汪子俊；顾朝辉；贾占奎；刘继红；杨锦建
目的 探讨甲状腺乳头状癌(PTC)中V-raf鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体B1(BRAF) V600E基因突变和患者的尿碘浓度(UIC)及其与临床病理特征的关系.方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术和DNA直接测序法检测110例PTC、47例结节性甲状腺肿、26例甲状腺腺瘤患者标本中BRAF V600E基因突变,同时检测患者的尿碘浓度;分析PTC患者中BRAF V600E基因突变和尿碘浓度与患者性别、年龄、肿瘤数目、腺体外浸润、淋巴结转移及TNM分期等临床病理特征的关系.结果 在183例甲状腺结节组织中,PTC中检测到BRAF V600E突变,突变阳性率为49%(54/110),而结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤标本未检测到(χ2=50.838,P=0.000).BRAF V600E突变与PTC的腺体外浸润呈正相关(χ2=6.031,P=0.014),与性别(P=0.363)、年龄(P=0.360)、肿瘤数目(P=0.593)、肿瘤直径(P=0.497)、淋巴结转移(P=0.554)及pTNM分期(P=0.785)无明显相关.PTC患者碘过量率为79%,高于结节性甲状腺肿的66%和甲状腺腺瘤的58%,差异有统计学意义(χ2=6.288,P=0.043).PTC患者的尿碘浓度与性别(P=0.187)、年龄(P=0.138)、肿瘤数目(P=0.571)、肿瘤直径(P=0.454)、腺体外浸润(P=0.345)、淋巴结转移(P=0.248)及pTNM分期(P=0.792)无明显相关.PTC中BRAF V600E突变与尿碘浓度无明显相关(χ2=0.019,P=0.891).结论 BRAF V600E突变与PTC的侵袭性明显相关,PTC患者尿碘浓度的碘过量率高于甲状腺良性结节.
作者：李斌；冯联忠；王胤达；郑雪勇；章波；芮昆昆 刊期： 2017年第08期
目的 通过同时靶向人类表皮生长因子受体-2(Her-2)和表皮生长因子受体(EGFR)分子的双特异性抗体抑制人胰腺癌细胞PANC-1体内外增殖.方法 通过基因合成获得曲妥珠单抗和西妥昔单抗的基因序列,经重叠聚合酶链反应(PCR)融合成目的基因,构建入表达载体,转化进毕赤酵母X-33进行表达,获得同时靶向Her-2和EGFR的双特异性抗体CT-BiAb;流式检测CT-BiAb 对胰腺癌细胞系PANC-1的结合能力;MTT法检测CT-BiAb对PANC-1细胞的增殖抑制;通过流式双染法检测给药后PANC-1细胞的凋亡率;建立PANC-1荷瘤小鼠动物模型,检测CT-BiAb的体内抗肿瘤活性.结果 通过毕赤酵母表达及纯化,获得CT-BiAb,经Western blot鉴定验证了CT-BiAb 表达及装配正确.流式细胞术检测CT-BiAb与PANC-1的结合率为50.9%.细胞增殖抑制实验,与PBS组相比,亲本抗体组与CT-BiAb组对PANC-1均有抑制作用,且抑制作用呈浓度依赖性.凋亡实验,CT-BiAb组PANC-1细胞凋亡率[(33.50±7.14)%]高于亲本曲妥珠单抗[(15.86±4.32)%,P=0.022],也高于西妥昔单抗组[(18.64±5.71)%,P=0.048].移植瘤模型实验,CT-BiAb 高剂量组肿瘤抑制率可以达到(73.76±10.21)%,明显优于亲本曲妥珠单抗[(32.55±14.42)%,P=0.001],也明显优于西妥昔单抗组[(52.63±8.47)%,P=0.006].结论 本文构建了CT-BiAb,其具有良好的体内外抗肿瘤活性,有效地抑制PANC-1的体内外增殖,为抗肿瘤治疗提供了新的思路.
