张仁德；王蒙；王俊宽；左玉超；孙红卫
目的:观察Bcl-2抑制剂TW37和紫杉醇联用对食管癌EC9706细胞增殖、平板克隆形成及细胞凋亡的影响.方法:MTT法考察单用0.20～50.00μmol/L紫杉醇、单用0.20～50.00μmol/L TW37及联用后食管癌EC9706细胞的增殖抑制率;平板克隆形成实验考察0.8μmol/L紫杉醇、0.8μmol/L TW37单用及联用对细胞克隆形成的影响;流式细胞术检测单用及联用对细胞凋亡的影响.结果:MTT结果显示,Bcl-2抑制剂TW37联合紫杉醇作用可以抑制食管癌EC9706细胞增殖.细胞平板克隆形成实验证实,0.8μmol/L紫杉醇和0.8μmol/L TW37都可以抑制克隆形成,2个化合物联用,能进一步抑制细胞集落的形成(P<0.001).细胞凋亡检测结果显示,联用紫杉醇和TW37可以促进细胞凋亡(P<0.001).结论:TW37联用紫杉醇可以抑制食管癌细胞增殖和克隆形成,促进细胞凋亡.
作者：刘卫华；秦甜甜；李蕾蕾；张雪燕；霍峻锋；石晓丽；王淙 刊期： 2018年第04期
目的:分析血管内栓塞及显微外科手术治疗硬脊膜动静脉瘘(SDAVF)的疗效、复发率,探讨其预后的相关因素.方法:回顾性分析44例SDAVF患者的临床资料.34例患者接受血管内栓塞治疗,10例患者接受显微外科手术治疗,比较两种治疗方式的治疗效果及复发率,并对SDAVF患者的预后因素进行分析.结果:显微外科手术治疗组中临床治愈7例,改善1例,无变化2例,无患者复发.血管内栓塞治疗组中临床治愈20例,改善4例,无变化8例,恶化或加重2例;6例患者在术后9个月内复发.两组疗效及复发率差异无统计学意义(P>0.05).确诊时间、术前脊髓水肿程度与SDAVF预后有关.结论:血管内栓塞和显微外科手术均为治疗SDAVF的有效方法,个体化治疗有助于提高临床疗效.确诊时间、术前脊髓水肿程度是SDAVF患者预后的独立因素.
作者：张仁德；王蒙；王俊宽；左玉超；孙红卫 刊期： 2018年第04期
目的:通过表达荧光素酶的慢病毒载体感染TC-1细胞株,建立稳定表达荧光素酶的TC-1细胞株.方法:根据荧光素酶基因设计引物,PCR扩增获得目的基因,构建表达荧光素酶的慢病毒载体并包装重组慢病毒,感染TC-1细胞.嘌呤霉素加压筛选,鉴定.用双荧光素酶报告基因检测试剂盒及体外成像系统进行荧光素酶活性检测.结果:经检测证实细胞感染及筛选后,成功构建了稳定高表达荧光素酶的TC-1细胞.结论:获得荧光素酶稳定表达的TC-1细胞,转染效果确切,荧光素酶基因表达稳定.
作者：韩笑笑；刘丽雅；谭超月；李元；高君碧；韩丽萍 刊期： 2018年第04期
目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)单独及联合维甲酸受体β(RARβ)激动剂CD2314或抑制剂LE135对食管癌KYSE70细胞增殖、迁移的影响以及可能机制.方法:将KYSE70细胞分为ATRA组、ATRA+CD2314组、ATRA+LE135组和对照组,采用CCK-8法检测各组细胞分别处理24、48、72 h的增殖情况,通过划痕实验测定处理24 h后的迁移能力,采用Western blot方法检测处理48 h后各组细胞Notch1、DLL4和VEGF-C蛋白的表达情况.结果:处理24、48和72 h后,ATRA+CD2314组细胞增殖抑制率高于ATRA组,ATRA+LE135组低于ATRA组(P<0.05);处理24 h后,ATRA组细胞的迁移能力低于对照组,ATRA+CD2314组细胞的迁移能力低于ATRA组(P<0.05),而ATRA+LE135组高于ATRA组(P<0.05);处理48 h后,ATRA组细胞Notch1蛋白表达量高于对照组,DLL4和VEGF-C蛋白表达量低于对照组,ATRA+CD2314组细胞Notch1蛋白表达量高于ATRA组,而DLL4和VEGF-C蛋白的表达量低于ATRA组;ATRA+LE135组细胞Notch1蛋白表达量低于ATRA组,DLL4和VEGF-C蛋白表达量高于ATRA组(P<0.05).结论:ATRA可能通过上调Notch1蛋白,下调DLL4、VEGF-C蛋白的表达抑制KYSE70细胞增殖和迁移,增强RARβ的表达可进一步增强这一作用.
