学术投稿

人血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌中的表达

王雅梅;祁雅慧;司杨;殷红;武文琦

关键词:血管内皮细胞生长因子, 融合蛋白, 诱导表达
摘要:应用DNA重组技术,将编码人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)的基因插入到原核表达载体pET32M中,与载体中的硫氧还蛋白(相对分子质量约1.4万)基因融合.经双酶切鉴定、序列测定及工程菌初步表达分析,表明该重组质粒在大肠杆菌BL21中有明显表达.表达的硫氧还蛋白-VEGF融合蛋白的相对分子质量约为3.2万,主要以包涵体形式存在,也有少量重组蛋白为可溶性蛋白,Western印迹实验和生物活性分析证实可溶性的重组蛋白具有hVEGF的抗原性和促血管生长活性.
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  • 心脏机械电反馈的特点及其有关机制研究

    许多研究表明扩张或牵拉心肌组织可导致心脏电生理的改变,这一现象被称为心脏机械-电反馈[1,2].研究心脏机械-电反馈在技术上存在一定的难度.首先,将玻璃微电极插入在体心脏和离体心肌条的细胞时,常常由于心脏的跳动或组织的牵拉导致电极尖端脱离细胞,因而很难在一个细胞上连续记录动作电位.其次,体表心电图也不能精确而具体的反映出机械牵拉引发的心脏电生理改变.近年来,单向动作电位(MAP)记录技术趋于成熟,应用该技术可获得有关心肌动作电位,特别是复极过程的信息.MAP技术已经成为在完整的心脏上研究心脏机械-电反馈一个重要方法.此外,应用膜片钳和分子生物学技术分别鉴定牵张激活的离子通道和克隆牵张离子通道,更有助于进一步阐明机械-电反馈的分子机制[3,4].本文拟对牵张引起的心脏电生理的改变及相关的研究作一简要叙述.

    作者:李延海;钮伟真 刊期: 2003年第02期

  • 一氧化氮的胰腺保护作用与胰腺组织磷脂酶A2活性的关系

    为探讨内源性一氧化氮(NO)对实验性急性坏死性胰腺炎的作用及其与胰腺组织磷脂酶A2(PLA2)活性的关系,以5%牛磺胆酸钠溶液胰胆管注射(1 mL/kg)制成大鼠急性坏死性胰腺炎模型,以L-硝基精氨酸(L-NNA)为内源性NO的阻断剂,观察内源性NO对胰腺损伤程度和胰腺组织PLA2活性的影响.发现牛磺胆酸钠胰胆管注射可造成胰腺组织明显的水肿和坏死,部分大鼠发生胰腺实质内出血,但胰腺组织内PLA2的活性并没有显著变化.以L-NNA阻断内源性NO明显加重胰腺损伤,却对胰腺组织局部的PLA2活性没有影响.结果提示:内源性NO具有胰腺保护作用,但其保护作用可能与胰腺组织局部的PLA2活性无关.

    作者:张在兴;孙家邦;李非;张淑文;崔叶青;孙海晨;刘爽 刊期: 2003年第02期

  • 神经干细胞接种密度对其增生和分化的影响

    为探讨神经干细胞不同接种密度对其增生和分化的影响,取10~12周龄胎儿的大脑皮质用胰酶消化获得单细胞,分别以1×102/mL、1×104/mL和1×106/mL的细胞密度接种,用无血清培养基DMEM/F12、上皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和白血病抑制因子(LIF)培养;用MTT法测OD值并观察神经干细胞的存活和增生情况.从培养基中剔除生长因子,继尔以10%胎牛血清诱导分化,用免疫细胞化学(ICC)方法,研究不同细胞密度培养后神经干细胞的分化能力.结果:在1×106/mL细胞密度下培养,神经干细胞增生活跃,形成神经球,Nestin表达阳性,10%胎牛血清诱导后神经干细胞可分化为神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞;低细胞密度(低于1×104/mL)培养不利于神经干细胞的存活和增生,血清诱导未见分化的细胞.提示:适宜的神经干细胞接种密度有利于其增生和分化.

