耿学军；常伟勤；范伟全；杨莉莉；贺巾超；马杰；颜炜群
甲基化胞嘧啶(5'methylated cytosine,5mC)被称之为人类DNA的第5种碱基.肿瘤表观基因组(cancer epigenomics)概念的提出和人类表观基因组计划(Human Epigenetic Project,HEP)的实施将表观遗传学研究又推向了一个新的高度[1].了解DNA甲基化分析技术的原理、适应范围和优缺点有利于研究者根据自身不同需求和设备条件来选择有效方法达到终目的[2,3].
作者：黄庆；府伟灵 刊期： 2005年第02期
目的研究脑外伤大鼠脑内碱性成纤维生长因子(bFGF)mRNA和肿瘤坏死因子(TNF)蛋白表达的时程变化,探讨脑外伤后神经功能修复的内源性机制.方法自由落体法制作脑外伤大鼠模型,用Northemblot和吸光度扫描分析bFGFmRNA表达,Westemblot检测TNF蛋白表达.结果脑外伤大鼠脑内bFGFmRNA和TNF蛋白的表达在12～24h开始增高,3 d时达到高峰,7 d时逐渐减弱.结论脑外伤后,随着大鼠脑内损伤因子TNF蛋白表达的增强,保护因子bFGF mRNA的表达也相应增强,二者的相互作用这可能是脑外伤后神经功能损伤与修复的主要机制之一.
作者：陈大庆；宋冬晶 刊期： 2005年第02期
目的了解肺癌患者外周血CEA-mRNA的水平.方法采用实时荧光RT-PCR技术,检测肺癌患者78例,肺部良性疾病(BLD)患者70例,健康志愿者30例外周血CEA-mRNA的水平.结果78例肺癌患者外周血CEA-mRNA的平均水平为(10 238.4±18 526.3)copies/ml,其中43例阳性、阳性率为55.1%.BLD患者外周血CEA-mRNA平均水平为(827.4±603.7)copies/ml,其中阳性2例,阳性率为6.7%.健康对照未检测到CEA-mRNA.CEA-mRNA水平与肿瘤病理分期和分化程度相关;CEA-mRNA阳性组患者血清CEA蛋白的阳性率与CEA-mRNA阴性组相比差异无显著性(P＞0.05).结论外周血CEA-mRNA可作为肺癌辅助诊断指标,定量检测外周血CEA-mRNA可作为肺癌微转移的一个监测指标.
作者：李招云；毛卫华；张黎明；王乐见 刊期： 2005年第02期
目的评估原发性肝细胞癌(HCC)患者血清AFP数值变化在介入临床治疗过程中的意义.方法136例Child-Pugh A级HCC患者,均经导管化疗栓塞(TAC/TACE)干预.按照栓塞剂用量进行分组;分别于术前3天、术后3天、以及术后4～6周进行血样采集;采用放免方法对样本血样进行血清AFP数值测定.结果Child-PughA groupHCC患者按照碘油用量分组,术后4～6周AFP数值与术前3天相比无显著性差异(P＞0.05).术后3天AFP数值与术前3天相比,AFP数值变化存在显著差异,其中TACE(I.O≥8 ml)组差异性显著(P＜0.05).非规律TACE组与规律TACE组2次治疗术前AFP数值相比较,具有统计学显著相关性(P＜0.005).结论在允许的情况下,适当增加的碘油的用量、规律进行TACE治疗可以更好的降低血清AFP数值,达到介入治疗控制HCC的目的.
