学术投稿

绿荧光蛋白的荧光强度在D-氨基酸氧化酶活性检测中的应用

翟勇平;王健民;张雨生;周虹;吕书晴

关键词:D-氨基酸氧化酶, 绿荧光蛋白, 基因表达
摘要:目的:探讨在转基因细胞KDfGc和KDfGd,以内部核糖体进入位点(IRES)序列连接的绿荧光蛋白(GFP)的荧光强度为单位,衡量D-氨基酸氧化酶(DAAO)活性的准确性. 方法:白血病细胞系K562e经转染含IRES序列连接的GFP和DAAO基因的逆转录病毒载体pLDfG,获得稳定表达GFP和DAAO基因的单克隆细胞KDfGc和KDfGd,以流式细胞仪和Lowry测定其荧光阳性率以及平均荧光强度、蛋白量,用D-丙氨酸(D-Ala)作用DAAO+细胞,并用酚红氧化法测定培养上清H2O2. 结果:KDfGc和KDfGd细胞的荧光阳性率分别为94.64%和96.31%.2×104细胞的平均荧光强度分别为202 U和174 U.2×104细胞的蛋白量分别为13.17 μg和7.12 μg,KDfGc、KDfGd细胞每微克蛋白量每小时产生的H2O2峰值无差异,而以单位荧光来衡量,两细胞具有明显差别. 结论:在含IRES序列的转基因细胞,以GFP的平均荧光强度为度量单位,比以细胞蛋白量能更准确地反映DAAO的活性.
医学研究生学报杂志相关文献
  • 血清AST测定方法的比较及其与IFCC法结果转换的计算方法

    目的:研究血清标本及校正品或标准品用不同方法测定天冬氨酸转氨酶(AST)结果间的关系以及转换成IFCC法结果的计算方法. 方法:采用八种常用的AST测定方法(试剂盒)测定87份血清标本,以IFCC推荐的方法H(不含磷酸吡哆醛)为基准,其他七种方法测定的血清AST值与之进行相关分析;并研究两种酶校正品(RANDOX、c.f.a.s)和一种酶参考品(ERM)与人血清AST的转换性. 结果:八种方法间血清AST测定值的相关性较好,相关系数(r)接近1.0,截距接近0.ERM在以上各方法间均与人血清AST反应性相近,具转换性;校正品RANDOX、c.f.a.s则与人血清AST反应性有差异,转换性欠佳. 结论:采用统一的合格的酶参考品可以大大减小各方法间测定值的离散度,是酶测定标准化的新途径.

    作者:史利宁;孟泽 刊期: 2002年第02期

  • 皮脂腺囊肿的微创摘除术

    传统的皮脂腺囊肿切除术,切口大、张力明显、恢复慢、术后瘢痕明显,尤其是囊肿越大越明显,故发生于面部的患者通常不愿接受手术.我科为了改变这一尴尬局面,1998年以来,探索用小切口微创的皮脂腺囊肿切除术,共118例.面部86例,胸部10例,耳后8例,臀部5例,四肢9例.具有术后恢复快、瘢痕较小等优点,尤以面部疗效好,基本无瘢痕,深受患者欢迎.

    作者:周济宏;姜会庆;洪志坚;胡心宝 刊期: 2002年第02期

  • 微量白蛋白尿与胰岛素抵抗的关系

    微量白蛋白尿是糖尿病肾病的早期诊断指标,近年作为心血管疾病的独立危险因素日益受到关注.有研究表明,微量白蛋白尿的发生与胰岛素抵抗有关.至于微量白蛋白尿与胰岛素抵抗有直接的病理生理联系,还是仅与该综合征的某些代谢紊乱有关,目前尚不清楚.作者对有关的研究进展作一综述.

    作者:索丽霞;余叶蓉 刊期: 2002年第02期

  • 血管紧张素Ⅱ受体与高血压关系的研究进展

    从AⅡ1受体和AⅡ2受体的功能、基因等方面阐述两种受体在高血压中的重要作用,并简要介绍AⅡ1受体拮抗剂治疗高血压病的优越性.

    作者:王伟新;凌树森 刊期: 2002年第02期

  • 帕金森病大鼠模型的炎性机制

    目的:研究帕金森病(PD)大鼠模型的炎性机制. 方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测PD大鼠模型黑质纹状体区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)的水平.采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化法估测黑质区神经损伤的程度. 结果:PD大鼠模型黑质纹状体区TNF-α和IL-1的水平较对照组明显增高(P<0.05),环孢素(CsA)可减轻6-羟基多巴胺(6-OHDA)对黑质多巴胺神经元的损伤,但对黑质纹状体区TNF-α和IL-1水平无明显影响. 结论:免疫炎性机制可能参与PD的发病过程,CsA可能通过与炎性因子无关的途径对黑质多巴胺神经元起保护作用.

