学术投稿

特异性沉默EBV潜伏期基因LMP1 pSUPER retro RNAi系统的构建

殷凡;王笑峰;罗兵

关键词:shRNA, LMP1, PA317, 逆转录病毒载体, Epstein-Barr病毒
摘要:目的构建并筛选携带针对Epstein-Barr病毒(EBV)潜伏膜蛋白基因LMP1的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞克隆.方法用DNA重组技术,将60 bp能转录产生靶向LMP1小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,脂质体法将重组逆转录病毒载体转染包装细胞系PA317,G418筛选建立稳定产生逆转录病毒的细胞克隆.结果重组逆转录病毒载体经限制性内切酶酶切,电泳后可观察到7 167 bp和281 bp两条DNA条带;测序鉴定结果表明序列正确;重组载体转染包装细胞,可表达绿色荧光蛋白,经G418筛选,得到抗性细胞克隆.结论特异性沉默EBV潜伏期基因LMP1的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞系构建和筛选成功.
齐鲁医学杂志相关文献
  • 特异性沉默EBV潜伏期基因LMP1 pSUPER retro RNAi系统的构建

    目的构建并筛选携带针对Epstein-Barr病毒(EBV)潜伏膜蛋白基因LMP1的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞克隆.方法用DNA重组技术,将60 bp能转录产生靶向LMP1小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,脂质体法将重组逆转录病毒载体转染包装细胞系PA317,G418筛选建立稳定产生逆转录病毒的细胞克隆.结果重组逆转录病毒载体经限制性内切酶酶切,电泳后可观察到7 167 bp和281 bp两条DNA条带;测序鉴定结果表明序列正确;重组载体转染包装细胞,可表达绿色荧光蛋白,经G418筛选,得到抗性细胞克隆.结论特异性沉默EBV潜伏期基因LMP1的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞系构建和筛选成功.

    作者:殷凡;王笑峰;罗兵 刊期: 2006年第03期

  • 腰大池灌注林格液加脑室外引流治疗全脑室出血28例分析

    脑室出血是一种非常严重的临床急症,病死率高.2002年8月~2005年1月,我科采用腰大池灌注林格液加脑室外引流术治疗全脑室积血病人28例,取得较好效果,现报告如下.

    作者:宁铁英;于欣;陈瑶刚;赵明媚;刘伯晨;李洪善 刊期: 2006年第03期

  • 药物性肝病35例临床分析

    药物性肝病(DILD)是指由于药物或(和)其代谢产物引起的肝脏损害.可以发生在以往没有肝病史的健康者或原来就有严重疾病的病人,在使用某种药物后发生程度不同的肝脏损害,均称药物性肝病,其表现与人类各种肝病的表现相同,可以表现为肝细胞坏死、胆汁淤积、细胞内微脂滴沉积或慢性肝炎、肝硬化等.

    作者:张琪;张民生;张翠萍 刊期: 2006年第03期

  • 通过噬菌体筛选表达人CD59的CHO细胞结合的内化短肽

    目的筛选并鉴定与表达人CD59的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞特异结合的内化短肽,为设计具有拮抗CD59肿瘤逃逸活性的短肽药物奠定基础.方法以高表达人CD59的CHO细胞为靶,对噬菌体随机十二肽库进行5轮亲和筛选,并进行竞争结合实验,用ELISA法筛选噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析.结果随机挑选的10个克隆中有6个与人CD59结合力高,测序后得到2个高度同源的氨基酸序列. 结论获得了与高表达人CD59的CHO细胞结合的内化短肽序列,为进一步设计与肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽药物提供了参考依据.

    作者:程颖;高美华;王冰;王秋波 刊期: 2006年第03期

  • 慢性盆腔炎病人的康复护理

    慢性盆腔炎是妇科常见病之一,多由于急性盆腔炎治疗不及时、不彻底或者病人体质差,病程迁延所致.当机体抵抗力降低时,慢性盆腔炎可急性发作.本文对慢性盆腔炎的康复护理体会介绍如下.

