沈丽；买鸿宴；南燕；张琳；王淑玲
目的:分离并克隆大鼠吗啡依赖相关基因.方法:SD大鼠用递增剂量的吗啡作皮下注射,形成吗啡依赖的动物模型.分离鼠脑的中脑导水管周围灰质、伏核、纹状体等核团,提取总RNA,用mRNA差异显示(differential display PCR,DDPCR)的方法,筛选吗啡依赖大鼠特异表达产物的cDNA片段.用3组锚定引物(T12MN,M=A,G,T或C,N＝A,C或G)和6组随机引物(AP1～AP6)作不同组合进行PCR扩增.结果:获得了80余个差异表达产物的cDNA片段,经斑点杂交初步筛选,克隆了10个阳性片段,选取4个克隆进行序列分析,获得了4个cDNA片段.结论:通过BLAST数据库序列比较,现已确认获得了4个吗啡依赖表达的新基因片段.
作者：崔振中；梁德勇；金蕾；罗非；王晓民；韩济生 刊期： 1999年第03期
孤啡肽(orphanin FQ,OFQ)是1995年底发现的孤儿阿片受体样受体的内源性配体[1],其结构和细胞内信号转导通路方面类似于阿片肽但功能在脑内则与阿片肽相反.OFQ作为一种新的抗阿片样物质广泛存在于中枢神经系统,原位杂交[2]和Northern杂交[3]结果表明其前体mRNA在中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray,PAG)、杏仁核、丘脑和下丘脑等部位有较多的分布与表达.本工作运用放射免疫分析方法对P77PMC大鼠和Wistar大鼠的这4个脑区及脑室灌流液中OFQ免疫活性(immunoreactivity,ir)进行了测定.
作者：袁立；韩宙；韩济生 刊期： 1999年第03期
目的:观察稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞对6-羟基多巴胺损毁所致帕金森病(Parkinson disease,PD)模型大鼠旋转行为有无治疗作用.方法:用6-羟基多巴胺损毁大鼠单侧中脑黑质多巴胺能神经元、2周后腹腔注射阿朴吗啡诱导大鼠出现偏侧旋转行为的方法制备PD模型大鼠.通过脑立体定位技术,将稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞注入模型鼠损毁侧纹状体,1周后观察阿朴吗啡诱导的旋转行为有无改善.结果:稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞可明显降低PD模型大鼠的异常旋转行为,治疗作用达10周之久.结论:运用exvivo方法和防治兼顾的策略对于PD基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义.
作者：经兴军；马端端；高红；王晓民；韩济生 刊期： 1999年第03期
CD23的功能是多方面的,其信号传导通路十分复杂,涉及蛋白激酶C、磷酸肌醇、cGMP及cAMP通路、NOS通路等,并和一系列分子发生相互作用,如CD21/CD19/TAPA-1/Leu-13复合体、HLA-DR、p59fyn、CD11b和CD11c等.现在一般认为,IgFc受体除受体分子外,还存在若干辅助分子,这些辅助分子在维持受体构型、识别配体及传导信号等方面都起着必不可少的作用.CD23是否具有辅助分子,目前仍无确切报道.
作者：晋康新；王卫莉；陈建；徐德胜 刊期： 1999年第03期
目的:口服髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)与T细胞疫苗接种(T cell vaccination,TCV)联合应用诱导免疫耐受,以提高特异性的免疫疗法对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的防治效果.方法:从gpSCH/CFA诱发EAE的DA大鼠体内取淋巴细胞,体外再以MBP刺激,并用rIL-2促进增殖,反复数个循环,可获得MBP特异的T淋巴细胞系.将此T细胞系经照射(15Gy)灭活处理后,静脉接种至同基因正常DA大鼠体内,同时给此DA大鼠多次口服MBP诱导耐受,后以脊髓匀浆/完全福氏佐剂(SCH/CFA)攻击经上述处理的大鼠,以观察其EAE的发病情况.结果:单独口服MBP诱导耐受及单独TCV处理的DA大鼠对随后诱发的EAE的抑制率分别为67%和50%,而将二者联合应用,则抑制率可达80%.结论:口服MBP与MBP特异的T细胞疫苗接种联合应用,可获得更深程度的耐受效果,多种手段联合应用可能成为临床今后通过诱导耐受防治自身免疫病的新策略.