    作者:周国庆;陈光辉 刊期: 2002年第02期

  • 三联疗法对幽门螺旋菌相关性十二指肠溃疡的疗效观察

    目的:观察雷尼替丁加克拉霉素、阿莫西林治疗幽门螺旋菌(helicobacter pylori, HP)感染相关的十二指肠溃疡(DU)及降低复发率的效果. 方法:对胃镜检查为活动性DU、胃窦粘膜活检尿素酶试验及组织切片阳性的HP感染患者96例,随机分为两组,治疗组用雷尼替丁150 mg,每天2次,早、晚餐前半小时服,克拉霉素500 mg、阿莫西林1000 mg,每天2次,连服2周.对照组用雷尼替丁150 mg,每天2次,早、晚餐前半小时服,枸橼酸铋钾颗粒剂每次220 mg,每天2次,连服2周.治疗结束后4周复查胃镜,随访1年,对出现上腹痛等症状者随时复查. 结果:溃疡愈合率:治疗组为95.83%(46/48),对照组为85.42%(41/48),P>0.05.HP根除率:治疗组为81.25%(39/48),明显高于对照组10.41%(5/48),P<0.01.溃疡愈合患者1年后复发率:HP根除组为9%(4/44),明显低于HP未根除组69.23%(36/52),P<0.01. 结论:雷尼替丁加克拉霉素、阿莫西林对治疗HP感染相关的DU及降低复发率,疗效显著,价格合理,是可供临床选择的治疗方案之一.

    作者:朱扣林 刊期: 2002年第02期

  • 转录因子NF-κB对急性早幼粒白血病细胞程序性死亡的调节

    目的:探讨转录因子NF-κB对砷制剂诱导下NB4细胞程序性死亡的调控作用. 方法:将NB4细胞与不同浓度的三氧化二砷共同孵育,在不同时间用流式细胞仪检测胞质内转录因子NF-κB的表达,同时作细胞周期分析、PI和HO双染以及DNA梯度,以鉴定As2O3的致程序性死亡的作用. 结果:NB4细胞在1 μmol/L、2 μmol/L As2O3的诱导下,在16~24 h的期间内均有明显的程序性死亡现象.NF-κB在6~16 h期间的对照组和加药组(1 μmol/L 的As2O3)均有表达,对照组中12 h后表达明显下降(P<0.05),加药组较对照组也明显减低(P<0.05),但不存在时间依从性. 结论:As2O3可诱导早幼粒细胞程序性死亡,在这一过程中,NF-κB可能起负调控作用.

    作者:范芸;顾惜春;刘俊达;李蓉生 刊期: 2002年第02期

  • 葡萄柚汁与药物相互作用的特征和个体差异

    葡萄柚汁是一种柑桔类果汁,它能与近40种药物在不同程度上发生相互作用.大多数受影响的药物口服生物利用度低、代谢过程受细胞色素P450 3A4(CYP3A4)的控制.有研究表明,葡萄柚汁能够抑制小肠CYP3A4介导的药物氧化代谢过程,导致血药浓度上升,从而使得药效增强或不良反应增加;葡萄柚汁与药物相互作用的个体差异与个体小肠CYP3A4的表达水平有关;呋喃香豆素类化合物是葡萄柚汁中关键的CYP3A4抑制剂.

    作者:郭联庆;李金恒 刊期: 2002年第02期

  • 兔眼球爆炸伤后玻璃体谷氨酸含量的改变及意义

    目的:通过测定兔眼球爆炸伤后玻璃体内谷氨酸含量,以探讨其意义. 方法:制作兔眼球爆炸伤模型,测定玻璃体内谷氨酸浓度,并与对侧对照眼进行平行对比分析. 结果:所有实验眼玻璃体内谷氨酸浓度均显著高于对照眼,眼球爆炸伤后1天玻璃体内谷氨酸含量即增高,伤后25~30天达高值,其后逐渐下降. 结论:眼球爆炸伤后玻璃体内谷氨酸浓度增高可能是伤后视觉功能损伤的一个重要原因.

    作者:陈穗桦;王理理;黄振平;冯媛;潘丽娟;倪利群 刊期: 2002年第02期

  • 0.5 TMR机MRCP诊断胆道结石

    磁共振胆囊-胰腺造影术(MRCP)与内窥镜逆行胆囊-胰腺造影术(ERCP)相比,在诊断胆道结石有许多方面的优越性,本文通过对25例正常人和66例胆道结石患者的临床资料和MRCP的图像分析来评估应用0.5T磁共振机行MRCP诊断胆道结石的作用.

