于淑萍；马春虎；王玉坤
目的 通过克隆形成及致瘤能力研究肺腺癌细胞系A549肿瘤始发细胞的比例.方法 采用有限稀释法,检测细胞单克隆形成的数量及大小;收集来自于1个细胞形成的克隆细胞,种于BALB/C裸鼠皮下,观察其致瘤能力;采用CD133磁珠分选A549细胞,测定CD133+、CD133-细胞的克隆形成能力,测定Hoechst33342染色对非SP细胞的增殖能力和单克隆形成能力的影响.结果 45%以上的A549细胞能够形成大于100个细胞的大克隆,其传代后又能形成新的克隆,来源于1个大克隆的细胞种植到BALB/C裸鼠身上,10 d左右能形成肉眼可见的肿瘤;CD133+、CD133-细胞克隆形成能力相同;Hcechst33342染色能够明显干预细胞的克隆形成及增殖能力.结论 45%以上的A549细胞是肿瘤始发细胞.
作者：孟祥姣；王亚伟；王秀问 刊期： 2009年第04期
目的 建立体外稳定获取大数量及高纯度脊髓神经元的培养方案,比较当前国内外常用的无血清培养基(Neurobasal+B27,NCM)与传统含血清培养基(DMEN/F12+10%胎牛血清+5%马血清,SCM)对体外培养脊髓神经元生长状态的影响.方法 取E14-15 d Wistar大鼠的胚胎脊髓组织行胰酶消化获取脊髓神经元的单细胞悬液,分别用NCM与SCM进行培养,差速贴壁法及Ara-C干预纯化培养的神经元.于接种后第1、2、3、4、5、6、7 d倒置相差显微镜下观察细胞生长状态的变化,并用免疫荧光细胞化学法比较两种培养基培养下获取的神经元纯度.结果 采用NCM培养的脊髓神经元生长良好,对环境变化如换液及加入Ara-C更为耐受;NCM培养的神经元的纯度为(87.70±8.70)%,SCM培养的神经元纯度为(78.61±7.00)%,前者纯度更高(P=0.019).结论 NCM较之SCM更加适合脊髓神经元的体外培养.
作者：袁玉静；傅志俭；孙涛 刊期： 2009年第04期
目的 观察姜黄素对糖尿病大鼠肾脏结构和功能的影响.方法 用链脲佐菌素(STZ)诱导制备糖尿病大鼠模型,并随机分为糖尿病组和姜黄素治疗组,另设一正常对照组.治疗组给予姜黄素200 mg/(kg·d)灌胃,为期8周.然后进行肾脏形态学观察和血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、内生肌酐清除率(Ccr)、尿白蛋白排泄率(UAER)等的检测.结果 糖尿病组大鼠Ccr、UAER、尿白蛋白/肌酐、肾小球平均截面积(MGA)、肾小球平均体积(MGV)均显著高于正常对照组(P<0.01或P<0.05).光镜和电镜下观察显示,糖尿病组大鼠较正常对照组大鼠肾小球明显增大,细胞数目增多,基底膜节段性增厚,部分足细胞足突融合.姜黄素治疗组上述异常均明显减轻.三组大鼠间血BUN和Scr两两比较无明显差异(P>0.05).结论 姜黄素可明显改善糖尿病大鼠肾脏病理改变,减轻肾脏肥大和高滤过状态,降低尿白蛋白,时糖尿病大鼠有肾脏保护作用.
