学术投稿

靶向TrKA基因的SiRNA干扰对乳腺癌细胞生长的影响

陈昌杰;章菊;杨清玲

关键词:乳腺肿瘤, RNA干扰, TrkA, Caspase-3
摘要:目的:观察TrKA对乳腺癌细胞生长的影响,并初步探讨其分子机制,为乳腺癌治疗提供新的药物靶点.方法:荧光定量PCR和Western-blot检测干扰前后乳腺癌细胞株中TrKA的表达水平;MTT法检测干扰后对神经生长因子的促细胞生长作用的影响;Western-blot检测干扰后caspase-3的蛋白活性变化.结果:干扰后TrKA mRNA和蛋白表达分别下降73.8%和80.5%(P<0.05);NGF能促进乳腺癌细胞株MCF-7增殖(P<0.01);MCF-7+NGF组在OD490 nm值,各时间点高于MCF-7组(P<0.01);干扰后抑制了NGF的促细胞增殖作用,TrKA-SiRNA和TrKA-SiRNA+NGF组在490 nm处,各时间点均低于MCF-7 (P<0.01);Western-blot结果显示,与MCF-7组相比TrKA-SiRNA和TrKA-SiRNA+NGF组caspase-3蛋白明显活化,cleaved caspase-3增加(P<0.05).结论:TrKA的SiRNA干扰有效抑制乳腺癌细胞的生长,并有助于细胞趋向凋亡,提示NGF-TrKA生物学轴对乳腺癌的生长起重要作用,阻断此生物学轴可能是乳腺癌治疗新的靶点.
蚌埠医学院学报杂志相关文献
  • 保留神经的根治性子宫切除术技术要点及体会

    早期子宫颈癌经手术治愈率已明显提高,5年生存率可达90%,如何改善子宫颈癌生存者的生活质量成为新的挑战.

    作者:吴小华 刊期: 2008年第06期

  • 我国首例人体司氏伯特绦虫病——节片形态及流行病学意义

    目的:探讨司氏伯特绦虫人体感染在进行病原诊断时对节片的识别及我国发现该绦虫感染的流行病学和公共卫生意义.方法:收集的节片进行活体观察和甲醛固定后观察,测量记录其形态以分析大体标本的形态特点.结果:患者送检节片为数节至10余节甚至数十节相连,呈典型的宽远大于长的特点,在活体时由于虫体遇冷收缩可在一端呈双角状;固定标本每节片平均长0.1 cm,宽0.68~1.10 cm,外观即显著区别于其它绦虫.结论:司氏伯特绦虫感染者排出的节片因收缩而显著变形,固定后其形态在长宽比例上迥异于其它绦虫,掌握该特征并追溯流行病学线索对诊断具有关键意义.

    作者:孙新;陈兴智;杨小迪;方强;胡守锋;夏惠;张美华;王雪梅;王媛媛 刊期: 2008年第06期

  • 二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化的细胞周期时相性研究

    目的:探讨二甲基亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO)诱导分化的HL-60细胞周期变化,进一步揭示细胞分化在细胞周期中特定的时相.方法:以分化诱导剂DMSO(终浓度为2.5%,v/v)影响下不同时间点的HL-60细胞为检测对象,应用流式细胞术分析细胞的大小及细胞表面的分化标志;碘化丙啶染色后用激光共聚焦显微镜观察细胞形态,从而对已分化细胞进行确认;应用流式细胞术分析药物诱导的细胞周期变化;再应用流式分选术结合激光共聚焦显微镜观察各期细胞形态,进一步揭示药物诱导的细胞分化在细胞周期中的时相特异性;应用流式细胞术检测G1期Ki67的表达水平.结果:随着药物诱导时间的延长,被诱导的HL-60细胞体积逐渐增大;48 h后,被DMSO诱导细胞开始表达分化标志物CD11b,并出现细胞核型的变化.被诱导的HL-60细胞的细胞周期图出现G0/G1峰升高,S期水平下降.随着药物诱导时间的延长,G1期Ki67的表达水平逐渐下降.只有在G1期细胞中可见到已分化细胞.结论:DMSO可以诱导HL-60细胞周期的G1早期→G1晚期阻滞,并诱导HL-60沿着粒系方向分化,细胞分化完成于细胞周期中的G1早期.