作者：桑露倩；李娜；王映；都小晗；路颜娟；路太英 刊期： 2018年第04期
目的:探究α-烯醇化酶(ENO1)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及临床意义.方法:利用TCGA和GEO公共数据库肝癌表达谱数据,分析HCC组织中ENO1 mRNA的表达;依据ENO1 mRNA的表达水平将TCGA数据库中的肝癌样本分为ENO1 mRNA低表达组和高表达组,然后下载目标分析基因集进行富集分析;K-M法绘制生存曲线,比较两组总体生存期(OS)和无进展生存时间(PFS).采用免疫组化染色方法检测93例HCC及87例癌旁正常组织中ENO1蛋白的表达;将肝癌样本分为ENO1蛋白低表达组和高表达组,对两组进行生存分析.结果:HCC组织中ENO1 mRNA和蛋白表达水平均高于癌旁正常组织(P<0.05);TNMⅢ、Ⅳ期HCC组织中ENO1 mRNA和蛋白表达水平高于TNMⅠ、Ⅱ期组织(P<0.05),病理分级3、4级的HCC组织中ENO1 mRNA表达水平高于1、2级组织(P<0.05).ENO1 mRNA低表达组中位OS和PFS均大于高表达组(P<0.05);ENO1蛋白低表达组中位OS大于高表达组(P<0.05).与HCC预后不良相关的基因富集在ENO1 mRNA高表达组,与预后良好相关的基因富集在ENO1 mRNA低表达组.结论:ENO1与HCC的发生发展有关,有望成为HCC诊断及治疗的新靶点.
作者：朱威威；陈晓龙；陈建安；何玉婷；余炎；胡秋月；孙冉冉；任志刚；李娟；崔光莹；张敏敏；余祖江 刊期： 2018年第04期
目的:探讨沉默半乳凝集素-3(Galectin-3)基因表达对甲状腺癌细胞生长的影响.方法:采用RT-PCR及Western blot方法检测46例甲状腺癌及其相应的距癌灶1 cm以上癌旁正常组织中Galectin-3 mRNA和蛋白的表达.将阴性对照(NC)-siRNA、Galectin-3-siRNA转染人甲状腺癌SW579细胞,转染12、24、48 h后CCK-8法检测细胞增殖率;转染48 h后,RT-PCR及Western blot检测Galectin-3 mRNA及蛋白的表达,流式细胞术检测凋亡率,Western blot法检测Ki67、PCNA、Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白.以未转染细胞作空白对照.结果:甲状腺癌组织中Galectin-3 mRNA及蛋白的表达均高于癌旁正常组织(P<0.01).与空白对照和NC-siRNA组比较,Ga-lectin-3-siRNA组细胞Galectin-3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01);细胞增殖率降低,凋亡率升高(P<0.01);Ki67、PI3K、PCNA和p-AKT蛋白表达降低,Cleaved caspase3蛋白表达升高(P<0.01).结论:Galectin-3可能通过PI3K/AKT信号通路调控甲状腺癌细胞的生长.
