学术投稿

牛胚胎干细胞分离克隆及定向分化研究

李松;窦忠英;苗增民;华进联;雷安民;徐小明;钱永胜

关键词:胚胎干细胞, 分离克隆, 定向分化, 实验材料, 胚胎原始生殖细胞, 分化潜能, 基因结构与功能, 转基因动物, 发育生物学, 自我更新, 早期胚胎, 应用前景, 形态特征, 小鼠胚胎, 细胞技术, 胚胎细胞, 胚胎发育, 临床医学, 克隆治疗, 科学意义
摘要:胚胎干(embryonic stem, ES)细胞自Evans和Kanfman(1981)首次从小鼠胚胎中分离到后,胚胎干细胞技术一度成为各国学者研究的热点.ES细胞是自附置前早期胚胎或附置后胚胎原始生殖细胞分离克隆的一种具有自我更新和全向分化潜能的细胞,其具有与胚胎细胞相似的形态特征及分化潜能,同时又可以在体外进行培养、扩增、转化、筛选和冻存.它为克隆治疗以及深入研究基因结构与功能、胚胎发育、各种遗传病模型以及克隆动物和转基因动物等提供了新型实验材料.ES细胞在发育生物学基础研究、组织工程研究、临床医学等方面具有诱人的应用前景和重要的科学意义.本研究以牛为实验材料,探讨影响牛ES细胞分离克隆的因素,完善牛ES细胞的分离克隆程序,为人类ES细胞的研究提供相关的技术参数,主要取得了如下几方面的成果.
医学研究杂志相关文献
  • 鞍区肿瘤术后低钠血症临床诊断和处理

    目的 探讨鞍区肿瘤手术后并发尿崩症以及低钠血症的病因、发病机制、诊断、治疗经验. 方法回顾分析34例鞍区肿瘤术后尿崩症以及低钠血症患者,通过其临床表现以及实验室检查确立诊断,总结有效的治疗方法.结果 除1例患者继发细胞毒性脑水肿,肢体瘫痪,记忆、定向神经功能低下外,其余33例病人恢复良好. 结论鞍区肿瘤术后低钠血症出现后,尿量、尿比重的变化以及试验性限水治疗有助于鉴别抗利尿激素分泌异常综合征和脑性盐耗综合征;病因未明时,应首选限水治疗.因为绝大多数的病例为脑性耗盐综合征.

    作者:车志豪;俞文华;杜权 刊期: 2007年第02期

  • P15及P16蛋白在脑胶质瘤中表达的研究

    目的 探讨抑癌基因p16、p15在脑胶质瘤中的表达及其与胶质瘤病理分级、恶性程度的关系.方法 应用免疫组化SP方法检测63例人脑胶质瘤手术标本中P16、P15蛋白的表达水平.结果P16、P15蛋白的表达率与脑胶质瘤的病理分级呈负相关,且低恶性组(Ⅰ~Ⅱ级)与高恶性组(Ⅲ~Ⅳ级)相比较有显著差异(P<0.001).结论P16及P15蛋白的表达与胶质瘤的病理分级和恶性程度有关.从而可作为反映脑胶质瘤的增生能力及恶性进展的参考指标.

    作者:兴桂华;张晓杰;荣玮 刊期: 2007年第02期

  • 气管支架置入治疗胸部肿瘤导致气管狭窄25例分析

    目的 评价气管支架置入术治疗因胸部恶性肿瘤引起的气管狭窄的疗效.方法 取25例因肺癌、食管癌等压迫侵犯气管、支气管致严重呼吸困难的病人在纤支镜直视下置入镍钛记忆合金人体气管支架.结果25例支架均放置成功,呼吸困难症状立即缓解,随访观察3~35 个月,生存者支架无移位,气道通畅,无明显疼痛及异物感.结论 气管支架能暂时缓解恶性肿瘤引起的呼吸困难,改善生活质量,生存时间的延长有赖于结合有效的放化疗.

