学术投稿

Survivin特异性shRNA表达载体的构建及评价

史美龙

关键词:RNA干扰, 生存素, 结肠癌, shRNA
摘要:目的 构建针对人结肠癌细胞系Lovo的高效率沉默Survivin的shRNA表达载体.方法 合成特异性干扰Survivin的小发卡RNA(shRNA)片段,并与pGenesil2 载体连接,构建Survivin干扰载体(pGenesil2-Survivin shRNA).利用脂质体将其转染Lovo细胞,分为正常细胞对照组和3个shRNA干扰组(pGenesil2-Survivin1、2及3),应用荧光显微镜对转染效果进行评价,应用Western印迹和免疫细胞化学法分析转染后Lovo中Survivin的蛋白表达水平.结果 插入片段测序结果与合成shRNA结果一致;转染效率可达70%左右,转染pGenesil2-Survivin shRNA后,3个干扰组的Lovo细胞中Survivin蛋白表达水平均较正常对照组显著降低(P<0.01).结论 成功构建了能高效沉默Survivin的RNAi表达载体;且pGenesil2-Survivin高效抑制结肠癌Lovo细胞中Survivin基因表达.
中国老年学杂志相关文献
  • 白细胞介素与急性冠脉综合征

    急性冠脉综合征(ACS)包括不稳定心绞痛(UA)、急性非ST段抬高心梗(NSEAMI)和急性ST段抬高心梗(SEAMI).它们共同的病理基础是血管内皮损伤,细胞因子和炎症细胞侵入,血小板聚集,斑块破裂出血,血栓形成.白细胞介素(IL)是由多种细胞产生,作用于多种细胞的一类细胞因子.近年来,IL在ACS中的作用越来越引起人们的重视.本文对IL在ACS中的作用地位加以概述.

    作者:费瑜;李淑梅;张文琪;吕丽丽;王莉;吴丽侠 刊期: 2009年第11期

  • 乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因对肺腺癌A549细胞周期及增殖的影响

    目的 构建乏氧(HRE)/辐射(Egr1)双敏感启动子介导的分泌型人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)(shTRAIL)基因表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,观察其对肺腺癌A549细胞周期及增殖的影响.方法 利用化学合成HRE上、下链,PCR扩增得到双链HRE;利用基因重组技术构建含有HRE/Egr1双敏感启动子介导shTRAIL的表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,经酶切、PCR和测序鉴定正确后,干扰质粒经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞,MTT法检测A549细胞增殖的变化,流式细胞术检测A549细胞周期的变化.结果 BamH I和Sma I酶切,所得片段大小分别为1 284 bp和4 998 bp、2 292 bp和3 990 bp;以载体为模板,Egr1和shTRAIL引物进行PCR扩增,可得到469 bp和820 bp产物;将pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL进行测序,所得结果与设计一致,说明构建正确.转染肺腺癌A549细胞后,乏氧与辐射能够降低细胞增殖能力,增加G0/G1和S期细胞百分比,降低G2/M期细胞百分比(P<0.05,P<0.01),二者联合作用更明显.结论 乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因在乏氧和/或辐射条件下能够延长细胞G0/G1和S期,缩短G2/M期,并且抑制肺腺癌A549细胞增殖能力,二者协同作用更明显.

    作者:杨艳明;王志成;王铁君;王溪;曲雅勤 刊期: 2009年第11期

  • 睾酮对心肌成纤维细胞表型转化的干预研究

    目的 观察氧化应激对心肌成纤维细胞(CF)表型转化的影响以及睾酮的干预作用,初步探讨睾酮抗心脏老化过程中心肌纤维化的机制.方法 差速贴壁法培养雄性昆明白乳鼠心肌成纤维细胞, 用β-半乳糖苷酶瓤色检测细胞的衰老,MTT法检测细胞增殖能力,采用免疫细胞化学染色检测肌成纤维细胞的典型标记-α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA).结果 H2O2刺激下β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例增加,心肌成纤维细胞增殖率降低,α-SMA免疫化学染色出现明显强阳性;睾酮在3.0×10-9、3.0×10-8和3.0×10-7mol/L 3种浓度下均具有延缓H2O2诱导的以上效应,氟他胺(Flu)能部分阻断睾酮的各种保护作用.结论 睾酮通过受体机制可以逆转H2O2诱导的心脏成纤维细胞表型的转化,这可能是睾酮抗心脏老化过程中心肌纤维化的机制之一.

