学术投稿

地龙ISSR-PCR反应体系的建立与优化

吴文如;李薇

关键词:地龙, ISSR, 反应体系, 建立和优化
摘要:目的 建立和优化地龙ISSR-PCR反应体系.方法 以地龙药材为实验试材,采用异丙醇沉淀法提取了地龙总DNA模板,对地龙ISSR-PCR反应体系中各个主要影响因子进行了优化和筛选.结果 建立了标记位点清晰、稳定、重复性好,可用于地龙ISSR分析的佳反应体系,50 μl体系中含有:1×Taq酶配套缓冲液,DNA模板50 ng,2.5U Taq DNA聚合酶,2 mmol/L MgCl2,0.8 μmol/L引物,0.2 mmol/L dNTPs.扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,(据不同引物的退火温度)复性30 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;72℃延伸5 min,反应结束后,4℃保存.结论 这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行地龙类药用动物鉴定及种质资源遗传多样性分析奠定了基础.
时珍国医国药杂志相关文献
  • 黄芩苷对抗结核药物肝损伤保护作用的实验研究

    目的 探讨黄芩苷对抗结核药物肝损伤的保护作用机制.方法 将60只小鼠完全随机分为6组,即正常对照组,肝损伤 (异烟肼+利福霉素钠) 组,联苯双酯组及黄芩苷高、中、低剂量组.给药8 d后,分别用光镜和电镜观察肝脏组织细胞病理学的改变情况,用免疫组织化学染色技术分析肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况.结果 黄芩苷能明显减轻肝细胞变性和坏死,炎症活动程度明显减轻(P<0.05 或P<0.01);TNF-α蛋白在黄芩苷组小鼠肝脏组织内为弱阳性表达(P<0.05 或P<0.01);黄芩苷3个剂量组间小鼠肝脏病理形态学及肝脏组织内TNF-α蛋白的表达均无显著性差异(P>0.05).结论 黄芩苷对抗结核药物肝损伤的保护作用可能与抑制TNF-α蛋白表达有关.

    作者:王新华;金东岭;何红梅;张延霞;时志民;赵如同 刊期: 2009年第07期

  • 125份中药材送检抽检报告书的分析

    中药材的真伪、质量的好坏,将直接关系到临床中医用药的疗效及安全.由于中药材和中药饮片产地来源不同,加工方法各异,再加上中药材的混淆品种极多,一些不法分子为了金钱的利益掺假掺杂,以及其他诸多因素影响,造成药材的质量下降.

    作者:韩进庭 刊期: 2009年第07期

  • 通腑法开通玄府对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑含水量的影响

    目的 研究通腑醒神胶囊(简称TFXSJN,下同)通腑法开通玄府对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤模型脑含水量的影响.方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞模型,2h后拔线实现再灌注损伤,于拔线后1,3 d及7 d不同时间点观察神经功能评分、大鼠脑含水量及脑组织病理的改变.结果 造模后模型组及治疗组大鼠的脑含水量在1 d时均明显升高,与假手术组及正常组相比有显著性差异(P<0.05),3 d时脑含水量高,7 d时基本恢复正常,与假手术组及正常组相比无明显统计学差异(P>0.05).而治疗组在3d时的脑含水量明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01);而TFXSJN治疗后能有效降低模型鼠1,3 d及7 d时的神经功能缺损评分;明显减轻脑组织病理损伤程度.结论 TFXSJN通腑法开通玄府能减轻大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤的脑含水量,减轻脑组织损伤程度,从而减轻神经功能缺损症状.

    作者:胡建芳;余志辉;汪峰;黄培新;尤劲松 刊期: 2009年第07期

  • 中药在诱导肿瘤细胞凋亡方面的机制研究进展

    目前研究表明,肿瘤的发生不仅与细胞增殖速度有关,也与过剩的细胞不能清除到体外直接有关.因此应用药物促使肿瘤启动细胞凋亡程序,就成为抗肿瘤治疗的一个有意义与希望的研究领域.目前中医药抗肿瘤机制的研究热点之一就是中药诱导细胞凋亡.初步了解其相关机制,能为进一步研究打下基础.

    作者:何立丽;孙桂芝 刊期: 2009年第07期

  • 美塔派克斯与甲醛甲酚根管消毒临床疗效比较

    根管治疗是治疗慢性根尖周炎的常规方法,在根管治疗过程中进行根管清理、消毒、充填三个步骤,缺一不可,但消毒是重要的环节,我们用META PEX糊剂作为根管消毒剂和FC消毒液进行对比,观察其疗效.报道如下.