作者：黄长山；余伟；王谦；丁月超；马超；黄涛；张浩 刊期： 2017年第08期
胶质母细胞瘤(GBM)是中枢神经系统常见的恶性肿瘤,尽管经过积极外科手术结合术后同步放化疗,其中位生存时间仅为14.6个月.肿瘤细胞向周围脑组织浸润生长、放化疗抵抗,从而导致肿瘤不可避免复发.随着干细胞及生物工程学技术的不断进展,利用干细胞对GBM天然的定向趋化特性,并使其携带相关治疗药物,从而达到治疗目的,是目前胶质瘤治疗研究的重要思路.该策略目前尚存在一些有待验证和深入研究的细节,需要系统性分析其优势与不足,为其临床转化和应用提供依据.
作者：雷霆；万锋；朱明欣 刊期： 2017年第08期
目的 探讨miR-370-3p、β-连环蛋白(β-catenin)在人脑胶质瘤组织中的表达及其与胶质瘤细胞株U251恶性增殖的相关性.方法 (1)收集武汉大学人民医院神经外科自2014年9月至2015年3月手术切除的20例胶质瘤组织和同期行减压术切除的10例正常脑组织标本,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-370-3p表达,Western blot检测β-catenin蛋白表达,并对胶质瘤组织中两者表达进行相关性分析.(2)将体外培养的U251细胞分别转染miRNA无义序列和miR-370-3p模拟物,48h后RT-qPCR检测细胞中miR-370-3p、β-catenin mRNA表达,Western blot检测β-catenin蛋白表达.(3)双荧光素酶实验检测miR-370-3p对β-catenin编码基因CTNNB1基因的靶向调控作用.(4)细胞计数试剂盒(CCK-8)法和平板克隆形成实验综合评估转染后细胞的增殖能力.(5)共转染miR-370-3p模拟物与β-catenin pcDNA3质粒进行逆转实验进一步分析两者之间的功能联系.结果 (1)miR-370-3p在人脑胶质瘤中表达低于正常脑组织,且miR-370-3p在低级别胶质瘤(Ⅰ级和Ⅱ级)、高级别胶质瘤(Ⅲ级和Ⅳ级)胶质瘤中的表达量逐渐降低(对照组比低级别组比高级别组:3.67±1.65比4.94±1.08比2.37±1.11),与β-catenin蛋白表达呈负相关(R2=0.8868),差异有统计学意义.(2)与无义序列转染组比较,miR-370-3p模拟物转染组U251细胞中miR-370-3p表达显著增加(模拟物转染组比阴性对照组:174.33±23.08比1.03±0.30),β-catenin mRNA表达无明显改变,但β-catenin蛋白表达明显降低.双荧光素酶实验结果显示,转染miR-370-3p后野生型报告质粒的荧光素酶活性较对照组降低约40%,且差异有统计学意义(P=0.021).(3)上调miR-370-3p表达后,U251细胞增殖能力较对照组明显降低,克隆形成能力减弱(模拟物转染组比阴性对照组:30.00±7.00比63.33±4.04;P=0.004).(4)逆转实验结果发现,上调β-catenin的表达可以部分逆转miR-370-3p对U251细胞的生长抑制现象(miR-ctrl+CTNNB1组比miR-370-3p+vector组比miR-370-3p+CTNNB1组:78.33±6.03比31.33±4.51比63.00±5.57).结论 miR-370-3p可以通过转录后调控β-catenin,抑制胶质瘤细胞U251恶性生长.