作者：于冬青；刘金波；邓华聪 刊期： 2009年第04期
目的 探讨双源CT在先天性心脏病诊断中的应用价值.方法 采用西门子Siemens Somatom Definition DSCT增强扫描检查先天性心脏病50例,其中40例采用心电门控扫描模式,10例因心率过快采用普通胸部增强扫描模式.50例均行心脏超声检查,其中27例经手术证实、9例经X线心血管造影证实.本组以手术或X线心血管造影结果为标准,比较双源CT和心脏超声的诊断准确率.结果 经手术或X线心血管造影证实的36例先天性心脏病中,含单纯房间隔缺损、单纯室间隔缺损、主动脉弓离断、单心室、完全型大动脉错位、肺动脉起源异常、冠状窦无顶综合征各1例,单纯动脉导管未闭、校正型大动脉错位、冠状动脉起源异常、肺动脉闭锁并室间隔缺损、左室双出口各2例,右室双出口4例,主动脉缩窄5例,法洛四联症10例.36例共计107处畸形,均以手术或X线心血管造影结果证实,其中心内畸形30处,双源CT和心脏超声诊断准确率分别为93.33%和96.67%(P=1.000).心外畸形77处,双源CT和心脏超声诊断准确率分别为96.10%和87.01%,双源CT诊断准确率高于心脏超声(X2=4.117,P=0.042).双源CT与心脏超声联合诊断准确率为99.21%.结论 双源CT对比增强扫描对先天性心脏痛心外畸形的诊断准确率高于心脏超声,但二者联合可提高对先天性心脏病的诊断准确率.
作者：汪洁；王青；崔凤玉 刊期： 2009年第04期
目的 探测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对背根神经节(DRG)神经元谷氨酸(Glu)损伤的保护作用.方法 Wistar胎鼠DRG神经元分散培养48 h后,用Glu(200 μmol/L)造成神经元损伤,并同时给予IGF-1(10 mnol/L),观察添加IGF-1和未添加IGF-1孵育的Glu损伤的神经元的活细胞生长状况,并用流式细胞仪检测神经元的凋亡率,用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)检测细胞内钙离子荧光强度.结果 用IGF-1孵育的神经元生长状况良好,凋亡率、细胞内钙离子荧光强度均低于无IGF-1孵育的标本.结论 IGF-1可通过减低钙离子内流,抑制细胞凋亡,从而对Glu损伤的DRG神经元产生保护作用.
作者：张凤军；王丽红；刘真；邢子英；王怀经；李振中 刊期： 2009年第04期
目的 探讨自制质控血清在肿瘤标志物及激素电化学发光分析室内质量控制中的应用价值.方法 选择日常工作中甲胎蛋白、癌胚抗原等所需检测项目的 高浓度标本,加至正常浓度的血清中调节各检测项目至所需浓度配成自制质控血清.自制质控血清灭活,离心、分装后置于-80℃冰箱保存,每天取出1管于37℃水浴溶化后, 随同当日标本检测.结果 在罗氏E170仪器上检测,自制质控血清稳定,控制效果良好,重复精度好.结论 自制质控血清可以满足室内质控要求,且来源方便,成本低.
作者：高扬；单宁宁；李心河；刘延红；夏洪印；王慧敏 刊期： 2009年第04期
目的 探讨大鼠肺移植受体闭塞性细支气管炎(OB)与细胞凋亡的关系.方法 采用大鼠气管异位移植模型模拟肺移植术后OB.随机分为对照组、移植组和免疫抑制剂治疗组,分别于术后7、14和28 d取出移植物.原位末端标记法(TUNEL)检测移植气管细胞凋亡情况;免疫组织化学EnVison法检测移植气管Caspase-3和Bax基因蛋白的表达.结果 ①动物模型气管HE染色检测到术后排斥反应,与OB组织学改变符合;②TUNEL检测到大鼠OB模型存在细胞凋亡,免疫抑制剂治疗组较移植组细胞凋亡数少,移植中后期两组差异有统计学意义(P<0.05);③免疫组织化学检测到大鼠OB模型Caspase-3、Bax基因蛋白表达在移植组和免疫抑制剂治疗组增高,移植中后期两组差异有统计学意义(P<0.05).结论 ①大鼠肺移植受体OB与细胞凋亡相关;②抑制细胞凋亡可治疗肺移植受体OB.
