学术投稿

以GoldVieW和EB检测PCR产物敏感性的观察

张莺莺;孙新;吴俊英

关键词:核酸检测技术, 琼脂糖凝胶电泳, 染色检测, 聚合酶链反应, 荧光测定法, 染色方法, 检测方法, 分子技术, 比较研究, 显示, 浓度, 安全
摘要:聚合酶链反应(PCR)是公认的一种简便、准确的核酸检测技术,它的检测依赖于显示DNA的染色方法.荧光测定法是测定DNA浓度敏感的分子技术之一[1].作者对琼脂糖凝胶电泳GoldView染色及EB染色检测人4-1BBL(h4-1BBL)的效果进行了比较研究,旨在寻求一种敏感、安全、便捷的PCR产物检测方法.
中国实验诊断学杂志相关文献
  • 正电子发射型断层显像仪的临床应用

    正电子发射型断层显像仪(PET)是利用发射正电子的放射性核素及其标记化合物为显像剂对脏器或组织进行功能、代谢和分子成像的仪器.广泛应用于肿瘤、神经与精神疾病以及心血管等疾病的诊断、治疗与研究中,是本世纪重要的成像设备.

    作者:张浩然;高识;马庆杰 刊期: 2007年第03期

  • 乙醇脱氢酶在各类肝损伤中的变化

    乙醇脱氢酶(Alcohol delydrogenase,简称ADH)的系统名为:乙醇:辅酶Ⅰ氧化还原酶(alcohol:NAD+oxidoreductase).ADH催化乙醇氧化生成的乙醛,可在体内进一步氧化成乙酸,并氧化成乙酰辅酶A,或经三羧酸循环彻底氧化供能,或作为某些物质(如脂酸,胆固醇等)的合成原料.体内ADH的分布有较高的器官特异性,除肝脏含量丰富外,其他组织如视网膜、胃、小肠黏膜及肾的ADH含量甚微,多数器官如心、胰、骨骼肌及红细胞等均不含此酶[1].肝内ADH主要位于细胞液(占80%-90%),少量位于微粒体(3%-12%)和线立体(4%-6%).这些活性的95%分布于肝小叶中心区.本人对我院住院的各类肝损害患者的血清ALT AST GGT ALP ADH进行检测,以探讨血清ADH与ALT AST GGT ALP活性的相关性及ADH各类肝实质损伤之间的关系.

    作者:周泽云 刊期: 2007年第03期

  • 糖尿病患者肾脏早期损害指标的探讨

    糖尿病肾病是糖尿病重要并发症之一,各类因糖尿病所致肾功能损伤日益增多,是导致末期肾功能衰竭的重要原因.因此,对糖尿病肾病的防治,尤其是对早期糖尿病肾病的及早发现更是有着重要的意义.我们通过对98例糖尿病患者的尿蛋白定性(URO)、尿微量白蛋白(mAlb)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定,以探讨糖尿病患者肾脏早期损害的监测指标.

    作者:李毅;詹贞芳;谢必会;宋智盛 刊期: 2007年第03期

  • 小儿肾小球疾病肾活检病理诊断价值

    目的 了解肾活检在小儿肾小球疾病中的诊断治疗意义.方法 在彩超引导下,采用1秒钟抽吸法,对49例小儿肾小球疾病患者进行经皮肾活检术,标本做光镜,免疫荧光,必要时做电镜检查.结果 49例患儿中,按病因分类,原发性肾小球疾病常见,占87.75%;病理类型以系膜增生性病变高,占36.73%,其次为IgA肾病,占28.57%.结论 肾活检病理诊断对小儿肾小球疾病的诊断、治疗及评估预后有重要价值.