作者：李德江；王兵；马立人 刊期： 2018年第04期
目的:获得表达量较高且有活性的人源SIRT4蛋白.方法:将SIRT4基因克隆到pPICZA载体上,得到重组pPICZA-SIRT4表达质粒.重组质粒线性化后转入到巴斯德毕赤酵母X33感受态细胞中,筛选出阳性菌株.将阳性重组菌株发酵培养,并对诱导剂甲醇浓度进行优化,表达蛋白用镍柱HisTrapTM HP进行纯化,并对表达的蛋白进行活性考察.结果:SDS-PAGE显示表达的SIRT4目的蛋白大小约33000,与预期蛋白相对分子质量大小相符,进一步利用His标签抗体通过Western blot确认了目标蛋白,并且初步验证了SIRT4的去生物素酰化和去硫辛酰化的活性.结论:成功用巴斯德毕赤酵母表达了有活性的SIRT4蛋白,并且获得酵母表达的佳诱导条件.
作者：朱红；王春；王芳；邹叶芳；陈晓雪；刘亭；李燕；何彬 刊期： 2018年第04期
目的:调查河南新乡地区汉族人群27个Y-STR基因座(包含3个双拷贝基因座)的遗传多态性,为法医学个体识别及法医DNA数据库的建立提供数据.方法:采集263名河南新乡地区汉族无关男性个体血样本,提取基因组DNA,采用AGCU Data Y30六色荧光试剂盒复合扩增,GeneMapper?ID X软件分析结果并分型.结果:DYS392、DYS389Ⅱ、DYS447、DYS522、DYS19、DYS448、DYS481、DYS460、DYS458、DYS635、DYS444、DYS643、DYS557等13个单拷贝Y-STR基因座的基因多样性(GD)大于0.7,DYS527 a/b和DYS385 a/b两个双拷贝Y-STR基因座的GD值大于0.8.在263名无关男性样本中,共检测到261种单体型,其中259种单体型仅出现1次,2种出现2次.27个Y-STR基因座的个体识别力和单体型多样性分别为0.9961和0.9999,单体型辨别能力为0.9924.结论:27个Y-STR基因座组成的单体型在河南汉族群体中具有较高的遗传多态性.
作者：孟娟；王晓丹；黄艳梅；焦会永；郭利伟；张倩；李茜 刊期： 2018年第04期
目的:利用打靶载体技术构建小鼠T279基因敲除胚胎干细胞模型.方法:订购含小鼠T279基因的129 BAC质粒和PL452,PCR扩增Retrieving同源臂及loxp-neo-loxp片段,利用PL253质粒进行目的片段的连接,并在EL350大肠杆菌中进行同源重组,构建T279打靶载体,将其电转染小鼠胚胎干细胞,利用Southern blot方法鉴定同源重组的阳性克隆.结果:经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序鉴定,T279打靶载体构建成功.Southern blot结果显示成功筛选到同源重组的敲除T279基因的胚胎干细胞克隆.结论:T279基因敲除打靶载体构建成功并筛选到了同源重组阳性的胚胎干细胞克隆.
作者：杨超；王朝亮；张天标；殷正伟；王瑞 刊期： 2018年第04期
目的:编制适合中国患者的《艾滋病患者自我社会适应能力量表》(HIV-SAS),并检验其信效度.方法:构建条目池,经专家咨询及预调查,形成预试量表.对预试量表进行项目分析和验证性因子分析,形成正式量表.采用多阶段分层随机抽样的方法,分别从河南省艾滋病高、中、低发病区选取样本,终随机选取艾滋病患者530人,对正式量表的信效度进行检验.结果:正式量表包括社会交往、认知意愿、角色适应三个维度共12个条目,量表总体Cronbach'sα系数为0.818,三个维度的α系数分别为0.803、0.646和0.629,量表的总折半信度为0.757.各条目得分与总分的相关系数在0.450～0.669,三个维度累积方差贡献率为56.1％,所有条目的因子载荷在0.596～0.810.结论:成功编制了HIV-SAS,该量表具有较好的信效度.
