学术投稿

抗原特异性调节性T细胞体外诱导扩增及其功能测定

陈跃;许戈良;王保龙

关键词:小鼠, T淋巴细胞亚型, 抗原, 流式细胞术
摘要:目的 体外诱导扩增抗原特异性CD4+ CD25+ T细胞,测定其免疫抑制功能,验证其抗原特异性.方法 应用免疫磁珠法(MACS)分选C57BL/6鼠CD4+ CD25+ T细胞.CD4+ CD25+ T细胞在Balb/c鼠抗原刺激条件下,体外扩增获得Balb/c鼠抗原特异性的CD4+ CD25+ T细胞(iCD4+ CD25+ T),流式细胞术测定其纯度, RT-PCR方法测定其FoxP3mRNA.测定在Balb/c小鼠(A组)或昆明鼠(B组)抗原刺激条件下,iCD4+ CD25+ T抑制T细胞增殖的效率,验证iCD4+ CD25+ T的抗原特异性.ELISA法测定A、B组上清液中IL-10和TGF-β的含量.结果 MACS分离的C57BL/6小鼠CD4+ CD25+ T细胞纯度为99.6%.扩增3周,iCD4+ CD25+ T纯度达85%,扩增数目达900倍,高表达Foxp3基因.当iCD4+ CD25+ T ∶ CD4+ CD25- T为1 ∶ 1、1 ∶ 2时,A组抑制率明显高于B组(82.2%±3.29% vs 11.6%±1.2%,54.4%±3.5% vs 5.4%±1.7% ,P<0.01).A组IL-10和TGF-β的分泌量均高于B组(P<0.01).结论 在体外成功诱导扩增了具有免疫抑制功能的抗原特异性的CD4+CD25+调节性T细胞.
安徽医科大学学报杂志相关文献
  • 卵泡发育速度对胚胎发育及体外受精-胚胎移植结局的影响

    目的 探讨促排卵过程中卵泡发育速度与卵母细胞质量间的相关性.方法 154名患者共159个体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期,按卵泡发育速度(v,mm/d)的分布分为A组(v<1)、B组(1≤v≤1.59)、C组(v>1.59),比较各组卵母细胞成熟度指标.结果 A、B、C 3组卵细胞成熟率分别为89.56%、92.45%和94.76%,优质胚胎率分别为40.85%、36.37%和37.11%,妊娠率分别为42.1%、43.1%和35.3%,卵母细胞成熟率C组高于A、B组,优质胚胎率A组高于B、C两组,但组间差异均无显著性(P>0.05),而妊娠率A、B两组明显高于C组,且B、C两组间差异有显著性(P<0.05).结论 促排卵过程中卵泡的生长速度应控制在一个佳的范围内,因其与卵子质量和后期优质胚胎率及妊娠结局密切相关,且卵泡发育速度又可作为衡量卵泡发育潜能的一项重要指标.

    作者:徐玉萍;曹云霞;章志国;魏兆莲;周平;丛林;李芬;赵济华 刊期: 2006年第04期

  • 肾移植术后早期无尿或少尿的诊治

    肾移植术后无尿或少尿是常见并发症,严重影响移植肾的近远期存活效果[1].分析其原因并给予及时相应的治疗,对移植肾功能的恢复非常重要.

    作者:曹正国;诸禹平;曾凡军;周四维;刘继红;林正斌;亓林;吴奎 刊期: 2006年第04期

  • 纤维蛋白原与老年2型糖尿病大血管并发症相关因素的关系

    目的 探讨老年2型糖尿病(DM)患者血浆纤维蛋白原(FIB)的变化及其与大血管并发症的关系.方法 103例老年DM患者根据FIB水平的不同,分为正常FIB组(Ⅰ组)和高FIB组(Ⅱ组),比较两组的年龄、病程、糖基化血红蛋白(HbA1C)、空腹血浆胆固醇(CH)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(Fins)及胰岛素敏感指数(ISI).同时检查下肢血管彩超和头颅CT或MRI.结果 与Ⅰ组相比,Ⅱ组年龄大、女性构成比高、病程长、HbA1C水平高、大血管并发症发生率高(P<0.01~0.05).回归分析显示,FIB与LDL、年龄、HbA1C呈正相关,与ISI呈负相关.结论 随着年龄的增长,DM病程延长,长期血糖、血脂控制不良及胰岛素抵抗,老年2型DM患者FIB明显上升,大血管并发症的危险性增加.

