学术投稿

牛胚胎干细胞分离克隆及定向分化研究

李松;窦忠英;苗增民;华进联;雷安民;徐小明;钱永胜

关键词:胚胎干细胞, 分离克隆, 定向分化, 实验材料, 胚胎原始生殖细胞, 分化潜能, 基因结构与功能, 转基因动物, 发育生物学, 自我更新, 早期胚胎, 应用前景, 形态特征, 小鼠胚胎, 细胞技术, 胚胎细胞, 胚胎发育, 临床医学, 克隆治疗, 科学意义
摘要:胚胎干(embryonic stem, ES)细胞自Evans和Kanfman(1981)首次从小鼠胚胎中分离到后,胚胎干细胞技术一度成为各国学者研究的热点.ES细胞是自附置前早期胚胎或附置后胚胎原始生殖细胞分离克隆的一种具有自我更新和全向分化潜能的细胞,其具有与胚胎细胞相似的形态特征及分化潜能,同时又可以在体外进行培养、扩增、转化、筛选和冻存.它为克隆治疗以及深入研究基因结构与功能、胚胎发育、各种遗传病模型以及克隆动物和转基因动物等提供了新型实验材料.ES细胞在发育生物学基础研究、组织工程研究、临床医学等方面具有诱人的应用前景和重要的科学意义.本研究以牛为实验材料,探讨影响牛ES细胞分离克隆的因素,完善牛ES细胞的分离克隆程序,为人类ES细胞的研究提供相关的技术参数,主要取得了如下几方面的成果.
医学研究杂志相关文献
  • 早期非小细胞肺癌微转移研究进展

    肺外科技术已经相当成熟,然而对于完全切除的Ⅰ期非小细胞肺癌(NSCLC)复发率25%~50%, 一个可能的原因就是手术前的常规检查不能发现已经存在的隐匿性微转移灶(occult metastases, OMs)[1].因此,对非小细胞肺癌微转移的研究日益受到重视.

    作者:王明钊;沈毅;魏煜程 刊期: 2007年第02期

  • 气管支架置入治疗胸部肿瘤导致气管狭窄25例分析

    目的 评价气管支架置入术治疗因胸部恶性肿瘤引起的气管狭窄的疗效.方法 取25例因肺癌、食管癌等压迫侵犯气管、支气管致严重呼吸困难的病人在纤支镜直视下置入镍钛记忆合金人体气管支架.结果25例支架均放置成功,呼吸困难症状立即缓解,随访观察3~35 个月,生存者支架无移位,气道通畅,无明显疼痛及异物感.结论 气管支架能暂时缓解恶性肿瘤引起的呼吸困难,改善生活质量,生存时间的延长有赖于结合有效的放化疗.

    作者:陈若;陈静瑜;郑明峰 刊期: 2007年第02期

  • 鞍区肿瘤术后低钠血症临床诊断和处理

    目的 探讨鞍区肿瘤手术后并发尿崩症以及低钠血症的病因、发病机制、诊断、治疗经验. 方法回顾分析34例鞍区肿瘤术后尿崩症以及低钠血症患者,通过其临床表现以及实验室检查确立诊断,总结有效的治疗方法.结果 除1例患者继发细胞毒性脑水肿,肢体瘫痪,记忆、定向神经功能低下外,其余33例病人恢复良好. 结论鞍区肿瘤术后低钠血症出现后,尿量、尿比重的变化以及试验性限水治疗有助于鉴别抗利尿激素分泌异常综合征和脑性盐耗综合征;病因未明时,应首选限水治疗.因为绝大多数的病例为脑性耗盐综合征.

    作者:车志豪;俞文华;杜权 刊期: 2007年第02期

  • 人源幼虫巨大致死性基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

    目的 研究人源幼虫巨大致死性基因Hugl-1表达与人肺癌临床病理生理特征的关系,探讨Hugl-1基因表达与肺癌肿瘤细胞发生、侵袭的相关性.方法 对50例NSCLC标本(含癌旁组织)和10例肺良性病变组织应用单克隆抗体、免疫组化SP法检测Hugl-1基因的蛋白表达情况.结果(1)肺癌肿瘤组织中Hugl-1基因表达水平显著低于癌旁组织和肺良性病变组织(P<0.05). (2)肺癌组织中Hugl-1基因表达水平降低与肿瘤分期、淋巴结转移程度存在相关性(P<0.05),与肺癌组织学类型、细胞分化程度以及患者的性别、年龄无关.结论Hugl-1基因表达下降与肺癌的发生、发展过程有关.

