学术投稿

单纯疱疹病毒2型ICP4基因荧光实时定量PCR检测方法的建立

刘继峰;关翠萍;唐旭;徐田红;许爱娥

关键词:单纯疱疹病毒2型, ICP4, 实时定量荧光PCR, 标准曲线
摘要:目的 建立实时荧光PCR定量检测单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因的方法.方法 依据HSV2 ICP4基因序列设计引物.PCR纯化后克隆到pMD-18T载体上进行测序,抽提重组质粒作为标准品.根据测序结果设计荧光定PCR的引物和探针,质粒标准品10倍稀释后进行扩增,建立标准曲线,并进行灵敏度和可靠性分析.结果 测序结果显示在扩增的PCR片段中有在A-G无和T-C的无义突变.标准品101以下没有检测信号,101具有明确的检测信号,因而检测的灵敏度为10.可靠性测定结果:107-101进行10次重复Ct值的平均值分别为14.275±0.137、17.988±0.162、22.081±0.259、25.957±0.345、29.565±0.203、33.269±0.287、37.737±0.698,变异系数分别为0.965%、0.902%、1.174%、1.329%、0.686%、0.862%、1.851%.Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系.回归系数为0.998.结论 成功建立了HSV2 ICP4基因实时定量荧光PCR检测的方法,灵敏度高,重复性好,可用于HSV2 ICP4基因的定量分析.
医学研究杂志相关文献
  • P53-P21-Rb信号通路在缺血再灌注损伤后期肾小管上皮细胞衰老中的作用

    目的 研究P53-P21-Rb信号通路在肾脏缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,IRI)后期肾小管上皮细胞衰老中的作用.方法 建立P53(+/+)和P53(-/-)鼠单侧肾脏IRI模型,研究IRI后期不同时间点肾小管上皮细胞的衰老变化以及P52、P21和Rb蛋白表达的变化.结果 P53鼠肾脏在IRI后期,肾小管上皮细胞衰老在IRI后3个月和6个月点显著增加(P<0.05);而P53(+/+)鼠对侧肾和P53(-/-)鼠双肾,在IRI后1个月和3个月点几乎没有出现肾小管上皮细胞衰老;P53(-/-)鼠的IRI肾在IRI后6个月点也只检测到少量衰老的肾小管上皮细胞,细胞衰老与P53、P21和Rb蛋白的表达有相关性(P<0.05).结论 P53-P21-Rb信号通路的激活在IRI诱导肾小管上皮细胞衰老的发生中可能发挥着重要作用.

    作者:李开龙;何娅妮;杜晓兰;申海鹰;赵玲;陈林 刊期: 2008年第12期

  • 下尺桡关节脱位的分类及X线影像分析

    目的 分析下尺桡关节脱位的损伤机制、分类及其X线表现.方法 对20例下尺桡关节脱传病例的临床、放射影像资料进行回顾性分析总结.结果 下尺桡关节脱位X线影像上分为横向、纵向、掌侧及背侧脱位四种类型.结论 下尺桡关节脱位表现形式多样,详细的X线影像分析能明确其脱位类型,并有助于其进一步治疗和预后评价.

    作者:李中泉;曾晓华;黄文才;杨肖巍 刊期: 2008年第12期

  • 活血化瘀中药防治放射性肺损伤的研究进展

    放射性肺损伤是在放射治疗肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤过程中,正常肺组织受到照射而出现的损伤反应,主要包括两个类型:放射性肺炎和放射性肺纤维化.

    作者:王建彬;杨宇飞 刊期: 2008年第12期

  • 硝酸甘油缓解性胸痛对冠心病诊断的意义

    目的 探讨胸痛可被舌下含服硝酸甘油缓解在冠心病诊断中的价值.方法 以2006年8月~2008年4月期间由于胸痛到第四军医大学西京医院就诊入院的患者689例进行前瞻性研究,将其冠状动脉造影结果与胸痛可被硝酸甘油缓解的结果进行对比分析.结果 689例患者中,共有282例(41%)患者的胸痛可被硝酸甘油缓解.在确诊为冠心病的患者364例中有39%患者(142例)的胸痛可被硝酸甘油缓解,而在非冠心病病因引起胸痛的患者325例中有43%患者(140例)的胸痛可被硝酸甘油缓解,两者无显著性差异(P>0.5).结论 胸痛可被舌下含服硝酸甘油缓解并不有助于诊断冠心病.