    作者:刘树军;李殿秋;丁亚杰;张金兰 刊期: 2007年第03期

  • 小儿肾病、乙肝患者血清CaM与抗CaM自身抗体的测定研究

    目的 研究小儿疾病患者血清中CaM含量和抗CaM自身抗体阳性检出水,探讨CaM及抗CaM抗体与临床小儿疾病的关系.方法 优化实验反应条件,建立检测CaM和抗CaM抗体的ELISA测定方法,并将其初步应用于临床小儿疾病患者血清CaM和抗CaM自身抗体水平测定.结果 优化后的ELISA对CaM和抗CaM自身抗体的实验结果特异、敏感、可靠.在CaM浓度为39 ng/ml-2500 ng/ml范围内,该法对CaM的测定具有良好的线性关系,相关系数(r)大于0.99.临床研究结果表明,各类小儿肾脏疾病血清CaM含量与抗CaM自身抗体均处在与正常对照组相同的水平.但在小儿乙型肝炎患者血清中,两者水平均显著高于正常对照组.25例被检者中分别有5例CaM水平升高,有6例为抗CaM自身抗体阳性,其中有5例为二者水平同时升高.结论 小儿在感染乙型肝炎病毒的发病过程中,即伴有一定程度的CaM和抗CaM自身抗体水平升高,据比推测抗CaM抗体在继发引起小儿自身免疫性肝损害的过程中可能起一定作用.

    作者:谈华;王惠云;虞伟;李晓军;武建國 刊期: 2007年第03期

  • 乳腺癌患者血清ADA及其同工酶的检测分析

    目的 探讨ADA总活性及其同工酶ADA1和ADA2活性与乳腺癌发生发展的关系.方法 应用日立7150全自动生化分析仪,采用酶显色法测定ADA总活性;在反应体系中加入ADA1的抑制剂后,再测定ADA的活性,即为ADA2的活性;通过计算求得ADA1活性.分别检测112例乳腺癌患者和98例对照组ADA、ADA1和ADA2的活性.根据有无绝经、肿瘤大小、淋巴侵袭进行分组,分析不同组别的差异性.结果 乳腺癌患者的血清ADA和ADA2的活性明显高于对照,ADA1活性无差异;乳腺癌患者中绝经后的血清ADA和ADA2活性高于未绝经者;肿瘤大小、淋巴浸润组无统计学意义.结论 乳腺癌患者的血清中ADA和ADA2的活性增高,可能与年龄和激素水平有关,与乳腺癌的预后无关.

    作者:孔虹;梁彬 刊期: 2007年第03期

  • 哮喘病人外周血CD4+ T淋巴细胞自噬现象的观察

    目的 观察分离培养的哮喘病人外周血CD4+ T淋巴细胞的自噬现象.方法 密度梯度离心法、尼龙棉柱法及磁分离法分离哮喘病人外周血CD4+ T淋巴细胞,分空白组及地塞米松(DXM)组,培养72 h后用流式细胞仪检测自噬细胞比例变化.结果 DXM组与空白组72 h自噬细胞发生率有显著性差异.结论 DXM可诱导哮喘病人外周血CD4+ T淋巴细胞自噬.

    作者:孟宪明;黄勤欢;黄瑾 刊期: 2007年第03期

  • 骨桥蛋白在原发性肝癌中的表达及其与预后的关系

    目的 探讨骨桥蛋白(OPN)在原发性肝癌中的表达及其与临床、病理、预后之间的关系.方法 采用免疫组化SP法检测32例原发性肝癌组织、4例正常肝脏组织中OPN的表达,分析其表达与肝癌及肝癌患者预后的关系.结果 ①原发性肝癌组织中OPN表达明显高于正常组织(P<0.01).②OPN的阴性表达与阳性表达在肿瘤的分级中存在差异(P<0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤直径、AFP水平无关(P>0.05).③OPN阳性表达生存期相对缩短,为一负性预后因子.结论 OPN阳性表达与肝癌的发生;发展及预后密切相关

    作者:姜伟栋;印芳颖;韩喜春;关文曾 刊期: 2007年第03期

  • 头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其耐药状况分析

    我们对我院2004年1月-2005年12月间分离到的254株金黄色葡萄球菌采用头孢西丁纸片散法检测到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)87株,并对其耐药状况进行回顾性分析,结果报告如下.