    作者:刘新强;吴赛珠;邢晓雯;阮云军;何天民;罗才福;赖文岩 刊期: 2009年第11期

  • 糖尿病合并脑梗死老年患者下肢动脉病变的彩色多普勒超声观察

    糖尿病(DM)作为脑血管疾病的一种独立危险因素已得到公认,尤其是DM合并脑梗死因发病率高、病情重、死亡率高等特点被人们广泛重视.DM合并脑梗死颈动脉病变的研究较多,然而,其与下肢动脉病变相关性的关注较少.因此,本研究对DM合并脑梗死与无脑梗死老年患者的下肢动脉行彩色多普勒超声检查并进行对比研究,探讨下肢动脉超声在DM合并脑梗死老年患者检测的价值和意义.

    作者:孙成瑜 刊期: 2009年第11期

  • 年龄对非体外循环冠状动脉旁路移植手术的影响

    目的 研究年龄对非体外循环冠状动脉旁路移植手术(OPCAB)结果的影响.方法 148例行OPCAB的冠心病患者,其中年龄≥65岁47例(老年组),年龄<65岁101例(对照组),两组患者术前年龄层次不同、老年患者合并慢性阻塞性肺病(COPD)较多外其他特征基本相同,均在麻醉诱导期及关胸时抽动脉血行血气分析并计算肺泡-动脉血氧分压差(PA-aO2),术前及术后第1天抽静脉血查血糖、肌酐、尿素氮及总胆红素,观察临床指标及并发症情况.结果 两组患者血糖、肌酐、尿素氮及总胆红素变化情况、手术时间、搭桥支数、心包纵隔引流量、输血量、血管活性药物使用量、住院期间死亡率、二次手术止血率及伤口感染等其他并发症情况无显著差异(P>0.05),但老年组术后房颤的发生率高于对照组(P<0.05);老年组和对照组关胸时动脉血氧分压分别为(77±9)、(82±10)mmHg(P<0.05), PA-aO2分别为92.6±10.5、78.4±9.4(P<0.05);老年组术后呼吸机使用时间、 ICU 时间、总住院时间长于对照组(P<0.05).结论 OPCAB对老年患者是安全的,但风险及某些并发症高于年轻患者.

    作者:周涛;张大国;阎兴治;向道康;刘秀伦;舒义竹;刘军;刘小斌 刊期: 2009年第11期

  • 黄芪化学成分及对心血管系统作用的研究进展

    黄芪是一种常用的补气中药.中国药典规定药用黄芪为豆科植物膜荚黄芪(Astragalus membranaceus (Fisch) Bge)或蒙古黄芪[Astragalus membranaceus (Fisch) Bge.var.mongholicus (Bge.)Hsiao]的干燥根[1].通过高效液相色谱-质谱研究膜荚黄芪与蒙古黄芪主要化学成分相似,但也存在一些差异[2].黄芪提取物(Extract of astragalus,EA)主要含黄酮类、皂苷类、多糖类、氨基酸及微量元素等化学成分.文献记载黄芪具有补气固表、托毒生肌、排脓止汗等功效,现代药理学研究证明:黄芪具有强心、抗心律失常、调节血压、利尿、增强机体免疫功能等多种作用.本文就黄芪的化学成分从器官、细胞、分子水平分析了对心血管系统的药理作用与作用机制.

    作者:黄玫;曲晶;李晓天;王丹丹 刊期: 2009年第11期

  • 老年人骨关节损伤多层螺旋CT诊断34例临床分析

    常规CT横断面扫描为二维断层图像,缺乏立体感,特别是对水平骨折线和多发、粉碎性骨折观察效果不理想, 而多层螺旋CT可通过多轴位和三维重建技术清晰显示隐匿性骨折和脱位以及撕脱后骨质局部缺损等[1].本文回顾性分析老年人骨关节损伤采用多层螺旋CT薄层扫描和MPR、3D重建技术的检查资料,旨在评价其在老年人骨关节损伤中的应用价值.