作者：刘学彬；武锦玲；谢蜀生 刊期： 1999年第03期
目的:探讨白细胞介素-1受体拮剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1ra)治疗博莱霉素(bleomycin,BLM)致大鼠肺纤维化模型的作用机制.方法:利用MTT法测定经IL-1ra作用前、后1周时该模型大鼠肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),及其培养上清促肺成纤维细胞增殖能力的变化;利用Northern杂交测定肺泡巨噬细胞TNF-α、血小板衍化生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)mRNA的表达.结果:BLM致肺纤维化模型1周时,肺泡巨噬细胞TNF-α的产生及该组细胞上清的促成纤维细胞增殖活性与正常对照组相比均明显增强,而IL-1ra(10mg.L-1)对肺泡巨噬细胞TNF-α的产生及该组细胞上清的促成纤维细胞增殖活性有明显的抑制作用.BLM致肺纤维化模型1周时肺泡巨噬细胞TNF-α、PDGFmRNA的表达较正常对照组增高,而IL-1ra对其表达无明显影响.结论:IL-1ra通过对肺泡巨噬细胞的TNF-α产生及其对成纤维细胞增殖活性的抑制,可能对该模型的肺纤维化起到抑制作用.
作者：赵桂荣；何冰；李海潮；宿利；李小玲 刊期： 1999年第03期
目的:观察IL-1的受体拮抗剂(IL-1ra)对缺氧性神经细胞的影响,探讨IL-1在神经细胞缺氧损伤中的作用以及基因转染治疗的可能性.方法:(1)以缺陷型HSV为载体构建的pHSV-IL-1ra转染体外培养的神经细胞为实验组,以pHSV-LacZ转染的体外培养的神经细胞为对照,进行体外缺氧实验.以神经细胞的3H-GABA和3H-Glu摄取能力及细胞凋亡情况为判定损伤程度的指标.结果:转染pHSV-IL-1ra的神经细胞缺氧后,其3H-GABA和3H-Glu的摄取较转染pHSV-LacZ的神经细胞有所增高,神经细胞凋亡的程度少于对照.结论:pHSV-IL-1ra转染可减轻缺氧引起的神经细胞急性损伤和迟发性损伤.
作者：梁卫兰；母得志；张国荣；吴希如 刊期： 1999年第03期
随着对弥漫性脑损伤研究的不断深入,该病确诊的患者不断增多,但疗效差,死亡率很高.1995年后,作者在脱水、激素、亚冬眠治疗和手术的基础上,改进手术,并采用激素冲击疗法和尼莫地平治疗,效果较好,报告如下.
作者：宋明；单宏宽；谢京诚；刘彬 刊期： 1999年第03期
急性炎性脱鞘性多神经根神经(acute inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathy,AIDP)为一种主要累及脊神经、颅神经的周围神经系统疾病,病变部位神经髓鞘脱失,伴大量淋巴细胞浸润,严重时可有轴索变性;巨噬细胞、MHCⅡ类分子阳性的抗原呈递细胞及分泌细胞因子的活化T细胞亦在局部大量聚集.研究表明活化的T细胞在AIDP的病理损伤中起重要作用,T细胞通过T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)发挥作用,TCR基因经过V-D-J-C区的基因重排显示多样性和特异性.对其它的自身免疫性疾病研究发现TCR基因呈限制性基因重排,与疾病的发生或损伤程度密切相关,在AIDP的病理机制中是否也存在类似机制目前尚无定论[1].
作者：王立军；钟延丰；康德瑄；王盛兰；杨金辉 刊期： 1999年第03期
应用北京医科大学培育的听源性癫痫易感大鼠P77PMC,以癫痫不易感大鼠Wistar为对照,系统研究了NMDA受体亚单位Ⅰ(NR-1)与白细胞介素-1(IL-1)在癫痫发生发展中的作用及相互关系.实验在整体、脑片、神经细胞培养及分子水平进行.所得较有意义的结果如下:(1)在听源性惊厥易感大鼠P77PMC整个发育过程中脑内NR-1mRNA的表达,以及成年鼠脑内NMDA受体活性(MK-801结合)都高于对照组Wistar大鼠.惊厥后P77PMC脑内NR-1mRNA的表达呈时间依赖性增加,惊厥后24h比惊厥前增加111%～202%;NR-1反义寡核苷酸脑室注射(每μl10μg)可显著减轻P77PMC大鼠惊厥程度,并可对谷氨酸引起的体外神经细胞的损伤有保护作用,抑制谷氨酸导致的神经毒性作用.由此证实NR-1参与惊厥的发生发展,并与P77PMC大鼠的遗传性癫痫易感性关系密切.(2)在神经细胞培养中IL-1β可明显剂量依赖性地(1～25U.ml-1)提高NR-1mRNA的表达,白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)可阻断此效应;IL-1β可剂量依赖性地提高NR-1受体活性,因此提示IL-1具有兴奋性神经调质的作用,其作用可能是通过直接或间接地促进脑内NR-1基因表达与受体功能.(3)应用缺陷型单纯疱疹病毒(HSV)pHSVLac载体(由哈佛大学Geller教授惠赠)构建含IL-1racDNA的pHSV-IL-1ra载体,进行转基因表达IL-1ra.侧脑室注射pHSV-IL-1ra假病毒(5×105pfu)可显著抑制P77PMC大鼠的惊厥发作.相关脑区有IL-1ramRNA及蛋白的表达,可长达6周以上,说明HSV载体可有效地将IL-1ra基因转移入脑内.
