改良的降落PCR与普通PCR结果比较

张贵星；袁保梅；许培荣；薛乐勋

关键词：改良降落PCR, pfu DNA聚合酶, PCR特异性

摘要：目的:设计并验证一改良的降落PCR(MTD-PCR)程序.方法:自盐藻bardawil中提取基因组DNA作为PCR模板,使用Taq DNA聚合酶及pfu DNA聚合酶,运用普通PCR和MTD-PCR程序,扩增胡萝卜素生物合成相关基因(cbr)上游启动子序列,并电泳比较PCR扩增产物的特异性.结果:使用普通Taq酶进行PCR,普通PCR程序产生200 bp,500 bp和1 272 bp 的3条带, 而MTD-PCR程序仅克隆出1 272 bp的特异带;利用高保真的pfu DNA聚合酶作PCR,在MTD-PCR泳道中也仅有1 272 bp 1条带,而普通PCR除了产生1 272 bp的特异带外,还出现1条500 bp的非特异带.结论:无论使用普通Taq酶或高保真酶pfu,改良的MT-PCR程序均明显提高PCR的特异性,提示它可用于克隆普通PCR难以克隆的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性.

郑州大学学报（医学版）杂志相关文献

疝环填充式腹股沟疝113例修补体会

1996年以来作者采用疝环填充式修补术对113例腹股沟疝进行修补,并与同期进行的136例常规疝修补术进行对比,报道如下.

作者：张谢夫；吕建锋刊期： 2003年第03期
小剂量3-硝基丙酸预处理对脑缺血沙土鼠海马CA1区及纹状体神经元的影响

目的:探讨小剂量3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NPA)预处理诱导沙土鼠脑缺血耐受的可行性.方法:将5组沙土鼠腹腔分别注射双蒸水5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg 3-NPA,于注射3-NPA后3 d,透射电镜观察纹状体神经元细胞核和细胞器超微结构形态的变化;每组均分别于注射后1 d,2 d,3 d,4 d阻断沙土鼠双侧颈总动脉造成前脑缺血模型,恢复血流期满时处死动物,通过Cresyl Violet染色观察海马锥体细胞层存活神经元数目.结果:应用不同剂量3-NPA后3 d,纹状体神经元细胞核均无明显变化,腹腔注射15 mg/kg及20 mg/kg 3-NPA组线粒体和粗面内质网轻度肿胀.应用不同剂量3-NPA 1～3 d后,前脑缺血沙土鼠海马CA1区锥体细胞层存活神经元数目均高于双蒸水对照组(P<0.01或0.05),第4 d则下降,与双蒸水对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:应用小剂量3-NPA诱导脑缺血耐受较安全,具有时间依赖性,无剂量依赖性.

作者：朱红灿；孙圣刚；李红戈刊期： 2003年第03期
可摘式覆盖义齿37幅远期疗效观察

覆盖义齿是指义齿的基托覆盖并支持在已做治疗的牙根或牙冠的一种全口义齿或可摘局部义齿.由于牙根的保留,减少了患者拔牙的痛苦及牙槽骨的吸收,同时增强了义齿的固位、稳定和支持.但长期戴用后可能出现龋病、牙周病等临床疾病[1].现将笔者制作的37幅82颗基牙的可摘式覆盖义齿远期疗效观察报道如下.

作者：张月兰刊期： 2003年第03期
金属烤瓷冠颈缘位置的选择

金属烤瓷冠由于其生物相容性好、美观耐用、理化性能稳定等诸多优点,近年来已广泛应用于临床,其颈缘设计和制作是影响修复效果的重要因素.为了美观、固位和预防继发龋,常将颈缘设置于龈下,这是否损害牙龈组织的健康,一直存在着争论[1].作者从美观、颈缘形态和适合性等方面考虑,设计了两种龈下位置的金属烤瓷冠颈缘,以寻求对牙龈组织健康影响较小的金属烤瓷冠颈缘位置.

作者：邱晓霞刊期： 2003年第03期
新生儿头皮血肿与产程的关系

目的:探讨新生儿头皮血肿与产程的关系及预防措施.方法:对本院同期单胎头位阴道分娩的头皮血肿新生儿42例(血肿组)和同期单胎头位阴道分娩正常新生儿84例(对照组),从第1产程、潜伏期、活跃期、第2产程、出生体重、胎龄、产母年龄、并发其他损伤及催产素使用率等9方面进行比较分析.结果:第1产程和活跃期,血肿组均显著短于对照组(P＜0.001),并发其他损伤血肿组也显著多于对照组(P＜0.005),而潜伏期、第2产程、出生体重、胎龄、产母年龄及催产素使用率方面,2组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:活跃期进展过快,容易造成新生儿头皮血肿,应充分关注活跃期进展速度.

作者：阎晓琴；李慧聪；韦德华；卢爱妮；耿正惠刊期： 2003年第03期
2种窝沟封闭剂临床效果比较

窝沟封闭术已被公认为预防窝沟龋的有效方法.作者用自身双侧对照的方法对玻璃离子水门汀和光固化窝沟封闭剂的临床效果进行了对比评价,报道如下.