    作者:张泽舜;历俊华;张亚卓;王忠诚 刊期: 2003年第02期

  • 人血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌中的表达

    应用DNA重组技术,将编码人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)的基因插入到原核表达载体pET32M中,与载体中的硫氧还蛋白(相对分子质量约1.4万)基因融合.经双酶切鉴定、序列测定及工程菌初步表达分析,表明该重组质粒在大肠杆菌BL21中有明显表达.表达的硫氧还蛋白-VEGF融合蛋白的相对分子质量约为3.2万,主要以包涵体形式存在,也有少量重组蛋白为可溶性蛋白,Western印迹实验和生物活性分析证实可溶性的重组蛋白具有hVEGF的抗原性和促血管生长活性.

    作者:王雅梅;祁雅慧;司杨;殷红;武文琦 刊期: 2003年第02期

  • 白大衣高血压在不同类型人群中的发生率

    通过诊室血压测量和24 h动态血压监测,将患者分为白大衣高血压组和持续性高血压组,分别观察白大衣高血压在初诊高血压人群中的发生率,在各年龄组中的发生率,收缩期高血压、舒张期高血压和双期高血压中白大衣高血压的发生率.结果:白大衣高血压的发生率为28%,女性高于男性;单纯收缩期高血压中,白大衣高血压发生率较高.提示:白大衣高血压的发生率较高;对于初诊的高血压患者,尤其是女性、单纯收缩期高血压者,应注意鉴别发生白大衣高血压的可能性.

    作者:李静;华琦 刊期: 2003年第02期

  • AGEs与葡萄糖浓度对血管内皮细胞增生的影响

    为研究非酶促糖化终末产物(AGEs)和不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞增生的影响,用氚标记胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法,测定不同浓度葡萄糖、AGEs以及抗氧化剂(维生素E)对血管内皮细胞增生的影响.结果:11 mmol/L葡萄糖加AGEs(5 mg/L)、30 mmol/L葡萄糖、11 mmol/L葡萄糖+AGEs+维生素E组的血管内皮细胞的2 h3H-TdR掺入量分别为对照组的4.69倍(P<0.01)、2.15倍(P<0.05)和1.46倍(P<0.05).提示:高糖和AGEs均能直接刺激血管内皮细胞增生,高糖及AGEs同时存在时更为明显,而抗氧化剂维生素E则抑制内皮细胞增生.

    作者:陈惠;田密;韩彩和;张京;乌晴 刊期: 2003年第02期

  • 低钾型周期性麻痹患者血清肌酸激酶水平与临床症状的关系

    回顾性分析低钾周期性麻痹患者的血清肌酸激酶(CK)、电解质等各项检查的结果,相关电生理和临床各项指标,并分析它们之间的关系.发现:CK增高组和正常组的肌力、肌痛、血清钾、U波和病程存在显著性差异;低血钾周期性麻痹首发患者CK易升高.CK的增高在一定程度上反映了骨骼肌的受损程度,且与患者的预后有关.

    作者:潘华;尹学红;王拥军 刊期: 2003年第02期

  • 672例学龄儿童血脂和血糖与单纯肥胖症的相关性调查

    为了解6~12岁儿童血脂和血糖代谢的状况及其与单纯肥胖症的相关性,选择北京市长椿街地区在校小学生672名,均测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FBG)、身高和体质量.应用SPSS软件包进行统计学处理.发现:672例6~12岁儿童的TC、TG和FBG浓度分别为(4.66±0.52) mmol/L、(1.97±0.22) mmol/L、(4.25±0.96) mmol/L.其中TC 4.68~5.17 mmol/L占30.3%,5.20~5.69 mmol/L占21.9%,≥5.72 mmol/L占17.3%;TG≥1.65 mmol/L占10.0%;FBG≥6.05 mmol/L占7.8%.男女学生的TG、TC、FBG比较无统计学差别.TC、TG、FBG与儿童的年龄呈正相关.超重和肥胖儿童的TG、TC平均水平显著高于正常儿童.TG、TC与FBG之间存在两两正相关的关系.提示:超重和肥胖者在学龄儿童期即可出现脂类代谢异常.

    作者:华丛笑;华琦 刊期: 2003年第02期

  • 重症急性胰腺炎合并深部真菌感染的治疗经验

    为分析重症急性胰腺炎(SAP)合并深部真菌感染的临床特点、危险因素及预后,并探讨其防治的策略,回顾性分析85例SAP合并感染的临床资料,其中43例合并真菌感染,42例为单纯细菌感染.研究发现2组的年龄、性别、病因、ICU住院时间均无显著性差异;真菌感染组较细菌感染组APACHE Ⅱ评分及CT分级高,发生菌群紊乱、腹压增高及器官障碍的概率高、手术次数多,且均有显著性差异.真菌组的病死率约是细菌组的2倍多(44.19%比21.43%).结果提示:合并真菌感染病死率明显增高;APACHE Ⅱ评分、CT分级、菌群紊乱、腹压增高、手术次数是真菌感染发生的危险因素;当发现不明原因的发热、意识改变及大出血时应怀疑合并真菌感染的可能;预防性抗真菌药物的应用可能有助于防治真菌感染.