    作者:曹成铁;卢宇;郝旭升 刊期: 2009年第11期

  • 探讨老年人急性颈髓损伤后低钠血症的临床特点

    急性颈髓损伤是创伤外科较为常见的严重损伤,并发症多且预后较差.急性颈髓损伤后低钠血症的发生率高达45%~77.8%[1],其发病机制尚不十分明确,本文回顾分析了2002年~2006年我院收治的35例老年急性颈髓损伤患者的临床资料,并与同期收住的中青年急性颈髓损伤患者进行对照,初步探讨老年人颈髓损伤后低钠血症的发生率、临床特点、预防和治疗措施.

    作者:曲高伟;聂林;侯勇;程雷;梁延琛;耿伟 刊期: 2009年第11期

  • 中药平颤方加褪黑素对PD模型大鼠行为和前脑多巴胺及其代谢的影响

    目的 观察中药平颤方加褪黑素(MT)对N-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)模型大鼠行为学和前脑多巴胺(DA)及其代谢产物含量的影响,探讨中药与MT联合治疗PD的疗效及作用机制.方法 SD大鼠60只,分5个组:对照组、模型组、MT组、中药组、中药+MT组.模型组和各治疗组大鼠腹腔注射MPTP建立PD模型,用爬杆法和迷宫实验测量大鼠行为学改变和智力状况,用高压液相电化学法测定前脑DA、高香草酸(HVA)及二羟基苯乙酸(DOPAC)含量.结果 PD模型大鼠出现不同程度爬杆能力下降和智力减退,与模型组相比各治疗组大鼠行为学异常可部分改善(P<0.01);模型组DA、HVA、 DOPAC含量均较对照组显著降低(P<0.01),各治疗组DA、HVA、DOPAC含量较对照组低,但较模型组明显增高(P<0.05,P<0.01).结论 平颤方与MT联合通过调节大鼠前脑DA神经元活性从而改善PD症状.

    作者:严丽荣;高放;周亚平;侯莉;苗曼悌;许豪勤;陈艳;许庆;狄荣科 刊期: 2009年第11期

  • 红花对肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞表型转化的抑制作用

    目的 目的观察红花对结扎单侧输尿管诱导的肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞表型转化的抑制作用.方法 结扎单侧输尿管方式复制肾间质纤维化实验动物模型,分别给以红花4.0 g*kg-1*d-1、缬沙坦10 mg*kg-1*d-1经口灌服,采用免疫组化、原位杂交方法检测大鼠肾脏肾小管上皮细胞表型转化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅲ型胶原的表达.结果 单侧输尿管结扎大鼠肾脏α-SMA动蛋白和Ⅲ型胶原的阳性面积及积分光密度较假手术组明显增强,红花及缬沙坦可显著性抑制其表达.结论 红花可以通过抑制肾小管上皮细胞的表型转化拮抗肾间质纤维化.

    作者:许庆友;潘莉;王月华;王香婷;王筝;谷艳丽;张磊磊;丁英钧;赵京山;杜明华 刊期: 2009年第11期

  • 维生素B2检测方法的研究进展

    维生素B2又称核黄素,是维持机体正常结构与功能的必需营养物质,具有多种生理功能,参与碳水化合物、脂肪及蛋白质代谢,促进生长发育;与呼吸链的能量产生有关;强化肝功能、调节肾上腺素的分泌;保护皮肤毛囊黏膜及皮脂腺的功能;在维生素B6、叶酸转化成辅酶及合成色氨酸反应中也发挥着重要作用.维生素B2缺乏可出现眼角炎、舌炎等一系列皮肤黏膜症状[1],并可以使脂质过氧化酶加重,必需脂肪酸代谢障碍[2],使得大脑学习能力下降.维生素B2缺乏还与贫血、一些肿瘤的发生密切相关[3].全国第4次营养调查表明,居民膳食中维生素B2普遍缺乏[4].随着人们对生活质量要求的提高,营养缺乏病的防治也越来越受到关注,维生素B2作为营养补充剂或者是功能调节因子被广泛用于保健食品和药品当中.因此,研究选择一种快速准确的检测维生素B2的方法对于营养缺乏病的诊断有着极其重要的意义.