    作者:陈若;陈静瑜;郑明峰 刊期: 2007年第02期

  • 肺移植治疗终末期肺病临床研究

    目的 对比国外开展肺移植情况,探讨临床肺移植在我国开展的可行性,目前主要存在的问题及对策.方法2002年5月,我院成立肺移植团队,开展猪肺移植动物实验,在此基础上于2002年9月~2005年8月我院共完成临床肺移植24例,其中肺气肿11例、肺纤维化8例、硅沉着病1例、双侧支气管肺囊肿2例、肺淋巴管平滑肌瘤病1例及室间隔缺损合并艾森曼格综合征1例.受体术前均为重症呼吸衰竭,长期靠呼吸机依赖4例.手术方式:单肺移植20例,包括:左肺移植11例,右肺移植9例,其中2例为同一供体同期的左、右单肺移植,有1例为左侧供肺植入右胸腔,1例为体外循环下室缺修补后行右肺移植,1例为体外循环下右肺移植;双肺移植4例,包括非体外循环下序贯式双侧单肺移植3例,体外循环下序贯式双侧单肺移植1例.结果 术后短期内死亡5例,其中1例于术后15天死于急性排斥,2例于术后30天死于感染、多脏器衰竭,1例术后36天死于肺梗死、1例术后1天死于心脏衰竭.19例痊愈出院,术后早期生存率79.8%(19/24),肺功能极大改善,生存3年以上1例,生存 2年以上2例,1年以上1例,中位生存时间10(1~36)个月. 结论本组肺移植的结果与国际发达国家的疗效相似,肺移植在我国新世纪会迎来一个快速发展阶段,组建肺移植团队、多学科合作是肺移植手术成功开展,术后长期生存的关键;术后的缺血再灌注损伤、排斥和感染仍是肺移植短期死亡的主要原因.

    作者:陈静瑜;郑明峰;胡春晓;朱艳红;何毅军;王永功;周敏;陆国础;陆明华 刊期: 2007年第02期

  • 简易且能避免污染的细胞培养方法

    培养细胞常规方法需用二氧化碳温箱,且为保持箱内二氧化碳气5%~10%的浓度,需持续输入二氧化碳气体.为此,箱内的培养瓶盖不能拧紧,以便二氧化碳气体自由进出.这种方法缺点:①成本较高:一个二氧化碳温箱的价值就近万元,另外需大量的二氧化碳气,费用也高;②较易污染:二氧化碳气需自由进出培养瓶,无形中增加了外界的细菌或真菌感染细胞的机会.兹将我们培养细胞的方法做一简介.该方法的特点:①只需购置数百元的普通隔水式恒温箱,不需要昂贵的二氧化碳温箱;②配液方法特殊,可节省大量的二氧化碳气体;③培养瓶口要塞严或将瓶盖拧紧,减少了细胞受到感染的机会.

    作者:宋福津;杨新宇 刊期: 2007年第02期

  • 儿童斜视手术眼-胃反射体表胃电图临床分析

    眼部手术或牵拉眼外肌时,使迷走神经兴奋性增强,加强食管和胃的蠕动,出现恶心、呕吐或腹痛等胃肠功能紊乱称眼-胃反射(oculogastvic reflex).眼-胃反射可发生在术中或术后,有时呕吐为持续性,也有术后数日不能进食,严重者可因呕吐出现脱水及电解质紊乱.

    作者:叶婴茀;黄德樱;严春香;向施红;李世莲;揭红;黄明泉;汤洪;冯春 刊期: 2007年第02期

  • 冷冻保存自体血小板输注式造血干细胞移植治疗恶性血液病

    目的 观察冷冻保存自体血小板输注式造血干细胞移植的临床效果.方法 在8例造血干细胞移植过程中进行了22例次冷冻保存自体血小板回输.采用COBE单采机采集血小板,加5%二甲亚砜(DMSO)血小板冻存保护剂,置-80℃冰箱冷冻保存1~3个月.40℃水浴复苏冻存血小板.血小板﹤20×109/L时回输冻存血小板.测定冻存血小板CD41、CD42b 、CD61 、CD62P、CD63、回收率及血小板校正增加值(CCI).结果 移植后一般需输注冻存自体血小板2~4次.血小板冻存后回收率在47%~87%之间,平均回收率为(72.73±10.49)%.在22例次血小板冷冻保存回输中,流式细胞仪测定发现有12例次冻融后的血小板CD62P百分比值升高,7例次冻融后的血小板CD63百分比值升高,表明血小板出现了一定程度的活化.有4例次冻融后的血小板CD41或CD42b百分比值减低,表明血小板的黏附聚集功能受到一定程度的影响.输注后CCI在(5.6~17.6)×109/L之间,22次回输中有18次的CCI在7.5之上.移植过程中无出血发生,回输后也未出现并发症.结论 造血干细胞移植时采用冻存自体血小板输注可以防止移植过程中出血的发生,代替异体血小板输注而杜绝诸如艾滋病毒、巨细胞病毒等造成的输血传播性疾病的发生,回输是安全和切实可行的.