    作者:谭琳;李庆梅 刊期: 2006年第03期

  • HIF-1α、VEGF及IGF-Ⅰ蛋白在子宫内膜癌中的表达及其意义

    目的研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)蛋白在子宫内膜癌中的表达及其意义,并探讨HIF-1α与IGF-Ⅰ及VEGF蛋白表达之间的关系.方法应用免疫组织化学PicTureTM方法检测HIF-1α、VEGF、IGF-Ⅰ蛋白在42例子宫内膜癌、10例子宫内膜不典型增生及20例正常子宫内膜组织中的表达情况,结合临床分期、病理分级进行分析.结果 HIF-1α、VEGF、IGF-Ⅰ蛋白在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生组织及子宫内膜癌组织中阳性表达率比较,差异有显著性(χ2=22.094~25.261,P<0.01).HIF-1α蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达率Ⅰ期为42.11%,Ⅱ期为81.82%,Ⅲ期为83.33%,三者比较有显著性差异(χ2=7.435,P<0.05);HIF-1α蛋白的表达与病人发病年龄、病理分级无关(χ2=0.036、0.634,P>0.05).VEGF蛋白在子宫内膜癌组织中阳性表达率Ⅰ期为36.84%,Ⅱ期为81.81%,Ⅲ期为75.00%,三者比较差异有显著性(χ2=6.578,P<0.05);VEGF蛋白的表达与病人发病年龄、病理分级无关(χ2=1.879、0.097,P>0.05).子宫内膜癌组织中IGF-Ⅰ蛋白阳性表达率与病人发病年龄、临床分期及病理分级无关(χ2=0.190~0.791,P>0.05).子宫内膜癌组织中HIF-1α与VEGF蛋白表达呈显著正相关(r=0.469,P<0.01);IGF-Ⅰ与VEGF蛋白的表达呈显著的正相关(r=0.452,P<0.01);HIF-1α与IGF-I蛋白的表达无相关性(r=0.209,P>0.05).结论子宫内膜癌组织中HIF-1α、VEGF、IGF-I蛋白参与了子宫内膜癌的发生发展.子宫内膜癌组织中的HIF-1α、IGF-Ⅰ蛋白表达与VEGF呈正相关,IGF-Ⅰ蛋白与HIF-1α的表达无相关性,提示HIF-1α与IGF-Ⅰ可能通过上调VEGF蛋白的表达,促进肿瘤的血管生成而促进子宫内膜癌的发生.

    作者:耿蕾;崔竹梅;李玉军;孙显路 刊期: 2006年第03期

  • 氟尿嘧啶和卡铂周围静脉给药与舌动脉灌注栓塞后药代动力学实验研究

    目的研究对比经数字减影血管造影术(DSA)舌动脉介入灌注与经周围静脉给药两种途径抗癌药物在血和组织中浓度的不同变化.方法选4只杂种健康犬,分为两组,一组先静脉给予氟尿嘧啶(Fu)和卡铂(CBP)各75 mg,于给药后10 min、20 min、30 min、1 h、2 h、3 h、5 h、3 d、5 d、8 d静脉取血,于给药后10 min、20 min、30 min、3 d、5 d、8 d行舌及颊组织活检,应用高效液相色谱法(HPLC)测定血、组织中药物浓度;3周后行DSA超选择性舌动脉介入灌注抗癌药物栓塞,同上检测血、组织中药物浓度.另一组先行动脉给药,再行静脉给药,余同前组.结果 DSA超选择性舌动脉介入灌注抗癌药物栓塞后,血药浓度的衰减比静脉给药变慢,而舌组织中药物浓度显著增加,给药后10、20、30 min舌组织中Fu浓度是静脉用药组的25、20、4倍,颊组织中药物浓度是静脉用药组的25、44、25倍,差异有显著性(F=4.81~52.02,t=2.82~9.75,P<0.01、0.05).结论术前DSA动脉介入灌注抗癌药物栓塞,能减缓血药浓度的衰减,增加组织中药物浓度.

    作者:王良忠;李宁毅;马霖;王岩青;樊功为;李子祥 刊期: 2006年第03期

  • 小梁切除术46例临床分析

    小梁切除术是目前国内外常用的抗青光眼手术方式,广泛应用于各种类型的青光眼.板层巩膜下小梁切除术较传统的巩膜全层滤过术,由于在滤过口上覆盖着一层半厚的巩膜组织,因而较少形成囊样薄壁滤过泡,减少了眼内感染的机会,降低了术后房水过多渗漏、前房延迟恢复等并发症.然而,巩膜瓣制作不良、术后巩膜瓣形成瘢痕粘连、阻塞滤过道等是手术失败的主要原因.因而巩膜瓣的制作非常重要.2003年11月~2004年11月,作者利用巩膜隧道刀在小梁切除术中制作巩膜瓣治疗青光眼病人46例,收到良好效果.现报告如下.

