学术投稿

单纯疱疹病毒2型ICP4基因荧光实时定量PCR检测方法的建立

刘继峰;关翠萍;唐旭;徐田红;许爱娥

关键词:单纯疱疹病毒2型, ICP4, 实时定量荧光PCR, 标准曲线
摘要:目的 建立实时荧光PCR定量检测单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因的方法.方法 依据HSV2 ICP4基因序列设计引物.PCR纯化后克隆到pMD-18T载体上进行测序,抽提重组质粒作为标准品.根据测序结果设计荧光定PCR的引物和探针,质粒标准品10倍稀释后进行扩增,建立标准曲线,并进行灵敏度和可靠性分析.结果 测序结果显示在扩增的PCR片段中有在A-G无和T-C的无义突变.标准品101以下没有检测信号,101具有明确的检测信号,因而检测的灵敏度为10.可靠性测定结果:107-101进行10次重复Ct值的平均值分别为14.275±0.137、17.988±0.162、22.081±0.259、25.957±0.345、29.565±0.203、33.269±0.287、37.737±0.698,变异系数分别为0.965%、0.902%、1.174%、1.329%、0.686%、0.862%、1.851%.Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系.回归系数为0.998.结论 成功建立了HSV2 ICP4基因实时定量荧光PCR检测的方法,灵敏度高,重复性好,可用于HSV2 ICP4基因的定量分析.
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  • 白血病干细胞靶向治疗的研究进展

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    作者:游世伦;练志方;王慧萍;张艳华 刊期: 2008年第12期

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    目的 研究神经生长因子(NGF)注射液对小鼠实验性免疫功能低下的影响.方法 以环磷酰胺(Cy 80mg/kg,皮下注射)造成小鼠免疫功能低下的动物模型,采用碳粒廓清法、单向免疫扩散法、二硝基氟苯诱导迟发型超敏反应法、3H-TdR参入法以及间接免疫光法测定有关免疫指标.结果 NGF注射液[0.01、0.1mg,/(kg·d)×10d,im]可使小鼠降低的K值、α值、血清IgG、耳片肿胀度、ConA诱导的T淋巴细胞增生反应值等明显升高;同时可使小鼠外周血减少的L3T4+细胞增多,从而使降低的L3T4+/Lyt-2+细胞比值增高.结论 NGF注射液对小鼠实验性免疫功能低下有明显的增强作用,从而为放、化疗所致神经损伤肿瘤病人的临床应用提供了理论依据.

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  • 胆道残余结石的原因及预防

    目的 探讨胆道术后残余结石的原因及预防措施.方法 利用建立的胆道结石Access数据库,对1990年1月~2007年12月收治的临床资料完整的669例胆道结石患者中胆道残余结石患者167例进行同顾性分析.结果 除患者的生理和病理因素外,胆道残余结石与结石部位、初次手术医院和手术方式、手术时机相关.结论 胆道术后残余结石的原因是多方面的,术前全面检查、术中操作规范及合理选择术式和时机可大大降低胆道术后残石率.

    作者:张刚庆;王红兵;高鹏;杨晨;郑权;方驰华 刊期: 2008年第12期

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    目的 研究从人初级精母细胞特异EST文库中克降的新基因HSD-28及编码蛋白质在精子发生过程中的表达及可能发挥的功能.方法 利用根据本实验室构建的人初级精母细胞特异EST文库,通过电子克隆方法,从网络数据库资源获取基因HSD-28.纯化原核表达系统表达的HSD-28蛋白,以此免疫新西兰白兔制备针对HSD-28的特异性多克隆抗体.采用免疫组化的方法研究HSD-28在人睾丸组织中的表达定位.后,利用酵母舣杂交系统筛选与HSD-28相互作用的蛋白质.结果 克隆得到了的HSD-28基因,提交GenBank获得登陆号为AY251533,全长为641个碱基,其中开放阅读框为504碱基,编码一个由168个氨基酸构成的蛋白质,命名为HSD-28蛋白.将构建的pET-30a-HSD-28重组质粒转化到BL21(DE3)宿主菌,表达并纯化了HSD-28蛋白,大小约为28kDa.免疫组织化学结果显示,HSD-28蛋白特异的定位于人精原细胞和早期初级精母细胞.筛选得到与HSD-28相互作用的两个阳性克隆45#和106#.结论 从人睾丸cDNA文库中成功克隆得到HSD-28基因,其编码蛋白质表达定位于人精原细胞和初级精母细胞中,可能参与精子发生过程中减数分裂的调节.

    作者:张宁;王勇;陈迎春;吴宁;缪时英;王琳芳 刊期: 2008年第12期

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  • Her-2过表达乳腺癌患者术后的治疗进展

    乳腺癌是危害妇女健康的恶性肿瘤之首,发病率呈逐年上升趋势.乳腺癌是全身性疾病,确切病因仍未完全清楚.目前对无手术禁忌证患者首选手术治疗,术后辅以综合治疗.近年来研究发现,原癌基因Her-2过度表达影响乳腺癌术后治疗效果.Her-2原癌基因是生长因子受体家族成员之一,20%~30%乳腺癌患者Her-2过度表达,其与患者预后不良相关.本文将Her-2过表达的乳腺癌患者术后治疗进展情况综述如下.

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    作者:刘继峰;关翠萍;唐旭;徐田红;许爱娥 刊期: 2008年第12期

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医学研究杂志

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主管:中华人民共和国卫生和计划生育委员会

主办:中国医学科学院