作者：彭泽生；张申起；朱晓楠；陈谦学；田道锋 刊期： 2017年第08期
目的 建立一种稳定可复制的反复轻度颅脑损伤(TBI)的动物模型.方法 选用雄性SD大鼠64只,按照随机数字表法分为单一损伤对照组、单一损伤组、反复损伤对照组、反复损伤组,每组再分为4个亚组:3、7、14、30d组,每亚组4只.单一损伤组开颅后仅打击1次,反复损伤组间隔24h打击4次,对照组仅行去骨瓣处理.建立损伤模型后检测1、3、7、14、21、30d神经功能缺损评分(mNSS)及Morris水迷宫检测30d空间学习记忆能力.苏木素-伊红(HE)染色观察损伤后损伤灶,免疫荧光检测损伤后神经元缺失.结果 (1)mNSS评分结果显示损伤后不同时间点,反复损伤组与单一损伤组比较,导致更加严重的神经行为学缺失,差异有统计学意义(1、3d:P=0.013,7d:P=0.003,14d:P=0.008,21、30d:P=0.000).Morris水迷宫潜伏期训练结果显示训练开始后第2天起,反复损伤组与单一损伤组比较,到达目标平台所需要的时间更长,差异有统计学意义(P=0.000).目标象限百分比结果显示,在相同检测时间内,单一损伤组[(33.33±6.80)%]较反复损伤组[(16.34±3.76)%]进入目标象限时间比更高,差异有统计学意义(P=0.029).(2)神经元免疫荧光检测结果显示损伤后14d及30d,反复损伤组损伤区周围与海马齿状回区域神经元随时间推移缺失严重,较单一损伤组差异有统计学意义(损伤区周围:14d:P=0.007,30d:P=0.003;海马齿状回:14d:P=0.009,30d:P=0.007).结论 反复TBI导致的神经行为学缺失现象更加严重,导致的神经元缺失现象也更加严重,可以为反复TBI后的神经退行性变的病理机制变化提供稳定可复制的动物模型.
作者：高华斌；韩召利；黄山；白若靖；葛歆瞳；陈芳莲；雷平 刊期： 2017年第08期
目的 探讨尿沉渣人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因甲基化与非肌层浸润性膀胱癌临床病理特征与预后的关系.方法 本研究为前瞻性对照研究,按顺序纳入2014年7月至2014年12月在我院住院手术的45例初发膀胱癌患者,45例患者均行经尿道膀胱肿瘤电切术,术后病理检查证实为非肌层浸润性尿路上皮癌.对照组为同期45例输尿管结石或肾结石患者.采集手术当日晨尿进行尿沉渣RUNX3基因甲基化检测.患者术后每3个月接受膀胱镜复查,发现膀胱癌复发为研究终点.结果 与对照组比较,膀胱癌组尿沉渣RUNX3甲基化差异有统计学意义,尿沉渣RUNX3甲基化与膀胱癌病理分级明显相关(P=0.002).随访18~24个月,12例膀胱癌复发,其中3例进展为浸润性膀胱癌,生存曲线分析结果表明,尿沉渣RUNX3甲基化与膀胱癌复发相关.结论 尿沉渣RUNX3甲基化与膀胱癌病理分级明显相关,且与膀胱癌复发有关.