    作者:代伟;孙晓梅 刊期: 2006年第03期

  • 老年病人心理护理过程中存在的问题

    随着生活水平的提高,疾病谱的转变,老年病人在病人中所占比例越来越大.在老年病人的诊治过程中,由于疾病对病人死亡威胁时时存在,再加上诊疗的创伤和痛苦,如陌生的环境、缺少亲人的陪伴、生活自理能力差、其他病人死亡以及医护人员严肃的表情和紧张的工作等因素的影响,病人的情绪表现多种多样,有焦虑、心理否认、抑郁、恐惧、依赖、急躁和绝望等.

    作者:周建华;徐峰;李英 刊期: 2006年第03期

  • 可溶性黏附分子与风湿免疫性疾病

    黏附分子(AM)是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间黏附作用的膜表面糖蛋白,它们分布于细胞膜表面或细胞外基质中,以受体-配体相对应的形式发挥作用,导致细胞与细胞间、细胞与基质间或细胞-基质-细胞间的黏附.

    作者:姜波;吴红;陈世锋;戴志杰 刊期: 2006年第03期

  • 腰椎间盘细胞不同培养方法细胞分裂指数检测对比

    目的探讨更具有优越性的腰椎间盘细胞培养方法.方法 16例胎儿及成人腰椎间盘细胞分别进行单层培养和立体培养,检测细胞分裂指数,进行对比分析.结果立体培养细胞指数生长期分裂指数较单层培养细胞明显增高(t=5.49~9.61,P<0.05),细胞稳定生长期两者分裂指数无明显差异(P>0.05).结论立体培养的细胞较单层培养者具有更大的生物学活性.

    作者:刘勇;胡有谷;宁斌 刊期: 2006年第03期

  • 老年病人经尿道前列腺电切术中腰-硬联合麻醉应用

    目的观察小剂量丁哌卡因和芬太尼腰-硬联合麻醉在老年病人经尿道前列腺电切术中麻醉效果和血流动力学参数改变.方法选择40例择期行经尿道前列腺切除术病人,年龄65~86岁,ASA Ⅰ~Ⅲ级,腰-硬联合穿刺,取L3~4蛛网膜下隙注入丁哌卡因3 mg+芬太尼20 μg混合液2 mL,然后向上置入硬膜外导管4 cm,术中酌情硬膜外注入17.3 g/L碳酸利多卡因2~4 mL.观察感觉阻滞、运动阻滞和血流动力学参数变化.当收缩压(SBp)下降到12.0 kPa或原收缩压30%以下时,静注麻黄素5~10 mg,心率(HR)低于55 min-1时,静注阿托品0.3~0.5 mg.结果 40例麻醉效果皆满意,腰麻前后SBp、舒张压(DBp)和HR比较无显著性差异(P>0.05).3例改变了手术方式和1例手术时间延长病人术中硬膜外注入了碳酸利多卡因2~4 mL,其中2例静注了麻黄素,2例静注了阿托品.结论小剂量丁哌卡因和芬太尼腰-硬联合麻醉在老年病人经尿道前列腺电切术中有良好的麻醉效果和稳定的血流动力学状态.

    作者:陆惠元;于礼;崔虹 刊期: 2006年第03期

  • 可膨胀型阴茎假体植入术病人手术前后的护理

    阴茎假体植入术是成熟男性勃起功能障碍(ED)病人恢复自信,维持家庭关系,满足夫妻性生活的一种治疗方法.该术式假体的隐匿性强,而且接近生理功能的勃起,病人易于接受.2001年2月~2003年10月,我院采用国产三件套阴茎假体植入术治疗截瘫ED病人7例,取得满意疗效,现将护理体会介绍如下.

    作者:韩芝 刊期: 2006年第03期

  • 微型种植体支抗在口腔正畸中的应用研究

    口腔正畸中的支抗控制是多数正畸病例治疗成败的一个关键性问题.有学者认为,支抗不足是阻碍正畸水平提高的主要障碍之一.种植体支抗直接以坚硬的骨骼作为支抗力的承受者,将口外支抗变为口内支抗[1],可以提供稳定、高效的支抗力,特别是近年来发展迅速的微型种植体支抗系统,由于其良好的性能,受到了国外正畸学者的密切关注.微型种植体支抗系统与以往正畸种植支抗系统大不同在于它的种植体不依赖与骨结合进行固位,而是依靠种植体与骨组织之间的机械嵌合力.根据其形状,可分为以下两类.