    作者:王萍;周丽华 刊期: 2007年第03期

  • 2006年泌尿生殖系统支原体感染状况及耐药性分析

    目的 通过分析2006年度我院门诊妇产科及皮肤科1006泌尿生殖道分泌物支原体(Mycoplasma)感染及耐药性变迁情况,为临床提供新的流行病学资料及用药指导.方法 采用支原体培养、药敏一体化方法检测我院妇科、皮肤科送检的泌尿生殖道分泌物,分析就诊患者的性别、年龄等临床资料以及支原体培养药敏实验结果.结果 2006年疑似非淋菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis,NGU,女性为宫颈炎)患者2001例,支原体阳性率为50.3%,其中解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)、人型支原体(Macoplasma hominics,Mh)、混合型(Mh+Uu)分别占总阳性的87.4%、1.5%、11.1%.支原体阳性患者以20-40岁青壮年为主,女性患者多于男性.2006年度Uu对四环素类药物的敏感性高,对大环内酯类次之,对喹诺酮类耐药性为严重.整体上看混合型感染、单纯Mh感染者耐药性较Uu单纯感染者严重.结论 支原体感染已成为非淋球菌性泌尿生殖系统炎症的主要病原体之一,且耐药性十分严重,临床治疗中合理用药以减少耐药菌株产生是当务之急.

    作者:薛文成;孟冬娅;万楠;褚美玲;张春玲;方秀菊 刊期: 2007年第03期

  • 化疗药物对体外培养同步化MCF-7细胞存活和凋亡的影响

    目的 探讨不同化疗药物在体外培养的经TAM同步化MCF-7细胞存活率和凋亡的影响.方法 以体外培养雌激素受体阳性细胞MCF-7为研究对象,采用MTT法和流式细胞术法检测MCF-7细胞存活率和细胞凋亡.结果 体外培养的MCF-7细胞的倍增时间是33 h,TAM可使MCF-7同步化于G0/G1期,5-Fu、DDP、ADM在中低剂量时可使同步化的MCF-7细胞存活率降低,与不同步化组比较差异具有显著性(P<0.05).采用流式细胞术方法检测DDP、ADM中低剂量组可使经TAM同步化的MCF-7细胞PCD%增加,与不同步化组相比较差异具有显著性(P<0.05).结论 不同化疗药物可诱导经TAM同步化的细胞发生凋亡.

    作者:刘亚辉;刘波;谭岩 刊期: 2007年第03期

  • 肿瘤免疫治疗实验研究的新热点——Exosome

    肿瘤治疗除手术、放疗和化疗外,免疫治疗已成为治疗肿瘤的方法.肿瘤的主动特异性免疫疗法(ASI)是近年研究的热点,目前应用于临床实验的多表位肿瘤抗原主要来源于肿瘤细胞的溶泡物质,但真正实用的肿瘤相关抗原十分有限.

    作者:黄海燕;王占峰;鞠砚 刊期: 2007年第03期

  • 被动吸烟对血管内皮舒张功能和血浆CRP的影响

    目的 探讨被动吸烟对健康青年人血管内皮舒张功能和血浆C反应蛋白(CRP)的影响.方法 采用超声肱动脉内径测量法,观察被动吸烟、主动吸烟及正常对照组各30例血流介导的和硝酸甘油介导的肱动脉内径变化;同时测定血浆CRP含量.结果 三组肱动脉内径基础值及硝酸甘油介导的肱动脉舒张均无显著差异(P>0.05),而血流介导的血管扩张被动吸烟组与正常对照组间存在显著差异(P<0.01),与吸烟组无显著性差异(P>0.05).主、被动吸烟组血浆CRP含量均高于正常组(P<0.05),而两组间个指标含量无显著性差异.结论 被动吸烟导致健康青年人群血管内皮舒张功能损伤可能与血浆CRP含量增加有关.

