学术投稿

用于膜片钳研究的大鼠背根神经节细胞急性分离技术的改良

邱方;刘艳红;姜雨鸽;张树卓;刘晓燕;米卫东

关键词:神经节, 脊髓, 细胞培养, 膜片钳
摘要:目的 通过技术改良,进一步摸索适于膜片钳实验的成年大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞的急性分离方法.方法 应用显微外科技术获取成年大鼠DRG,采用改良的双酶顺序消化(先胶原酶,后胰蛋白酶)及双血清(胎牛血清+马血清)共同培养法,急性分离培养DRG.倒置显微镜下观察神经元的形态,选取已贴壁的细胞,用全细胞膜片钳技术记录其基本膜电生理特性.加入河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)后再次记录DRG神经元的钠离子电流变化.结果 本实验可获得形态良好、结构完整的单个DRG神经元,表面光亮,胞膜完整清晰,呈圆形或椭圆形.其静息膜电位为(55.22±4.39)mV,加入TTX后可记录到缓慢失活的河豚毒素不敏感(tetrodotoxin-resistant,TTX-r)的钠离子电流.其中,中等直径DRG神经元高阻封接成功率为73.2%,高于小直径和大直径DRG神经元的封接成功率(P<0.05).结论 经改良的DRG急性分离方法分离效率高、可操作性强.分离得到的中等直径DRG神经元状态良好,更适合膜片钳实验.
北京医学杂志相关文献
  • 喉罩置入和视可尼喉镜气管插管在全麻诱导期对循环和BIS影响的比较

    目的 比较全麻诱导期喉罩置入和视可尼气管内插管对患者心血管反应和脑电双频指数(BIS)的影响.方法 选择择期行鼻内窥镜全麻手术的患者60例,ASA Ⅰ~Ⅱ级,随机分为喉罩置入组(Ⅰ组)和视可尼气管插管组(Ⅱ组),每组30例.麻醉诱导和维持采用靶控输注丙泊酚和瑞芬太尼全静脉麻醉.比较各组患者诱导前(T1),诱导后(T2),喉罩置入或视可尼气管插管后即刻(T3)、1 min (T4)、3 min (T5)、5 min (T6)时平均动脉压(MAP)、心率(HR)、BIS值的变化.结果 Ⅰ组喉罩置入前后MAP、HR、BIS值组内比较差异无统计学意义(P>0.05);Ⅱ组T3、T4、T5的MAP、HR较R时点差异无统计学意义(P>0.05),但BIS值明显升高(P<0.05),且在T3、T4、T5时明显高于Ⅰ组(P<0.05).结论 在相同麻醉深度下,全麻诱导期使用喉罩置入或视可尼气管内插管均可保持患者循环系统稳定,但视可尼气管内插管可使中枢神经兴奋性增高.

    作者:纪方;陈磊;舒洛娃 刊期: 2012年第08期

  • 乌司他丁及氨甲环酸联合应用抑制瓣膜置换术患者炎性因子及粒细胞弹性蛋白酶的临床研究

    目的 研究乌司他丁和氨甲环酸单独或联合应用在体外循环(CPB)心脏瓣膜置换手术中对炎性细胞因子及中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的影响.方法选择择期体外循环下行瓣膜置换术患者120例,随机分为空白对照组(C组)、氨甲环酸组(T组)、乌司他丁组(U组)以及联合用药(氨甲环酸+乌司他丁)组(D组),每组30例,分别给予生理盐水、氨甲环酸、乌司他丁及联合应用氨甲环酸及乌司他丁.于麻醉诱导后(T1)、转流开放升主动脉后(T2)、停机1 h(T3)、停机24 h(T4)4个时点经桡动脉抽取动脉血,测定血浆肿瘤坏死因子α(NF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和NE的浓度.结果 各组患者血浆TNF-α、IL-6和NE的浓度,在T2~T4时点与CPB前比较均显著增加(P<0.05);T2~T4时点U组和T组血浆TNF-α和IL-6浓度显著低于其他各组(P<0.05).结论 乌司他丁能抑制CPB过程中炎性介质的释放,减轻体外循环期间炎症反应.氨甲环酸具有轻微抗炎性反应.在心脏瓣膜置换手术中联合应用乌司他丁和氨甲环酸可抑制炎性反应.