作者：刘亚柯；王重建；袁雪；杨淑敏；孙亮；陈震；陈冰 刊期： 2018年第04期
目的:评价三氧化二砷(ATO)联合免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)治疗再生障碍性贫血(AA)的临床疗效,从细胞分化角度分析原因.方法:54例AA患者分为试验组和对照组,每组27例.试验组接受ATO联合CsA治疗,对照组接受CsA治疗,患者同时常规口服司坦唑醇片,比较2组患者的临床疗效.获取治疗前患者骨髓,分离骨髓间充质干细胞(MSC),实验组加入0.001 mmol/L的ATO和2.5 mmol/L CsA,对照组加入2.5 mmol/L CsA,观察2组MSC成脂与成骨分化的情况.结果:试验组22例完全缓解,5例为部分缓解,有效率为100.0％.对照组5例完全缓解,6例为部分缓解,有效率为40.7％.2组治疗效果比较差异有统计学意义(P<0.05).细胞形态学观察发现实验组骨髓MSC促进成骨细胞分化及抑制成脂细胞分化的作用强.结论:ATO联合CsA通过调控AA患者骨髓MSC成脂与成骨分化,可以较好地治疗AA.
作者：曾军杰；刘丽娜；房佰俊 刊期： 2018年第04期
目的:构建小鼠TSC21基因敲除打靶载体,电转胚胎干细胞(ES细胞)并筛选同源重组阳性克隆.方法:订购含TSC21基因的129 BAC克隆,PCR扩增2对同源臂,利用PL253、PL452质粒进行目的片段的连接和同源重组,构建打靶载体并电转ES细胞,利用Southern blot方法鉴定同源重组阳性ES细胞克隆.结果:构建了TSC21基因敲除打靶载体,经过限制性内切酶鉴定及DNA测序鉴定,TSC21基因敲除打靶载体构建成功.Southern blot结果显示成功筛选到打靶序列同源重组阳性ES细胞克隆.结论:TSC21基因敲除打靶载体构建成功并筛选到同源重组阳性ES细胞克隆.
作者：殷正伟；王朝亮；张天标；杨超；张卫星 刊期： 2018年第04期
目的:探讨心理接纳对护理人员职业倦怠与抑郁倾向关系的调节作用.方法:采用多阶段随机抽样方法抽取河南省某市7家市级医院的841名在编护理人员,采用职业倦怠量表(MBI-GS)、《流调用抑郁自评量表》(CES-D)和《接纳与行动量表》(AAQ-Ⅱ)进行问卷调查,对数据进行层级回归分析.结果:护理人员职业倦怠与抑郁倾向呈正相关(r=0.439,P<0.05),与心理接纳呈负相关(r=-0.417,P<0.05),心理接纳与抑郁倾向呈负相关(r=-0.512,P<0.05).职业倦怠对抑郁倾向(β=0.224,P<0.01)有显著影响;在预测抑郁倾向时,心理接纳与职业倦怠之间存在交互作用(β=-0.007,P<0.01).结论:心理接纳能有效降低职业倦怠对护理人员抑郁倾向的损害,调节作用随着倦怠程度的增加而增强.
作者：汤丽霞；王红；张育红；徐旭峰；王红丽；李志春；高丽云；王守英；姚永成；陈四清 刊期： 2018年第04期
目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对氟诱导雄性大鼠海马细胞凋亡及ATF-6蛋白表达的影响.方法:选用4～5周龄雄性健康SD大鼠48只,随机分为对照组、NaF组、NaF+NAC组和NAC组,每组12只,灌胃染毒7周后处死动物,进行海马体质量和海马组织氟含量的测定,采用TUNEL法检测大鼠海马细胞凋亡情况,采用免疫组化法检测大鼠海马组织中ATF-6蛋白的表达情况.结果:NaF可减少海马体质量;NAC可增加海马体质量(P<0.001).NaF可升高海马组织氟含量、海马细胞凋亡指数和ATF-6蛋白相对表达量(P<0.001);NAC可降低海马组织氟含量、海马细胞凋亡指数和ATF-6蛋白相对表达量(P<0.001).NaF和NAC对海马体质量、海马组织氟含量、海马细胞凋亡指数和海马组织中ATF-6蛋白相对表达量的交互作用差异有统计学意义(P<0.001).结论:NAC能够保护海马细胞避免NaF引起的凋亡,也能拮抗NaF诱导的ATF-6蛋白表达上调.