作者：吴希如；单巍松；张国荣 刊期： 1999年第03期
目的:研究神经节苷脂GM1对β淀粉样蛋白(Aβ)分泌和β淀粉样蛋白前体(APP)基因转录水平的影响,探讨GM1在阿尔茨海默病Aβ生成过程中的作用机制.方法:利用人类APP695基因转染神经母细胞瘤细胞株,免疫沉淀Western印迹法检测经不同浓度GM1处理的细胞培养液中的Aβ含量,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法测定细胞中APPmRNA水平.结果:随GM1浓度增加,细胞分泌Aβ增加,GM110μmol.L-1组和100μmol.L-1组分别为对照组的1.33倍(t=1.29,P>0.05)和3.07倍(t=3.63,P<0.05);而APPmRNA水平无变化,APP特异性片段与内参照的比值3个组无显著性差异(F=0.23,P>0.05).结论:GM1不影响APP基因转录水平,其促进细胞分泌Aβ的作用可能与干扰APP的水解代谢有关.
作者：张晖；康德瑄；阮燕；张岱 刊期： 1999年第03期
目的:观察混合脐血浆在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)培养中的作用.方法:在含20%(体积分数)混合脐血浆的内皮细胞培养体系中进行HUVEC的原代和传代培养,并对培养细胞进行纯度鉴定.同时用噻唑蓝试验观察不同体积分数的混合脐血浆对HUVEC增殖活力的影响.结果:20%(体积分数)的混合脐血浆对HUVEC培养有明显支持作用,该体系培养的HUVEC经第Ⅷ因子相关抗原(Ⅷ:Ag)和Ⅰ型荆豆凝集素(UEA-Ⅰ)鉴定纯度可达93.1%.结论:20份混合的脐血浆可以代替内皮细胞生长因子成功地用于HUVEC的培养,以获得高纯度可传代的内皮细胞.
作者：李智萍；李金兰；付家瑜；陈珊珊 刊期： 1999年第03期
同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是甲硫氨酸代谢过程中产生的一种含硫氨基酸,临床和流行病学资料表明,高Hcy血症是心血管疾病的一个独立危险因素.已证实Hcy具有损伤血管内皮、刺激血管平滑肌增殖和促进胶原合成等生物学效应.Hcy细胞损伤作用的机制目前尚未阐明.已知与其通过自身氧化对组织细胞产生氧化应激有关.
作者：李淑莲；李载权；张英；薛琳；许松；王晓红；唐朝枢 刊期： 1999年第03期
目的:观察多次注射小剂量氯胺酮对炎症痛的治疗作用.方法:给单发性佐剂性踝关节炎症大鼠每天皮下注射1次氯胺酮,每周注射5次,共治疗4周,疼痛评分采用背屈关节测痛试验,1周评分1次.动物的一般状况以体重增长速率为指标,炎症程度用踝周长表示.结果:(1)给炎症大鼠多次注射不同剂量氯胺酮(0.08,0.4,2,10mg.kg-1),在治疗的第2周10mg.kg-1组动物的疼痛即得到明显缓解,第3周时2mg.kg-1组动物的疼痛也开始得到明显缓解,2mg.kg-1及10mg.kg-1组大鼠4周内的治疗效果与生理盐水组相比有显著差异;P值分别为0.05及0.01,且各剂量之间存在一定的量效关系;(2)关节肿胀有一定程度的缓解,但不如镇痛效果明显;(3)各组动物间的体重增长无明显变化.结论:多次注射氯胺酮连续4周可使关节炎大鼠急性期疼痛症状得到明显缓解,未见明显的毒副作用.
