学术投稿

人巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其体外中和活性鉴定

姜永忠;王明丽;李艳秋;余莉;胡勇;毕克菊

关键词:杂交瘤, 抗体, 单克隆/生物合成, 巨细胞病毒属
摘要:目的制备具有中和人巨细胞病毒(HCMV)感染作用的单克隆抗体并对其进行生物学活性鉴定.方法用HCMV抗原免疫Balb/c小鼠5、6次后,取致敏的脾脏B淋巴细胞和HGPRT-SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合,在HAT选择培养基中培养2周,间接ELISA法筛选克隆.挑取分泌抗体的杂交瘤株,再用间接ELISA进行鉴定,终获得抗HCMV的阳性杂交瘤细胞株,用Ouchterlony法鉴定McAb的亚类.小鼠腹腔内接种杂交瘤细胞,取腹水经盐析法提纯IgG.Lowry法测定蛋白质浓度,在第6代HF细胞株及原代培养新生乳鼠脑神经细胞上进行微量中和实验.结果获得了4株杂交瘤细胞株,制备的F9McAbs盐析后蛋白质浓度为11.2 g/L,血清学试验证明该McAbs能和HCMV抗原进行特异性结合,制备的IgG具有高度特异性.且体外实验已证实,该McAb具有中和抗体的性质.结论通过杂交瘤技术制备的HCMV单克隆抗体能在体外中和HCMV致病变效应,为该McAb作为抗人巨细胞病毒治疗药物的研发奠定了基础.
安徽医科大学学报杂志相关文献
  • 大肠癌组织中p53蛋白和MAD2蛋白表达及意义

    目的研究大肠癌组织中p53、MAD2基因的表达及意义.方法应用免疫组化SP方法检测40例大肠癌组织中基因p53、MAD2的表达.结果正常黏膜p53表达阴性,腺癌表达率为55%,两者差异有显著性(P<0.01).正常黏膜中MAD2蛋白表达阳性率为50%,腺癌中MAD2阳性率为85%,两者差异有显著性(P<0.01),MAD2表达与大肠癌组织分化无关(P<0.05).结论p53基因突变及MAD2基因异常在大肠癌发生中起重要作用.

    作者:李刚强;张洪福 刊期: 2002年第03期

  • 青光眼滤过术后持续浅前房的原因及手术治疗

    目的分析青光眼滤过术后持续浅前房的原因、手术治疗方法及效果.方法对1993年1月~2001年10月我院行青光眼滤过术后发生持续性浅前房并终通过手术恢复前房的22例(22眼)临床资料进行分析.结果滤过引流过盛13例,脉络膜脱离6例,结膜瓣渗漏2例,巩膜瓣破损1例,22例均通过手术恢复前房.结论浅前房是青光眼滤过术后的常见并发症,极少数患者如果保守治疗无效、应积极查明原因,通过手术恢复前房,避免更严重的并发症发生.

    作者:张晓苹;朱美玲;龚健杨;刘兴华 刊期: 2002年第03期

  • 改进的鼻唇沟与颊组织瓣修复下唇大型缺损再造红唇

    目的寻求理想的方法修复下唇缺损再造红唇.方法应用改进的鼻唇沟复合皮瓣--携带加宽的颊粘膜瓣修复下唇缺损同时再造红唇.结果我们应用这种新技术对5例下唇鳞癌切除后超过1/2以上全层下唇的大块缺损,作了修复红唇再造.所有病例均获手术成功,无并发症,外形和功能满意.结论此种复合瓣具有良好血运,带有感觉;颜色、质地较匹配、手术简便、安全可靠,是修复下唇缺损再造红唇较理想的方法.

    作者:王明刚;水庆付;徐荣成;赵维璋;褚燕军;杨维军 刊期: 2002年第03期

  • 鼻内窥镜下微波热凝术治疗鼻出血

    我科自1998年底月以来,采用微波热凝术(mi-crowave tissue coagulation,MTC)治疗鼻出血100例,取得较好疗效.