    作者:刘爱玲;马红;王文丽;陈伟;屈娟娟 刊期: 2007年第03期

  • 对500例阴道炎病原体检测情况分析

    近年来,阴道炎有逐步上升超势,尤其是多种病原体合并感染已成为目前临床上一个非常棘手的问题[2-3],笔者应用超高倍显微诊断仪对500例炎性阴道分泌物进行动态检测,分析统计病原体感染状况并报告如下.

    作者:谢冰 刊期: 2007年第03期

  • 重组促红细胞生成素对血液透析患者铁代谢的影响

    目的 测定维持性血液透析患者血清促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)及铁参数,探讨血液透析患者的铁代谢状况及重组EPO(recombinant human erythropoietin,rh-EPO)治疗对铁代谢的影响.方法 选择单纯血液透析和接受rh-EPO治疗的血液透析患者31例,分别测定血常规及血清EPO、铁参数,并与健康对照组进行比较.结果 血液透析患者和rh-EPO治疗的血液透析患者RBC、Hb、Hct、SI、TS显著低于健康对照组(P<0.05,P<0.01),SF、sTrFR和TIBC高于健康对照组,尤其是sTrFR和血液透析组的SF显著升高(P<0.05).血清EPO的检测3组间无明显差异.结论 血液透析患者存在贫血伴缺铁及铁代谢紊乱.给予rh-EPO治疗可改善肾性贫血,同时改善铁代谢紊乱.rh-EPO的应用对血液透析患者体内EPO水平影响不大.

    作者:杜玉君;王冠军;窦海川;艾清 刊期: 2007年第03期

  • 47,XX,(+18)染色体病1例报告

    先天性染色体数目异常或结构畸变而发生的疾病,称为染色体病或染色体综合征.现已发现人类的染色体数目异常和畸变约10000余种.除平衡易位携带者和少数性染色体异常外,智能低下和发育迟缓几乎是所有染色体异常患者共同的特征.18三体综合征在临床上存活病例少见,本文就疾病的诊断分析如下:

    作者:王军荣;刘志婷;续薇;关宝杰 刊期: 2007年第03期

  • 急性白血病患者化疗前后IL-2及IL-6水平的变化及临床意义

    目的 研究急性白血病患者化疗前后免疫功能的变化,探讨IL-2、IL-6的水平与患者预后的关系,并为临床治疗提供理论依据.方法 应用放射免疫分析法对84例急性白血病患者进行化疗前后血清IL- 2、IL-6含量检测,并与30例正常健康人作对照.结果 急性白血病初治组及短期CR组IL-2水平分别为(18.76±9.43)ng/L,(29.48±6.39)ng/L明显低于长期CR组(46.73±8.26)ng/L及正常对照组(53.61±8.92)ng/L;初治组及短期CR组IL-6水平分别为(126.38±15.62)ng/L,(82.34±10.18)ng/L明显高于长期CR组(30.35±7.65)ng/L及正常对照组(23.52±6.25)ng/L.初治组IL-2和IL-6水平与长期CR组及正常对照组比较,差异有显著性,P<0.05.结论 初治及短期CR急性白血病患者体内以Th2型细胞因子占优势,造成免疫抑制状态,与IL-2、IL-6水平有关,白血病易于复发.随着CR时间的延长免疫状态逐渐恢复.IL-2、IL-6的水平可作为临床上评估患者免疫状态和预后的指标.