    作者:卫文栋;孙家邦;李非;朱斌;陈宏;贾建国 刊期: 2003年第02期

  • 重症急性胰腺炎并发急性呼吸窘迫综合征的临床特点与治疗探讨

    为探讨重症急性胰腺炎(SAP)并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的临床特点及治疗方法,回顾性分析我院SAP患者246例.总结SAP并发ARDS患者的发生率、发生时间、临床表现、血气变化、X线胸片以及治疗和预后情况,并将SAP患者分为ARDS组和无ARDS组进行比较.结果:SAP并发ARDS的发生率为27.6%,73.5%发生于SAP发病3 d内或术后3 d内;SAP并发ARDS的临床特点是:发生时间早,起病急,主要表现为呼吸频率增加[(36.76±0.92)次/min],部分患者(39.7%)表现为典型的呼吸窘迫;血气分析提示酸碱失衡以呼吸性碱中毒和呼吸性碱中毒合并代谢性酸中毒多见(89.7%).高三酰甘油血症、高APACHE-Ⅱ评分、腹腔高压征、手术是ARDS的易患因素.积极处理高三酰甘油血症、腹腔高压征,严格掌握手术指征,合理应用呼吸机可能对SAP并发ARDS患者治疗有效.

    作者:林栋栋;李非;孙家邦;刘大川;朱斌篌 刊期: 2003年第02期

  • 174例聋幼儿助听效果动态观察

    为评价聋幼儿配戴助听器后语言分辨能力,使用全国聋儿听觉言语康复评估题库中听觉评估内容评估助听效果.经3个学期跟踪观察,声场下助听音频测试助听补偿范围无明显差异(P>0.05);大言语识别率有显著性差异(P<0.01).结论:1)聋幼儿配戴助听器后必须经过听觉言语训练,才能逐步建立起助听后阈上听觉功能.2)言语测听为听觉言语康复训练提供直接重要的评价指标.

    作者:邹建华 刊期: 2003年第02期

  • 高胆红素血症新生儿血清β2-MG的测定

    测定高胆红素血症新生儿32例和正常新生儿25例的血清β2微球蛋白(β2-MG)的质量浓度.观察高胆红素血症对新生儿肾脏滤过功能的可能影响.

    作者:陈升平 刊期: 2003年第02期

  • MT启动子控制的GFP基因在CHO细胞中的诱导表达

    用羊金属硫蛋白(MT)启动子构建含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的真核表达载体,经脂质体介导在培养的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中进行诱导性表达.结果:构建的GFP基因表达载体能在CHO细胞中进行表达,用硫酸锌诱导可提高GFP的表达量.

    作者:孙丽翠;祁雅慧;仲峰 刊期: 2003年第02期

  • 基于CT图像的鼻部解剖结构三维重建

    为了给可视化虚拟人体模型的建立探索一种精确的重建方法和显示手段,同时也为医疗工作者提供一种更为细致、完全和快捷的观察方案,利用3D Slicer软件实现鼻部解剖结构的三维可视化.分别对单层切片进行感兴趣区的轮廓提取,将处理后的体数据导入3D Slicer,选择阈值进行进一步的图像分割,产生感兴趣区的标志图(label maps),并根据标志图重建出组织的三维表面模型;还可以显示不同结构之间的毗邻关系与空间定位.结果表明,基于CT图像和用3D Slicer软件对鼻部解剖结构的三维重建是有效的.

    作者:董硕;刘莎;杨本涛;罗述谦 刊期: 2003年第02期

  • 应用组织工程方法修复大鼠周围神经损伤的研究

    采用雪旺细胞和壳聚糖复合胶原导管,构建组织工程化人工神经,修复大鼠坐骨神经20 mm缺损,拟探索一种实验性提高周围神经损伤后修复的质量和速度的方法.术后8周、12周,通过大体观察、组织学染色、神经示踪等技术进行评价.结果表明,术后8周、12周实验组大鼠新生的神经纤维已通过缺损部位,手术局部未出现明显的排斥反应;实验组各项指标优于对照组Ⅱ及对照组Ⅲ,与对照组Ⅰ相近.结果提示:组织工程化人工神经对缺损的坐骨神经修复具有良好的桥梁作用和促进神经生长的作用.

