胞期至Ⅷ细胞期胚,卵裂球内均可见LN强免疫荧光或棕色LN阳性反应颗粒,卵裂球外间质中LN则为阴性反应.到桑椹胚期,卵裂球内及间质中同时出现LN阳性反应物质.早期胚泡中LN主要分布在内细胞团,滋养层细胞间质中也有分布.晚期胚泡滋养层细胞内LN表达增强,细胞间质中转为阴性,近内细胞团侧的滋养层与内细胞团处,均表达出LN强阳性反应.结论:早期小鼠胚胎的卵裂球中含有LN;桑椹胚期LN在细胞间质中出现;胚泡侵入子宫内膜期间近内细胞团侧的滋养层细胞及内细胞团中的LN含量增加;小鼠早期胚胎中LN与其发育及粘附着床正相关.

    作者:李英;吕丹瑜;杨京京 刊期: 2001年第01期

  • 钙调神经磷酸酶介导碱性成纤维细胞生长因子诱导的大鼠心肌细胞肥大

    目的:观察钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导心肌细胞肥大中的作用.方法:在原代培养的大鼠心肌细胞上,应用双波长荧光光度计检测心肌细胞游离Ca2+浓度;应用对硝基苯磷酸(p-nitrophenyl phosphate,PNPP)作底物测定CaN活性;根据3H-亮氨酸参入水平评估各种信号通路阻断剂对bFGF刺激的心肌细胞蛋白质合成速率的影响.结果:bFGF刺激心肌细胞24 h后,胞内游离Ca2+浓度较对照组增高272%(P<0.01);同时,bFGF刺激的心肌细胞CaN活性较对照组增高173%(P<0.01).bFGF(60μg·L-1)刺激的心肌细胞3H-亮氨酸参入较对照组增高106%(P<0.01);CsA(0.1~10 μmol·L-1)可以浓度依赖的方式抑制bFGF刺激的心肌细胞3H-亮氨酸参入.此外H7(PKC抑制剂)和50 μmol·L-1PD98059(MAPK抑制剂)亦可完全阻断bFGF刺激的心肌细胞3H-亮氨酸参入.结论:Ca2+/CaN信号通路参与bFGF诱导心肌细胞肥大的信息传递.另外,丝裂素活化蛋白激酶及蛋白激酶C可能亦是bFGF刺激心肌细胞肥大的重要信号传递途径.

    作者:符民桂;许松;庞永正;刘乃奎;唐朝枢 刊期: 2001年第01期

  • 磁共振门静脉成像在门脉高压症外科诊疗中的应用

    目的:评价磁共振门静脉成像在门脉高压症外科诊疗中的应用价值.方法:对32例门脉高压症病人的磁共振门静脉造影图像进行分析并与手术结果进行对比.结果:32例病人中的30例显示了清晰的门静脉图像,2例显示不清者手术证实为门静脉血栓形成或海绵样病变.全部病例的胃左静脉都呈不同程度的扩张、迂曲.1例肠系膜上静脉显示有狭窄者也经手术证实.造影过程中也可见到萎缩的肝和增大的脾.结论:磁共振门静脉成像术是评价门静脉的一项快速无创的技术,可提供完整清晰门静脉图像,有助于选择较好的手术方法和手术入路.

    作者:张同琳;周宏建;刘剑羽;谢敬霞;周孝思 刊期: 2001年第01期

  • 不同部位体表电刺激治疗大鼠单发佐剂关节炎的疗效差异

    目的:利用单发佐剂关节炎大鼠作为慢性痛动物模型,在不同部位给予不同频率的穴位体表电刺激(TENS)治疗,观察疗效的部位特异性.方法:应用HANS LH-800型刺激仪,分别在足三里(ST6)、涌泉(K1)、劳宫(PE8)给予100H2或2 Hz TENS治疗,观察疗效.结果:(1)与对照组相比,100Hz TENS作用于足三里和涌泉均可显著改善动物的行为学指标,疗效相仿.劳宫刺激则无疗效.(2)2Hz TENS刺激只有涌泉有显著疗效,足三里和劳官均无疗效.(3)若在同一部位比较不同频率的疗效,足三里刺激100Hz有效而2Hz无效,涌泉刺激100Hz和2Hz均有相似的疗效,劳宫刺激100Hz和2Hz均无疗效.结论:TENS治疗关节炎大鼠具有部位特异性,且在致炎部位附近治疗效果较好;低频刺激的有效范围较高频刺激局限.

    作者:宁云;罗非;韩济生 刊期: 2001年第01期

  • 后颅底肿瘤的显微外科手术治疗

    目的:提高对颅底肿瘤治疗的认识.方法:对1995年7月~1998年12月收治、显微手术切除的30例后颅底肿瘤病例进行回顾性研究.结果:肿瘤全切除16例(16/30),次全切除5例,大部切除9例.疗效:优24例(24/30),良4例,差1例,死亡1例.结论:术前精确的诊断对手术及预后非常重要.手术入路主要取决于肿瘤的位置、延伸及大小.显微外科手术是减少术后并发症、获得良好预后的关键.

    作者:鲍圣德;王象昌;张建国;尤玉才;霍惟扬;张彦芳;葛为勇 刊期: 2001年第01期

  • 大肠癌组织和正常黏膜中端粒酶活性表达及临床意义

    目的:探讨端粒酶活性检测作为一种新的肿瘤临床诊断的生物学标志的可行性.方法:应用端粒重复扩增实验(telomerase repeat amplification protocol,TRAP法)结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法测定35例大肠癌标本及正常黏膜端粒酶活性.结果:35例大肠癌标本中,29例为端粒酶阳性,阳性率为82.86%;而相邻正常黏膜中全部为阴性.两者之间差异有显著性,经统计学分析,端粒酶活性与大肠肿瘤Dukes'分期有关.结论:端粒酶表达具有很高的肿瘤特异性,对大肠肿瘤的临床诊断有应用价值,并且有判断预后和指导临床治疗的潜在意义.