    作者:许培权;郭伟;龚建平 刊期: 2008年第06期

  • 非小细胞肺癌中survivin和HIF-1α的表达及其相关性研究

    目的:探讨survivin和HIF-1α在非小细胞肺癌(non-small cell Lung cancer,NSCLC)组织中的相关性表达,以及两者与NSCLC组织分化程度、淋巴结转移和临床分期的关系.方法:采用免疫组织化学S-P法检测120例 NSCLC患者手术标本和40例良性肺疾病组织标本中survivin和HIF-1α的表达,分析两者之间的相关性.结果:120例NSCLC患者标本中survivin的阳性表达率为81.6%,良性肺疾病组织无表达;HIF-1α在NSCLC和阳性表达率分别为58.33%,而在良性肺疾病组织中为10.00%;survivin和HIF-1α在NSCLC中的表达均与组织分化程度、淋巴结转移和临床分期有一定关系(P<0.05~P<0.001); survivin和HIF-1α在NSCLC中的表达呈正相关关系(P=0.005).结论:survivin和HIF-1α在NSCLC组织中均有高表达,且与组织分化程度、淋巴结转移和临床分期密切相关.NSCLC组织中survivin与HIF-1α的表达呈正相关.

    作者:陈余清;赵成岭;李伟 刊期: 2008年第06期

  • 亚胺培南耐药的琼氏不动杆菌的外膜蛋白飞行时间质谱分析

    目的:探讨亚胺培南耐药的琼氏不动杆菌外膜蛋白特征及其在不动杆菌耐药中的作用.方法:从住院的慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者痰液中分离一株多重耐药(包括耐亚胺培南)琼氏不动杆菌ZN3858、API 20NE及ARDRA联合RAPD基因指纹技术鉴定到种.琼氏不动杆菌ATCC 17908作为参照,SDS-PAGE方法分离并挑选差异表达的外膜蛋白,基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)分析外膜蛋白特性,体外扩增其部分结构基因.结果:ZN3858的35-和 47- kDa外膜蛋白低表达,质谱分析检索显示35-和47- kDa外膜蛋白分别匹配耐药相关的外膜蛋白oprD和oprF前体;同时一个40 kDa外膜蛋白异常高表达,此蛋白质谱分析及检索显示高度匹配鲍曼不动杆菌中的与碳青霉烯耐药相关的外膜蛋白HMB-AB,其部分结构基因被扩增,并被Genbank收录(序列号:AY626903).结论:外膜蛋白可能参与琼氏不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药.omp40可能是琼氏不动杆菌中与鲍曼不动杆菌HMP-AB对应的外膜蛋白,其在细菌耐药中的作用有待进一步阐明.

    作者:张永;李峰;胡俊锋;黄礼年;陈余清;唐英春 刊期: 2008年第06期

  • 猪白细胞介素12 p35、p40亚基基因的克隆和序列分析

    目的:克隆猪白细胞介素(IL)-12 p35、p40亚基基因,为制备猪囊尾蚴的复合基因疫苗奠定基础.方法:分别分离成年猪的外周血单个核细胞和脾细胞,培养10 h后用IFN-γ(100 ng/ml)刺激增殖12 h,随后加入细菌脂多糖 (1 μg/ml)刺激培养3 h,分别收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增猪IL-12 p35、p40 cDNA 编码基因,克隆至pMD18-T载体,经PCR和双酶切鉴定后进行序列测定.结果:猪IL-12 p35、p40 cDNA PCR 产物电泳结果证明所克隆的基因分别为616 bp和1 011 bp,基因测序结果与GenBank 报道的基因序列各有一个碱基差异,但编码氨基酸无差异,证实分别为猪IL -12 p35、p40 cDNA 编码基因.结论:成功克隆了猪IL-12 p35、p40 cDNA 编码基因.