    作者:杨洋;黄学勤 刊期: 2002年第03期

  • 拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的病原学研究

    目的观察拉米夫定治疗对慢性乙肝患者体内HBVDNA的影响.方法对拉米夫定治疗组31例(po,100mg/d,25周)和对照20例组进行HBV DNA的斑点杂交和PCR半定量检测;未阴转者扩增含YMDD编码区的基因片段测序.结果拉米夫定治疗组4周、8周、24周、52周HBVDNA阴转率分别为55%、68%、80%、73%,远高于对照组(P<0.05);治疗组的YMDD变异株检出率亦高于对照组.结论拉米夫定对HBV有较强的抑制作用,但同时诱发较多的YMDD变异.

    作者:李宜;高人焘;周陶友;刘小波 刊期: 2002年第03期

  • 流式细胞术分析恶性肿瘤患者术前术后免疫功能的变化

    目的探讨细胞免疫功能与结肠癌、胃癌、乳腺癌患者病情变化及手术前后的关系.方法用流式细胞仪测定了66例恶性肿瘤患者(结肠癌、胃癌、乳腺癌)手术前后T细胞免疫表型,并与健康对照组进行比较.结果恶性肿瘤组CD4、CD3、CD%+16及CD4/CD8比值明显低于健康对照组(P<0.01);术后CD4、CD3、CD56+16及CD4/CD8比值则回升,高于术前组(P<0.01),但仍低于健康对照组(P<0.05).结论检测结肠癌、胃癌、乳腺癌患者免疫功能可能具有一定的临床意义.

    作者:孙昕 刊期: 2002年第03期

  • 免疫组织化学方法测定TGF-β1在鼠根尖周炎中的表达

    目的了解TGF-β1与大鼠急性根尖周炎的关系.方法取16只SD大鼠建立鼠根尖周炎动物模型,制作根尖周组织切片,用免疫组织化学方法测定TGF-β1在根尖周炎中的表达.结果免疫组化研究显示TGF-β1阳性表达细胞分布于根尖周和牙槽骨缺损处,在急性期(1~3周)根尖炎症阶段有高表达,表达细胞多为巨噬细胞、淋巴细胞和成纤维细胞;而在急性期和慢性期(第4周)均未见成骨细胞TGF-β1表达.结论在早期(1~4周)根尖炎症阶段未见成骨细胞TGF-β1表达,推测此物质在该阶段主要起促炎症作用.

    作者:梅陵宣;刘正;张濒 刊期: 2002年第03期

  • 行为问题儿童智力特征及其相关因素研究

    作者:李成福;陶芳标 刊期: 2002年第03期

  • 适形放疗体模摆位的体会

    在体部肿瘤放射治疗时,采用体模固定可减少体位变动误差,提高摆位的重复性和治疗精度.作者总结一套体模摆位程序,可提高摆位的准确性.

    作者:曹绿英;何侠 刊期: 2002年第03期

  • 安庆市城区1万名0~14岁儿童哮喘流行病学调查

    目的探讨2000年安庆市城区儿童哮喘的患病率及相关因素,为防治小儿哮喘提供科学依据.方法调查对象为0~14岁儿童.采取整群抽样调查方法.结果确诊哮喘患儿344人.多发生于秋季、换季时;好发时间为临睡及午夜;主要发病诱因为呼吸道感染.结论安庆城区0~14岁儿童哮喘累计患病率为3.35%.性别间哮喘患病率差异有显著性.工业区与居民区哮喘患病率差异较大,哮喘起病与发作的外部因素中,环境因素较遗传因素更为重要.

    作者:安庆市儿科哮喘协作组 刊期: 2002年第03期

  • 慢性肝病患者血清内毒素定量检测及丽珠肠乐对其影响

    目的探讨慢性肝病患者内毒素血症(Endotoxemia,ETM)的发生率及临床意义,并观察丽珠肠乐治疗肝病合并ETM的转阴率.方法应用偶氮基质显色法鲎试验方法检测110例慢性肝病患者血清内毒素(ET)水平,并选择80例慢性肝病合并ETM患者,随机分丽珠肠乐治疗组(n=40)和对照组(n=40).结果慢性肝病患者血清ET水平明显高于正常对照组,以重症肝炎高.重症肝炎组血清胆红素>342μmol/L、白蛋白<30 g/L及PT活动度<30%时ETM发生率为100%,ET水平高于血清胆红素(171 μmol/L<TB<342 μmol/L)、白蛋白>30 g/L及PT活动度>30%的患者.慢性肝病腹水患者腹水与血清ET水平均升高,分别为(315±80)与(342±83)ng/L.服丽珠肠乐治疗后,慢性肝病合并ETM组的转阴率较对照组为高.结论慢性肝病患者ETM发生率高,肠道微生态调节剂丽珠肠乐能有效地减轻或清除ETM.