    作者:徐文怀;鞠晓明;李涵 刊期: 2001年第01期

  • 人肝细胞癌相关新基因的筛选

    目的:寻找肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)相关的新基因,并从分子水平进一步探讨HCC发生发展的机制.方法:对通过荧光-差异显示(fluorescent-differential display,FluoroDD)技术从人HCC组织、配对非癌肝(paired non-cancerous liver,PNL)组织、胎肝(fetal liver,FL)组织和正常肝(normal liver,NL)组织获得的110条差异表达cDNA片段(DD片段)中的25条进行测序,将测序结果在GenBank NR数据库中进行同源性分析,并对其中12条DD片段用RNA狭缝杂交法验证其在HCC、PNL及NL组织中的表达规律.结果:25条DD片段中18条与已知基因具有高同源性(>96%);5条与已知序列(基因结构与功能未知)具有高同源性(>85%);2条与GenBank NR数据库中的序列无明显同源性.RNA狭缝杂交筛选到5条在HCC中特异性高或低表达并与已知哺乳类动物基因高度同源(97%~99%)的cDNA片段:在HCC中特异性高表达的3条片段是LC13(人热休克蛋白90β)、LC21(智人异源性核内核糖核蛋白C)和LC22(干扰素诱导的智人鸟嘌呤结合蛋白2);在HCC中特异性低表达的2条片段是LC5(智人甲状腺激素受体相关蛋白240)和FL25(分化相关基因1).结论:新发现5条与HCC相关、与已知哺乳动物基因高度同源的cDNA片段.其中3条在HCC中高表达、2条低表达,它们可能分别作为促进与阻抑HCC发生、发展相关的基因,其确切的生物学作用有待进一步研究.

    作者:张杰;刘军建;韩云;张宁;芮静安;金城;周柔丽 刊期: 2001年第01期

  • 桡、头动静脉瘘手术改进

    目的:研究提高头静脉较细的慢性血透患者前壁内瘘手术成功率的方法.方法:改进方式为桡、头动静脉侧侧吻合,吻合后经头静脉分支或吻合口远端头静脉置入3~4号Fogarty导管,至肘部后将前臂头静脉直径全程或阶段性扩张为3~4 mm;传统方式为桡、头动静脉端端吻合或(静脉)端(动脉)侧吻合.结果:自1996年2月至1999年9月间为61例慢性肾功能衰竭患者行桡、头动静脉内瘘术.传统方法26例,手术成功率为80.8%.其中头静脉直径<2mm时的手术成功率为0;2~2.4mm时为57.1%;2.5~2.9 mm以上的成功率为88.9%;3 mm以上时为100%.改进术式35例.头静脉直径≥1.5 mm时手术成功率为100%.两组数据经Fisher's精确概率法计算的P值为0.011.结论:桡、头动静脉正常,头静脉直径不小于1.5 mm时,方可施行桡、头动静脉瘘;头静脉直径小于3 mm,尤其是小于2.5 mm,或头静脉因操作而痉挛时,应行前臂头静脉全程或阶段性扩张的改进造瘘方式,以提高手术成功率;鼻烟壹是作内瘘较理想的部位.

    作者:赵军 刊期: 2001年第01期

  • 鸡转录增强因子-1相关基因cDNA片段的克隆及其在发育过程中的表达

    目的:克隆转录增强因子-1(transcription enhancer factor-1,TEF-1)相关基因(related TEF-1,RTEF-1),检测鸡发育过程RTEF-1基因的表达及组织分布.方法:从13 d鸡胚骨骼肌mRNAs经RT-PCR方法扩增RTEF-1的编码序列(cDNA),将其克隆到pGEM和pUC载体并进行核苷酸序列分析.采用RT-PCR技术检测鸡胚发育第9天至雏鸡孵出后6周的骨骼肌组织中RTEF-1基因的表达,并测试其在13 d鸡胚和出生后1 d雏鸡的骨骼肌、心肌、脑、肝和胗等5种组织中的存在.结果:克隆序列分析结合GenBank检索表明,所克隆的cDNA片段(900 bp)与cTEF-1A序列仅相差两个碱基.应用RT-PCR技术在鸡胚发育9 d至出生后6周雏鸡的骨骼肌组织均检出了RTEF-1基因的表达;13 d鸡胚和出生后1 d雏鸡的骨骼肌、心肌、脑、肝和胗等5种组织中均有TEF-1相关基因的转录.结论:克隆的cDNA片段属多种组织普遍存在的cTEF-1A.与先前检测的M-CAT结合因子发生规律(在两周前表达)不同,cTEF-1A在鸡胚发育的第9天至出生后6周的骨骼肌组织持续表达.

    作者:张雪平;张洁欣;陆纲;陈瑞华;贾弘 刊期: 2001年第01期

  • 盐酸戊乙奎醚治疗有机磷中毒临床研究

    目的:评价盐酸戊乙奎醚治疗有机磷中毒的疗效、安全性及毒性.方法:应用盐酸戊乙奎醚抢救急性有机磷中毒17例,其中4例呼吸、心搏停止.用药剂量范围1~21 mg.结果:17例急性有机磷中毒患者治愈率100%,治愈时间18 h~18 d,平均住院日4.1 d.结论:盐酸戊乙奎醚是一种新型、安全、高效、低毒的治疗有机磷中毒的长效抗胆碱药物.

    作者:吴红晶;楼滨城;黄岱坤;刘秋杰 刊期: 2001年第01期

北京大学学报(医学版)杂志

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主办:北京大学