    作者:陈婷婷;王刚;周琪;张凌 刊期: 2012年第08期

  • 13C呼气试验评价膳食纤维对人体碳水化合物吸收的影响

    目的 采用13C呼气试验和血糖测定的方法评价非水溶性膳食纤维对健康成年人碳水化合物吸收的影响,比较其敏感度.方法 入选10例中国健康成年受试者,随机分成2组.采用开放、双周期、交叉试验设计,在每个试验周期,受试者分别服用无膳食纤维或高膳食纤维试验餐,采集空腹和餐后系列时间点血样和呼气样本,测定血糖和13CO2丰度.两个周期间隔1d的清洗期.结果 高膳食纤维组的餐后血糖峰值低于无膳食纤维组,达峰时间延迟,但差异无统计学意义(P>0.05);餐后0~3 h血糖曲线下面积在两组间差异无统计学意义(P>0.05);13C呼气试验结果与血糖代谢动态变化趋势一致,但13C丰度变化曲线清晰显示膳食纤维对人体对碳水化合物吸收的作用(高纤维膳食组650.35 delta.min,无纤维膳食组723.31 delta.min).结论 与血糖测定相比,13C呼气试验能够更加灵敏地反映膳食纤维对人体碳水化合物吸收的影响.

    作者:江旻;王洪允;李宁;胡蓓;江骥 刊期: 2012年第08期

  • 老年患者麻醉中的呼吸管理

    呼吸系统功能异常是老年患者围术期病死率和并发症发生率增加的重要原因之一.衰老所致的解剖和生理变化以及呼吸系统并存疾病所致的病理生理改变均是其诱因.衰老所致呼吸功能变化包括:①通气能力下降.

    作者:米卫东 刊期: 2012年第08期

  • 老年人日间手术麻醉

    老年人对家人和生活环境的依赖性强,更易于接受日间手术的治疗模式.日间手术以其高效简捷的流程、微创技术的应用、术后恢复的有效控制及整体医疗费用的降低等优势对老年日间手术的开展起到了积极的作用.

    作者:李天佐 刊期: 2012年第08期

  • 医学模拟系统在麻醉教学中的应用及进展

    教学是医学模拟应用重要和广泛的领域.医学模拟教育是一种以“模拟”来代替“真实”进行教学的教育方式,利用仿真模型,参照医学学科的教学考核内容,模仿出人的正常结构、机能,疾病表现、演变、诊疗过程,创设出模拟患者、模拟临床现场(病房、手术室等)乃至模拟医院,代替真实患者、真实临床场景进行教学、实践训练和能力评估,从而以更科学化、更人性化、更贴近临床环境和更符合医学伦理学的方式培养和培训医学生的实践能力.

    作者:赵磊;王天龙;肖玮;薛纪秀 刊期: 2012年第08期

  • 心肌炎患者治疗前后SOD的水平变化及其临床意义

    在心肌炎的病理过程中,自由基导致的脂质过氧化反应起重要作用.研究表明,血红细胞超氧化物歧化酶(SOD)值可以作为心肌炎患者诊断和疗效评价的辅助指标[1].为此,我们于2010年1月至2011年6月测定心肌炎患者治疗前后血清中SOD的变化,并探讨病毒性心肌炎与SOD水平变化的关系,报告如下.

    作者:成红芬;杨现国 刊期: 2012年第08期

  • 超声预测剖宫产孕妇硬膜外腔穿刺深度的临床研究

    目的 研究超声测量的硬膜外腔深度与实际穿刺深度的相关性,探讨采用超声预测硬膜外腔穿刺深度的可行性.方法 选取30例椎管内麻醉下行择期剖宫产的孕妇.麻醉穿刺前使用超声测量皮肤至硬膜外腔的深度,比较实际穿刺深度(ND)和超声测量深度(UD),分析两者的相关性和一致性.结果 实际穿刺深度[(5.54±0.72)cm]与超声测量深度[(5.12±0.72)cm]差异有统计学意义(P<0.05),两者呈直线相关,相关系数r=0.93(P< 0.05).直线回归方程为ND=0.76+0.93 UD(R2=-0.87,P<0.05),95%一致性界限为-0.1~0.94 cm.结论 超声测量硬膜外腔深度与实际穿刺深度呈直线相关,可以用于预测硬膜外腔穿刺深度.