作者：温机灵；仇广明；龚东魁；王学雷；李容炳；叶静；朱蔚；温晓飞 刊期： 2017年第08期
目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在创伤性颅脑损伤中发挥的作用及其机制.方法 观察TLR4基因敲除型[TLR4(-/-)]/野生型[TLR4(+/+)]小鼠在自由落体脑外伤模型后24h学习能力、水肿、炎性反应等的变化.通过Morris水迷宫实验比较各组小鼠伤后学习能力;磁共振成像比较各组小鼠水肿面积;实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)比较各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-10、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达;Western blot法比较各组髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)的变化.结果 在行自由落体脑外伤模型24h后,TLR4(-/-)小鼠寻找平台潜伏期[(39.26±18.1)s]明显短于TLR4(+/+)小鼠[(50.19±16.5)s;t=2.361,P=0.021];TLR4(-/-)小鼠穿越平台的次数(2.04±1.18)明显多于TLR4(+/+)小鼠(0.60±0.47;t=3.000,P=0.011);TLR4(-/-)小鼠的水肿面积[(10.31±2.01)%]明显小于TLR4(+/+)小鼠[(23.20±5.70)%;t=5.643,P=0.000];在mRNA水平,TLR4(-/-) 小鼠IL-10[TLR4(-/-):3.00±0.74;TLR4(+/+):1.20±0.27;t=6.046,P=0.000]、BDNF[TLR4(-/-):55.67±7.94;TLR4(+/+):42.52±3.25;t=4.055,P=0.002]的表达较TLR4(+/+)小鼠增加,而TNF-α[TLR4(-/-):6.49±0.36;TLR4(+/+):8.89±0.57;t=9.419,P=0.000]、IL-1β[TLR4(-/-):7.49±0.79;TLR4(+/+):12.76±1.06;t=10.547,P=0.000]较TLR4(+/+)小鼠明显减少.另外,TLR4(-/-)小鼠MyD88(t=7.968,P=0.000)/NF-κB(t=6.198,P=0.000)的激活在伤后24h明显低于TLR4(+/+)小鼠.结论 在创伤性颅脑损伤后,TLR4的激活启动并促进脑外伤中的炎性反应,加重外伤后的脑水肿与继发性损伤,MyD88/NF-κB信号通路在中其发挥重要作用.
作者：尧小龙；丁卫；岳鹏杰；赵旻；谢蕊繁；胡峰；刘胜文；张华楸 刊期： 2017年第08期
目的 评价获取活体猪左半肝行脾窝异位辅助性肝移植的可行性.方法 选用体重相近的雌性广西巴马小型猪20头,随机分为供体和受体.切取活体供体猪左半肝(不含肝中静脉),肝左静脉缝合直径8mm、长2.5cm聚四氟乙烯人工血管做桥接血管.切除受体猪脾和左肾,将供肝置入脾窝,供体肝门静脉左支、肝动脉左支、肝左静脉桥接血管分别与脾静脉、脾动脉和左肾静脉行端端吻合,左肝管插管引出体外.未使用免疫抑制剂,观察术后2周情况及外科并发症.结果 进行10次脾窝异位辅助性活体肝移植,7头供体猪术后存活2周,6头受体猪术后存活2周,仅3头受体猪移植肝功能良好.结论 尽管动静脉血栓栓塞和人工血管血栓形成等并发症发生率较高,获取活体猪左半供肝行脾窝异位辅助性肝移植在技术上是可行的.
作者：艾乐民；林辉；梁霄；夏荣龙；沈杰；俞飞燕；谢丽美；潘永明 刊期： 2017年第08期
脑微透析(B-MD)是一种脑内微创、持续监测活体细胞外小分子物质动态变化技术.现已成为脑科学基础研究中常用的技术,在脑神经系统疾病的临床应用中也有初步开展,本文拟对B-MD技术的流程、结构、特点及其在神经科学中基础研究、临床应用的进展进行综述.