作者：宋忠臣；张晓；严涛刊期： 2003年第03期
旋毛虫成囊前期幼虫17 000抗原组分的免疫诊断价值

目的:研究旋毛虫成囊前期幼虫抗原(PELA) 17 000组分的免疫诊断价值.方法:应用聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)和转印技术分离PELA 17 000蛋白组分,用ELISA检测实验感染旋毛虫的Wistar大鼠和旋毛虫病患者血清抗体,并以PELA和成囊期幼虫抗原(ELA)为对照.结果:对于感染旋毛虫的大鼠,17 000组分和PELA的首次血清阳性反应出现在感染后第10 d,而ELA则在感染后第14 d,其差异具有统计学意义(P<0.05);对48份旋毛虫病患者血清,17 000抗原的阳性率为95.8%, PELA和ELA的阳性率均为100%,3种抗原之间差异均无统计学意义(P>0.05).17 000抗原与其他寄生虫病患者及健康人血清无反应,而PELA和ELA均与肺吸虫病、鞭虫病患者血清有反应,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论:与PELA和ELA相比,PELA 17 000组分对旋毛虫病的早期诊断具有更大的价值.

作者：张荣光；崔晶；毛福荣；晋雪香；王中全刊期： 2003年第03期
益气补肾汤对小鼠免疫功能的影响

目的:研究益气补肾汤对小鼠免疫功能的影响.方法:用药理实验的方法,将小鼠制成免疫抑制模型,灌服益气补肾汤,观察和测定小鼠巨噬细胞吞噬功能,胸腺、脾指数,迟发性超敏反应及溶血素抗体水平.结果:灌服益气补肾汤的小鼠与灌服蒸馏水的免疫抑制模型小鼠相比,巨噬细胞吞噬能力增强 (P＜0.05),胸腺指数升高(P＜0.05),迟发性超敏反应增强(P＜0.05),且血清溶血素抗体升高,脾指数2组间差异无统计学意义.结论:益气补肾汤可增强机体免疫功能.

作者：常世卿；王苏静刊期： 2003年第03期
腹腔镜诊治女性不孕症60例分析

本院从1999年8月至2001年4月应用电视腹腔镜对不孕症患者60例进行诊治,报道如下.

作者：付秀虹；王玉真；齐瑞玲刊期： 2003年第03期
改良的降落PCR与普通PCR结果比较

目的:设计并验证一改良的降落PCR(MTD-PCR)程序.方法:自盐藻bardawil中提取基因组DNA作为PCR模板,使用Taq DNA聚合酶及pfu DNA聚合酶,运用普通PCR和MTD-PCR程序,扩增胡萝卜素生物合成相关基因(cbr)上游启动子序列,并电泳比较PCR扩增产物的特异性.结果:使用普通Taq酶进行PCR,普通PCR程序产生200 bp,500 bp和1 272 bp 的3条带, 而MTD-PCR程序仅克隆出1 272 bp的特异带;利用高保真的pfu DNA聚合酶作PCR,在MTD-PCR泳道中也仅有1 272 bp 1条带,而普通PCR除了产生1 272 bp的特异带外,还出现1条500 bp的非特异带.结论:无论使用普通Taq酶或高保真酶pfu,改良的MT-PCR程序均明显提高PCR的特异性,提示它可用于克隆普通PCR难以克隆的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性.

作者：张贵星；袁保梅；许培荣；薛乐勋刊期： 2003年第03期
微泵耳蜗灌注碱性成纤维生长因子对庆大霉素致聋豚鼠的作用

目的:应用微量渗透泵(MOP)向豚鼠耳蜗灌注碱性成纤维生长因子(bFGF),观察其对庆大霉素中毒所致耳聋的保护作用.方法:10只豚鼠分成庆大霉素致耳聋组及正常组,于2组豚鼠右耳耳蜗植入MOP灌注bFGF,分别于灌注前,灌注后1周、2周测ABR阈值,扫描电镜观察耳蜗组织形态.结果:耳聋组在灌注bFGF后1周、2周ABR阈值较灌注前降低(P<0.05),耳蜗毛细胞形态得以恢复;正常组ABR阈值及形态均无明显改变.结论:MOP持续恒速耳蜗灌注bFGF对耳蜗中毒的毛细胞有修复作用,对正常耳蜗功能和形态无影响.

作者：叶放蕾；董明敏刊期： 2003年第03期
连续高位硬膜外加浅颈丛神经阻滞在颈部手术的应用

颈部手术中浅颈丛神经阻滞难以阻断深部牵拉反应[1],易引起血压升高,心率加快[2,3],且麻醉作用时间有限.高位硬膜外阻滞虽不受时间限制,深部牵拉反应较轻,但若用药量过大或管理不善,常会出现呼吸、循环方面抑制,且若阻滞欠完善切皮时部分患者仍有痛感.本研究将2者联合应用,旨在探讨连续高位硬膜外加浅颈丛神经阻滞在颈部手术应用的可行性和安全性.