作者：魏煜程；王滋宗；杨荣华；沈毅 刊期： 2009年第04期
目的 研究乙醇对体外培养的人肝L02细胞糖原含量及糖原合成酶激酶(CSK-3β)、磷酸化的AMP激活的蛋白激酶(P-AMPK)的影响.方法 培养L02细胞,按加入的乙醇浓度分为0、50和100 mmol/L三组,培养24 h,用蒽酮-硫酸比色法测定细胞糖原含量,蛋白免疫印记法(Western Blot)检测GSK-3β及P-AMPK的表达水平;并加入AMPK的激动剂(AICAR)或AMPK的阻断剂(Compound C),检测GSK-3β含量的变化.结果 与0mmol/L组比较,50和100mmol/L组糖原含量下降、GSK-3β及P-AMPK表达增强(P均<0.05),50 mmol/L组与100mmol/L组比较,糖原含量及蛋白表达均未见明显统计学差异(P>0.05);AICAR和Compound C对GSK-3β的表达无明显影响(P>0.05).结论 乙醇能减少L02细胞糖原含量,可能与GSK-3β表达增加有关.
作者：于慧；陈少华；赵家军；高聆 刊期： 2009年第04期
目的 比较国产实时荧光定量PER(FQ-PCR)试剂与罗氏COBAS Amplicor方法检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA的结果.方法 据COBAS Amplicor的FQ-PCR试剂(A)的检测结果,抽取151份慢性乙型肝炎(慢乙肝)血清标本,采用两种国产实时FQQ-PCR试剂B、C对血清标本进行HBV-DNA平行检测,以分析国产试剂的敏感度、特异度及与试剂A的相关性.结果 试剂A、B、C测得的HBV-DNA结果分别为(5.87±1.64)、(5.11±1.34)、(4.93±1.35)log10 copies/mL,试刺B、C与试剂A的相关系数分别为0.947、0.937.3种试剂检测结果总体差异有统计学意义(P<0.05),试剂B、C与试剂A检测结果相比差异有统计学意义(P<0.05).低HBV载量标本,试剂B、C与试剂A相关性较低.以试剂A为准,总体灵敏度、特异度分别为试剂B 90.4%、56.3%,试剂C 77.0%、100%.结论 试剂B、C与试剂A在检测HBV-DNA方面有较好一致性,但在低HBV载量时可靠性较低.试剂B灵敏度高,试荆C特异度高.
作者：薛艳；王磊；徐皖苏 刊期： 2009年第04期
目的 体外分离培养鉴定躯干神经嵴干细胞,探讨其生物学特性,为研究周围神经再生修复提供新的细胞来源.方法 取大鼠胚胎躯干部神经管,组织块法培养获取躯干神经嵴干细胞,通过形态学及免疫细胞化学观察其细胞生长、增殖、分化等特性.结果 原代培养的躯干神经嵴千细胞呈梭形,其特异性标记物nestin和p75表达阳性,并有较高的增殖活性.传代培养后,在含血清培养基中,其分化细胞呈GFAP、MAP-2、α-SMA阳性.结论 成功地培养了躯干神经嵴干细胞,细胞表现出多潜能干细胞特性,为研究周围神经组织工程种子细胞来源提供实验依据.
作者：卢静；孙晋浩；张静；丛丽；綦晓霞；庄园；杨洁；李振华 刊期： 2009年第04期
目的 应用脂多糖(LPS)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,检测细胞因子肿瘤坏死因子-a(TMF-a)、白细胞介素-6(IL-6)和尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体(uPA/uPAR)的mRNA和蛋白含量的变化及辛伐他汀对其表达的影响.方法 实验分为12h组和24h组,各组又分为空白对照组、脂多糖(100 ng/mL)组、辛伐他汀(5μg/mL)组、辛伐他汀(5μg/mL)和脂多糖(100 ns/mL)共作用组,用实时荧光定量PCR和ELISA方法测定12 h组、24 h组TNF-α、IL-6及uPA/uPAR的mRNA和蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,脂多糖组TNF-α、IL-6及uPA/uPAR的mRNA表达和上清波中IL-6蛋白的表达均明显增加(P均<0.05);与脂多糖组相比,辛伐他汀和脂多糖共作用组TNF-α、IL-6及uPA/uPAR的mRNA表达和上清液中IL-6蛋白的表达均明显降低(P均<0.05).结论 辛伐他汀可抑制HUVECs分泌的细胞因子TNF-α、IL-6及uPA/uPAR的表达.