    作者:袁远英;方强;孙新;王雪梅;李柏青;夏惠 刊期: 2008年第06期

  • 晚期鼻咽癌同步放化疗与单纯放疗疗效比较

    目的:探讨晚期鼻咽癌同步放化疗疗效和毒性反应.方法:回顾性分析163例经病理证实的鼻咽癌患者,其中单纯放疗组85例,同步放化疗组78例.两组均采用加速器6 MV X线常规分割放疗,每周5次,每次2 Gy,先面颈联合野加下颈切线野放疗至36~38 Gy,随后改为耳前野加全颈切线野或小面颈联合野加下颈切线野,鼻咽部总剂量为68~70 Gy/7周,颈部根治量为60~68Gy,预防量为50~55 Gy,同步放化疗组于放疗第1周及第5周配合化疗,化疗方案为甲酰四氢叶酸钙200 mg/m2, d1-5,氟脲嘧啶500 mg/m2,d1-5,顺铂20 mg/m2,d1-3.结果:同步放化疗组和单纯放疗组完全缓解率分别为87.2%和65.9%,3年生存率、3年无瘤生存率单纯放疗组和同步放化疗组分别为62.4%、50.6%与78.2%、69.2%,5年生存率、5年无瘤生存率单纯放疗和同步放化疗组分别为43.5%、32.9%与67.9%、51.3%,单纯放疗组和同步放化疗组5年内局部复发和5年内远处转移率分别为48.2%、30.6%与32.1%、16.7%,差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01).同步放化疗组黏膜反应、胃肠道反应及白细胞减少均高于单纯放疗组(P<0.05).结论:晚期鼻咽癌同步放化疗可以提高近期局部控制率、无瘤生存率及总生存率,降低转移率.

    作者:张亚军;段诗苗;徐全敬;江浩;沈学明 刊期: 2008年第06期

  • 细菌基序对黑素细胞及前列腺素E2的影响

    目的:研究细菌基序(CpG-ODN)对黑素细胞形态、黑素生成及前列腺素E2(PGE2)的影响.方法:用CpG-ODN处理体外培养的B16黑素瘤细胞和melan-α黑素细胞,分别用MTT法、多巴氧化法、NaOH裂解法和ELISA法检测B16细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量以及上清中PGE2的水平,另外,观察CpG-ODN干预后melan-α细胞形态的变化.结果:干预24 h后,5 μg/ml CpG-ODN促进B16细胞增殖,10 μg/ml对细胞增殖的影响与空白对照组无差异,而15 μg/ml CpG-ODN则抑制细胞增殖.48 h后,不同浓度CpG-ODN组的细胞增殖率趋于稳定,与正常对照组间差异无统计学意义(P>0.05).10 μg/ml CpG-ODN提高酪氨酸酶活性和黑素生成,作用近似于α-MSH(P>0.05).另外,此浓度CpG-ODN作用48 h后的细胞上清液中PGE2含量也有所升高,但与对照组差异无统计学意义(P>0.05),推测为检测时间滞后所致.10 μg/ml CpG-ODN 作用于melan-α细胞24 h后,细胞树突数目增加,并有二级以致三级树突出现.结论:CpG-ODN作用于鼠黑素细胞的适宜浓度为10 μg/ml,此浓度对黑素细胞的作用有时间依赖性.该实验为CpG-ODN作用于正常人黑素细胞的研究奠定了基础.

    作者:薛东章;张汝芝;江从军;朱文元 刊期: 2008年第06期

  • Tat47-57-HBcAg融合基因表达载体的构建及融合蛋白的表达鉴定

    目的:探讨融合蛋白Tat47-57-HBcAg原核表达的可行性,并分析其表达形式,为研究其功能提供理论基础.方法:合成Tat47-57编码序列,PCR技术扩增HBcAg基因,通过重叠延伸PCR片段拼接法,将Tat47-57编码序列和HBcAg基因拼接,将融合基因克隆到pET28原核表达载体中.挑选测序正确的构建质粒转化大肠埃希菌Rosetta-gamiTM2(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达,表达产物超声破壁,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析融合蛋白的表达形式,Western印迹鉴定.结果:Tat47-57-HBcAg融合蛋白在大肠埃希菌中主要以可溶性形式过度表达,Western印迹分析表明Tat47-57-HBcAg融合蛋白可与HBcAg单克隆抗体反应.结论:融合蛋白Tat47-57-HBcAg以可溶性形式在原核表达系统中高效表达,并能特异性的被HBcAg单克隆抗体所识别.

    作者:潘庆春;余永胜;汤正好;张韡;韩进超;臧国庆 刊期: 2008年第06期

  • 转录因子RORγt对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用

    目的:探讨转录因子维A酸相关孤独受体γt (RORγt)对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用.方法:健康成人外周血单个核细胞用CD3单克隆抗体和IL-2激活和扩增T细胞,活化T细胞用脂质体法转染人工合成的RORγt基因特异性短干扰RNA (siRNA)序列3个片段(RORγt-siRNA-982,-1026,-1197),RT-PCR半定量法检测活化T细胞转染siRNA后RORγt基因表达,流式细胞仪检测不同T细胞亚群产生IFN-γ细胞的比例.结果:活化T细胞转染RORγt-siRNA后, 对RORγt基因表达的检测显示,RORγt-siRNA-982序列无抑制作用,而RORγt-siRNA-1026和-1197序列均有明显抑制作用.活化T细胞转染RORγt-siRNA-1026后,产生IFN-γ细胞百分数在CD4+T细胞(32.78±3.41)中, 明显低于未转染组(44.54±1.75) (P<0.01).结论:转录因子RORγt对T细胞,特别是对CD4+T细胞产生IFN-γ有正调控作用.