    作者:吴建伟;赵武;李苏建;陈君坤 刊期: 2002年第02期

  • AⅡ1R基因1166位点多态性与AⅡ受体拮抗剂缬沙坦降压疗效关系的研究

    目的:探讨血管紧张素Ⅱ-1型受体(AⅡ1R)基因A 1166/C多态性与国人应用AⅡ受体拮抗剂缬沙坦降压疗效的关系,以利于结合基因分型指导临床合理用药的可行性. 方法:64例轻、中度原发性高血压患者住院期间停止服用任何降压药物5个半衰期后,测量患者基础血压,并抽取血样,应用限制性内切酶酶解聚合酶链式反应(PCR-RFLP)的方法检测AⅡ1R基因型.然后给予缬沙坦80 mg,1次/d,连续服用10天,分别于第7、10天上午9:00测量患者卧位、左上臂血压. 结果:CC基因型因其突变率极低,本次试验未发现,故未予以分组.①本组原发性高血压患者AC基因型频率为23.4%,C等位基因频率为11.7%. ②入选64例原发性高血压患者,服药后,显效52例,有效10例;无效2例,已剔除,未参与统计.AC基因型组有效率为93.33%,AA基因型组有效率为97.96%,总有效率为96.88%,AC基因型组与AA基因型组之间有效率无明显差异(P>0.05).③患者服用缬沙坦后第7天、第10天AC基因型组收缩压下降值均较AA基因型组有极显著差异(P<0.01).④患者服用缬沙坦后第7天,AC基因型组舒张压下降值较AA基因型组差异显著(0.010.05).⑤患者服用缬沙坦后第7天,AC基因型组脉压下降值较AA基因型组差异显著(0.01

    作者:林欣;江时森;曹文;徐燕丰;汪春晖 刊期: 2002年第02期

  • 六亚甲基双乙酰胺与紫杉醇合用对人骨肉瘤OS-9901细胞的抑制作用

    目的:研究六亚甲基双乙酰胺(HMBA)与紫杉醇合用对人骨肉瘤OS-9901细胞的抑制作用. 方法:用MTT法检测HMBA、紫杉醇单用或二者合用对体外培养的人骨肉瘤OS-9901细胞增殖变化的影响. 结果:在单用紫杉醇处理组中,不同药物浓度均未使增殖细胞抑制达到生长半数.在先用1.0 μg/ml紫杉醇处理6 h后再加用1 mmol/L HMBA组中,抑制率由18%增至59%.0.1 μg/ml紫杉醇先处理24 h组中,抑制率由23%增至67%.HMBA明显增强了紫杉醇的抗癌作用. 结论:HMBA与紫杉醇联合应用对骨肉瘤保肢术后的治疗可能有一定的价值.

    作者:俞玮;张殿忠;范清宇;周勇 刊期: 2002年第02期

  • 小儿重度烧伤早期胃肠道营养302例临床分析

    目的:回顾性分析302例小儿严重烧伤后,早期胃肠道营养对防止胃肠道大出血的临床经验. 方法:分析1980年至2001年10月收治的573例小儿烧伤中,302例为严重烧伤,在积极抗休克治疗的同时不禁食,并指导亲属施行早期胃肠道营养,同时观察胃肠道并发症的情况. 结果:302例严重烧伤患儿中,25例早期有明显休克,均平稳度过休克期.除2例并发急性胃扩张、腹泻及排柏油样便外,无一例并发胃肠道大出血.本组302例中死亡8例(2.6%),烧伤总面积均>50%,除1例死于化学性烧伤中毒外,其余7例均死于后期严重感染或MOF. 结论:在早期积极有效的抗休克治疗基础上,及早进行口服胃肠道营养治疗,并充分发挥患儿亲属的作用,对预防胃肠道大出血有积极作用,而且有利于患儿的心理康复.

    作者:胡心宝;姜会庆;陈一飞;解伟光;汪军;周济宏;陈馨 刊期: 2002年第02期

  • 边缘区B细胞淋巴瘤的临床和分子细胞遗传学研究进展

    边缘区B细胞淋巴瘤(MZBCL)是B细胞非霍奇金淋巴瘤中一种独特的亚型.近年来,在细胞和分子遗传学水平对MZBCL的发生发展机制的研究已有重要进展.MZBCL时,重排的VH基因亦是参与自身抗体产生的基因,提示该病源于自身反应性B细胞.多种染色体数量和结构异常及API2、BCL10和FAS等程序性死亡(又称凋亡)相关基因受累,表明程序性死亡受抑是MZBCL的主要发病原因.