    作者:杨勇;邹良建;周栋;郎希龙;金海;黄盛东 刊期: 2007年第02期

  • 猪到人异种移植匹配性研究

    器官移植是治疗人类脏器终末期功能衰竭疾病的唯一有效手段.供器官严重短缺是限制临床移植发展的瓶颈之一.全球认为猪是具潜力的异种供器官源.但其能否应用于临床的重要指标是猪-人器官功能是否匹配,是否长期安全和免疫差异能否克服.本研究旨在选择我国自主知识产权的版纳微型猪近交系(Banna minipig inbred line,BMI)和五指山猪近交封闭群(Wuzhisan pig,WZSP),研究其脏器结构、功能与人相应器官的移植匹配性、猪→人异种移植的免疫障碍、评价猪→人异种移植的可行性和安全性.

    作者:李幼平;张立 刊期: 2007年第02期

  • 卡培他滨联合奥沙利铂治疗进展期大肠癌临床研究

    我科自2004年11月~2006年3月使用卡培他滨(capcitabine)联合奥沙利铂治疗进展期大肠癌31例,现将结果报告如下.

    作者:罗福申;李文华 刊期: 2007年第02期

  • 牛胚胎干细胞分离克隆及定向分化研究

    胚胎干(embryonic stem, ES)细胞自Evans和Kanfman(1981)首次从小鼠胚胎中分离到后,胚胎干细胞技术一度成为各国学者研究的热点.ES细胞是自附置前早期胚胎或附置后胚胎原始生殖细胞分离克隆的一种具有自我更新和全向分化潜能的细胞,其具有与胚胎细胞相似的形态特征及分化潜能,同时又可以在体外进行培养、扩增、转化、筛选和冻存.它为克隆治疗以及深入研究基因结构与功能、胚胎发育、各种遗传病模型以及克隆动物和转基因动物等提供了新型实验材料.ES细胞在发育生物学基础研究、组织工程研究、临床医学等方面具有诱人的应用前景和重要的科学意义.本研究以牛为实验材料,探讨影响牛ES细胞分离克隆的因素,完善牛ES细胞的分离克隆程序,为人类ES细胞的研究提供相关的技术参数,主要取得了如下几方面的成果.

    作者:李松;窦忠英;苗增民;华进联;雷安民;徐小明;钱永胜 刊期: 2007年第02期

  • 鼻内镜下经硬腭鼻底鼻咽肿瘤切除术

    目的 探讨鼻内镜在鼻底鼻咽肿瘤切除手术中的应用价值.方法2001年1月~2005年1月共进行手术12例,其中鼻底肿瘤5例,鼻咽肿瘤7例.全部患者均在气管插管全麻,鼻内镜下经硬腭径路手术,其中3例鼻咽肿瘤术前采用血管造影并进行肿瘤供血动脉栓塞,术中根据需要采用控制性低血压技术.结果2例恶性肿瘤术中冷冻确诊后更改术式,其余10例术后硬腭黏骨膜瓣愈合良好,发音、吞咽、呼吸、咀嚼等功能正常,随访1年以上无复发. 结论鼻内镜下经硬腭切除鼻底鼻咽肿瘤较传统硬腭径路手术有明显优势.

    作者:袁宏伟;黄新辉;单晋杰 刊期: 2007年第02期

  • P73、E2F-1、Bcl-2蛋白表达与胃癌生物学行为关系研究

    目的 本研究旨在探讨P73、转录因子E2F-1、凋亡抑制基因Bcl-2在胃癌组织中的表达情况及其临床意义.方法 采用免疫组化技术(SP法)检测46例胃癌癌组织及癌旁正常黏膜中P73、E2F-1、Bcl-2蛋白的表达情况.结果 胃癌组织中P73蛋白的阳性表达率为69.6%,癌旁正常黏膜组织中为4.3%,两组比较具有统计学意义(P<0.01);P73蛋白的表达与胃癌组织学分级、淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关(P<0.05).胃癌组织中E2F-1阳性表达率为73.9%,癌旁正常黏膜中为8.7%,两者比较有显著性差异(P<0.01);E2F-1在癌组织中的表达与TNM分期、组织学分级、淋巴结转移及肿瘤浸润深度无相关性(P>0.05).Bcl-2在胃癌中的阳性表达率为52.2%,在癌旁正常黏膜中为15.2%,两者比较差异显著(P<0.01);Bcl-2在癌组织中的表达与胃癌组织学分级具有相关性(P<0.05).结论P73、E2F-1、Bcl-2在胃癌细胞中共同过度表达,参与了胃癌的发生发展.