作者：刘晓蕙；刘文一；李博；裴兰英；王瑾瑾；闫国立 刊期： 2018年第04期
目的:研究河南汉族人群锌指蛋白(ZPR1)rs603446位点多态性与血脂异常的关联.方法:从河南农村队列研究中抽取916例血脂异常患者,根据年龄、性别进行1:1匹配,选取916例血脂正常者作为对照组;采用2×48位SNPscanTM高通量SNP分型技术获取人群rs603446位点的基因型;条件logistic回归分析位点多态性与血脂异常的关联强度;多因子降维法(MDR)结合叉生分析评估基因与环境的交互作用.结果:血脂异常组和正常组ZPR1 rs603446位点3种基因型(CC、CT、TT)分布频率差异有统计学意义(P=0.046).调整相关环境因素后,ZPR1基因rs603446位点突变基因型CT+TT携带者可降低血脂异常的发生(调整OR=0.695,95％CI=0.553～0.872);交互作用分析结果显示,rs603446位点与吸烟具有相加交互作用(调整OR=0.516,95％CI=0.370～0.663),与体力活动具有相乘交互作用(调整OR=0.873,95％CI=0.819～0.930).结论:ZPR1基因rs603446多态性与血脂异常存在关联,且吸烟、体力活动对血脂异常的发病具有交互作用.
作者：张洪磊；李玉倩；张霞；刘晓田；屠润琪；刘瑞华；杨凯丽；毛振兴；张功员；王重建 刊期： 2018年第04期
目的:探讨以端粒为靶点的氧化损伤标志物的筛选,进而可能可以用来临床上早期发现或预报氧化损伤.方法:采用端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因敲除(TRF2-/-)斑马鱼胚胎作为氧化损伤模型,RT-qPCR法检测野生型和TRF2-/-斑马鱼胚胎中TRF2、PUM3、PACSIN3 mRNA的表达情况.构建pCS2-PUM3、pCS2-PACSIN3质粒并体外转录后,将mRNA分别显微注射至TRF2-/-斑马鱼受精卵中,比较注射组与未注射组斑马鱼畸形率.结果:RT-qPCR结果表明,与野生型斑马鱼胚胎相比,TRF2-/-斑马鱼胚胎TRF2、PUM3、PACSIN3 mRNA的表达量下降(P<0.05).显微注射PUM3 mRNA至TRF2-/-斑马鱼受精卵后斑马鱼胚胎畸形率下降(P<0.05).结论:TRF2能影响氧化应激相关基因PUM3、PACSIN3的表达,且PUM3能补救TRF2缺失造成的氧化损伤相关器官畸形.
作者：李嘉蔚；胡雪菲；韩鹏；陈呢喃；陆一鸣 刊期： 2018年第04期
目的:探讨食管癌中miR-149与DNA聚合酶β(polβ)的靶向关系.方法:采用实时荧光定量PCR方法,分析64对食管癌及其癌旁正常组织中polβmRNA和miR-149的表达水平.采用TargetScan和miRanda进行生物信息学分析,预测miR-149和polβ的结合位点.采用Western blot法检测未转染的EC9706细胞及miR-149 mimics、miR-149 scramble转染细胞中polβ蛋白的表达.构建野生型polβ3'UTR表达质粒pmirGLO-Wt-polβ3'UTR,检测miR-149 mimic或miR-149 scramble与重组质粒共转染的EC9706细胞中的荧光素酶活性.结果:与癌旁正常组织比较,食管癌组织中polβmRNA表达水平升高,miR-149表达水平降低,两者表达呈负相关(r=-0.671,P<0.05).miR-149 mimics转染组细胞中polβ蛋白表达水平低于miR-149 scramble转染组和未转染组(P<0.05).miR-149 mimic与重组质粒共转染组细胞中的荧光素酶活性低于miR-149 scramble与重组质粒共转染组(P<0.05).结论:食管癌中polβ是miR-149的靶基因,miR-149可通过结合polβ3'UTR下调polβ的表达水平.