    作者:曾晓勤 刊期: 2009年第07期

  • 蒲公英中总黄酮提取工艺的研究

    目的 对蒲公英中总黄酮的提取工艺进行优选.方法 采用正交实验设计,以总黄酮的含量为指标,对提取溶剂、料液比、提取温度、提取时间4种因素进行研究.结果 蒲公英细粉用甲醇,料液比1∶20,在70℃下超声提取10 min,总黄酮的提取率较高.结论 此工艺操作简便,重现性好,稳定可行.

    作者:李喜凤;郝哲;杜云锋 刊期: 2009年第07期

  • 天然药物化学实验课教学改革的探索

    天然药物化学实验教学的主要目的是通过中药有效成分的提取、分离和鉴定等基本操作技能的训练,使理论与实践密切结合,培养学生分析问题和解决问题的能力,训练严格的科学的工作态度,并为药剂等后期课程和将来从事药剂专业岗位工作奠定基础.

    作者:叶桂存;张元;叶根健 刊期: 2009年第07期

  • 高效液相色谱法测定蝎龙酒中阿魏酸的含量

    目的 建立测定蝎龙酒活性成分阿魏酸含量的高效液相色谱法.方法 采用Vp-ODS柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-水 (用磷酸调pH值为2.5~3) (25∶75) 为流动相,流速为0.8 ml/min,柱温30 ℃,检测波长320 nm.结果 阿魏酸在3.66~36.64 mg·L-1浓度范围内,峰面积与浓度线性关系良好,相关系数r=0.999 8,加样平均回收率为100.47%(RSD=0.84%).结论 该法简便,准确,可用于蝎龙酒中阿魏酸的含量测定.

    作者:梁陈方;杨春旭;吴洪文;李锦燊 刊期: 2009年第07期

  • 如意金黄散膜剂的改进

    目的 以壳聚糖接枝聚甲基丙烯酸甲酯为成膜材料制备了如意金黄散膜剂,使其释药比原膜剂更均匀和持久.方法 兼顾如意金黄散中各主要成分的溶解性,以乙醇为溶剂提取有效成分,以壳聚糖接枝甲基丙烯酸甲酯共聚物为成膜材料制备膜剂,HPLC测定膜剂中的姜黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、小檗碱的含量.结果 以膜剂中大黄酸的释放度为评价指标,膜剂体外缓释效果比以壳聚糖为成膜材料更好.结论 以壳聚糖接枝甲基丙烯酸甲酯共聚物为成膜材料制备如意金黄散膜剂柔性更好,大黄酸体外缓释效果更明显.

    作者:刘占军;韩刚 刊期: 2009年第07期

  • 桔梗总皂苷含量测定方法研究

    目的 建立一种香草醛-硫酸比色法测定桔梗中总皂苷含量的方法,为桔梗的质量控制提供科学依据.方法 索氏提取器提取,大孔吸附树脂纯化,香草醛-硫酸比色法测定桔梗总皂苷含量.结果 比色法测定的线性方程为A=0.003 4C+0.006 4,相关系数为r=0.999 7,平均加样回收率为96.97%,RSD=1.51%(n=6).对不同来源桔梗中总皂苷含量进行测定,其含量范围为1.07%~3.76%.结论 该法测定准确,重复性好,可用于桔梗药材中桔梗总皂苷的含量测定,便于对桔梗药材进行质量评价.

    作者:李妍;张崇禧;魏建和;许旭东;褚庆龙 刊期: 2009年第07期

  • 不同居群栝楼花粉形态的扫描电镜观察

    目的 在扫描电镜下对采集于河南、河北、湖北和贵州四省共14个居群栝楼花粉形态进行观察,为栝楼种质资源多样性研究提供参考.方法 利用扫描电镜,对不同居群栝楼花粉粒大小、形态及表面纹饰和萌发沟形态等方面进行观测,并对结果进行聚类分析.结果 14个居群栝楼花粉均为扁球形或近球形,花粉表面纹饰均呈穴状.不同居群在极轴长、赤道轴长、赤极比、孔穴密集程度以及萌发沟形态上有所差异.结论 花粉形状和表面纹饰是不同居群作为同种植物所具备的共同特征;花粉大小及萌发沟形态的差异则体现出不同居群的差异,可以作为栝楼种质资源多样性的佐证.