    作者:王前;尹橙;王天龙 刊期: 2012年第08期

  • 左氧氟沙星联合化疗治疗初治涂阳肺结核病犯的临床疗效观察

    观察左氧氟沙星与化疗联合用于初治涂阳肺结核病犯的治疗效果,报告如下.对象与方法1.一般资料:收集2002年12至2011年12月在北京市金钟监狱传染病分监区就诊的肺结核患者120例,均为男性,年龄18~65岁,中位年龄38岁.所有病例均为临床确诊的初治涂阳肺结核患者,符合中华医学会结核病学分会肺结核诊断和治疗指南的诊断标准[1].

    作者:陈建华 刊期: 2012年第08期

  • 3681例肛肠手术改良骶管阻滞效果分析

    目的 分析改良骶管阻滞的麻醉效果.方法 3681例行改良骶管阻滞的患者,俯卧或侧卧位下用带7号针头的5ml注射器穿刺,突破骶尾韧带,回抽无血液无脑脊液,注药阻力小,患者局部或放射状酸麻胀感,皮下无气肿即可判断为穿刺成功,一次性注入1%利多卡因15~20 ml及0.375%~0.5%罗哌卡因5~10 ml,总量约25 ml,记录麻醉平面、麻醉效果分级等,常规监测血压(BP)、脉搏(P)、脉搏血氧饱和度(SpO2)、呼吸频率(RR)、心电图(ECG)等,咪达唑仑镇静至RamsayⅢ~Ⅳ级.结果 麻醉效果达Ⅰ级者2869例(77.94%)、Ⅱ级者597例(16.22%),共3466例,总成功率为94.16%;轻度局麻药毒性反应反应176例(4.78%).结论 改良骶管阻滞麻醉效果确切,不良反应少,可作为肛肠手术的首选麻醉方法.

    作者:何金哲;袁建虎;杨茜芳 刊期: 2012年第08期

  • 怀柔地区临床分离300株念珠菌分布情况及耐药性分析

    不同菌种的念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性存在较大差异,菌株鉴定对避免盲目经验用药尤为重要.现回顾分析2010年1月至2011年12月期间我院临床送检标本中分离出的300株念珠菌的菌种构成及药敏试验结果,报告如下.

    作者:肖志忠 刊期: 2012年第08期

  • 脑电双频指数指导下全麻白内障儿童拔出喉罩时机的研究

    目的 研究在脑电双频指数(BIS)指导下,对七氟醚麻醉的儿童拔出喉罩的时机进行研究.方法 45例ASA Ⅰ级、年龄4~6岁、拟在全身麻醉下行择期手术的患儿,随机分为3组,每组15例.七氟醚诱导成功后置入喉罩,术中采用七氟醚和O2维持麻醉.手术结束后停止吸入七氟醚,Ⅰ组在BIS值65~60时拔出喉罩,Ⅱ组在BIS值60~55时拔出喉罩,Ⅲ组在BIS值55~50时拔出喉罩,拔出喉罩同时记录呼气末七氟醚浓度.拔出喉罩时或拔出后1 min内患儿出现咳嗽、牙齿咬紧致拔管困难、有目的性的肢体运动、屏气、喉痉挛、低氧血症(SpO2<95%)都认为拔出喉罩不满意;无上述现象则视为拔出喉罩满意.结果 3组满意度分别为40%(6/15)、80%(12/15)、20%(3/15);拔出喉罩时,七氟醚浓度分别为(1.03±0.11)%、(131±0.12)%、(1.51±0.14)%;Ⅱ组患儿的拔出喉罩情况更能满足实际需要.结论 在BIS 55~60之间可以减少拔出喉罩过程中潜在的并发症,提高麻醉安全.