    作者:杨继红;于亚平 刊期: 2002年第02期

  • 高纯度子宫内膜细胞分离和体外培养技术及其应用

    目的:分离、纯化子宫内膜间质细胞(ESC)和腺上皮细胞,建立体外ESC蜕膜化模型. 方法:选择正常育龄妇女的新鲜子宫内膜组织,经多酶消化制成细胞悬液,分离、纯化间质细胞和腺上皮细胞;分别培养至细胞聚合成片,随机分组,用等渗浓度的甾体激素诱导ESC体外蜕膜化改变. 结果:分离的间质细胞其纯度达95%以上,其细胞活力达92%~95%.在此体外培养系统中,ESC对生理剂量激素的应答出现与活体相仿的蜕膜化改变. 结论:利用此技术可在细胞和分子水平上研究子宫内膜的各种功能及其调节.

    作者:宿爱琴;糜若然;涂持坤;张双革;张玉华 刊期: 2002年第02期

  • 雄激素与男性骨质疏松

    雄激素是男性生长发育的重要激素,除参与生殖作用外,还影响机体的其他过程如骨代谢.经研究证明,骨细胞表面有雄激素受体,表明雄激素对骨细胞的作用是直接的.青春期前因性腺功能低下,故患者无法达到峰值骨量;以后随增龄引起的睾酮水平降低,可使骨量丢失,并引起骨质疏松.临床上行雄激素补充治疗,就可改变这些过程的发生.

    作者:甘卫东;戴玉田 刊期: 2002年第02期

  • 预防假体周围溶骨的研究进展

    在人工关节置换中,磨损微粒引起假体周围溶骨已成为当前预防假体无菌性松动的研究重点.本文对近年来为减少磨损微粒的产生、阻止微粒进入假体-骨界面和向远端移动、应用二膦酸盐等的研究作一综述.

    作者:林秾;赵建宁;王与荣;吴苏稼 刊期: 2002年第02期

  • 环氧化酶-2与氧化应激在急性肝损伤中的作用

    目的:研究环氧化酶-2(COX-2)在急性肝损伤中的表达,探讨COX-2与氧化应激在急性肝损伤中的作用. 方法:将30只Wistar大鼠随机分为三组,正常组10只;对照组10只,腹腔注射CCl4原液1 ml/kg;实验组10只,腹腔注射CCl4原液1 ml/kg、2 h后给予80 mg/kg塞来昔布(Celecoxib)灌胃. 结果:血清学检测结果显示,对照组和实验组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和细菌内毒素(LPS)均较正常组大鼠显著增高(P<0.05),对照组与实验组大鼠血清ALT、AST和LPS水平差异显著(P<0.05).对照组和实验组大鼠肝匀浆一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)均较正常组大鼠明显增高(P<0.05),对照组与实验组大鼠血清NO和MDA水平差异显著(P<0.05).H-E染色光镜下示对照组和实验组大鼠大量肝细胞肿胀、空泡变性和脂肪变性,部分肝细胞坏死.免疫组化结果显示COX-2在正常肝组织无表达,实验组大鼠较对照组大鼠COX-2表达明显增高(P<0.05). 结论:急性肝损伤后,内毒素刺激COX-2表达,氧化应激反应加剧,COX-2表达和NO水平增高可能是机体对抗损伤的一种保护性机制.

    作者:田耕;于皆平;罗和生;余保平;李建英 刊期: 2002年第02期

  • 中空式赝复体的一种改良方法

    0 引言目前,上颌骨缺损后的修复多以中空式赝复体为主[1],赝复体的制作方法虽很多,但往往存在如下缺点:工艺复杂,不易掌握;赝复体较重,不利于固位和稳定;阻塞器部分厚薄不匀,气泡较多,容易发生微渗漏,不利于口腔清洁[2].为克服和避免以上缺点,使其轻便美观,有利于固位和稳定,经反复研究,我们对赝复体的制作工艺加以改进,取得较为满意的效果,现介绍如下.

    作者:徐辉;翁志强;薛海鹰;王胜林 刊期: 2002年第02期

  • 屈光间质混浊与视神经病变闪光VEP的对照研究

    目的:描述闪光视觉诱发电位(F-VEP)在屈光间质混浊及视神经病变的峰时与振幅变化,并对屈光间质混浊术后视力进行预测. 方法:对33例屈光间质混浊及39 例视神经病变患者进行F-VEP测定,用两种波长闪光源(红光及白光)进行刺激. 结果:与屈光间质混浊组相比,视神经病变组N75、P100、N135峰时明显延迟,而N75、P100、N135的振幅两组间无明显差异.对屈光间质混浊组患者进行随访,术后视力均在0.3以上,而既有屈光间质混浊又合并视神经病变的患者,术后视力低于0.1. 结论:视神经病变组的P100峰时明显延迟,应用F-VEP有助于对屈光间质混浊病例术前视功能的判断.

    作者:曹春林;田农 刊期: 2002年第02期

医学研究生学报杂志

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主管:南京军区联勤部卫生部

主办:南京军区南京总医院