    作者:夏玲玲;王中新;周仲松;叶珺;尹华发 刊期: 2002年第03期

  • 独生与非独生子女的智商分项差异性比较

    目的了解独生子女与非独生子女在智商上的差异性.方法采用随机分层取样加1:1条件配对法确定样本.应用韦氏儿童智力量表对合肥市204对独生与非独生子女进行智商的测定.结果独生子女的总智商、语言智商及操作智商高于非独生子女的总智商、语言智商及操作智商,P均<0.01.分项分析发现独生子女在词汇测试(13.51±3.62)、类同测试(12.16±3.27)和迷津测试(11.05±2.62)的方面较非独生子女升高(11.29±3.25,11.02±2.78,10.25±2.67)(P<0.05),而在数学、理解等其他项目上差异无显著性.结论独生子女智商的整体水平高于非独生子女,尤其是言语理解因素方面高于非独生子女.其它分项独生子女的平均分均优于非独生子女,说明独生子女的智商是良性平衡发展.

    作者:詹以森;唐久来 刊期: 2002年第03期

  • 肺结核患者初始耐药的流行病学分析

    目的了解安徽省结核分支杆菌初始耐药的流行病学特征.方法将安徽省肺科医院1997年初~1999年底3年间230例初治肺结核患者的初始耐药性进行流行病学分析.结果3年的初始耐药率分别为:1997年30.4%,1998年27.1%,1999年26.3%,呈逐年下降趋势;异烟肼(INH)、链霉素(SM)、利福平(RFP)的初始耐药率也呈逐年下降趋势.城市初始耐药率(29.7%)高于农村(28.3%)和城镇(21.6%);中老年组初始耐药率高于青年、儿童组;不同职业中,知识分子具有较高的初始耐药率33.3%,学生次之29%,农民为27.7%,工人为25%;结论本地区结核病控制工作取得了一定的成效,但初始耐药情况仍十分严重.

    作者:曹孟淑;韩乔;胡杰贵;徐元宏;张秀军 刊期: 2002年第03期

  • 三种常用染发剂对小鼠骨髓细胞微核的影响

    目的以小鼠骨髓PCE微核率为指标,观察三种品牌的染发剂是否具有诱变性.方法昆明种小鼠连续5 d经皮给予受试物,剂量分别为5 000、2 500和1 250 mg/kg,另设阴性和阳性对照组,观察小鼠骨髓嗜多染红胞微核率.结果三种染发剂嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较均未见明显增高(P>0.05).结论三种染发剂对小鼠骨髓PCE无诱发微核细胞率的增加作用.

    作者:孙美芳;佘素贞;魏凌珍 刊期: 2002年第03期

  • 端粒酶活性和细胞学检测胃癌腹腔液中游离癌细胞的初步评价

    目的比较腹腔灌洗液中端粒酶活性和细胞学检测游离癌细胞及预测腹膜转移的应用价值.方法应用端粒重复扩增(TRAP)-酶联免疫吸附测定(ELASA)法检测52例胃癌和12例胃溃疡患者腹腔灌洗液中的端粒酶活性,同时对52例胃癌患者行腹腔灌洗液脱落细胞学(peritoneallavage cytology,PLC)检测.结果12例胃溃疡患者腹腔灌洗液中端粒酶活性均为阴性.胃癌患者腹腔灌洗液中端粒酶活性的阳性率随侵袭深度、病期进展而增加(P<0.05).TRAP-ELISA方法的阳性率比脱落细胞学检测显著增高(48.1%比25.0%,P<0.05).结论两种方法均适用于胃癌腹腔脱落癌细胞的诊断或腹膜转移的预测.但对微量癌细胞检出的灵敏度,以端粒酶活性检测为优.

    作者:黄道林;张长乐;张胜权;张亚;盛勇 刊期: 2002年第03期

  • 小儿败血症63例临床分析

    1 临床资料1.1 性别与年龄本组63例患儿就诊时间在1998~2000年,均符合败血症的诊断标准[1].其中(阜阳肿瘤医院11例,安徽医科大学第一附属医院52例)男34例,女29例,男女比为1.2:1,年龄4 d~12岁,平均(2.1±1.63)岁.