作者：张海峰；杨海山；赵永生；王大伟；金仲慧 刊期： 2005年第02期
目的建立检测大鼠TGF-β1 mRNA表达水平的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法.方法摸索SYBRGreen Ⅰ工作液的配制方法,筛选PCR反应液,优化反应中引物和MgCl2的浓度,以actin为对照,建立大鼠TGF-β1 mR-NA表达水平的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法并检测大鼠肾皮质TGF-β1 mRNA表达水平.结果SYBR GreenⅠ工作液,40倍水溶液稳定性好,佳反应稀释度为1:10000.大鼠TGF-β1表达水平的SYBR Green荧光定量PCR方法,TGF-β1和actin的佳MgCl2反应浓度分别为2.5 mM和3.5 mM,引物浓度分别为0.8 μM和0.5 μM,特异扩增产物的熔解温度分别为88.1和88.6℃,因此选择在85℃时收集荧光信号.正常大鼠TGF-β1的Ct值在29.03,actin的Ct值在24.86,扩增效率分别为0.995和1.08.结论通过优化反应条件和特异性分析,成功地建立了特异、敏感的大鼠TGF-β1 mRNA SYBRGreen Ⅰ荧光定量RT-PCR.SYBRGreen Ⅰ荧光定量PCR快速、敏感、特异、经济,可以满足临床和科研的需要.
作者：陈英剑；胡成进；赵苗青 刊期： 2005年第02期
目的探讨床旁B型利钠肽(BNP)测定对急性呼吸困难鉴别诊断的敏感性、特异性和准确性.方法采用美国博适-Triage干式快速定量心力衰竭/心肌梗死诊断仪对367例心源性和非心源性呼吸困难患者床旁BNP测定.结果不同心功能分级患者BNP水平不同;BNP水平小于61pg/ml患者基本可诊断为非心源性呼吸困难;BNP水平大于100pg/ml但小于500pg/ml患者需考虑心源性呼吸困难可能;大于500pg/ml患者基本可诊断为心源性呼吸困难.结论BNP水平高低是鉴别心源性和非心源性呼吸困难可靠的指标.
作者：孙晓鸥；姜朝晖；赵荣 刊期： 2005年第02期
目的建立孕周为19～37周各胎龄段的正常胎儿脐血凝血因子的活性的正常范围,并与正常新生儿及成人血浆凝血因子的活性进行比较,了解各凝血因子活性的动态变化,为产前诊断血液病提供依据.方法采用美国IL公司的AGL Futura Plus型全自动血凝仪检测182例胎儿、32例足月新生儿、30例健康成人血浆中的凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ的活性.结果凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ的活性在19～30周随胎龄的增加变化不明显,在出生时Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ因子活性都显著增加,但明显低于成人,Ⅷ因子在出生时显著增加已达成人水平,胎儿Ⅴ因子活性在19周时已达成人水平.结论凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ的活性在胎儿、新生儿血浆中是一个动态变化过程,凝血因子活性发展不平衡,胎儿Ⅴ因子活性在19周时已达成人水平,Ⅷ因子在出生时已达成人水平,Ⅱ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ因子活性在出生时显著低于成人.
作者：霍梅；林琳华；龚文胜；叶素丹；何林 刊期： 2005年第02期
目的比较不同消化酶对体外培养的原代乳鼠雪旺细胞的影响.方法取1周龄SD乳鼠坐骨神经,分别用胰蛋白酶、胶原酶Ⅱ型、混合酶消化,相同方法及实验条件下进行雪旺细胞培养,观察细胞形态、计算24h贴壁活细胞百分比及MTT微量比色法比较细胞的生长增殖状况.结果胰蛋白酶消化组细胞收获量相对小,细胞损伤程度较大;胶原酶组细胞有一定程度损伤;混合酶组细胞收获量大,细胞生长状态较好.结论单纯使用胰蛋白酶或胶原酶消化对原代雪旺细胞的活性及增殖有一定影响,采用胰蛋白酶与胶原酶联合消化效果较好.
作者：李春雨；张振兴；崔树森；孙鸿斌；韩冬；刘飙；王悦书 刊期： 2005年第02期
作者： 刊期： 2005年第02期
目的探讨PEX基因在体外对鼠黑色素瘤细胞B16F10生物学性状的影响.方法利用脂质体介导转染法,经G418稳定筛选后,应用MTT、流式细胞术、软琼脂克隆形成实验及Boyden小室侵袭实验,体外观察PEX基因对B16F10细胞生物学性状的影响.结果BpcDNA-sPEX、BpcDNA、B16F10三组细胞生长速度、细胞周期各时相均无明显差异(P＞0.05);BpcDNA-sPEX组细胞集落与BpcDNA组和B16F10组相比统计学上存在显著性差异(P＜0.01),BpcD-NA-sPEX组细胞集落比BpcDNA组和B16F10组少,且单个集落中细胞数目少;BpcDNA-sPEX组细胞穿透Matrigel胶能力比BpcDNA和B16F10组细胞弱,统计学上存在显著差异(P＜0.01).结论PEX基因转染对体外单纯培养的B16F10细胞生长、增殖无影响;PEX基因可抑制B16F10细胞在软琼脂中形成集落的能力及体外侵袭能力.