    作者:吴庆彬;汪艳丽;张莉 刊期: 2006年第04期

  • 心脏瓣膜置换术后早期死亡原因及相关因素分析

    目的 探讨心脏瓣膜置换术后早期死亡原因和相关因素.方法 对385例行心脏瓣膜置换手术患者的临床资料和术后早期死亡原因及相关因素进行统计分析.结果 手术后早期死亡18例,病死率4.68%.主要死亡原因依次为:低心排血量综合征8 例,多脏器功能衰竭7例,严重的室性心律失常2例,左心室破裂1例.单变量分析提示,年龄、手术前心功能分级、阻断时间、体外循环时间及心胸比与心脏瓣膜置换术后死亡的发生具有明显相关性(P<0.01).多变量Logistic回归分析提示,年龄、心功能与心胸比是心脏瓣膜置换术后早期死亡发生的独立危险因素(P<0.05). 结论低心排血量综合征、多脏器功能衰竭、严重室性心律失常是瓣膜置换术后早期死亡主要原因.手术前积极改善心功能,提高手术技巧,尽量缩短主动脉阻断时间和体外循环时间,加强手术中心肌保护和手术后的监护及综合治疗措施,可望提高瓣膜置换手术的成功率.

    作者:葛圣林;周汝元;林敏;葛建军;高晴云;张士兵;张飞;李峰;李艳丽 刊期: 2006年第04期

  • 污水中微量汞的富集-控制酸度解吸测定法

    目的 建立巯基棉-富集酸度控制解吸法,以检测污水中微量汞含量.方法 污染水样以巯基棉吸附富集,控制酸度实现干扰物和汞的分步解吸,再以罗丹明B法测定之.紫外测定波长为532 nm.结果 方法的线性良好,水样的小检出为0.0007 mg/L;回收率为97.5%、98.1%,RSD为4.2%,测定结果与现行国标方法无显著性差异.结论 该方法及所采用的富集技术是测定低浓度水样汞的又一选择,有较好的实用性.

    作者:杨媛媛;尹颖;王玮玮;谭礼梅;霍永琴;储成顶 刊期: 2006年第04期

  • 小鼠卵母细胞的孤雌激活

    目的 探讨一种有效的孤雌激活方法.方法 用乙醇、Ca2+载体A23187分别联合6-二甲氨基嘌呤对小鼠卵母细胞进行孤雌激活.结果 7%乙醇卵母细胞活化率、囊胚形成率分别达80.88%、10.29%;5 μmol/L Ca2+载体A23187卵母细胞活化率、囊胚形成率分别达86.88%、11.48%.两者差异无显著性.结论 应用乙醇、Ca2+载体A23187联合6-二甲氨基嘌呤处理小鼠卵母细胞,均可实现小鼠卵母细胞孤雌发育.

    作者:吴娟;章志国;赵济华;曹云霞 刊期: 2006年第04期

  • 脐带血CD34+细胞体外诱导成为血管内皮细胞的观察

    目的 研究脐带血CD34+细胞在体外适宜的细胞因子作用下,不仅能够大量增殖分化为各系造血细胞,而且还可以向血管内皮细胞增殖分化的特性.方法 采用CSF、FLT-3、TPO、IL-3、G-CSF细胞因子在无血清体系中进行不同的组合,分别在1、2周检测增殖后造血细胞的各项指标,同时用半固体培养研究造血细胞集落形成能力.2周后去除所有非贴壁细胞,更换含小牛血清和血管内皮细胞生长因子的培养基继续培养.分别于4、8周后收集液体培养和半固体培养后的贴壁细胞,检测细胞表面标志.结果 CD34+细胞在适宜条件下,大量地向造血细胞及内皮细胞增殖分化,分别表达各系细胞分化抗原.结论 脐带血CD34+细胞在体外可以被扩增、诱导分化为血管内皮细胞.