    作者:杨同华;赵仁彬;沈晓梅;史克倩;赖洵;杨艳梅;陆洁;杨泽凤 刊期: 2007年第02期

  • 三氧化二砷、顺铂对人卵巢癌细胞联合作用研究

    目的 探讨三氧化二砷(As2O3)、顺铂(DDP)对人卵巢癌细胞HO-8910的联合作用及其相关机制.方法 采用形态学方法研究As2O3、DDP对细胞增生的影响,用流式细胞术分析细胞周期,免疫细胞化学染色法检测p53基因表达.结果1. As2O3、DDP协同作用时,浓度分别在1.5μmol/L以上、2μmol/L以上时,有显著性差异;当三氧化二砷、顺铂浓度分别是12μmol/L、4μmol/L时,72h时癌细胞接近100%死亡.2.As2O3、DDP引起HO-8910细胞S期阻滞、p53基因表达增强.结论As2O3、DDP对人卵巢癌细胞HO-8910的生长有协同抑制作用;As2O3、DDP联合作用引起卵巢癌细胞凋亡的机制与S期阻滞、p53基因表达增强有关.

    作者:杨国宏;金华;刘瑞丰;刘志新;胡江平 刊期: 2007年第02期

  • 骨肉瘤基因治疗研究进展

    骨肉瘤是一种临床常见恶性骨肿瘤, 约占所有骨肿瘤的20%.其恶性程度高,好发于青少年,易复发和转移,预后较差.随着分子生物学理论和技术水平的提高, 尤其是肿瘤分子生物学的发展, 骨肉瘤的发生机制在分子水平有了一定的认识.目前,人们针对骨肉瘤及其肺转移已研究开展了免疫基因治疗、反义基因治疗、抑癌基因治疗、自杀基因治疗及其联合基因治疗或联合其他方法的治疗等诸多基辅前景的肿瘤基因治疗方法,现综述如下.

    作者:王桂龙;向阳 刊期: 2007年第02期

  • 光动力治疗肿瘤

    光动力治疗(photodynamic therapy, PDT)是20世纪70年代末开始形成的一项治疗肿瘤新技术,目前在美国、英国、法国、德国、日本等不少国家已经获得国家政府相关部门的正式批准,成为治疗肿瘤的一项常规手段.光动力疗法属光医学范畴,其作用基础是光动力效应.在光化学反应中,有一种分子只吸收光子,并将能量传递给那些不能吸收光子的分子,促使其发生化学反应,而本身则不参与化学反应,恢复到原先的状态,这种分子称为光敏剂.

    作者:王洪武 刊期: 2007年第02期

  • 胃癌围手术期活化CD69、HLA-DR变化及临床意义

    目的 了解胃癌患者围手术期的免疫功能变化,探讨其临床意义.方法 应用流式细胞仪检测82例胃癌患者手术前后外周血中T细胞2种表面抗原CD69、HLA-DR,并与良性病变患者进行对照.结果 发现胃癌患者术前CD69细胞百分率低于对照组(P<0.01),HLA-DR细胞百分率与对照组相近(P>0.05).术后胃癌患者的CD69、HLA-DR细胞百分率较术前均明显增高(P<0.01).结论 胃癌患者术前免疫功能低下,术后活化T细胞明显增多,表明切除肿瘤有利于提高患者的免疫功能,增强机体的抗癌能力,故应尽量争取根治性切除肿瘤.

    作者:蔡阳;朱玮;封光华;杨祺俊;冷建杭;陆贝 刊期: 2007年第02期

  • 鼻内镜下经硬腭鼻底鼻咽肿瘤切除术

    目的 探讨鼻内镜在鼻底鼻咽肿瘤切除手术中的应用价值.方法2001年1月~2005年1月共进行手术12例,其中鼻底肿瘤5例,鼻咽肿瘤7例.全部患者均在气管插管全麻,鼻内镜下经硬腭径路手术,其中3例鼻咽肿瘤术前采用血管造影并进行肿瘤供血动脉栓塞,术中根据需要采用控制性低血压技术.结果2例恶性肿瘤术中冷冻确诊后更改术式,其余10例术后硬腭黏骨膜瓣愈合良好,发音、吞咽、呼吸、咀嚼等功能正常,随访1年以上无复发. 结论鼻内镜下经硬腭切除鼻底鼻咽肿瘤较传统硬腭径路手术有明显优势.