作者：窦姗姗；邓景惕；季冉；扈燕来；张伟红；张立平 刊期： 2009年第04期
目的 观察大黄素对体外培养的人眼角膜基质细胞分泌白细胞介素6(IL-6)的干预作用.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度大黄素对人眼角膜基质细胞活性的影响.绿脓杆茵脂多糖(LPS)刺激角膜基质细胞(LPS组),并用大黄素进行干预(大黄素预处理组).分别于LPS刺激前(Oh),刺激后1、2、4、8h收集各组细胞及细胞上清液.Western blot检测不同时点角膜基质细胞kB抑制因子-α(IkB-α)蛋白的表达及大黄素的作用,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同时点角膜基质细胞IL-6蛋白的分泌及大黄素的作用.结果 不同浓度大黄素对角膜基质细胞的活性没有影响.与0 h相比,LPS刺激角膜基质细胞1 h时,胞浆IkB-α蛋白表达出现下降,其电泳条带随着刺激时间的延长而逐渐变暗,4 h时暗.LPS刺激后各时点IkB-α蛋白表达较LPS刺激前均明显下降(P<0.01).LPS刺激可引起人眼角膜基质细胞IL-6蛋白分泌增多,刺激后8h达峰值,LPS刺激细胞后各时点细胞分泌IL-6均较刺激前明显增加(P<0.01).大黄素预处理后,与LPS组相比较,角膜基质细胞表达IrB-α蛋白下降、细胞分泌IL-6减少(P<0.01).结论 绿脓杆菌LPS可引起人眼角膜基质细胞IkB-α降解,引起细胞因子表达,在角膜炎的过程中可能起一定的作用.大黄素能有效抑制吣诱导的人角膜基质细胞IkB-a降解,从而减少相应细胞因子的分泌.
作者：陈国玲；陈双；刘艳丽；魏璐婉；刘执玉 刊期： 2009年第04期
目的 调查成年人被动吸烟情况,了解人们对被动吸烟的知识、态度和行为,为制定控烟政策提供依据.方法 采用拦截调查的方法,在山东省济南市、聊城市、平阴县三地共调查543人,其中不吸烟者397人.采用X2检验、Logistic回归分析方法统计分析有关因素与被动吸烟的关系.结果 不吸烟者中42.6%的人被动吸烟,其中52.4%的男性被动吸烟,47.8%的女性被动吸烟,男性被动吸烟率高于女性.59.7%的不吸烟者主动反对吸烟者在自己面前吸烟.男性、从事室内工作、不主动拒绝被动吸烟和吸烟者吸烟前不征求他人意见是不吸烟者被动吸烟的危险因素.结论 人群中被动吸烟率仍然较高,人们对被动吸烟危害的认识尚不足,拒绝被动吸烟的意识淡漠.对不同公共场所全部禁烟的态度不尽一致,多数人支持在学校、医院、公交工具中全部禁烟.需要进一步加强对公众的控烟宣传,加大公共场所禁烟的力度,减少全人群的烟草暴露特别是加强对不吸烟者的保护力度.
作者：李斐斐；孙桐；刘言训；侯家祥 刊期： 2009年第04期
目的 探讨二甲双胍对初发2型糖尿病(T2DM)及糖耐量异常(IGT)者的疗效.方法 初发T2DM、IGT患者各30例,健康志愿者30例,分别设为T2DM组、IGT组及正常对照组,比较各组血糖、糖化血红蛋白(HbAlc)、血脂、血压、体质量指数(BMI)、腰臀比(WHR)、尿酸(UA)、血浆脂联素及内脂素的差异.T2DM组及IGT组患者在合理膳食和适当运动的同时加服二甲双胍1 500mg/d,疗程为1年,检测治疗前后各项指标的变化.用酶联免疫吸附法检测血浆脂联素、内脂素水平;血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)和UA用全自动生化仪测定;空腹血糖(FPG)和糖负荷后2h血糖(2hPG)采用葡萄糖氧化酶法,HbAlc测定采用高压液相法.结果 ①与对照组相比,IGT组及T2DM组BMI、TC、FPG、2hPG和HbAlc显著增高(P<0.01.P<0.05),脂联素和内脂素水平明显降低(P<0.05,P<0.01);②二甲双胍治疗后,T2DM组BMI、WHR、TC、FPG、2hPG和HbAlc较治疗前明显降低(P<0.05或P<0.01),IGT组BMI、WHR、LDL-c、TC、FPG和2hPG显著降低(P<0.05或P<0.01),但两组脂联素均明显高于治疗前(P<0.01,P<0.05).结论 初发T2DM及IGT患者在生活方式改善的同时服用二甲双胍干预治疗疗效明确.