    作者:吴古立;潘道香 刊期: 2002年第03期

  • 人巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其体外中和活性鉴定

    目的制备具有中和人巨细胞病毒(HCMV)感染作用的单克隆抗体并对其进行生物学活性鉴定.方法用HCMV抗原免疫Balb/c小鼠5、6次后,取致敏的脾脏B淋巴细胞和HGPRT-SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合,在HAT选择培养基中培养2周,间接ELISA法筛选克隆.挑取分泌抗体的杂交瘤株,再用间接ELISA进行鉴定,终获得抗HCMV的阳性杂交瘤细胞株,用Ouchterlony法鉴定McAb的亚类.小鼠腹腔内接种杂交瘤细胞,取腹水经盐析法提纯IgG.Lowry法测定蛋白质浓度,在第6代HF细胞株及原代培养新生乳鼠脑神经细胞上进行微量中和实验.结果获得了4株杂交瘤细胞株,制备的F9McAbs盐析后蛋白质浓度为11.2 g/L,血清学试验证明该McAbs能和HCMV抗原进行特异性结合,制备的IgG具有高度特异性.且体外实验已证实,该McAb具有中和抗体的性质.结论通过杂交瘤技术制备的HCMV单克隆抗体能在体外中和HCMV致病变效应,为该McAb作为抗人巨细胞病毒治疗药物的研发奠定了基础.

    作者:姜永忠;王明丽;李艳秋;余莉;胡勇;毕克菊 刊期: 2002年第03期

  • 尼美舒利胶囊的生物等效性研究

    目的研究国产尼美舒利(Nime)胶囊的生物利用度和生物等效性.方法采用3周期的3×3拉丁方试验设计,以进口和国产Nime片剂为标准参比制剂,对尼美舒利胶囊进行生物利用度和生物等效性进行评价.结果健康志愿者口服200 mg Nime胶囊后,其主要药代动力学参数:Ti/2k为(4.44±0.66)h,Tmax为(3.36±0.59)h,Cmax为9.29 mg/L与进口片剂和国产片剂均相近.以进口片剂或国产片剂为标准对照,用AUC估算,国产Nime胶囊的相对生物利用度及90%的可信限均在标准参比制剂的80%~120%之间.经方差分析和双单侧t检验分析显示,国产Nime胶囊的Cmax,AUC与进口片剂,国产片剂之间差异无显著性.结论国产胶囊与进口片剂,国产胶囊与国产片剂之间,均有生物等效性.

    作者:金涌;李俊;张运芳;姚宏伟;李常玉;徐叔云 刊期: 2002年第03期

  • 中缝背核注射对氯苯丙氨酸观察睡眠的变化及5-羟色胺神经元形态学的改变

    目的观察大鼠中缝背核(DRN)微量注射对氯苯丙氨酸(PCPA)后睡眠的变化及5-羟色胺(5-HT)能神经元的形态学改变.方法采用核团微量注射、多导睡眠描记和免疫组织化学技术.结果DRN内微量注射PCPA(10μg)引起睡眠时间增加,尤以深慢波睡眠增加明显;免疫组织化学显示DRN内5-HT阳性神经元明显减少.结论大鼠DRN微量注射PCPA后睡眠增加且5-HT阳性神经元明显减少,提示5-HT神经元参与睡眠调节.

    作者:章功良;赵乐章;高隽;张景行;刘巧琼;范一菲 刊期: 2002年第03期

  • 二维彩色多普勒血流显像在下肢深静脉血栓中的应用

    目的探讨二维彩色多普勒血流显像在下肢深静脉血栓中的应用价值.方法应用二维彩色多普勒血流显像检测47例51条病肢,分析其声像图特征并根据发病部位对其分型.结果下肢静脉血栓超声表现为腔内血栓回声;探头加压静脉腔不能压扁;腔内缺乏彩色血流信号或出现充盈缺损;脉冲多普勒无血流信号显示或频谱不随呼吸而变化.51条病肢中中央型62.7%,周围型15.7%,混合型21.6%.结论二维彩色多普勒血流显像可作为诊断下肢深静脉血栓的首选方法.

    作者:王玲;张新书;郑慧;姜凡;王惠民;张超学 刊期: 2002年第03期

安徽医科大学学报杂志

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