    作者:许淼;王珊 刊期: 2006年第03期

  • 热休克蛋白与视网膜色素上皮细胞的保护

    热休克蛋白(HSPs)广泛存在于人、动物、微生物及植物细胞内,几乎所有的细胞均能合成HSPs.它能快速、短暂调整应激过程中的细胞,保护细胞免受损伤,并有助于细胞恢复正常的结构和功能,在维持组织细胞的自身稳定及抵御外界环境损伤等方面具有重要作用.

    作者:徐静;牛膺筠 刊期: 2006年第03期

  • 腮腺区开放性损伤的治疗

    腮腺区开放性损伤在临床上较常见,早期做出正确的诊断并及时正确处理,可有效避免涎漏、永久性面瘫及FRESH综合征的发生.1997~2003年,我科共收治腮腺区损伤的病人42例,均早期行手术治疗,效果满意.现报告如下.

    作者:邱建忠;蔡洁风;郭纪明;王琪姝 刊期: 2006年第03期

  • 中西医结合治疗溃疡性结肠直肠炎100例临床分析

    溃疡性结肠炎是临床常见病,疑难病,常呈慢性反复发作.2000~2005年,作者采用中西医结合方法治疗该病病人100例,效果较好.现报告如下.

    作者:郭玉波 刊期: 2006年第03期

  • 扇贝多肽对UVB损伤HaCaT细胞ERKs/MAPKs通路的影响

    目的探讨扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐射损伤HaCaT细胞的作用及对细胞外调节激酶-丝裂原活化蛋白激酶(ERKs/MAPKs)通路的影响.方法建立UVB(20 mJ/cm2)对体外培养的HaCaT细胞辐射损伤的病理模型,实验分为对照组、模型组、UVB+5.69 mmol/L PCF组、UVB+2.84 mmol/L PCF组、UVB+1.42 mmol/L PCF组和UVB+5.69 mmol/L维生素C组.琼脂糖凝胶电泳观察各组不加入或分别加入Caspase-3抑制剂(DEVD-FMK)、ERKs通路抑制剂(PD98059)后的细胞凋亡情况;Western blot检测ERKs、MEKs磷酸化与非磷酸化的活性.结果 PCF能剂量依赖性地减少UVB所致的HaCaT细胞DNA片段的出现;预先应用ERKs通路抑制剂可使DNA片段增加;预先应用Caspase-3抑制剂使DNA片段减少;PCF还能提高磷酸化ERKs、MEKs的活性,但不影响总的ERKs、MEKs的含量.结论 PCF能抑制UVB辐射诱导的细胞凋亡,对UVB辐射损伤的细胞具有保护作用.其作用通过调节ERKs/MAPKs的信号通路和Caspase级联反应实现.

    作者:于爽;郭沈波;严州萍;姜国湖;王跃军;王春波 刊期: 2006年第03期

  • 口腔医用冰的药理作用

    目的探讨口腔医用冰(简称口冰)的药理作用,为临床用药提供依据.方法制备二甲苯致小鼠耳部炎症、琼脂致大鼠足肿胀急性炎症模型,大鼠琼脂肉芽肿慢性炎症模型,观察口冰对炎症的作用;采用热板法进行小鼠热刺激性疼痛试验,断尾法测定小鼠出血时间,观察口冰对小鼠疼痛及出血时间的影响.结果口冰局部应用能抑制小鼠耳部肿胀、大鼠足肿胀,抑制大鼠肉芽肿,延长疼痛潜伏期,缩短小鼠出血时间.结论口冰有抗炎镇痛止血作用.

    作者:赵永娟;刘占涛;邵伯芹 刊期: 2006年第03期

  • 胸主动脉瘤手术53例配合体会

    胸主动脉瘤的人群年发生率为5.9/10万,内科保守治疗的早期病死率大于50%,外科手术是唯一有效的治疗方法.2001~2005年,我院心外科成功为53例胸主动脉瘤病人实施了手术,效果较好.现将手术护理体会总结如下.

    作者:张颖;王建华;王昱洁;刘名荃 刊期: 2006年第03期

齐鲁医学杂志

齐鲁医学杂志

主管:山东省教育厅

主办:青岛大学医学院