    作者:汪健;翟志敏;孙自敏;刘会兰;王保龙 刊期: 2006年第04期

  • 抗原特异性调节性T细胞体外诱导扩增及其功能测定

    目的 体外诱导扩增抗原特异性CD4+ CD25+ T细胞,测定其免疫抑制功能,验证其抗原特异性.方法 应用免疫磁珠法(MACS)分选C57BL/6鼠CD4+ CD25+ T细胞.CD4+ CD25+ T细胞在Balb/c鼠抗原刺激条件下,体外扩增获得Balb/c鼠抗原特异性的CD4+ CD25+ T细胞(iCD4+ CD25+ T),流式细胞术测定其纯度, RT-PCR方法测定其FoxP3mRNA.测定在Balb/c小鼠(A组)或昆明鼠(B组)抗原刺激条件下,iCD4+ CD25+ T抑制T细胞增殖的效率,验证iCD4+ CD25+ T的抗原特异性.ELISA法测定A、B组上清液中IL-10和TGF-β的含量.结果 MACS分离的C57BL/6小鼠CD4+ CD25+ T细胞纯度为99.6%.扩增3周,iCD4+ CD25+ T纯度达85%,扩增数目达900倍,高表达Foxp3基因.当iCD4+ CD25+ T ∶ CD4+ CD25- T为1 ∶ 1、1 ∶ 2时,A组抑制率明显高于B组(82.2%±3.29% vs 11.6%±1.2%,54.4%±3.5% vs 5.4%±1.7% ,P<0.01).A组IL-10和TGF-β的分泌量均高于B组(P<0.01).结论 在体外成功诱导扩增了具有免疫抑制功能的抗原特异性的CD4+CD25+调节性T细胞.

    作者:陈跃;许戈良;王保龙 刊期: 2006年第04期

  • 褪黑素保护细菌脂多糖引起的小鼠宫内胎儿死亡和生长发育迟缓

    目的 研究褪黑素(MT)对细菌脂多糖(LPS)引起宫内胎儿死亡(IUFD)和生长发育迟缓(IUGR)的保护作用.方法 实验1:LPS组小鼠于受孕第15~17天每天经腹腔注射LPS(75 μg/kg),LPS+MT组在LPS处理前和(或)处理后经腹腔注射MT,生理盐水和单纯MT处理作为对照.所有孕鼠于受孕第18天处死,统计活胎、死胎和吸收胎数,称量活胎体重,测量胎鼠身长和尾长,并对胎鼠骨骼发育情况进行评价.实验2:LPS组小鼠于受孕第16天经腹腔一次性注射75 μg/kg LPS,LPS+MT组孕鼠于LPS处理前和(或)处理后经腹腔注射MT,生理盐水和单纯MT处理作为对照.LPS处理后6 h处死孕鼠,取母肝和胎盘,检测丙二醛和谷胱甘肽水平.结果 LPS+MT处理组宫内胎儿死亡数显著低于单纯LPS处理组,并呈明显剂量-效应关系;MT预+后和后处理均显著减轻LPS引起生长发育迟缓,并逆转LPS引起的枕骨骨化不全.MT预+后处理明显减轻LPS引起的母肝和胎盘脂质过氧化,但对LPS所致GSH含量降低无明显影响.结论 MT通过其抗氧化功能保护LPS引起的IUFD和IUGR.