    作者:赵晓梅;李敬霞;罗谊;张亚敏;王海昌;胡涛 刊期: 2008年第12期

  • WWOX基因、p53基因与食管癌的研究现状

    许多研究表明WWOX(WW domain containing ox-idoreductase)基因,与p53基因的点突变、缺失与下调及蛋白表达异常在多种肿瘤,如乳腺癌、多发骨髓瘤、前列腺癌、卵巢癌、肺癌及食管癌中频发出现,对这些肿瘤的发生和进展过程中起着关键性的作用.因此探讨WWOX、p53基因的结构及功能对阐明肿瘤的发病机制具有重要的意义.本文就WWOX基因、p53基因与食管癌的研究现状做一综述.

    作者:张宏伟;王茂生 刊期: 2008年第12期

  • NGF增强小鼠实验性免疫功能低下研究

    目的 研究神经生长因子(NGF)注射液对小鼠实验性免疫功能低下的影响.方法 以环磷酰胺(Cy 80mg/kg,皮下注射)造成小鼠免疫功能低下的动物模型,采用碳粒廓清法、单向免疫扩散法、二硝基氟苯诱导迟发型超敏反应法、3H-TdR参入法以及间接免疫光法测定有关免疫指标.结果 NGF注射液[0.01、0.1mg,/(kg·d)×10d,im]可使小鼠降低的K值、α值、血清IgG、耳片肿胀度、ConA诱导的T淋巴细胞增生反应值等明显升高;同时可使小鼠外周血减少的L3T4+细胞增多,从而使降低的L3T4+/Lyt-2+细胞比值增高.结论 NGF注射液对小鼠实验性免疫功能低下有明显的增强作用,从而为放、化疗所致神经损伤肿瘤病人的临床应用提供了理论依据.

    作者:祁岩超;刘振寰;柴铁劬 刊期: 2008年第12期

  • 肠道病毒71型感染的诊断与治疗

    手足口病(hand,foot,and mouth disease,HFMD)是由一种常见的由肠道病毒引起的传染病,可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹,重症患者可出现中枢神经系统受累、肺水肿等表现.

    作者:罗玲;李太生 刊期: 2008年第12期

  • 川芎嗪对重症急性胰腺炎大鼠腹腔器官血流的影响

    目的 研究川芎嗪(telramethylpyrazine,TMP)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠腹腔器官血流,特别是胰腺血流的影响及其作用机制.方法 将大鼠随机分成川芎嗪治疗组(TMP),重症急性胰腺炎组(SAP)和正常对照组.各组分别有数只大鼠于术后12h、24 h处死,观察血浆淀粉酶的变化.另外,运用多普勒超卢测定胰腺局部动脉(相当于胰头、体交界处)、门静脉血流、脾动脉及肠系膜上动脉血流.结果 TMP组的血浆淀粉酶明显低于SAP组(P<0.01).SAP时,大鼠胰腺局动动脉血流明显下降.且于术后12h时已呈明显下降(与对照组比较P<0.01).随胰腺炎的病程进展,胰腺局部血流的下降也更趋严重(24h与12h比较,P<0.05).与此同时,门静脉、脾动脉和肠系膜上动脉的血流量也行下降(与对照组比较,P<0.01).应用海风藤酮能改善胰腺、门静脉、脾动脉及肠系膜上动脉的血流量(与SAP组比较,P<0.01).结论 TMP能促使SAP大鼠胰腺血流量增加.