    作者:蒲玲玲;韦京豫;余奇 刊期: 2009年第11期

  • 老年冠状动脉旁路移植体外循环期间肺保护液灌注的肺保护作用

    目的 研究体外循环期间经肺动脉灌注肺保护液对老年冠状动脉旁路移植(CABG)病人的肺保护作用.方法 将20例老年单纯CAPG病人随机分为对照组和实验组.实验组在主动脉阻断后主动脉根部灌注心脏停搏液的同时,经肺动脉灌注低温保护液,对照组则不灌注肺保护液.分别于术前、开放升主动脉后20 min、体外循环结束时采集外周动脉血,进行中性粒细胞计数;并于术前、体外循环结束后0、3、6、12 h测得动脉血氧分压(PaO2)、吸入氧浓度(FiO2),计算氧指数(PaO2/FiO2).结果 对照组在升主动脉开放20 min中性粒细胞计数较术前明显降低(P<0.05);实验组的中性粒细胞计数在体外循环结束时明显高于术前(P<0.05).实验组与对照组的PaO2/FiO2在体外循环结束后6 h达到低点(P<0.01);实验组的PaO2/FiO2在体外循环结束后12 h回升接近术前正常水平,而对照组则未回升至术前正常水平;在体外循环结束后0、3、6、12 h,实验组的PaO2/FiO2均明显高于对照组(P<0.05,P<0.01).实验组肺泡-动脉氧压力差(P[A-a]O2)与对照组在体外循环前无明显差别(P>0.05),实验组再灌注60 min后P[A-a]O2与体外循环前无明显差别(P>0.05)、明显低于对照组(P<0.01),对照组再灌注60 min后明显高于体外循环前(P<0.01).结论 体外循环后存在肺损伤,体外循环期间经肺动脉灌注肺保护液可明显减轻CABG患者的肺损伤.

    作者:林柏松;张秀和;张柏民;姜亦忠;李哲;张慧华 刊期: 2009年第11期

  • 护理干预改善老年人高血压伴抑郁患者生活质量的临床观察

    原发性高血压是早被公认的一种心血管系统的心身疾病,与情绪障碍密切相关.有研究资料证明,高血压患者抑郁情绪的发生率和严重程度均明显高于非高血压患者,抑郁、焦虑可直接影响血压[1]. Jonas等[2]报道,明显的抑郁和焦虑情绪是高血压发病的独立预测因子,并可以影响降压药物的疗效.抑郁和紧张、焦虑等不良情绪和恶劣环境不仅降低患者生活质量,一定程度上还影响高血压的发展和预后.本文通过探讨护理干预对老年人高血压伴抑郁患者生活质量的改善作用,为其在高血压伴抑郁患者治疗中的临床应用提供依据.

    作者:郝凤杰 刊期: 2009年第11期

  • 9226例老年病人住院情况统计分析

    我国在2000年就已进入老年型国家行列.但在我国省级以下的大多数医疗机构还没有将老年病的防治列入重要的工作任务,专项防治工作有待加强.为深入了解老年病人在我院住院情况,本文试探讨其中一般性规律,为老年病的防治提供科学参考.

    作者:卢劲 刊期: 2009年第11期

  • 人脑胶质瘤中核转录因子-κB及热休克蛋白90的表达及意义

    目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)与热休克蛋白90(HSP90 )在人脑胶质瘤中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学法检测11例脑外伤内减压切除正常脑组织和57例不同级别脑胶质瘤组织中NF-κB和HSP90的表达强度.结果 在57例胶质瘤组织中,NF-κB及HSP90的表达阳性率分别为75.4%(43/57)和68.4%(39/57),显著高于正常对照脑组织中的表达水平(4/11和3/11,P<0.05).胶质瘤组织恶性程度越高,NF-κB及HSP90表达越强(P<0.05).胶质瘤组织中NF-κB与HSP90的表达水平呈正相关性(r=0.719,P<0.001).结论 NF-κB与HSP90蛋白在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用.