    作者:陈远华;徐德祥;王华;赵磊;王剑萍;魏凌珍;孙美芳 刊期: 2006年第04期

  • Er:YAG激光制洞对牙髓的生物学效应

    目的 观察Er:YAG激光制洞对兔牙髓组织的影响.方法 分别用Er:YAG激光和普通牙钻于兔前牙唇面制备V类洞,常规窝洞垫底充填.术后即刻和72 h处死动物并分离实验牙,HE染色观察兔牙髓的形态学改变.术后72 h,免疫组化S-P法检测转化生长因子β1(TGF-β1)在牙髓中的表达.结果 术后即刻和72 h Er:YAG激光组与普通牙钻组均可见牙髓轻度炎性反应;术后72 h激光组及普通牙钻组均可见成牙本质细胞内及其下方牙髓细胞内TGF-β1的表达,两组比较差异有显著性(P<0.05),激光组牙髓组织内TGF-β1的中强阳性表达率(90%)高于普通牙钻组(30%). 结论与普通牙钻组比较,Er:YAG激光制洞对牙髓组织未见有明显损伤;Er:YAG激光辐射可能具有促进牙髓组织修复的潜能.

    作者:潘蕾;梅陵宣;陈乔尔 刊期: 2006年第04期

  • 肝细胞肝癌中COX-2表达与Survivin和Caspase-3的关系

    目的 研究肝细胞肝癌(HCC)中COX-2与Caspase-3、Survivin蛋白表达的关系及其意义.方法 应用免疫组织化学S-P法检测44例HCC组织COX-2、Caspase-3和Survivin的表达情况.结果 HCC中COX-2、Caspase-3和Survivin蛋白表达阳性率分别为52.3%、75.0%、75.0%.COX-2和Survivin蛋白的表达呈显著正相关(r=0.394,P<0.01),COX-2和Caspase-3蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.447,P<0.01).结论 HCC中COX-2的抗凋亡通路可能是通过上调Survivin、下调Caspase-3途径实现的.

    作者:虞长春;吴强;吴正升;凌晓光;杨枫 刊期: 2006年第04期

  • 大肠埃希菌DNA对小鼠抗IFN-α免疫应答的增强作用

    目的 探讨大肠埃希菌(E.coli)DNA对小鼠抗IFN-α免疫增强的作用. 方法 Balb/c纯系小鼠随机分成8组,生理盐水对照组(A); E.coli DNA 50 μg+IFN-α 1.0 μg(B);弗氏完全佐剂+ E.coli DNA+ IFN-α(25 μg +25 μg +1.0 μg)(C); 弗氏完全佐剂50 μg+ IFN-α 1.0 μg(D);不加任何佐剂的IFN-α(E); E.coli DNA 12.5 μg + IFN-α 1.0 μg(F); E.coli DNA 50 μg+IFN-α 0.25 μg(G); E.coli DNA 12.5 μg+ IFN-α 0.25 μg(H).小鼠腹部皮下注射,首次免疫后加强免疫2次, 用微量中和实验、MTT法和细胞流式技术分别检测小鼠体液免疫和细胞免疫状态. 结果 经组间单因素相关性分析,E.coli DNA和弗氏完全佐剂均能明显增强小鼠特异的体液免疫和细胞免疫,其中E.coli DNA刺激IFN-α抗体剂量效应和脾淋巴细胞活性均与弗氏完全佐剂相当(P>0.05),而E.coli DNA免疫后IFN-α抗体的时效性较弗氏完全佐剂效果好.结论 E.coli DNA具有强烈的免疫刺激作用,可成为一种新型免疫佐剂.

    作者:李京培;毕克菊;王明丽 刊期: 2006年第04期

  • A771726的抗银屑病作用及对免疫功能的影响

    目的 探讨A771726的抗银屑病作用及部分免疫功能.方法 采用鼠尾鳞片表皮模型及小鼠阴道上皮模型,观察A771726对表皮细胞分化及上皮细胞有丝分裂的影响.并通过检测ConA诱导T淋巴细胞增殖及LPS诱导腹腔巨噬细胞产生IL-1,观察A771726对免疫功能的影响.结果 A771726能促进小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成,抑制小鼠阴道上皮细胞的有丝分裂,对ConA诱导T淋巴细胞增殖反应及LPS诱导IL-1的产生均有抑制作用.结论 A771726可能通过抑制表皮细胞增殖及促其分化,并通过一定的抗炎及免疫调节而发挥抗银屑病作用.