    作者:李晓光;杨朝阳;张皑峰;蔡青;鲁强;姬曼;徐群渊;刘岩 刊期: 2003年第02期

  • 结肠双对比造影术前不同导泻药清肠效果对照分析

    为比较硫酸镁与番泻叶的临床应用效果及探讨两者优选问题,对结肠造影术前用硫酸镁组与番泻叶组各50例进行对照分析.结果:术前用药无明显临床反应者硫酸镁组45例(90%),番泻叶组32例(64%),前者显著高于后者(P<0.01);X线全结肠无粪便者硫酸镁组40例(80%),番泻叶组28例(56%),前者显著优于后者(P<0.05).提示:硫酸镁宜列为术前导泻的首选用药.

    作者:杜兴亚;齐忠政 刊期: 2003年第02期

  • 婷美减肥美容胶囊的安全性及减肥作用探讨

    对婷美减肥美容胶囊进行了毒理学安全性评价.结果:急性经口LD50为10 g/kg,Ames试验、骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸变试验均为阴性,30 d喂养试验4.50 g/kg组(相当于人群推荐量0.045 g/kg的100倍)雄鼠体质量增长缓慢,增加质量、饲料摄入量、食物利用率及游离脂肪酸均明显低于阴性对照组,平均每日排便量、胃、睾丸的脏体比明显高于阴性对照组,未发现对血液学指标、生化指标、肝肾功能,蛋白、脂肪、糖的代谢有明显影响.表明受试物除影响体质量增长外,无其他有害影响.

    作者:郭建强;齐娜;苏忆兰;陈振良;蒋致诚 刊期: 2003年第02期

  • 2型糖尿病患者瞬目反射的改变

    为探讨2型糖尿病患者瞬目反射(BR)的改变及其影响因素,用肌电图仪测定85例2型糖尿病患者左右两侧的R1、R2、R2′波的潜伏期、波幅,将其均值分别与正常值做对比;并将病人分为BR阳性组与阴性组进行分析.发现2型糖尿病患者左右两侧R1、R2、R2′各反应波潜伏期均值与正常值相比均有不同程度的延长,有显著差异(P<0.001).BR阳性组与阴性组的年龄和病程均存在显著差异(P<0.05和P<0.01).且病程越长,BR各值的变化越明显,两者间存在一定相关性.由此可见2型糖尿病可对患者造成一定程度的中枢神经系统损害,影响脑干功能.2型糖尿病的病程与BR的潜伏期变化程度存在一定相关性.不同病程的病人其BR异常率不同,随病人病程的延长BR异常率也逐渐增高.结果提示:BR可为2型糖尿病合并中枢神经系统损害提供客观而灵敏的指标.

    作者:李萍;刘莉;白勤;乔慧 刊期: 2003年第02期

  • 莪棱舌草I号对人肝癌细胞抑制作用的研究

    运用MTT比色实验测定细胞增生能力,通过球体细胞培养、细胞生长曲线的测定以及细胞形态结构的观察,研究抗癌药莪棱舌草I号对人肝癌细胞(7721细胞)的抑制作用.结果:莪棱舌草I号使7721细胞的增生能力明显下降(抑制率高达70%以上),细胞球体明显减小甚至解体,细胞形态明显改变.这种抑制作用可能是莪棱舌草I号对肝癌细胞产生杀伤作用的机制之一.

    作者:谢文杰;刘欣;王喆;王娜;付桂芳;张瑾峰 刊期: 2003年第02期

  • 小鼠常压低氧舱的制作与应用

    低氧动物模型可广泛用于航空航天研究、水下作业,高原环境所致的低压低氧性疾病、心脑血管疾病和肺疾病等常压低氧性疾病的研究.国内制作低氧动物模型的低氧舱费用较为昂贵,操作也比较烦琐[1,2].本着实用的原则,我们设计制作了一种简易的小鼠常压低氧舱.

    作者:曾晓蓓;李宝红;孙海梅;瓦龙美 刊期: 2003年第02期

首都医科大学学报杂志

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