作者：许传杰；王贵全；张立红；朱桂彬；王英；李玉林 刊期： 2005年第02期
目的观察2型糖尿病患者血、尿转化生长因子β1(TGF-β1)变化,探讨TGF-β1与糖尿病肾病关系及其检测的临床意义.方法对79例2型糖尿病患者和20例健康人,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ⅡASIA)同时检测血和尿中TGF-β1浓度.结果与正常对照比较,糖尿病患者血TGF-β1(45.57±21.78 vs 24.58±12.61 ng/ml)、尿TGF-β1(61.68±35.92 vs 19.89±13.06ng/mmol.Cr)均增高,差异有显著意义,随肾病进展血、尿TGF-β1增高愈明显.在正常、微量和大量白蛋白尿糖尿病患者之间,血、尿TGF-β1水平存在显著差异;血TGF-β1、尿TGF-β1与24h尿白蛋白排泄率呈正相关(r=0.397,P＜0.05;r=0.537,P＜0.05).结论糖尿病患者血、尿TGF-β1明显升高,并与糖尿病肾病进展一致.血、尿TGF-β1可以作为糖尿病肾病敏感的早期诊断指标之一.
作者：荆春艳；叶山东；陈燕；任佰龄 刊期： 2005年第02期
目的制备OVA66蛋白和其抗体,探讨其检测肿瘤的应用价值.方法应用原核表达技术和Ni2+亲和层析法,制备纯化的OVA66蛋白,经SDS-PAGE电泳鉴定,将纯化蛋白加佐剂免疫家兔,获得抗OVA66蛋白抗血清,并应用Westem Blot测定其滴度和特异性.利用OVA66蛋白和其抗体分别建立ELISA和免疫组化法,测定正常人和肿瘤患者的血清OVA66抗体水平和肿瘤组织标本中OVA66蛋白表达量.结果获得的高纯度OVA66蛋白和高滴度、特异性抗OVA66抗血清.ELISA检测显示,正常人和肿瘤患者血清抗体水平存在显著性差异(P＜0.001).正常人组OD均值为0.20±0.05,肿瘤患者组OD均值为0.36±0.12,肿瘤患者中阳性率为40%(46/116).免疫组化法结果表明,肿瘤组织标本阳性率达81%(34/42),而正常组织均为阴性.结论应用OVA66蛋白和其抗血清建立的检测方法,为临床肿瘤辅助诊断的应用奠定基础.
作者：杨振熙；李美星；尤强；陈影；张惠珍；葛海良 刊期： 2005年第02期
1临床资料男性,39岁,因发作性头晕、行为失常2年、突发昏迷、肢瘫1次于1992年3月2日就诊.患者2年前在劳累或空腹时出现头晕、心悸,伴有行为失常(如倒骑摩托车),约每2～3个月发作一次,每次经休息或输液治疗后好转.因此将工作岗位由以体力劳动为主调整到以脑力劳动为主,但发作次数并未减少.
作者：乔建文 刊期： 2005年第02期
总结1994年～2002年2月在我院治疗的64例MM患者,并对发生医院感染的32例进行回顾性统计分析.现将结果报告如下.
作者：肖大为 刊期： 2005年第02期
目的加深对脑动静脉畸形的血管造影表现特点的认识,探讨其诊断价值.方法回顾性分析98例脑动静脉畸形的选择性动脉造影资料,由两名医生对其DSA表现进行动态观察、共同分析,并达成一致意见.结果DSA均可显示供血动脉、畸形血管团和引流静脉,获得明确的诊断.98例脑AVM中,病灶大直径4.0 cm以下者57例,位于深部46例,单支供血动脉17例,深部引流16例,单支引流静脉37例.结论DSA检查是脑动静脉畸形合理而可靠的诊断方法,有利于估计其预后并制订治疗方案.