    作者:岳丽玲;吴国新;于海涛;王玉;郑丽红;林春荣 刊期: 2007年第02期

  • Peroxiredoxin Ⅱ研究进展

    peroxiredoxins(prxs)蛋白是新近发现的一类过氧化物酶,属于抗氧化蛋白超家族,广泛存在于原核生物和真核生物中.该家族第1个被发现的蛋白是来源于酵母菌的25kD蛋白质,命名为巯基特异性抗氧化酶.哺乳动物的Prxs家族包括6个成员,即prxⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ[1].prxs家族的所有蛋白均在N-端具有保守的半胱氨基酸(cys)残基,部分蛋白在C-端也有保守的cys残基.根据各成员间的同源性和cys残基的数目,prxs家族蛋白可分为3个亚类,即2-cys Prx(prx Ⅰ~Ⅳ),非典型2- Cys prx(prx Ⅴ)和1- cys prx(prx Ⅵ)[2].

    作者:岳海英;黎丹戎;李瑗 刊期: 2007年第02期

  • 应用细胞遗传学方法检测口腔鳞状细胞癌染色体畸变

    目的 检测口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中的染色体数目异常与结构畸变. 方法用秋水仙素、低渗液处理细胞,经冰醋酸膨胀及甲醇固定后,进行Giemsa染色,在油镜下观察细胞染色体,并对细胞染色体核型进行分析. 结果 OSCC的染色体众数为63~66,并存在多种类型的染色体结构畸变,主要为染色体断裂及染色单体断裂.染色体数目异常有1、7、16、19、20号增加及6、9、10、18、21、22号丢失,结构重排主要累及1、2、4、11号等.结论OSCC的染色体变异研究有助于其相关癌基因或抑癌基因在染色体上的定位.

    作者:李侃 刊期: 2007年第02期

  • 肺移植治疗终末期肺病临床研究

    目的 对比国外开展肺移植情况,探讨临床肺移植在我国开展的可行性,目前主要存在的问题及对策.方法2002年5月,我院成立肺移植团队,开展猪肺移植动物实验,在此基础上于2002年9月~2005年8月我院共完成临床肺移植24例,其中肺气肿11例、肺纤维化8例、硅沉着病1例、双侧支气管肺囊肿2例、肺淋巴管平滑肌瘤病1例及室间隔缺损合并艾森曼格综合征1例.受体术前均为重症呼吸衰竭,长期靠呼吸机依赖4例.手术方式:单肺移植20例,包括:左肺移植11例,右肺移植9例,其中2例为同一供体同期的左、右单肺移植,有1例为左侧供肺植入右胸腔,1例为体外循环下室缺修补后行右肺移植,1例为体外循环下右肺移植;双肺移植4例,包括非体外循环下序贯式双侧单肺移植3例,体外循环下序贯式双侧单肺移植1例.结果 术后短期内死亡5例,其中1例于术后15天死于急性排斥,2例于术后30天死于感染、多脏器衰竭,1例术后36天死于肺梗死、1例术后1天死于心脏衰竭.19例痊愈出院,术后早期生存率79.8%(19/24),肺功能极大改善,生存3年以上1例,生存 2年以上2例,1年以上1例,中位生存时间10(1~36)个月. 结论本组肺移植的结果与国际发达国家的疗效相似,肺移植在我国新世纪会迎来一个快速发展阶段,组建肺移植团队、多学科合作是肺移植手术成功开展,术后长期生存的关键;术后的缺血再灌注损伤、排斥和感染仍是肺移植短期死亡的主要原因.