    作者:袁宏伟;黄新辉;单晋杰 刊期: 2007年第02期

  • 自体干细胞移植治疗类风湿性关节炎

    目的 探讨自体干细胞移植治疗难治性类风湿性关节炎的疗效. 方法对1例类风湿性关节炎患者进行自体骨髓移植,预处理方案采用环磷酰胺、ATG.结果 移植后造血恢复较快,干细胞回输后第10天白细胞升至1.0×109/L以上,干细胞回输后第5天患者关节疼痛消失,可下床活动.移植后2个月RF、CRP、ESR均恢复正常.结论 自体干细胞移植有可能作为类风湿性关节炎的有效方法.

    作者:刘珂;阮林海 刊期: 2007年第02期

  • 宫太妇月康胶囊对药物流产效果临床观察

    目的 了解宫太妇月康胶囊对药物流产临床效果的影响.方法 将600例健康孕妇随机分成3组.A组;药物流产后口服宫太妇月康胶囊(200例);B组:药物流产后口服益母丸(200例);C组(对照组);药物流产后不服任何药物.结果(1)孕囊当天未排出,3天内排出率,A组为84.62%,B组为63.64%,C组为58.33%.(2)不全流产发生率,2周内,A组为1.50%,B组为6.00%,C组为5.50%.(3)药物流产后阴道出血时间,不超过2周,A组为96.50%,B组为97.50%,C组为69.80%;超过1个月,A组为1.00%,B组为6.50%,C组为7.50%.(4)其他不良反应,大量出血,急诊清宫,A组1例,B组7例,C组9例.宫腔感染,A组1例,B组13例,C组15例.结论 宫太妇月康胶囊能明显提高3天内药物流产成功率,降低不全流产发生率,缩短阴道流血时间,减少并发症的发生.

    作者:赵丽萍 刊期: 2007年第02期

  • 牛胚胎干细胞分离克隆及定向分化研究

    胚胎干(embryonic stem, ES)细胞自Evans和Kanfman(1981)首次从小鼠胚胎中分离到后,胚胎干细胞技术一度成为各国学者研究的热点.ES细胞是自附置前早期胚胎或附置后胚胎原始生殖细胞分离克隆的一种具有自我更新和全向分化潜能的细胞,其具有与胚胎细胞相似的形态特征及分化潜能,同时又可以在体外进行培养、扩增、转化、筛选和冻存.它为克隆治疗以及深入研究基因结构与功能、胚胎发育、各种遗传病模型以及克隆动物和转基因动物等提供了新型实验材料.ES细胞在发育生物学基础研究、组织工程研究、临床医学等方面具有诱人的应用前景和重要的科学意义.本研究以牛为实验材料,探讨影响牛ES细胞分离克隆的因素,完善牛ES细胞的分离克隆程序,为人类ES细胞的研究提供相关的技术参数,主要取得了如下几方面的成果.

    作者:李松;窦忠英;苗增民;华进联;雷安民;徐小明;钱永胜 刊期: 2007年第02期

  • Peroxiredoxin Ⅱ研究进展

    peroxiredoxins(prxs)蛋白是新近发现的一类过氧化物酶,属于抗氧化蛋白超家族,广泛存在于原核生物和真核生物中.该家族第1个被发现的蛋白是来源于酵母菌的25kD蛋白质,命名为巯基特异性抗氧化酶.哺乳动物的Prxs家族包括6个成员,即prxⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ[1].prxs家族的所有蛋白均在N-端具有保守的半胱氨基酸(cys)残基,部分蛋白在C-端也有保守的cys残基.根据各成员间的同源性和cys残基的数目,prxs家族蛋白可分为3个亚类,即2-cys Prx(prx Ⅰ~Ⅳ),非典型2- Cys prx(prx Ⅴ)和1- cys prx(prx Ⅵ)[2].

    作者:岳海英;黎丹戎;李瑗 刊期: 2007年第02期

  • 针刺和半导体弱激光疗法对大鼠自然杀伤(NK)细胞活性影响比较研究

    目的 本项目研究针刺和激光疗法对大鼠自然杀伤(NK)细胞活性的影响.方法 实验中大鼠腹腔注射免疫抑制剂后,分别用针刺和激光疗法进行治疗,然后测定大鼠NK细胞的活性.结果 大鼠NK细胞活性在针刺百会和激光穴位表面照射后增强,而激光穴内针刺后则无明显变化.结论 针刺和激光表面照射均能改善大鼠NK细胞活性,而这种改善在肿瘤的临床治疗中有十分重要的意义.