作者：陈丹玲；米念荣；王淑芳 刊期： 2009年第04期
目的 探讨山东地区宫颈癌发病危险因素.方法 采用以医院为基础的1:2病例对照研究,用统一的调查表对山东省三所省级医院893例宫颈癌患者及1786例对照进行调查,应用条件Logistic回归分析筛选宫颈癌发病危险因素.结果 在单因素Logistic回归分析的基础上,HPV16感染、HPV52感染、吸烟、首次性交年龄、性伴侣个数、人工流产次数、配偶有阴茎癌或前列腺癌、绝经和使用避孕套共9个因素被引入回归模型,其OR值依次为:28.256、10.164、2.946、4.529、4.012、4.211、1.312、0.507和0.612.结论 HPV16、HPV52感染是山东地区宫颈癌发生的主要危险因素,首次性交年龄早、性伴侣个数多、人工流产次数多、吸烟以及配偶有阴茎癌或前列腺癌可增加宫颈癌发生的危险,而绝经和使用避孕套则降低宫颈癌的发生风险.
作者：阚士锋；芦鑫；王传新；郑桂喜；李伟；张晓 刊期： 2009年第04期
目的 监测远端坏死的穿支皮瓣经皮氧分压(tcPaO2)的变化规律,为临床工作提供实验依据.方法 应用体质量400～450g雄性Wistar大鼠100只,在其背部作以髂腰皮动脉为蒂的穿支皮瓣,面积约12 cm×3 cm,以穿支穿出点为近端到皮瓣远端均分为4个区域依次为1、2、3、4区,分别在术前及术后0、1、2.4、7d监测各区域的tcPaO2值.结果 术后各区域0 dtcPaO2值较术前明显降低(P<0.01).术后1、2、4、7d近端3个区域的tePaO2值逐渐升高(P<0.01),术后7 d达到高,其中近端2个区域基本达到正常水平;远端4区的tcPaO2值逐渐降低(P<0.01),术后4d全部坏死.术后1、2d由近端到远端tePaO2值先升高后降低,2区明显高于1区与3,4区(P<0.05);术后4、7 d由近端到远端tcPaO2值呈降低趋势(P<0.05),1、2两个区域tcPaO2值差异无统计学意义(P>0.05).结论 tcPaO2可以客观、连续、定量地反映皮瓣的血液供应状态,有助于早期发现皮瓣的血运障碍,在临床上有很大的应用前景.
作者：尹国瑞；何波；丰荣杰；李淑媛；毕本军；许庆家；朱小雷 刊期： 2009年第04期
目的 测定慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)小鼠外周血中IL-11及其受体(IL-11R)的水平,探讨CITP的发病机制,为ITP的治疗提供新的理论依据.方法 BALA/C小鼠60只,随机分为对照组(20只)和CITP组(40只),通过腹腔注射豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)的方法建立CITP模型.于造模第8 d分别采用ELISA、流式细胞术测定两组小鼠外周血中IL-11及IL-11R的水平.结果 CITP小鼠外周血中IL-11及IL-11R平均水平均较对照组升高(P<0.05);其中有31只小鼠同时存在IL-11及IL-11R水平的升高,余9只小鼠仅存在IL-11水平的升高,而IL-11R水平降低.结论 IL-11及IL-11R在CITP的发病机制中起一定作用,但它们发挥作用的原理及过程尚需进一步探讨.