    作者:孙利波;刘莉;陈儇;付双林;罗毅男 刊期: 2009年第11期

  • 去卵巢大鼠海马及额叶皮层海马胆碱能神经刺激肽含量的变化

    目的 观察雌激素缺乏对大鼠海马CA1/CA2区及额叶皮层海马胆碱能神经刺激肽(HCNP)含量的影响.方法 选取清洁级4月龄雌性SD大鼠30只,随机分为3组:假手术组(Sham组)、去卵巢组(OVX组)和去卵巢加雌二醇(E2)组(OVX+E2组),每组10只.除Sham组做假性手术外,其余2组均行双侧卵巢切除术;OVX+E2组去卵巢手术10 d后给予E2皮下注射,100 μg/kg,隔日1次.去卵巢手术后常规喂养4个月,获取组织标本,用于组织蛋白和组织总RNA的提取.用Western印迹法测定大鼠海马和皮层C-HCNPpp、N-HCNPpp的相对含量.用RT-PCR技术检测HCNPpp mRNA水平.结果 OVX组大鼠海马和皮层中C-HCNPpp的相对含量较Sham组和OVX+E2组明显升高(P<0.05),而Sham组和OVX+E2组之间无显著差别(P>0.05),三组大鼠之间的海马和皮层中N-HCNPpp的相对含量差异不显著(P<0.05);OVX组和OVX+E2组大鼠HCNPpp mRNA表达与Sham组无显著差异(P>0.05),OVX+E2组大鼠HCNPpp mRNA表达与OVX组相比增高(P<0.05);三组大鼠皮层HCNPpp mRNA表达无显著差异(P>0.05).结论 雌激素缺乏可导致大鼠海马CA1/CA2区及额叶皮层HCNP的增多.

    作者:高飞;宋士军;胡进中;李芳芳;张若楠 刊期: 2009年第11期

  • 高血压的心理因素

    心理社会因素作用于人体时经中枢神经系统接受、整合,产生紧张、恐惧、忧郁、愤怒等情绪,并将这种信息传至下丘脑,引起一系列植物神经-内分泌反应.如果心理社会应激强烈而持久,会使神经体液系统血压调节机制遭受破坏,终发展成高血压.高血压不仅需要药物及时干预,更重要的是取决于心理治疗[1].

    作者:吕慧 刊期: 2009年第11期

  • 限制热量对NIT-1细胞胰岛素/胰岛素样生长因子通路及胰岛素分泌功能的影响

    目的 研究限制热量(CR)对胰岛素β瘤细胞(NIT-1)细胞胰岛素/胰岛素样生长因子(IGF-1)信号通路及胰岛素分泌功能的影响,为2型糖尿病(T2DM)的发病机制及防治提供实验依据和理论基础.方法 NIT-1细胞培养至指数生长期,分别用PI3-K的阻断剂LY294002(LY)进行干扰,实验分成4组:对照组;CR组;LY+CR组;LY组.用RT-PCR、免疫细胞化学等方法检测Foxo1及其下游基因的转录及表达,用放射免疫及免疫细胞化学法检测胰岛素的分泌及表达,用细胞计数法检测细胞倍增周期.结果 ①CR可使NIT-1细胞倍增周期延长;②Foxo1主要定位于胞浆,阻断PI3-K后Foxo1从胞浆移入胞核,mRNA转录减少;③CR在正常状态及PI3-K通路障碍的细胞均可使Foxo1mRNA转录增加,并影响其下游基因p27、Bim的转录;④PI3-K通路障碍可使NIT-1细胞胰岛素分泌增加,CR则可使PI3-K通路障碍的NIT-1细胞胰岛素分泌减少.结论 CR不需通过上游PI3-K/Akt,可直接或间接作用于Foxo1参与对胰岛素/IGF-1信号通路的调控,延长细胞寿命,增强NIT-1细胞的糖耐量,改善胰岛素信号的传导及NIT-1的胰岛素分泌功能;可能参与了T2DM的发生发展.

    作者:朱志宏;陈慎仁;傅玉才;魏炽炬;杨杰华;林超 刊期: 2009年第11期

  • 老年脊髓型颈椎病患者的手术效果分析

    脊髓型颈椎病的发生发展很大程度与退行性脊椎僵硬和间盘病变有关,老年患者显然有更高的发病危险.目前关于老年脊髓型颈椎病患者手术效果的报道很少[1~3].

    作者:何玉宝;杨有庚;王明礼;邵国喜;白云深;任宪盛 刊期: 2009年第11期

  • 股深动脉重建治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床经验

    我科2004年6月~2008年6月采用人工血管旁路转流术、股深动脉成形术等方法恢复股深动脉血流,治疗Fontaine Ⅲ、Ⅳ期下肢动脉硬化闭塞症患者41例.

    作者:孙大军;韩涛;尹德馨;洪星禹;赵岳;赵浩民;姜涛 刊期: 2009年第11期

中国老年学杂志

中国老年学杂志

主管:中国老年学学会

主办:中国老年学学会 吉林省卫生厅