    作者:康敏;商亚娟;王成果;刘屹;杜锡林 刊期: 2008年第12期

  • 不同负荷的游泳运动及雌激素对去卵巢大鼠血清IL-6、TGF-1水平及生化指标的影响

    目的 观察不同负荷的游泳训练和雌激素对去卵巢大鼠血中免疫指标和生化的影响,从而为因雌性激素减少而发生的骨质疏松症患者进行运动康复提供理论依据.方法 将大鼠随机分为假手术组、骨质疏松模型组、中等强度运动组、大强度运动组、雌激素下预组.训练8周以后,麻醉处死,腹主动脉取血,测血清中IGF-1、IL-6、总碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的变化.结果 8周中等强度运动训练和雌激素能够升高去卵巢大鼠血中IGF-1的水平(P<0.01),同时能够降低血清中IL-6的水平(P<0.05和P<0.01).而大强度的运动训练对IGF-1和IL-6的效果不明显(P>0.05).与骨质疏松模型组比较中等强度运动训练和雌激素能够显著提高血中ALP的活性(P<0.01),降低血中TRAP的活性(P<0.01).结论 中等负荷的游泳训练能像注射雌激素一样改善去卵巢大鼠的免疫水平,提高骨的形成,抑制骨的吸收,改善骨质疏松症状.

    作者:钟卫权 刊期: 2008年第12期

  • Her-2过表达乳腺癌患者术后的治疗进展

    乳腺癌是危害妇女健康的恶性肿瘤之首,发病率呈逐年上升趋势.乳腺癌是全身性疾病,确切病因仍未完全清楚.目前对无手术禁忌证患者首选手术治疗,术后辅以综合治疗.近年来研究发现,原癌基因Her-2过度表达影响乳腺癌术后治疗效果.Her-2原癌基因是生长因子受体家族成员之一,20%~30%乳腺癌患者Her-2过度表达,其与患者预后不良相关.本文将Her-2过表达的乳腺癌患者术后治疗进展情况综述如下.

    作者:张新明;潘琪 刊期: 2008年第12期

  • CML慢性期三氧化二砷联合高三尖杉酯碱治疗的临床探讨

    目的 探讨三氧化二砷(AS2O3)联合高三尖杉酯碱治疗慢性粒细胞白血病(CML)慢性期的疗效和安全性.方法 对7例CML慢性期患者采用AS2O3>联合高三杉酯碱方案治疗.AS2O310ms/d,2~3周,高三尖杉酯碱3~4 ms/d,1~2周.结果 一个疗程后7例均获得临床缓解,其中4例获得完全血液学缓解,均为初治患者,3例获得部分缓解,其中2例初治、1例为复治患者.4例完全缓解的患者,又进行第2次巩固治疗,仍持续血液学完全缓解.不良反应主要为Ⅲ度骨髓抑制和轻度肝功能损害,没有明显的恶心、呕吐、腹泻和黏膜炎.结论 AS2O3联合高三尖杉酯碱是CML慢性期治疗的安全有效方案.

    作者:何志国;侯丽君;徐景勃;曾林涓;钟淑萍 刊期: 2008年第12期

  • 睾丸表达新基因HSD-28的克隆及其编码蛋白质的研究

    目的 研究从人初级精母细胞特异EST文库中克降的新基因HSD-28及编码蛋白质在精子发生过程中的表达及可能发挥的功能.方法 利用根据本实验室构建的人初级精母细胞特异EST文库,通过电子克隆方法,从网络数据库资源获取基因HSD-28.纯化原核表达系统表达的HSD-28蛋白,以此免疫新西兰白兔制备针对HSD-28的特异性多克隆抗体.采用免疫组化的方法研究HSD-28在人睾丸组织中的表达定位.后,利用酵母舣杂交系统筛选与HSD-28相互作用的蛋白质.结果 克隆得到了的HSD-28基因,提交GenBank获得登陆号为AY251533,全长为641个碱基,其中开放阅读框为504碱基,编码一个由168个氨基酸构成的蛋白质,命名为HSD-28蛋白.将构建的pET-30a-HSD-28重组质粒转化到BL21(DE3)宿主菌,表达并纯化了HSD-28蛋白,大小约为28kDa.免疫组织化学结果显示,HSD-28蛋白特异的定位于人精原细胞和早期初级精母细胞.筛选得到与HSD-28相互作用的两个阳性克隆45#和106#.结论 从人睾丸cDNA文库中成功克隆得到HSD-28基因,其编码蛋白质表达定位于人精原细胞和初级精母细胞中,可能参与精子发生过程中减数分裂的调节.