作者：张满；李敏；赵国强 刊期： 2018年第04期
目的:探讨河南农村汉族人群中KCNQ1基因rs2299620位点多态性与2型糖尿病易感性的关联.方法:采用1:1匹配的病例对照研究设计,通过问卷调查获得522对研究对象的基本情况;rs2299620位点基因型采用Taqman荧光探针分析获得.采用条件logistic回归分析rs2299620位点多态性与2型糖尿病易感性的关联;采用MDR模型和叉生分析探讨基因-环境的交互作用.结果:调整多种环境因素后,rs2299620位点CC和(TC+CC)基因型与河南农村汉族人群2型糖尿病易感性增加有关联,OR(95％CI)分别为1.74(1.11～2.75)和1.56(1.02～2.40).以等位基因T为参照,等位基因C增加2型糖尿病的易感性,OR(95％CI)为1.16(1.04～1.29).进一步分析显示,在2型糖尿病易感性的影响因素中rs2299620位点多态性与体质指数存在交互作用,OR(95％CI)为1.04(1.02～1.08).结论:KCNQ1基因rs2299620位点多态性与河南农村汉族人群2型糖尿病易感性有关联,且该位点多态性与体质指数对2型糖尿病的发生具有交互作用.
作者：杨凯丽；霍文倩；刘晓田；屠润琪；刘瑞华；张洪磊；张海庆；毛振兴；李玉倩；王重建 刊期： 2018年第04期
目的:观察苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脊髓中P53、MDM2及IL-17表达的影响.方法:将45只C57BL/6雌性小鼠随机分3组,分别为正常组、模型组、治疗组,每组15只.模型组和治疗组用MOG35-55免疫诱导建立慢性EAE模型,治疗组于免疫后第13天起腹腔注射苦参素200 mg/kg,1次/d,连用10 d.采用HE和勒克斯光蓝(LFB)染色观察3组小鼠脊髓组织病理学变化,采用免疫荧光组化染色法检测脊髓组织中P53和MDM2蛋白的表达,采用ELISA法测定脊髓匀浆中IL-17的表达.结果:与模型组相比,苦参素治疗组小鼠EAE发病时间推迟,神经功能评分降低(P<0.05),小鼠脊髓组织中炎症浸润和脱髓鞘评分降低(P<0.05),P53蛋白表达增加(P<0.01),而MDM2与IL-17的表达降低(P<0.01).小鼠脊髓组织中P53与IL-17表达呈负相关(r=-0.665,P<0.05).结论:苦参素可能通过调节P53/MDM2的表达,控制致炎因子的表达,从而对EAE起到一定的治疗作用.
作者：刘淑情；吕莹；刘方洲；张慧君；张明亮；马雯迪；朱琳 刊期： 2018年第04期
目的:探讨miR-499对缺氧/复氧诱导的原代心肌细胞凋亡的影响,探讨其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路的关系.方法:通过对原代培养新生大鼠心肌细胞行缺氧3 h/复氧4 h,模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤;将细胞分为4组:正常对照组、缺氧/复氧组(A/R组)、缺氧/复氧+miR-499激动剂agomir预处理组(Agomir组)、缺氧/复氧+miR-499激动剂agomir+PI3K特异性阻断剂LY294002组(Agomir+LY294002组).采用MTT方法检测各组心肌细胞活力,分别采用荧光定量PCR方法和Western blot法检测各组心肌细胞中miR-499、PI3K mRNA及Caspase-3、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平的变化.结果:与正常对照组相比,A/R组心肌细胞活力下降,miR-499及PI3K mRNA表达量减少,p-PI3K及p-Akt蛋白表达量减少,Caspase-3蛋白表达量增加(P<0.05);但经Agomir处理后,心肌细胞活力增加,miR-499及PI3K mRNA表达量增加;p-PI3K及p-Akt蛋白表达量增加;与A/R组相比,Caspase-3蛋白表达量减少(P<0.05);而agomir的作用可被LY294002即PI3K阻断剂抑制.结论:miR-499可以减少缺氧/复氧所诱导的心肌细胞的凋亡,这可能与其活化PI3K/Akt信号通路有关.
作者：岳莹；吕风华；陈玉磊；王卓；司澳洋 刊期： 2018年第04期
郑州大学学报（医学版）杂志
主管:河南省教育厅
主办：郑州大学