作者：王韵；黄诚；曹羽；韩济生 刊期： 1999年第03期
目的:建立一种简便实用、稳定可靠的脊髓损伤动物模型.方法:采用电解损毁法,主要损伤大鼠第10胸椎节段脊髓双侧皮质脊髓束纤维,在术后不同时间观察受损脊髓组织学变化及大鼠运动功能改变,并用HRP逆行标记技术,以大脑运动皮层标记神经元计数来反映皮质脊髓束受损情况.结果:1mA,210s的损伤电流,可在脊髓后索造成神经组织坏死,形成空腔,使双侧皮质脊髓束纤维受损;术后1周、2周、3周观察,电损毁组大鼠运动功能显著低于假手术组,表现为后肢运动评分下降,Ashworth肌张力评分增大,斜板实验角度下降;电损毁组运动皮质标记神经元计数也显著低于假手术组.结论:电解损毁在适宜参数下能损伤双侧脊髓皮质脊髓束,引起双后肢的不完全性截瘫,结果稳定可靠,操作简便,为脊髓损伤的实验研究奠定了基础.
作者：唐晓青；万有；黄志华；韩济生 刊期： 1999年第03期
目的:观察携带胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)基因的重组腺病毒(AdCMVgdnf)对损伤运动神经元的保护作用.方法:采用培养运动神经元的谷氨酸损伤模型,评价GDNF重组腺病毒对损伤运动神经元的影响,指标是运动神经元计数.结果:(1)建立了运动神经元谷氨酸损伤模型:当培养液中加入0.5mmol.L-1的谷氨酸,作用24～48h后,运动神经元数目较对照组显著减少(P＜0.01);(2)携带GDNF基因的重组腺病毒可显著减轻谷氨酸导致的运动神经元损伤.结论:腺病毒介导的GDNF表达对损伤的运动神经元具有保护作用.
作者：唐晓青；万有；徐国恒；王韵；韩济生 刊期： 1999年第03期
甲真菌病是真菌侵犯甲板引起的感染性疾病.发病率为2%～13%,是常见的甲疾病.甲癣则是皮肤癣菌侵犯甲板引起的甲病.为探讨不同真菌在甲真菌病中的致病作用及凝集素组织化学染色法对判断甲真菌病病原菌的意义,特制备离体甲的甲真菌病模型,进行组织病理检查、扫描电镜观察,并研究甲板中真菌与4种不同凝集素的结合形式.
作者：马映宇；张文娟；蔡永明；桑菊花 刊期： 1999年第03期
罗哌卡因(ropivacaine)是一种新型、长效的局部麻醉药,目前国际上已用于临床,国内尚未见到相应的文献报道.为了研究此药在国人体内的药物代谢状况,我们建立了测定罗哌卡因血药浓度的气相色谱法,并对其在硬膜外阻滞时血药浓度的变化进行了测定.
作者：解大建；许幸；吴新民；胡晓华 刊期： 1999年第03期
目的:建立小鼠电针镇痛模型,在不同品系小鼠上观察各种电针参数引起的电针镇痛效果.方法:应用LH型HANS刺激仪,采用辐射热甩尾测痛法,比较了6种品系小鼠的电针镇痛效应.结果:(1)品系的差异:100Hz电针时DBA/2品系的镇痛效果显著优于其它品系,2Hz电针时DBA/2品系和BALB/c品系显著优于ICR品系;(2)性别差异:2Hz电针DBA/2、C57、BALB/c3种品系的雌鼠优于雄鼠,100Hz电针仅BALB/c品系的雌鼠优于雄鼠;(3)刺激强度方面:1-2-2mA组针效显著优于0.5-1.5-2.5mA组或1-1.5-2mA组;(4)DBA/2和C57品系小鼠的电针镇痛与吗啡镇痛呈正相关性;(5)纳洛酮翻转:剂量为1mg.kg-1的纳络酮能翻转2Hz电针效果;而翻转100Hz电针效果,则需剂量为25mg.kg-1的纳络酮.结论:小鼠电针镇痛存在品系(遗传背景)和性别差异.阿片受体参与了小鼠电针镇痛,低频和高频电针镇痛分别由不同亚型的阿片受体介导.
作者：黄诚；万有；王晓民；韩济生 刊期： 1999年第03期
原发性帕金森病(Parkinson disease,PD)是神经系统变性性疾病,病因不清.10多年前发现1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶能通过抑制线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ导致PD[1],国外陆续有报道PD患者黑质、血小板、骨骼肌等多种组织存在线粒体酶复合体功能障碍[2～4].弄清酶复合体缺陷产生的原因,对认识PD病因与发病具有重要意义.
作者：高枫；陈清棠 刊期： 1999年第03期
北京大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：北京大学