    作者:张宁;王勇;陈迎春;吴宁;缪时英;王琳芳 刊期: 2008年第12期

  • 胸腔内高温灌注化学治疗肺癌恶性胸腔积液的临床观察

    目的 探讨胸腔镜辅助下胸腔内高温灌注化学治疗肺癌恶性胸腔积液的方法和效果.方法 1999年2月~2006年3月,我们对70例肺癌恶性胸腔积液患者随机分为治疗组(35例)和对照组(35例).治疗组在全身麻醉胸腔镜下行胸膜活检术,并用人工心肺机恒温43℃生理盐水3000ml加顺铂300mg灌注1h;对照组予以胸腔引流,胸腔内灌注顺铂60~90mg.比较两组治疗前、后胸水量的变化、胸水中癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白K19片段(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)浓度变化和不良反应.结果 治疗组、对照组有效率分别为100%和54.3%,差异有统计学意义(X2=3.65,P<0.05),治疗组治疗后胸水中CEA、CYFRA21-1、NSE浓度较治疗前明显下降(t=2.76,P<0.05),治疗后治疗组较对照组明显降低(P<0.05),两组各种不良反应比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 胸腔镜辅助下胸腔内高温灌注化学治疗肺癌恶性胸腔积液安全、效果可靠,创伤小、视野大,能直视下分离粘连,并准确对胸膜病变活检,对肺癌恶性胸腔积液患者有较高的应用价值.

    作者:冯兴;李浒;王国卿;章希贤;毛宝根 刊期: 2008年第12期

  • 复合外伤患者摄影体位选择及改良的应用价值

    目的 探讨复合外伤患者摄影的体位选择、改良及其临床应用价值.方法 根据不同摄影部位,选择对影像诊断针对性强的各种非常规摄影体位,并提供经改良后的部分体位的摄影方法及注意事项,实行对复合外伤患者的摄片工作.结果 选择恰当的摄影体位,改良的各种拍摄位置及具体方法的应用,优化的曝光参数及数字化影像设备的合理运用,能够保障各种复合外伤患者摄影的图像诊断质量.结论 复合外伤患者的摄影,应根据患者的实际病情,选择行之有效的各种摄影方法、体位改良技术及运用不同数字化设备所充分体现的临床价值.

    作者:罗志鸿;王海林;黄云海;余京元 刊期: 2008年第12期

  • 14-3-3蛋白的生物学功能

    14-3-3蛋白家族是由多个高度保守但又各具特异性的成员构成的具有复杂功能的调节性蛋白家族,它们主要通过与磷酸化丝氨酸模体结合来发挥作用.14-3-3蛋白参与很多重要的细胞生理过程,如酶和细胞因子活性、离子通道、细胞骨架动力学调节,DNA损伤时细胞周期关卡的引发及维持,细胞增生、分化和凋亡调节等.

    作者:吕靖;曹济民 刊期: 2008年第12期

  • 肾输尿管全长切除治疗上尿路肿瘤的两种手术方法比较

    目的 评价先经尿道切除膀胱壁段输尿管的肾输尿管切除治疗上尿路移行细胞癌的临床效果.方法 回顾性非随机对58例局限性上尿路移行细胞癌的患者进行比较研究,25例用电切镜先经尿道切除膀胱壁段输尿管后再行腰部切口行肾输尿管切除,33例采用常规的腰部或第11肋间切口肾输尿管切除后再做下腹部切口行膀胱袖状切除.比较两组手术时间、出血量和膀胱肿瘤的复发率.结果 经尿道切除膀胱壁段输尿管的手术时间明显短于标准的两个切口的手术时间(平均112与186min,P<0.05),出血量明显低(平均108与251ml,P<0.01).随访6~51个月时,先经尿道切除膀胱壁段输尿管膀胱内肿瘤复发4例(16%),两个切口手术组膀胱内肿瘤复发6例(18%).结论 先经尿道切除膀胱壁段输尿管的肾输尿管切除治疗上尿路移行细胞癌创伤小、手术时间短、出血量少,并不增加膀胱肿瘤的复发率,是局限性上尿路肿瘤的有效手术方法之一.