    作者:裴春明;李天佐 刊期: 2012年第08期

  • 地佐辛、舒芬太尼在开腹全子宫切除术后静脉自控镇痛效果的对比研究

    目的 比较地佐辛与舒芬太尼自控静脉镇痛(PCIA)的效果和不良反应.方法 60例全子宫切除术患者,年龄36~70岁,ASA I~Ⅱ级,随机分为两组.术后A组PCIA采用地佐辛40 mg+昂丹司琼8.0 mg,稀释于100ml生理盐水中;B组PCIA采用舒芬太尼100 μg+昂丹司琼8.0 mg,稀释于100 ml生理盐水中,于术后6、12、24、48 h采用视觉模拟评分法(VAS)评定镇痛效果及不良反应.结果 两组患者术后48 h内VAS评分差异均无统计学意义.两组患者术后恶心(10.0%vs.13.3%)、呕吐(3.3%vs.6.7%)、皮肤瘙痒(0 vs.6.7%)的发生率及排气时间[(23.6±2.5)hvs.(19.9±3.2)h]差异均无统计学意义.结论 地佐辛PCIA镇痛效果确切,安全可靠.

    作者:肖莉;赵斌江 刊期: 2012年第08期

  • 2469例日间手术的麻醉管理

    目的 探讨日间手术麻醉管理的具体实施方法和效果.方法 回顾分析2010年5月至2012年4月在我院接受日间手术的患者资料,包括手术科室、手术种类、麻醉方法、术后麻醉恢复情况等.结果 2469例接受全麻下日间手术患者中,腹腔镜胆囊切除术2173例、宫颈锥切术183例、宫腔镜检查术113例.2299例于手术结束当日或次日出院.延迟出院170例,主要原因为心理因素65例,恶心、呕吐36例,腹腔引流37例,中转开服(或腹腔镜)11例,术后疼痛14例,发热7例.麻醉效果及术后麻醉恢复情况满意.结论 日间手术的开展能够明显缩短患者住院天数、节省医疗资源,同时推行安全、合理、规范的日间手术围术期麻醉管理措施以保证日间手术的顺利进行.

    作者:刘阳;冯泽国;冯龙;张宏;米卫东;王爱国 刊期: 2012年第08期

  • 术前预防性抗菌药物使用管理的难点分析与对策

    抗菌药物是医院内使用广泛的药物,但抗菌药物的使用在相当长的时间内并不规范.为了解围手术期患者抗菌药物应用情况,贯彻落实《抗菌药物临床应用指导原则》[1],加强抗菌药物使用管理,控制医院感染的发生,我们从2009年8月起对手术科室术前抗菌药物使用进行集中管理,现就遇到的难点及采取的对策总结分析如下.

    作者:张苓;王天龙 刊期: 2012年第08期

  • WHO手术安全核查单应用中存在的问题与对策

    卫生部2008年医院管理年活动方案明确提出了中国的“病人安全八项目标”,其中就有手术核对的要求.北京协和医院翻译了世界卫生组织(WHO)的手术安全核对单,于2009年4月应用于临床.但并未对手术安全核查单的使用情况进行研究.2010年卫生部明确要求各级医院施行手术安全核查.

    作者:张亚军;张久越;赵诗斌;井玲;杨晓蓉 刊期: 2012年第08期

  • 下肢神经阻滞复合喉罩全麻用于老年患者全膝关节置换术的临床观察

    目的 评价下肢神经阻滞复合喉罩全麻在老年患者全膝关节置换术中应用的麻醉效果.方法 择期行单侧全膝关节置换术的老年患者60例,年龄65~87岁,体重53~102 kg,ASAⅡ~Ⅲ级,随机分为气管插管全麻组(T组)和神经刺激器引导下肢神经阻滞复合喉罩全麻组(L组),每组30例.T组行常规气管插管全身麻醉,L组在神经刺激器引导下实施下肢神经(腰丛-坐骨神经)阻滞后置入喉罩全麻.记录麻醉前(T1)、气管插管或喉罩置入即刻(T2)、手术切皮(T3)、屈膝剥离骨膜(T4)、拔气管导管或取出喉罩即刻(T5)等时间点的心率(HR)、平均动脉压(MAP);记录手术时间、止血带时间、术中全身麻醉药用量、术毕苏醒时间、拔气管导管或取出喉罩时间以及术后恶心呕吐、咽喉疼痛的发生情况等.结果 T2、T3、T4、T5时间点T组的HR均显著快于L组(P均<0.01),MAP均显著高于L组(P均<0.01);T组术中异丙酚用量、芬太尼使用总量及术后24h内患者自控镇痛(PCA)药物用量均显著高于L组(P均<0.01);术毕苏醒时间及拔气管导管或取出喉罩时间T组显著长于L组,T组术后恶心呕吐(PONV)和咽喉疼痛的发生率显著高于L组(P均<0.01).结论 下肢神经阻滞复合喉罩全麻可以安全有效地应用于老年全膝关节置换术,其生理干扰轻微并能提供良好的术后镇痛效果,并发症少.