作者：杨邦坤；陈谦学 刊期： 2017年第08期
目的 探讨关节突关节面的角度变化与下胸椎胸椎黄韧带骨化(TOLF)的关系.方法 选取行下胸椎64层CT扫描的患者168例,其中TOLF组88例,对照组80例.测量两组T8~T12双侧关节突关节矢状面和横轴面角度,对两组数据进行统计学分析.结果 两组性别比例相似(P=0.120),TOLF组年龄(50.61±12.13)岁,对照组年龄(50.49±10.83)岁,差异无统计学意义(P=0.096).TOLF组各节段矢状面角度:T8左(75.60±3.31)°,右(75.42±3.59)°;T9左(78.78±3.65)°,右(79.60±3.51)°;T10左(83.40±2.94)°,右(84.64±3.32)°;T11左(97.61±16.67)°,右(97.30±14.62)°;T12左(124.13±12.36)°,右(131.50±11.13)°.TOLF组各节段横轴面角度:T8左(78.00±3.21)°,右(77.53±3.14)°;T9左(78.58±3.18)°,右(78.73±2.92)°;T10左(84.21±4.00)°,右(83.70±3.40)°;T11左(82.18±2.79)°,右(83.05±3.27)°;T 12左(77.13±3.81)°,右(78.20±4.05)°.对照组各节段矢状面角度:T8左(72.96±2.98)°,右(72.39±3.22)°;T9左(77.50±2.98)°,右(76.72±3.05)°;T10左(81.71±3.54)°,右(81.36±2.83)°;T11左(105.97±10.43)°,右(106.36±9.88)°;T12左(131.85±20.78)°,右(135.80±16.27)°.对照组各节段横轴面角度:T8左(75.75±2.66)°,右(75.07±2.90)°;T9左(76.82±3.02)°,右(77.24±2.88)°;T10左(81.24±3.75)°,右(81.94±2.60)°;T11左(77.64±3.28)°,右(78.69±3.10)°;T12左(74.69±2.67)°,右(74.42±4.19)°.两组矢状面角度除T9左侧和T12右侧差异无统计学意义(P值分别为0.088、0.171),余各节段差异均有统计学意义(P=0.000、0.000、0.000、0.007、0.000、0.007、0.001、0.037);两组各节段横轴面角度差异均有统计学意义(P=0.000、0.000、0.008、0.016、0.000、0.004、0.000、0.000、0.001、0.000);TOLF组各节段同侧矢状面角度进行方差分析(P=0.000),双侧均为T8和T9、T9和T10差异无统计学意义,余各节段比较差异均有统计学意义;TOLF组各节段同侧别横轴面角度进行方差分析(P=0.000),双侧均为T8和T9、T8和T12、T9和T12、T10和T11差异无统计学意义,余各节段比较差异均有统计学意义;TOLF组中共有12例矢状面角度不对称,对照组有13例,χ2=4.610,两组差异有统计学意义(P=0.020).结论 下段TOLF多发于T10、T11节段;下胸段关节突关节面越接近冠状面,黄韧带骨化的发病率越高;双侧关节突关节矢状面角度的不对称对黄韧带骨化的发生也具有一定影响.
作者：刘屹林；张杨；刘宏建；王玉强；谭洪宇；赵亮；王利民 刊期： 2017年第08期
目的 慢病毒介导短发卡RNA(shRNA)靶向抑制前列腺癌细胞株LnCaP、VCaP 细胞的抑制神经前体细胞表达下调因子8(NEDD8)的表达,观察其对雄激素受体(AR)、前列腺特异性抗原(PSA)的表达以及细胞生物学行为的影响.方法 构建NEDD8短发夹RNA(NEDD8-shRNA)稳定转染的LnCaP、VCaP 细胞株.实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及Western blot法检测NEDD8、AR及PSA mRNA及蛋白表达.细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、TranswellTM 实验检测细胞侵袭能力.结果 NEDD8-shRNA慢病毒转染后,LnCaP、VCaP 细胞NEDD8 mRNA表达量分别是空白对照组的(0.11±0.03)、(0.16±0.04)倍,AR mRNA表达量分别为(0.52±0.04)、(0.42±0.05)倍,PSA mRNA的表达量分别为(0.49±0.04)、(0.59±0.06)倍.慢病毒转染后,LnCaP、VCaP 细胞NEDD8蛋白相对表达量分别为(11.26±2.65)%、(6.26±2.04)%,AR蛋白相对表达量分别为(30.36±4.35)%、(15.36±3.37)%,PSA蛋白相对表达量分别为(13.37±2.70)%、(11.36±2.67)%.与对照组比较,NEDD8、AR、PSA mRNA及蛋白表达均显著下降(P=0.000).慢病毒转染后,与对照组比较,LnCaP、VCaP 细胞增殖显著抑制;转染后 LnCaP、VCaP细胞株凋亡率分别为(15.08±1.23)%、(20.37±1.76)%,与对照组比较显著增加(P=0.001、0.000);穿膜细胞数显著减少(P=0.000、0.004),分别为(55.5±12.5)、(60.8±11.3) 个.结论 NEDD8可能在转录水平参与了对AR表达调控,通过抑制NEDD8基因能有效抑制LnCaP、VCaP中AR表达及细胞的增殖、侵袭能力,诱导细胞凋亡.