    作者:谢果珍;舒少华;王沫 刊期: 2009年第07期

  • 赤芝子实体的化学成分研究

    目的 研究赤芝子实体的化学成分.方法 应用多种色谱方法进行分离和纯化,通过1H,13C-NMR 和MS 等波谱技术确定化合物的结构.结果 从赤芝子实体中分离得到8个化合物,分别被鉴定为:灵芝醇B(ganoderiol B,1)、灵芝酸A (ganoderic acid A,2)、赤芝酸A(lucidenic acid A,3)、灵芝萜酮二醇(ganodermanondiol,4)、 3,7,11,15,23-5O-5α-羊毛甾-8-烯-26烷酸(3,7,11,15,23-pentaoxo-5α-lanosta-8-en-26- oic acid,5)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇十五烷酸酯(ergosta-7,22-dien-3β-ol- pentadecanoate,6)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(ergost a-7,22-dien-3β-ol,7)及正二十六烷酸(n-hexacosanoic acid,8).结论 其中化合物8为从该植物中首次分离得到.

    作者:陈曼;张敉;张涵庆;孙视 刊期: 2009年第07期

  • 反相高效液相色谱法测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量

    目的 建立同时测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的反相高效液相色谱检测方法.方法 采用Restek Pinnacle Ⅱ C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,配制流动相为甲醇∶四氢呋喃∶0.3%H3PO4水溶液=42∶13∶56,在流速为1.0 ml/min,检测波长为350 nm,柱温为室温,进样量为10 μl的情况下建立测定方法.结果 木犀草素线性范围为3.99~99.75 μg/ml(r=0.999 6),平均加样回收率为105.9%,RSD=1.5%;芹菜素线性范围为4.095~102.375 μg/ml(r=0.999 6),平均加样回收率为103.7%,RSD=2.5%.结论 用该方法测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量,具有分析时间较短,分离度高的特点.

    作者:潘见;汪翔;杨毅;金日生 刊期: 2009年第07期

  • 川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C通路的影响

    目的 观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中蛋白激酶C(PKCζ)-细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路的影响.方法 建立AngII诱导的VSMC增殖模型,测定细胞增殖活度,免疫细胞化学法检测PKCζ与ERK1/2表达.结果 与对照组比较,AngⅡ组细胞增殖活度显著增高,PKCζ与ERK1/2表达显著高于对照组(均P<0.01).中、高剂量川芎嗪组的细胞增殖活度明显降低(P<0.05或P<0.01),PKCζ与ERK1/2表达亦明显低于AngⅡ组(P<0.01),与低剂量川芎嗪组相比亦有显著差异,说明川芎嗪的抑制作用具有量-效关系.结论 川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMC增殖有显著抑制作用,其机制与抑制PKCζ-ERK1/2通路有关.

    作者:孙银平;王省;张大伟;郭勇;王煜霞 刊期: 2009年第07期

  • CCKB-R mRNA在幼龄厌食大鼠结肠平滑肌细胞中的表达

    目的 探讨胆囊收缩素受体CCKB-R mRNA在幼龄厌食大鼠结肠平滑肌细胞中的表达及加减益胃汤对其表达的影响.方法 借助特制饲料喂养幼龄厌食大鼠模型,采用RT-PCR技术检测CCKB-R在幼龄厌食大鼠结肠平滑肌细胞中的表达,并观察加减益胃汤对该模型CCKB-R表达的影响.结果 正常大鼠结肠平滑肌细胞中CCKB-R有低水平表达,特制饲料喂养造模后其表达水平异常增高,与空白对照组比较有极显著的统计学意义(P<0.001);加减益胃汤高、中、低剂量组均能显著抑制或下调CCKB-R的高表达,且有一定的量-效趋势.结论 CCKB-R基因高表达可能是厌食发生的主要病理环节之一,抑制或下调CCKB-R基因表达可能是加减益胃汤治疗厌食症的主要作用靶点之一.