作者：牛婷婷；陈力军；黄丽华；杜雪；张孝卫 刊期： 2009年第04期
目的 探讨程序性细胞凋亡因子4(PDCD4)和Ki67蛋白在不同期蕈样肉芽肿(MF)皮损中的表达.方珐选择27例MF病变皮肤及5例正常皮肤组织蜡块,分为:红斑/斑块期MF(n=21)、肿瘤期MF(n=6)和正常对照组(n=5),应用免疫组织化学Envison两步法分别检测3组标本表皮及真皮中PDCD4及Ki67的表达.结果 ①红斑/斑块期MF皮损表皮PDCD4+细胞与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),真皮PDCD4+细胞明显少于正常对照组(P<0.05);肿瘤期MF皮损表皮及真皮PDCD4+细胞均少于正常对照组和红斑/斑块期MF(P<0.05);②两组MF表皮Ki67'细胞的数量与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),红斑/斑块期MF及肿瘤期MF皮损真皮Ki67+细胞均多于正常对照组(P<0.05);肿瘤期MF皮损真皮Ki67+细胞高于红斑/斑块期MF皮损(P<0.05);③各期MF的表皮及真皮中PDCD4和Ki67的表达无相关性(P>0.05).结论 PDCD4的表达从MF的红斑/斑块期到肿瘤期逐渐减低,真皮中Ki67的表达逐渐增强,MF的发生与发展可能与PDCD4表达降低或缺失有关.
作者：于淑萍；马春虎；王玉坤 刊期： 2009年第04期
目的 研究EGFR、NM23和Bcl-2基因在下咽鳞状细胞癌组织中的表达规律及与下咽癌临床病理因素的关系,评价其在临床应用的价值.方珐下咽癌29例手术后石蜡包埋组织,制作切片,用免疫组化SP法检测EGFR、NM23和Bcl-2基因的表达,分析它们与下咽癌临床病理因素之间的相关关系.结果 EGFR、NM23和Bcl-2的阳性表达率,分别为62%(18/29)、79%(23/29)和86%(25/29).EGFR在低分化癌组的阳性表达率高于高中分化组(P=0.021),在淋巴结转移组的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(P=0.018).NM23和Bcl-2与临床病理因素无关.结论 EGFR在下咽癌的高表达与分化及淋巴结转移密切相关,可以作为辅助判断下咽癌临床特性的生物学指标.NM23和Bcl-2表达的规律,有待进一步研究.
作者：杨秋安；杨金霞；付卫江；张廷国；王妍；刘文君；章晓梅；赵维萍 刊期： 2009年第04期
目的 观察脑神康胶囊对缺氧复氧损伤大鼠海马神经元凋亡及其Bel-2、Bax mRNA表达的影响.方法 随机将原代培养大鼠海马神经元分为对照组、损伤组、中药低、中、高浓度组.对照组正常培养,损伤组及中药组建立缺氧复氧损伤模型,中药各浓度组于复氧时换以不同浓度含药血清的培养液,采用MTT法测各组细胞存活率,采用流式细胞仪检测凋亡率,采用RT-PcR法检测Bcl-2和Bax mRNA的表达并计算两者比值.结果 损伤组细胞存活率及Bcl-2 mRNA表达明显下降(P均<0.01),凋亡率及Bax mRNA表达显著升高(P均<0.01),Bel-2/Bax降低(P<0.01);中药各浓度组较损伤组细胞存活率及Bel-2 mRNA表达均升高(P均<0.01),凋亡率及Bax mRNA表达降低(P<0.01,P<0.05),Bcl-2/Bax增加(P<0.01),且呈明显的剂量依赖性.结论 脑神康胶囊对海马神经元缺氧复氧损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其调节凋亡相关蛋白、减少凋亡密切相关.
作者：李伟；刘德山；常萍；林炜炜 刊期： 2009年第04期
山东大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：山东大学