作者：徐国亭；刘玉惠；王春亭；聂守才；李云杰；王西娟刊期： 2003年第03期
蓝趾综合征32例临床分析

蓝趾综合征(blue tou Syndrome )是指足趾的微小血管闭塞引起足趾出现蓝黑色、锯齿状、指压不褪色的斑点,伴剧痛等症状的综合征,病因多为粥样硬化性栓子[1].1996年1月至2002年5月以足痛就诊本院神经科,经彩色多普勒确诊为蓝趾综合征共32例,现总结报道如下.

作者：庞承仁；牛殿英；付中华刊期： 2003年第03期
中晚期胰腺癌19例外科治疗体会

近年来,胰腺癌发生率逐年增加,由于其发病隐匿,一旦出现临床症状已多属晚期,常规胰-十二指肠切除(Whipple)术已不能实施.本院1995年5月至2002年3月,共行胰腺、门静脉和肠系膜上静脉(superior mesenteric-portal vein,SMPV)联合切除术治疗中晚期胰腺癌19例,现报道如下.

作者：许培钦；马秀现；党晓卫刊期： 2003年第03期
γ-羟基丁酸钠联合氯胺酮麻醉在小儿气管异物取出术中的应用

小儿气管异物取出术是一种急危症手术,其麻醉方法有局麻和静脉全麻,前者易致气管损伤造成喉痉挛、气胸等严重并发症,后者麻醉配伍方法较多,作者在药物的配伍使用及手术操作时机上进行改进,收到了满意的效果,报道如下.

作者：付金厚刊期： 2003年第03期
计算机辅助脑内靶点定位结合电生理刺激射频毁损治疗帕金森病疗效观察

目的:研究计算机辅助立体定向脑内靶点定位与术中电生理刺激射频结合确定丘脑腹外侧核(VL)、苍白球腹后外侧部(VPLP)在治疗帕金森病(PD)中的作用.方法:对58例PD患者共进行76次手术,先进行立体定向CT扫描,将扫描资料在专用的软件中确定靶点后,再于术中应用电生理刺激的方法验证和纠偏,根据调整后的结果进行射频毁损.结果:立体定向CT扫描计算机定位准确率达92.1%,电生理纠偏率为7.9%.显效66例次,有效10例次,无效0例次.结论:立体定向CT扫描计算机定位准确性高,疗效肯定,术中电生理刺激验证和纠偏仍有必要.

作者：何承；韩冬；陈国志刊期： 2003年第03期
颞下颌关节强直48例远期疗效观察

颞下颌关节(TMJ)强直的外科治疗方法较多,应用下颌升支垂直截骨、下颌升支后缘倒置再植术式的TMJ重建术治疗TMJ强直,因下颌升支高度的保持,有利于发挥下颌骨有效的杠杆作用和力偶作用,可较好地恢复关节功能[1～6].作者收集1989年5月至2001年5月对实行TMJ重建手术治疗的48例(62侧关节)TMJ强直患者的资料,对其远期疗效进行分析,报道如下.

作者：刘中寅；冯晓东；汤小雨；李伟；温炎刊期： 2003年第03期
胃腺癌组织中微血管密度观察

目的: 探讨胃腺癌组织中微血管密度的临床意义.方法:收集本院1995年以来Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期胃腺癌手术切除标本189例,利用免疫组化ABC技术检测胃癌组织中微血管密度,并在随访的基础上研究微血管密度与胃癌组织病理学分级(Lauren分类法)、PTNM分期及预后的关系.结果:微血管密度与胃腺癌的组织学分化程度、PTNM分期中的N分期及预后密切相关,但与PTNM分期中的T分期及患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置无明显的关系.结论:微血管密度可作为判断胃癌患者预后的可靠指标之一.

作者：僧靖静；赵高峰；僧国珍；张云汉刊期： 2003年第03期
糖尿病大鼠血管损伤后纤连蛋白的表达

目的:观察糖尿病大鼠血管损伤后纤连蛋白(FN)mRNA 和蛋白的表达.方法:Wistar 大鼠32只,随机分为正常对照组(n=8),手术对照组及糖尿病组(均n=12),糖尿病组单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制成糖尿病模型.后2组大鼠均行胸主动脉至左髂总动脉球囊损伤后,每组选8只用于试验.术后14 d用Northern 印迹杂交测定血管平滑肌细胞FN mRNA 的表达,用免疫组化检测 FN在血管壁的表达.结果:与手术对照组相比,糖尿病组FN mRNA和蛋白表达均明显增高(P<0.01),而此2组又均高于对照组(P<0.01).结论:糖尿病患者PTCA后再狭窄的发生与FN mRNA 及蛋白水平高表达有关.

作者：郑丽丽；华海婴；申红；王筠；叶启霞；张英鸽刊期： 2003年第03期
海通片治疗脑梗死102例疗效观察

海通片(甘糖酯)是在对藻酸双酯钠(PSS)做了系统的构效关系研究的基础上新近研制而成的一种低分子质量、低抗凝的海洋天然药物.本院内科2000年8月至2002年8月,对102例脑梗死患者进行治疗观察,现报道如下.

作者：孙宣龙刊期： 2003年第03期