    作者:公茂伟;袁维秀;赵颖;张永强;米卫东 刊期: 2012年第08期

  • 血液稀释联合局部亚低温对大鼠全脑缺血/再灌注损伤的影响

    目的 观察血液稀释联合局部亚低温对大鼠全脑缺血/再灌注损伤的影响.方法 40只雄性SD大鼠随机分为缺血/再灌注损伤组(I/S)、局部亚低温组(MH)、急性等容性血液稀释组(NH)和局部亚低温联合急性等容性血液稀释组(MHNH),每组10只.血液稀释后3h处死大鼠,采用ELISA法测定血清S-100B的浓度,采用干湿重法测定大脑半球的含水量,应用电镜观察脑皮质神经元超微结构.结果 与I/S组比较,其他3组大鼠血清S-100B浓度、脑含水量明显下降(P<0.05),MHNH组低,皮质神经元损伤轻.结论 急性等容性血液稀释联合局部亚低温后大鼠血清S-100B的浓度明显下降,对缺血/再灌注损伤大鼠有保护作用.

    作者:马淑敏;张析哲;孙义 刊期: 2012年第08期

  • 改良Bentall术对马凡综合征主动脉根部瘤的治疗效果

    目的 评价改良Bentall手术对马凡综合征主动脉根部瘤的临床治疗效果.方法 1999年7月至2009年8月共收治36例马凡综合征主动脉根部瘤患者,其中16例采用常规Bentall术(CG组),20例采用改良Bentall术(MG组),比较两组临床效果.结果 CG组住院死亡1例(6.3%),MG组无死亡病例.MG组术中失血量少于CG组[(428.0±66.8)ml vs.(839.5±95.4)ml)],差异有统计学意义(P<0.05).MG组患者主动脉阻断时间、转机时间、手术操作时间均较CG组短,但差异无统计学意义(P>0.05).MG组患者术后12h引流较CG组少[(420.6±236.4)ml vs.(615.3±259.6)ml],差异有统计学意义(P<0.05).MG组患者围术期输注悬浮红细胞量为(2.0±0.8)U,较CG组少[(4.8±2.1)U,P< 0.05].随访2~98个月,两组均无死亡病例,每组各有1例患者接受二次手术.结论 改良Bentall手术可以减少患者手术失血量,缩短手术时间,中期随访临床效果良好,可安全用于马凡综合征主动脉根部瘤的外科治疗.

    作者:杨传瑞;周其文;张建群;张志忠;白涛;黄信生;乔志钰;张方;马杰;李大连;郭建中;程智广;崔永超;高翔;杨峰;李阳;李莹莹 刊期: 2012年第08期

  • 缺血预处理对离体缺血心脏跳动时间影响的实验研究

    目的 探讨缺血预处理对心肌缺血耐受的影响.方法 将28只SD大鼠随机分为缺血预处理组和对照组,每组14只.两组大鼠复制离体心脏灌注动物模型,缺血预处理组采用5 min缺血、10 min灌注,反复3次;对照组大鼠常温灌注45 min,2组大鼠均心脏常温缺血30 min.测定2组大鼠心脏缺血后跳动时间,于缺血前和缺血30 min测定心肌ATP含量、Na+-K+-ATP酶活性.结果 缺血预处理组心脏缺血后跳动时间较对照组明显延长[(14.3±3.6)min vs. (9.5±2.5)min,P<0.05],缺血后心肌ATP含量低于对照组[(275±43)nmol/g vs. (358±65)nmol/g,P<0.05],但缺血后2组间Na+-K+-ATP酶活性的差异无统计学意义.结论 缺血预处理能提高心肌能量利用能力,延长缺血后心脏缺血跳动时间.

    作者:潘楚雄;李天佐;袁克志;张炳熙 刊期: 2012年第08期

北京医学杂志

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主管:北京市卫生局

主办:中华医学会北京分会