    作者:于满;于爱军;王志勇;赵立军;张利国;马光;王振潮;辛立升 刊期: 2008年第12期

  • 结核性脑膜炎患者脑脊液S100B、IL-1β动态演变及临床意义

    目的 探讨结核性脑膜炎患者脑脊液S100B、白细胞介素-1β(IL-1β)动态变化及二者的相关性.方法 43例结核性脑膜炎患者(TBM组)分为昏迷组和无昏迷组,均给予标准抗结核治疗.选择无神经系统疾病的腰麻术患者28例作为对照组.TBM组和对照组均于发病后1~6天首次采集脑脊液,以后每隔5~7天采集1次,共5次.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫法测定3组患者不同病程脑膜炎S100B、IL-1β含量.结果 15例发生昏迷(昏迷组),28例未发生昏迷(无昏迷组).昏迷组和无昏迷组S100B、IL-1β含量较对照组均显著增高(P<0.05);昏迷组较无昏迷组患者脑脊液S100B、IL-1β含量增高明显.随时间的延长,S100B维持于较高水平,而IL-1β的含量不断下降.结论 结核性脑膜炎患者脑脊液S100B含量的高低能够反映病情的严重程度,IL-1β对治疗反应更灵敏.

    作者:卢言霞;王贤军;夏作理 刊期: 2008年第12期

  • Aurora B与细胞分裂调控

    细胞增生主要通过遗传物质的自我复制与分裂形成两个与起始细胞相似的子代细胞的形式进行,这一理论的建立终成为细胞生物学的理论基石[1].

    作者:晏杰;詹启敏 刊期: 2008年第12期

  • 抗病毒治疗对CMV感染者血染色体着丝粒点的影响

    目的 研究巨细胞病毒(CMV)感染患者治疗前后外周血染色体着丝粒点(Cd)变异率的变化,为优生优育积累实验依据.方法 选择早期自然流产且有CMV(PCR检测)感染的孕妇22例.取静脉血以同步银染法检测染色体Cd变异率,然后采用抗病毒和免疫调节对患者进行治疗,当CMV转阴性时和转阴性6个月后采血进行染色体Cd分析,所得数据通过统计学处理分析CMV感染和治疗后血液染色体Cd畸变情况,并观察其妊娠结局.结果 22例CMV感染患者血液Cd畸变率为0.76±0.14/细胞,而经抗病毒药物治疗后畸变率为0.28±0.04/细胞,二者比较具有显著性差异(P<0.0001).结论 抗体病毒治疗可降低Cd畸变率,这对健康妊娠意义重大.

    作者:刘彦慧;黎丽芬;吴亚敏;王明波;石静;袁冰;宋娟;何永明;魏代奎 刊期: 2008年第12期

  • 锥颅穿刺引流术对脑出血患者血清NSE水平的影响

    目的 探讨锥颅穿刺引流术对脑出血患者血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平的影响及临床意义.方法 选择出血量30~50ml的脑出血患者45例,分为手术组23例和保守组22例.对照组18例为同期健康体检者.用ELISA法动态测定血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)的水平.结果 ①保守组患者NSE浓度在发病21天内高于对照组(P<0.01);②手术组患者NSE浓度在发病14天内高于对照组(P<0.01),21天时与对照组比较无显著性差异(P>0.05);③于术组患者NSE浓度在发病7天内与保守组比较无显著性差异(P>0.05),但在14天和21天时明显低于保守组(P<0.01).结论 锥颅穿刺引流术可以减轻脑出血患者的脑损伤.

    作者:宋伟健;胡深;颜杰浩;唐映 刊期: 2008年第12期

医学研究杂志

医学研究杂志

主管:中华人民共和国卫生和计划生育委员会

主办:中国医学科学院