    作者:张茜;彭磊;石静波;刘骅;李荣;金涌 刊期: 2006年第04期

  • 映山红总黄酮的镇痛作用

    目的 研究映山红总黄酮(TFR)的镇痛作用.方法 TFR(50、100、200 mg/kg·d-1,3d)ig,采用小鼠扭体法、小鼠福尔马林实验、小鼠温浴法及小鼠热板法.结果 ig TFR(100、200 mg/kg)可明显抑制小鼠扭体反应数及小鼠福尔马林实验Ⅱ相反应,ig 100 mg/kg可延长小鼠热水缩尾时间,ig 200 mg/kg可延长小鼠热板舔足反应潜伏期.icv TFR(5、10 mg/kg)可明显抑制小鼠扭体反应数.结论 TFR具有明显的镇痛作用,而且其镇痛机制至少部分有中枢参与.

    作者:宋小平;陈志武;张建华 刊期: 2006年第04期

  • 综合医院心理门诊患者短期治疗依从性研究

    目的 观察综合医院心理门诊常见病患者治疗依从性.方法 对522例符合入组标准的初诊患者门诊随访记录2个月以上,按照依从性标准观察.其中抑郁症231例,焦虑症89例,强迫症119例,精神分裂症83例.均符合CCMD-3诊断标准,另外抑郁症患者汉密顿抑郁量表(HAMD17)≥18分.结果 总体依从性差者占41.2%;依从性与年龄、婚姻、职业和诊断显著相关(P<0.05),依从性差的疾病依次为: 抑郁症(51.5%)、焦虑症和强迫症(38.2%和37.0%)、精神分裂症(21.7%);精神分裂症依从性好于抑郁症(P<0.001),也好于焦虑症和强迫症(P<0.05)焦虑症、强迫症依从性好于抑郁症(P<0.05),差于精神分裂症(P<0.05)焦虑症和强迫症之间依从性差异无显著性(P>0.05).结论 不同的精神疾病治疗依从性不同;抑郁症患者门诊治疗依从性较低,需改变治疗策略,提高治疗依从性.

    作者:黄晓琴;陈玉玲;严小蓉;章洋 刊期: 2006年第04期

  • 原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态检测

    目的 研究原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态及其与原发性肝细胞癌发生发展的关系.方法 用特异性甲基化PCR(MSP)法检测30例原发性肝细胞癌肿瘤组织和5例正常肝脏组织中p16、p15基因启动子区甲基化状态,并进行统计分析.结果 30例原发性肝细胞癌肿瘤组织中p16和p15基因启动子区分别有53.3%(16/30,P<0.05)和46.7%(14/30,P>0.05)甲基化,5例正常组织中未发现甲基化.两基因甲基化与原发性肝细胞癌临床病理及HBsAg之间无明显相关性(P>0.05),两者在原发性肝细胞癌发生中有协同性(相关性和一致性).结论 p16、p15基因启动子区异常甲基化在原发性肝细胞癌中发生频率很高,可能对肝细胞癌发生发展起重要作用.

    作者:徐静;李旭;高人焘;徐修才;翟志敏;马金良;叶书来 刊期: 2006年第04期

  • 血压计袖带细菌检测及分析

    目的 对临床科室使用的血压计袖带消毒前、消毒后进行细菌检测,寻找简单有效的消毒方法.方法 分别从Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类环境的科室共抽取30只血压计袖带消毒前检测细菌菌落数,经紫外线照射后再检测菌落数,从以上环境另外抽取30只血压计袖带经环氧乙烷熏蒸后检测菌落数,比较消毒效果.结果 血压计袖带消毒前细菌检出率达40%,且菌落数严重超标,紫外线消毒后细菌检出率降至6.67%,菌落数明显减少,差异有显著性(P<0.01),环氧乙烷灭菌后无细菌生长.结论 血压计袖带必须定期消毒,环氧乙烷熏蒸效果好,但环氧乙烷熏蒸时间长,临床科室一般无此设备,要送消毒站集中处理,紫外线消毒后细菌检出率明显降低,菌落数也明显减少,与环氧乙烷熏蒸相比差异无显著性(P>0.05),且方法简便易行,便于临床实施.