    作者:阮步青;杨锋;江凌圳;杨东晓;陈秀峰 刊期: 2007年第02期

  • 荷肉瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像实验研究

    目的 制备细胞凋亡显像剂99mTc -annexinⅤ,并在荷肉瘤小鼠体内对凋亡肿瘤组织进行活体显像.方法 利用硫酸铵沉淀和Octyl-Sepharose疏水层析纯化来源于毕赤酵母重组表达、带有内在螯合位点的annexinⅤ.通过葡庚糖酸盐配体在annexinⅤ上直接标记放射性核素99mTc,Sephadex G-25脱盐处理制备99mTc -annexinⅤ.在Balb/C小鼠右侧腋下接种肉瘤株S-180,1周后荷肉瘤小鼠经腹腔注射化疗药物环磷酰胺诱导肉瘤细胞凋亡.化疗18h后经小鼠尾静脉注射99mTc -annexinⅤ,扫描6h后肿瘤组织的SPECT图像.分别于放射性药物注射后0.5、1、3、6 h处死动物,测定各脏器、组织的放射性计数,分析99mTc -annexinⅤ在荷肉瘤小鼠体内的生物分布.结果 经过硫酸铵沉淀和Octyl-Sepharose疏水层析纯化,annexinⅤ纯度达到95%.直接标记和脱盐处理制备出的99mTc -annexinⅤ放射性化学纯度为90%.将99mTc -annexinⅤ注射到环磷酰胺处理的荷肉瘤小鼠体内,肿瘤组织能够显像.结论 我们标记合成了99mTc -annexinⅤ,该探针可以活体显示肿瘤组织的凋亡情况,可能为临床应用和药物开发提供了一种手段.

    作者:张迎强;蔡炯;李方;郑连芳;邱飞蝉;刘丽琴 刊期: 2007年第02期

  • 乳腺针吸细胞病理学对乳腺癌早期诊断研究应用

    目的 探讨乳腺针吸细胞病理学对乳腺癌早期诊断应用价值.方法 用5~10ml一次性塑料注射器,对乳腺肿大或肿块及乳头溢液1324例患者进行定位针吸细胞病理学诊断及分型诊断,并与临床及病理组织学、CT、超声、钼靶、DNA、微核、结核抗体、CA153肿瘤标志物等对照.结果 乳腺针吸细胞病理学不仅对乳腺疾病诊断有重要适用价值,而且对乳腺癌早期诊断及分型诊断有重要价值,特别对鉴别乳腺增生及乳腺纤维腺瘤有否癌变有重要指导意义.穿刺成功率高达100%,早期诊断率16.9%,总诊断准确率高达98.6%,创历史新高.结论 乳腺针吸细胞病理学具有创伤小、简单快速、安全可靠、经济实用、结果准确等优点,各项技术指标明显高于传统诊断方法,是目前任何方法无法取代的,有较高推广实用价值.

    作者:王永才;钟寸荻;王寰;朱杰 刊期: 2007年第02期

  • P73、E2F-1、Bcl-2蛋白表达与胃癌生物学行为关系研究

    目的 本研究旨在探讨P73、转录因子E2F-1、凋亡抑制基因Bcl-2在胃癌组织中的表达情况及其临床意义.方法 采用免疫组化技术(SP法)检测46例胃癌癌组织及癌旁正常黏膜中P73、E2F-1、Bcl-2蛋白的表达情况.结果 胃癌组织中P73蛋白的阳性表达率为69.6%,癌旁正常黏膜组织中为4.3%,两组比较具有统计学意义(P<0.01);P73蛋白的表达与胃癌组织学分级、淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关(P<0.05).胃癌组织中E2F-1阳性表达率为73.9%,癌旁正常黏膜中为8.7%,两者比较有显著性差异(P<0.01);E2F-1在癌组织中的表达与TNM分期、组织学分级、淋巴结转移及肿瘤浸润深度无相关性(P>0.05).Bcl-2在胃癌中的阳性表达率为52.2%,在癌旁正常黏膜中为15.2%,两者比较差异显著(P<0.01);Bcl-2在癌组织中的表达与胃癌组织学分级具有相关性(P<0.05).结论P73、E2F-1、Bcl-2在胃癌细胞中共同过度表达,参与了胃癌的发生发展.

    作者:岳丽玲;吴国新;于海涛;王玉;郑丽红;林春荣 刊期: 2007年第02期

医学研究杂志

医学研究杂志

主管:中华人民共和国卫生和计划生育委员会

主办:中国医学科学院