    作者:赵琼;廖敏;丁维俊;李秀亮;瞿佳 刊期: 2009年第07期

  • 丹参注射液关节内注射预防关节粘连的实验研究

    目的 为探讨预防性关节内注射丹参注射液对关节粘连的影响.方法 将24只日本雄性大耳白兔随机分为3组,每组8只,分别为盐水对照组(A组)、玻璃酸钠对照组(B组)、丹参治疗组(C组).手术切开右后膝关节,搔刮髌上囊前壁,切除大部分髌上囊后壁滑膜和髌下脂肪垫,术毕用长腿管形石膏固定右后肢膝关节于伸直位.每只动物采用的药物品种及剂量分别是:A组注生理盐水0.3 ml、B组注玻璃酸钠0.3 ml、C组注丹参注射液0.3 ml,共4次.4周后空气栓塞处死动物,行关节活动度测量、关节腔行大体观察、髌上囊滑膜组织的组织学观察和总胶原含量检测.结果 关节活动度B、C组大于A组(P<0.01),B、C组之间差异无显著性(P>0.05);关节粘连计分B、C组均于小A组(P<0.01),B、C组之间差异无显著性(P>0.05);髌上囊前壁滑膜病变组织学计分B、C组均小于A组(P<0.01),B、C组之间差异无显著性(P>0.05);髌上囊前壁滑膜组织总胶原含量B、C组小于A组(P<0.01),C组小于B组(P<0.01).结论 丹参注射液关节内注射能有效预防关节粘连,且与玻璃酸钠的效果类似.

    作者:段戡;袁长深;姚弘毅;刘宇翔;刘政治 刊期: 2009年第07期

  • 兔耳风提取物的抑菌作用研究

    目的 比较不同极性溶剂提取铁灯兔耳风与杏香兔耳风成分对3种常见微生物的抑菌作用.方法 采用水、70%乙醇、95%乙醇及醋酸乙酯等不同极性的溶剂提取;用管碟法测抑菌圈的大小进行抑菌实验,用两倍稀释法进行小抑菌浓度的测定.结果 极性大的溶剂所提取出的成分对细菌(金黄色葡萄球菌)有明显抑菌作用,杏香兔耳风水提取物的小抑菌浓度为6.25%,铁灯兔耳风水提取物的小抑菌浓度为3.13%.极性小的溶剂提取出的成分对霉菌(白色念球菌)有抑菌作用.结论 不同极性的提取物抑菌作用各不相同.

    作者:葛菲;张晓伟;裴各琴;陈武;赖学文;刘庆华 刊期: 2009年第07期

  • 海金沙植物根和根状茎部位降血糖作用的初步实验研究

    目的 研究海金沙根和根状茎提取液对糖尿病小鼠动物模型的降血糖作用.方法 将四氧嘧啶用NS配成0.02 g/ml,按200 mg/kg注射到小鼠腹腔;连续2 d用葡萄糖灌胃(2 g/kg),早晚各1次,以葡萄糖氧化酶法测空腹血糖,大于11.00 mmol/L为造模成功小鼠.将入选小鼠随机分为模型组、水提液组、醇提液组和降糖灵组(0.10 g/kg),另取20只正常小鼠为对照组(蒸馏水),灌胃1次/d,连续15 d,第16天用葡萄糖氧化酶法测空腹血糖.结果 水提液和醇提液组血糖显著降低.结论 海金沙根和根状茎水提液和醇提液对四氧嘧啶所致糖尿病模型小鼠有降血糖作用.

    作者:吴颖;孔德平 刊期: 2009年第07期

  • 水溶苯胺蓝褪色光度法测定壳聚糖的含量

    目的 建立壳聚糖的含量测定新方法.方法 利用分光光度法研究壳聚糖与水溶苯胺蓝的超分子反应条件,并建立分析方法.结果 在pH 2.21时水溶苯胺蓝与壳聚糖发生了超分子褪色反应,所拟方法用于壳聚糖的测定,结果与溴甲酚绿法一致.结论 所拟方法简单,快速,用于壳聚糖的测定结果准确、可靠.

    作者:马卫兴;王敏;朱鹏;周亚文 刊期: 2009年第07期

  • 缬草油体外抑菌活性研究

    目的 探讨缬草油的抑菌活性.方法 以索氏提取法和水蒸气蒸馏法提取的缬草油为试材,用管碟法和微量稀释法比较两种方法提取的缬草油对供试菌的抑菌活性、低抑菌浓度(MIC)和小杀菌浓度(MBC).结果 两种方法提取的缬草油对细菌和真菌有一定程度的抑制作用.结论 缬草油有抑菌作用,具很大应用潜力.实验结果为其在食品、化妆品行业的开发应用提供了依据.

    作者:杨杰;李忠海;黄凌;黎继烈;文蓉;崔培梧 刊期: 2009年第07期

时珍国医国药杂志

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