作者：戚跃勇；邹利光；王文献；孙清荣；刘卫金；戴书华 刊期： 2005年第02期
球形肺炎是急性肺炎在影像学上的特殊表现,近来临床上发病率明显增高,因影像学上与肺内其他球形病灶相似[1],如早期严重急性呼吸综合征,肺结核,周围型肺癌等,故极易误诊.我院从2002年11月至2003年5月收治球形肺炎患者24例,且其中20例为本院职工,集中在门诊、ICU、呼吸科及中心实验室等.患者陆续发病,在发病前多有过度疲劳、抵抗力下降等诱因,但相关医护人员在无特殊防护的情况下并未发病,表明病菌虽具有一定的传染性,但毒力相对较弱.现报告如下.
作者：尹金植；张云霞；张捷 刊期： 2005年第02期
右心室(右室)梗死是心肌梗死的一种特殊类型,在诊断和治疗上有许多不同于左室梗死之处,临床上有时被误诊或漏诊.本文将我院2000～2002年收治的182例急性心肌梗死病例进行筛选,共发现11例门诊(急诊)收入院的误诊或漏诊的急性右室心肌梗死患者,占6.04%,旨在探讨、分析临床上急性右室心肌梗死误诊、漏诊的原因.
作者：徐丹；李岩松 刊期： 2005年第02期
目的在烟草中高效表达抑肽酶(bpti).方法克隆抑肽酶基因,以烟草叶片为外植体,通过根癌农杆菌将其导入烟草,经卡那霉素抗性筛选和PCR扩增检测基因的整合;抽提转染植株叶片中的抑肽酶,进行活性测定.结果抗性植株整合并高效表达了抑肽酶.结论构建的含抑肽酶基因的植物表达载体pBI121+bpti具有正确的阅读框,并能在异源植物中表达.
作者：耿学军；常伟勤；范伟全；杨莉莉；贺巾超；马杰；颜炜群 刊期： 2005年第02期
目的探讨肝素酶表达在胃癌发展中的作用.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定42例胃癌和26例非癌组织中肝素酶的表达情况,采用χ2检验比较肝素酶的表达与胃癌临床病理特征之间的关系.结果胃癌中有26例肝素酶呈阳性表达(阳性率61.9%);非癌组织中只有1例呈弱阳性表达(阳性率3.8%).肝素酶mRNA在胃癌TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期明显比Ⅰ、Ⅱ期表达阳性率高(P＜0.05),而且更倾向于在有浆膜浸润、淋巴结转移或远端转移的胃癌组织中表达(P＜0.05).结论肝素酶可能促进胃癌浸润和转移,在胃癌的转移途径中,参与淋巴道转移而非血道转移.肝素酶可作为预测胃癌复发、转移的分子标志物之一.
作者：陈岳明；张卫英；裘春宁；卢中；杨仲国 刊期： 2005年第02期
目的探讨CT血管造影(CTA)在脑动脉瘤诊断、治疗中的价值.方法对21例可疑动脉瘤病人进行CTA检查,开始的8例同时进行数字减影血管造影(DSA)检查,将CTA与DSA的检查结果相互比较,并与术中所见进行对照.结果21例可疑动脉瘤病人共检出23个动脉瘤并经手术证实,出现假阳性动脉瘤1个.CTA可以显示动脉瘤的形态、瘤体指向、动脉瘤与载瘤动脉的关系,为手术提供便利.结论CTA具有快速、微创、经济、提供的信息量大、检查人员接受辐射小等优点,可以作为蛛网膜下腔出血及可疑动脉瘤病人的首选检查方法.但CTA不能连续观测脑循环过程及进行血管内操作.
作者：朴颖哲；尹卫 刊期： 2005年第02期
中国实验诊断学杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：吉林大学中日联谊医院 上海交通大学医学院附属瑞金医院