    作者:陈静瑜;郑明峰;胡春晓;朱艳红;何毅军;王永功;周敏;陆国础;陆明华 刊期: 2007年第02期

  • 乳腺针吸细胞病理学对乳腺癌早期诊断研究应用

    目的 探讨乳腺针吸细胞病理学对乳腺癌早期诊断应用价值.方法 用5~10ml一次性塑料注射器,对乳腺肿大或肿块及乳头溢液1324例患者进行定位针吸细胞病理学诊断及分型诊断,并与临床及病理组织学、CT、超声、钼靶、DNA、微核、结核抗体、CA153肿瘤标志物等对照.结果 乳腺针吸细胞病理学不仅对乳腺疾病诊断有重要适用价值,而且对乳腺癌早期诊断及分型诊断有重要价值,特别对鉴别乳腺增生及乳腺纤维腺瘤有否癌变有重要指导意义.穿刺成功率高达100%,早期诊断率16.9%,总诊断准确率高达98.6%,创历史新高.结论 乳腺针吸细胞病理学具有创伤小、简单快速、安全可靠、经济实用、结果准确等优点,各项技术指标明显高于传统诊断方法,是目前任何方法无法取代的,有较高推广实用价值.

    作者:王永才;钟寸荻;王寰;朱杰 刊期: 2007年第02期

  • P15及P16蛋白在脑胶质瘤中表达的研究

    目的 探讨抑癌基因p16、p15在脑胶质瘤中的表达及其与胶质瘤病理分级、恶性程度的关系.方法 应用免疫组化SP方法检测63例人脑胶质瘤手术标本中P16、P15蛋白的表达水平.结果P16、P15蛋白的表达率与脑胶质瘤的病理分级呈负相关,且低恶性组(Ⅰ~Ⅱ级)与高恶性组(Ⅲ~Ⅳ级)相比较有显著差异(P<0.001).结论P16及P15蛋白的表达与胶质瘤的病理分级和恶性程度有关.从而可作为反映脑胶质瘤的增生能力及恶性进展的参考指标.

    作者:兴桂华;张晓杰;荣玮 刊期: 2007年第02期

  • 内源性褪黑素在肺癌患者肠外支持治疗中的变化规律及其与免疫功能关系

    随着科学技术发展,营养支持已成为临床救治危重病人的重要治疗方法之一,但是针对不同疾病提供不同营养支持和特殊营养底物,从而改善能量代谢、提高免疫功能、整体调整机体功能状态达到治疗目的这类深层的临床营养学应用尚缺乏深入研究.本研究选择了非小细胞肺癌(NSCLC)患者作为研究对象,对其营养代谢和给予肠外营养支持进行了初步的探讨,通过含色氨酸(Try)的复方氨基酸营养支持治疗,增加患者内源性褪黑素(MLT)水平,达到改善患者免疫功能,提高辅助肿瘤治疗的目的.

    作者:胡世莲 刊期: 2007年第02期

  • 儿童重症肺炎血清致炎性细胞因子变化及意义探讨

    目的 观察不同程度小儿肺炎时,血清致炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNFα)、白细胞介素6和8(IL-6、IL-8)的动态变化及其临床意义. 方法对2002~2003年杭州市中医院儿科收治的肺炎患儿74例,根据病情轻重将患儿分为重症肺炎组(51例)、非重症肺炎组(23例).采用ELISA法测定治疗前后的血清TNFα、IL-6、IL-8的动态变化.同步测定两组治疗前后的血C反应蛋白和血白细胞总数的动态变化.结果 重症肺炎患儿的血清TNFα (55.94±28.99pg/ml)、IL-6(151.60、±68.75pg/ml)、IL-8(39.09±16.97pg/ml)浓度明显高于非重症肺炎患儿的血清TNFα(13.96±8.01pg/ml)、IL-6(33.76±17.16pg/ml)和IL-8(7.74±3.34pg/ml),两组之间的差异有非常显著意义(P<0.01).治疗后,重症肺炎组的血清TNFα(18.08±7.26pg/ml)、IL-6(11.95±5.11pg/ml)、IL-8(5.81±2.64pg/ml)水平较治疗前明显下降,治疗前后比较差异有非常显著意义(P<0.01),非重症肺炎患儿的血清TNFα(8.49±4.72pg/ml)、IL-6(8.3±3.31pg/ml)水平较治疗前有明显下降,差异有非常显著意义(P<0.01),而IL-8(6.74±2.51pg/ml)的浓度变化其差异无显著性(P>0.05).血清C反应蛋白(CRP)和血白细胞总数呈相似的变化,重症肺炎组患儿血CRP(40.18±18.83mg/L)和白细胞总数[(11.883±4.553)×109/L]均高于非重症肺炎组CRP(8.21±5.51mg/L)和白细胞总数[(8.850±2.492)×109/L).治疗后重症肺炎组血CRP仍高于非重症肺炎组(P<0.01),血白细胞总数在两组间差异无显著意义. 结论在小儿肺炎的发病过程中,存在着致炎性细胞因子TNFα、IL-6、IL-8的过度释放.TNFα、IL-6、IL-8可作为反映肺炎严重程度的监测指标.