    作者:张岩平;康珍;吴强 刊期: 2006年第04期

  • 文拉法辛前药的脑靶向效应初探

    目的 评价文拉法辛前药的脑靶向效应.方法 运用药物化学的基本原理和方法,合成了文拉法辛前药B1、B2和B5,采用乙醚和石油醚萃取血浆和脑匀浆样品,通过RP-HPLC内标法检测样品.结果 检测了文拉法辛及化合物B1、B2、B5在SD大鼠血浆和脑组织中的浓度,化合物B1、B2在脑中代谢速度慢于血浆,浓度高于血浆,释放文拉法辛时间也长于血浆;而化合物B5在脑中释放的文拉法辛代谢速度与血浆同步.结论 化合物B1和B2能在脑组织中持续释放文拉法辛,具备脑靶向效应,而B5没有该效应.

    作者:潘献柱;王林;温晓雪;彭涛;程洁;汪思应 刊期: 2006年第04期

  • 妊娠高血压综合征患者蜕膜中Th1、Th2型细胞因子的变化

    目的 研究妊娠高血压综合征(PIH)患者蜕膜组织中单个核细胞产生Th1、Th2型细胞因子的变化.方法 PIH组21例,正常妊娠组13例,采用ELISA方法检测蜕膜组织中单个核细胞体外培养上清液中干扰素γ(IFN-γ) 、白细胞介素2(IL-2)及白细胞介素4(IL-4)水平.结果 蜕膜组织单个核细胞体外培养上清液中,IFN-γ在正常妊娠组为(361.8±114.1) ng/L,在PIH组为(591.3±192.5) ng/L,与正常妊娠组相比水平升高(P<0.01);IL-2在正常妊娠组为(83.3±42.1) ng/L,在PIH组为(387.4±123.7) ng/L,与正常妊娠组相比水平升高(P<0.01).IL-4在正常妊娠组为(24.9±6.8) ng/L,在PIH组为(23.7±7.5) ng/L,两者相比差异无显著性(P>0.05).IFN-γ/IL-4比值PIH组(18.3±5.4)与正常妊娠组(7.7±2.7)相比水平升高(P<0.001).IL-2/IL-4比值PIH组(10.0±3.6)与正常妊娠组(3.3±1.7)相比水平升高(P<0.001).结论 PIH患者蜕膜中单个核细胞体外培养时Th1、Th2型细胞因子产量失衡,Th1/Th2型细胞因子比值升高.

    作者:石永云;凌斌;周颖;姚凤球;高婷;王梅梅;冯定庆;孙新华 刊期: 2006年第04期

  • 16层螺旋CT血管成像在下肢血管病变诊断中的应用

    目的 评价16层螺旋CT血管成像在下肢血管病变中的应用价值. 方法 33例临床怀疑下肢血管病变的患者进行16层螺旋CT扫描,采用增强后容积扫描,层厚1.25 mm×16,床速27.5 mm/圈,螺距1.375 ∶ 1,重建层厚1.25 mm,重建间隔1.25 mm.扫描范围从腹主动脉至足趾,增强延迟时间动脉期为38~42 s,静脉期为120~150 s.图像传至AW 4.2工作站进行图像重建.结果 33例下肢血管在VR及MIP成像中,正常7例,腹主动脉及下肢动脉粥样硬化13例,胫后动静脉瘘伴多发静脉瘤1例,多发性动脉瘤2例,外伤后下肢腘动脉离断1例,胫后动脉痉挛1例,下肢动脉闭塞血管再植后血栓形成1例,滑膜肉瘤术后伴股深静脉瘤栓1例,腘动脉远端血栓形成1例,左胫前动脉脉管炎3例,右股骨下段软组织内血管瘤1例(供血动脉来源于股外侧动脉),股动脉穿刺后股动脉前侧血肿机化形成假性动脉瘤1例.结论 16层螺旋CT血管成像在下肢血管病变诊断中,可筛选和发现病变,并确定病变性质、范围,可作为临床有效、无创的检查方法.

    作者:金启安;邓克学;邓福生;曹东兴;胡何节 刊期: 2006年第04期

安徽医科大学学报杂志

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