    作者:薛祝平;马飞;唐洁;李柏青 刊期: 2008年第06期

  • FABP2多态性与2型糖尿病胰岛素抵抗、糖、脂代谢的关系

    目的:探讨小肠脂肪酸结合蛋白基因(FABP2)多态性与2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗、糖、脂代谢的关系.方法:应用聚合酶链反应,对140例蚌埠地区汉族人80例2型糖尿病(T2DM)组及60例正常对照(NC)组的小肠脂肪酸结合蛋白基因54密码子的HhaⅠ酶切位点进行限性片段长度多态性分析.结果:蚌埠地区汉族人存在FABP2 HhaⅠ多态性位点,有FABP2 Ala54Ala、Ala54Thr和Thr54Thr多态片段 (等位基因频率Ala为0.67, Thr为0.33).与NC组比较,T2DM组的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR指数)、胰岛素均明显增高(P<0.01),胰岛素敏感指数显著降低(P<0.01);甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白均明显增高(P< 0.01),高密度脂蛋白明显降低(P<0.01).T2DM组中,FABP2 Ala54Ala与Ala54Thr及Thr54Thr基因型患者比较,后两者的空腹胰岛素、HOMA-IR指数、空腹血糖、甘油三酯水平、低密度脂蛋白明显增高(P<0.01),而胰岛素敏感指数显著降低(P<0.01).结论:蚌埠地区汉族人存在FABP2多态性.2型糖尿病患者存在胰岛素抵抗及脂代谢异常,且FABP2 Ala54Thr、Thr54Thr基因型与胰岛素抵抗相关,是脂代谢异常的影响因素之一.

    作者:周海艳;石建华;黄(讠永)齐 刊期: 2008年第06期

  • 核糖核酸酶抑制因子与人乳腺癌细胞恶性增殖的相关性研究

    目的:探讨核糖核酸酶抑制因子(ribonuclesae inhibitor,RI)的表达与人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3恶性增殖之间的关系.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测RI基因表达水平,细胞免疫化学技术检测RI蛋白表达情况.结果:人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖速度、S期所占比例均小于人乳腺癌细胞MDA-MB-231、SKBR-3(P<0.05~P<0.01),且MCF-7细胞中RI基因表达水平、蛋白表达水平明显高于MDA-MB-231、SKBR-3细胞(P<0.01).结论:RI与人乳腺癌细胞恶性增殖生长有一定的相关性.

    作者:唐晓燕;章菊;夏俊;陈俊霞;崔秀云 刊期: 2008年第06期

  • 唑类抗真菌药物耐药及其对策

    唑类药物是目前治疗多种深、浅部真菌病的一线药物.按照结构,它被分为咪唑类(酮康唑、咪康唑、联苯苄唑、益康唑和克霉唑等)和三唑类(氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑等).

    作者:张宏 刊期: 2008年第06期

  • 预防医学专业实习基地建设对毕业生就业的影响

    目的:探讨预防医学专业实习基地建设与毕业生就业的关系.方法:根据预防医学专业毕业实习生的实习和就业的需要,在省外江苏、浙江和上海(江、浙、沪)发达地区建立专业实习基地,为毕业生就业创造有利的条件.结果:预防医学专业在上海市和江苏省等五省市的市(区)级疾病预防控制中心、卫生监督所和临床实习医院等建立了14个实习基地(涉及40个实习单位).连续三届毕业生就业率均为100%,毕业生在省外的就业率从2005首届28.1%上升到2007届61.1%,而其中在江、浙、沪专业实习基地及其周边地区就业者均高达93%以上.结论:实践证明,专业实习是本科教育的重要环节,加强实习基地建设是专业实现教学目标、教学质量的保证,也是增强专业学生综合能力、提高专业学生就业率的有效途径.