    作者:余峰;崔敏娴;姚冬莉;夏晓青;吴琳;柴鸣雷 刊期: 2007年第02期

  • 骨肉瘤基因治疗研究进展

    骨肉瘤是一种临床常见恶性骨肿瘤, 约占所有骨肿瘤的20%.其恶性程度高,好发于青少年,易复发和转移,预后较差.随着分子生物学理论和技术水平的提高, 尤其是肿瘤分子生物学的发展, 骨肉瘤的发生机制在分子水平有了一定的认识.目前,人们针对骨肉瘤及其肺转移已研究开展了免疫基因治疗、反义基因治疗、抑癌基因治疗、自杀基因治疗及其联合基因治疗或联合其他方法的治疗等诸多基辅前景的肿瘤基因治疗方法,现综述如下.

    作者:王桂龙;向阳 刊期: 2007年第02期

  • 自体干细胞移植治疗类风湿性关节炎

    目的 探讨自体干细胞移植治疗难治性类风湿性关节炎的疗效. 方法对1例类风湿性关节炎患者进行自体骨髓移植,预处理方案采用环磷酰胺、ATG.结果 移植后造血恢复较快,干细胞回输后第10天白细胞升至1.0×109/L以上,干细胞回输后第5天患者关节疼痛消失,可下床活动.移植后2个月RF、CRP、ESR均恢复正常.结论 自体干细胞移植有可能作为类风湿性关节炎的有效方法.

    作者:刘珂;阮林海 刊期: 2007年第02期

  • 光动力治疗肿瘤

    光动力治疗(photodynamic therapy, PDT)是20世纪70年代末开始形成的一项治疗肿瘤新技术,目前在美国、英国、法国、德国、日本等不少国家已经获得国家政府相关部门的正式批准,成为治疗肿瘤的一项常规手段.光动力疗法属光医学范畴,其作用基础是光动力效应.在光化学反应中,有一种分子只吸收光子,并将能量传递给那些不能吸收光子的分子,促使其发生化学反应,而本身则不参与化学反应,恢复到原先的状态,这种分子称为光敏剂.

    作者:王洪武 刊期: 2007年第02期

  • 重症乳腺囊性增生症非手术治疗临床探讨

    目的 通过曲安奈德乳腺增生包块内注射,结合口服他莫昔芬、乳块消颗粒的非手术治疗方法,探讨重症乳腺增生的治疗.方法 选择药物治疗1年以上无效,经穿刺细胞学检查和钼钯摄片确诊为重症乳腺增生,而又拒绝手术治疗的病人50例,计71处病灶.用利多卡因、曲安奈德作病灶内注射.包块消散不全者2个月后予他莫昔芬、乳块消颗粒维持治疗.所有病人置于穿刺细胞学严密观察之中.结果1次注射包块消失31处占43.7%(31/71).缩小1/2以上12处,口服他莫昔芬及乳块消颗粒2~6个月后完全消散9处,占12.7%(9/71).注射后包块缩小<1/2者13例,口服他莫昔芬及乳块消颗粒2~6个月后完全消散7处,占9.9%(7/71).总有效率达66.2%(47/71).结论 曲安奈德乳腺增生包块内注射,结合口服他莫昔芬、乳块消颗粒的综合治疗方法能使增生形成的包块缩小、变软甚至消失,为重症乳腺增生提供了一条有效的治疗途径.

    作者:杜明国;杨海波;廖晓峰;王建国;谢飞;王玲;汪明清 刊期: 2007年第02期

医学研究杂志

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主管:中华人民共和国卫生和计划生育委员会

主办:中国医学科学院