    作者:李焱;索晓慧;牛志云 刊期: 2007年第03期

  • 在人消化道肿瘤细胞表面构建α-gal表位的研究

    目的 在大肠杆菌中以可溶性形式表达鼠源性α-1,3-半乳糖基转移酶的催化结构域(α1,3 GTcd;catalytic do-main of α1,3GT),利用其在人消化道肿瘤细胞表面构建α-gal表位(Galαl-3Gal-β1-4GlcNAc-R),拟用来制备一种新的自体肿瘤疫苗.方法 利用pET-15 b载体以可溶性形式表达鼠源性α1,3 GTcd,利用高效液相色谱阴离子交换柱检测酶的活性.通过其在人不同消化道肿瘤细胞表面构建α-gal表位,先与人血清孵育,FITC标记的羊抗人的IgG为第二抗体,用流式细胞仪检测荧光强度,以分析α-gal表位的表达结果.结果 可溶性高效表达与纯化了带有His-tag的α1,3GTcd并利用HPLC阴离子交换柱检测α1,3 GTcd的活性.流式细胞仪检测结果证明了在人消化道肿瘤细胞表面成功构建了α-gal表位.结论 本研究可溶性的表达了α1,3 GTcd,并利用其在人消化道肿瘤细胞表面成功地构建了α-gal表位.为该方法的临床治疗的应用打下坚实的基础.

    作者:张睿;迟宝荣;朱学伟 刊期: 2007年第03期

  • 血清胱抑素C与肌酐在肾功能不同损害期患者中的应用比较

    目的 研究肾功能不同损害期患者血清胱抑素C(Scc)浓度变化及其与血清肌酐(Scr)和肌酐清除率(Ccr)的相关性,并对血清肌酐和胱抑素C在反映肾小球滤过率(GFR)中的应用作一比较.方法 采用免疫比浊法测定125例患者SCC水平;采用Jaffe法测定SCr和Ccr,并进行相关分析.结果 Scc与Scr呈高度正相关(r=0.783,P<0.01),Scc与Ccr呈高度负相关(r=-0.835,P<0.01);同时在肾功能损伤早期,Scc比Scr和Ccr更敏感,而且Scc与Ccr的相关性(r=-0.835)要好于Scr和Ccr的相关性(r=-0.615),两者有显著性差异(P<0.05).结论 Scc是反映GFR的一项敏感指标,可以取代Scr和Ccr在临床上常规应用.

    作者:姚虹;苏建荣;李岩 刊期: 2007年第03期

  • C-反应蛋白对急性冠脉综合征患者预后判断价值

    目的 探讨血浆炎症标志物C-反应蛋白水平与急性冠脉综合征(ACS)的相关性以及与近期预后的关系.方法 测定120例ACS患者和94例健康对照组的血浆CRP水平,随访ACS患者住院期间、30天以及3个月死亡事件以及MACE发生率.结果 (1)120例ACS患者中AMI组35例,UAP组85例,血浆CRP水平分别为17.81±10.4 mg/L和10.64±6.58 mg/L,与对照组CRP水平4.52±1.20 mg/L相比均明显升高,P<0.05,而且AMI组和UAP组之间的CRP水平也有差异,AMI组高于UAP组,P<0.05.(2)根据血浆CRP水平将120例ACS患者分为三组:CRP≤8.0 mg/L组,8.1-24.0 mg/L组,>24.0 mg/L组.随着血浆CRP水平的升高,各组的死亡率和MACE发生率也呈现增高趋势.在多变量的Logistic回归分析中,CPR独立于年龄、性别、吸烟、高脂血症、高血压、糖尿病等冠心病危险因素,预测30天死亡率OR=3.33,95%CI 1.71-12.46,3个月死亡率OR=3.08,95%CI 1.57-10.89,P<0.05;预测30天MACE发生率,OR=1.29,95%CI 1.11-6.01,3个月MACE发生率,OR=1.14,95%CI 1.09-5.27,P<0.05.结论 血浆CRP水平与ACS密切相关,ACS病情越严重CRP水平越高.而且CRP水平和ACS患者的临床事件的发生率密切相关,可预测短期的病死率和MACE发生率,对判断ACS患者的近期预后有重要的参考价值.

    作者:陈星海;魏岩;李家宏 刊期: 2007年第03期

中国实验诊断学杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:吉林大学中日联谊医院 上海交通大学医学院附属瑞金医院