    作者:周纯先;王春华;程先进;江城梅;张月英;孟莉;孔刚 刊期: 2008年第06期

  • 血管抑制因子治疗血管增生性疾病的研究进展

    血管增生(neovascularization),即从已存在的毛细血管网上大量生成新生血管的过程;新研究表明,新生血管可以直接由内皮祖细胞分化产生.

    作者:高国全 刊期: 2008年第06期

  • 计算机辅助三维定标法在冠、矢状位MRI脑结构定位的研究

    目的:为冠状及矢状位断层影像解剖研究探讨新的方法.方法:应用个人计算机设备,采用计算机辅助的三维定标法,对大脑冠状位、矢状位MRI上中央进行了识别、定位,并与连续追踪法结果比较.结果:计算机辅助三维定标法精确、方便地实现了中央沟在冠状面、矢状面等各断层MRI的识别和准确定位,识别结果与连续追踪法互相印证.结论:计算机辅助的三维定标技术可用于断层影像解剖学的研究.

    作者:沈龙山;王震寰;张磊;张顺花;张艳;张俊祥;刘志军 刊期: 2008年第06期

  • 吸入依洛前列环素对先天性心脏病继发肺动脉高压患者血液动力学的影响

    目的:探讨吸入依洛前列环素对先天性心脏病(CHD)继发肺动脉高压(PAH)患者的血液动力学影响.方法:对20例CHD继发PAH患者吸入依洛前列环素,分别测量吸入药物前后各血液动力学参数,比较用药前后的差异.结果:吸入依洛前列环素后PAH患者的肺动脉收缩压(PAP)、肺动脉舒张压、肺动脉平均压、肺血管阻力(PVR)下降,外周动脉血血氧饱和度、周围动脉氧分压、体循环血流量、肺循环血流量、心脏指数(CI)增加;混合静脉血氧含量、体循环收缩压、混合静脉血血氧饱和度、体循环舒张压、体循环平均压、肺小动脉嵌顿压、心率无明显变化.结论:吸入依洛前列环素可安全有效地降低PAH患者的PAP、PVR,增加CI.

    作者:罗显元;周学中;张维君 刊期: 2008年第06期

  • 扣带沟与副扣带沟的非对称性研究

    目的:观察副扣带沟在国人人群中的出现率及侧别差异、扣带沟走行的连续性及各类型出现的概率.方法:在微型计算机上eFilm1.5工作站中,选取30例头颅连续MRI矢状断层两侧旁正中矢状面,观察副扣带沟的出现率;扣带沟走行的连续性及各类型出现的概率.结果:左侧大脑半球副扣带沟的出现率为56.67%,右侧为26.67%;左侧扣带沟连续不分段的出现率为63.33%,右侧为50%;左侧出现副扣带沟时,同侧连续型扣带沟出现率为88.24%,右侧出现副扣带沟时,同侧连续型扣带沟出现率为71.43%.结论:副扣带沟的出现呈现明显的左偏趋势;副扣带沟的出现显著影响了扣带沟走行的连续性.

    作者:隋东莉;王震寰;李成;陈刘成;沈龙山 刊期: 2008年第06期

  • 胃癌转移的相关基因研究进展

    转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因,也是肿瘤治疗中的大障碍.癌的转移是一个复杂的生物学过程,与基因密切相关,转移常常伴随着某些基因的改变.

    作者:张庆;顾琴龙 刊期: 2008年第06期

  • Cyclin D1及p16在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

    目的:研究细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及p16基因在人非小细胞肺癌组织中的表达和临床意义.方法:以免疫组化SP法检测62例非小细胞肺癌组织中及20例肺良性病变组织中Cyclin D1及p16的表达.结果:Cyclin D1及p16在肺癌组织中均有较高的表达,其阳性率分别为62.9%和56.5%;在肺良性病变中未发现Cyclin D1的表达,p16阳性率为85.0%.Cyclin D1的表达与肿瘤的大小、淋巴结转移及临床分期无关(P>0.05);p16的表达与肿瘤的大小无关(P>0.05),与淋巴结转移及临床分期有关(P<0.005).结论:Cyclin D1的过表达与肺癌的发生有关,可作为肺癌早期诊断指标之一,而与肺癌发展和预后无关;p16异常与肺癌发生、发展及预后有关.

    作者:王立新;洪永青;高金瑜 刊期: 2008年第06期

蚌埠医学院学报杂志

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主管:安徽省教育厅

主办:蚌埠医学院