作者：李国灏；万志华；郭永连；陈琳；吴钉 刊期： 2017年第08期
目的 探讨人羊水克隆样细胞来源干细胞用于侧脑室损伤大鼠模型细胞治疗的可能性.方法 羊水标本来自怀孕16~22周行产前诊断的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得.利用克隆杯,从人孕中期羊水标本中分离获得人羊水克隆样细胞来源干细胞,培养扩增.制作脑室损伤大鼠模型,设立正常对照组、实验对照组、实验组、空白对照组.第3代人羊水克隆样细胞来源干细胞注入脑室损伤模型大鼠脑室内,选取合适的时间点对模型鼠的生长发育指标(体重、脑重、张耳时间、长毛时间)、感觉运动功能(足测试、姿势反射、肢体位置)进行观察测试.并运用SNK法对各组结果均数进行两两比较,判断有无差异.利用Western blot技术检测模型鼠脑组织内人相关Nestin 的表达.结果 各组模型鼠体重、脑重无明显差异,实验组、实验对照组和空白对照组鼠崽之间长毛时间无明显差异,但此3组跟正常对照组差异有统计学意义.实验对照组和空白对照组运动功能测试各项指标与正常对照组和实验组差异均有统计学意义,实验组各项指标与正常对照组接近.Western blot检测表明,hAFCSCs移植5d后,就可以检测出人相关蛋白的表达.结论 人羊水克隆样细胞来源干细胞移植入侧脑室损伤模型鼠体内可以改善模型鼠的生长发育和感觉运动功能.
作者：张胜利；范应中 刊期： 2017年第08期
目的 观察小鼠小肠缺血再灌注损伤(IRI)模型中缺血预适应(IPC)对小肠IRI的保护作用,并检测c-Fos和c-Jun的变化,探讨其小肠IRI和IPC中的作用机制.方法 建立雄性C57BL/6小鼠小肠IRI模型,分为Sham组(假手术)、IRI组(单纯IRI)和IPC组(IPC+IRI)3组.采集3组术后再灌注0、30、60、90、120min小肠组织,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测不同时间点c-Fos和c-Jun的mRNA表达;免疫组织化学检测不同时间点小肠组织的c-Fos、c-Jun、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测不同时间点小肠上皮细胞凋亡情况.结果 RT-qPCR检测结果显示与对照组比较,IRI组小肠组织中c-Fos和c-Jun mRNA表达强度不断上升,分别于再灌注30min和60min时达峰值(12.34±2.95、11.65±2.43),并且明显高于IPC组(P=0.011、P=0.017).免疫组织化学检测显示IRI组再灌注30~60min时c-Fos(189.62±47.45、174.31±32.57)(P=0.026、P=0.029)和60~120min(71.31±11.54、97.46±14.48)(P=0.031、P=0.027)时c-Jun表达明显高于IPC组.IRI组PCNA表达不断增强,60min达峰值(392.74±67.04)后下降,并且明显高于IPC组(P=0.013);TUNEL染色显示与对照组比较随再灌注时间延长,IRI组和IPC组的凋亡指数(AI)均高于对照组,但IPC组再灌注90~120min的AI值明显低于IRI组(P=0.036、P=0.028).结论 IPC对小鼠小肠IRI具有显著的保护作用,c-Fos和c-Jun可能是介导小鼠小肠IPC保护作用的重要内源性活性介质.
作者：唐强；张宏伟；薛飞；刘传江；付强；秦涛 刊期： 2017年第08期
目的 筛选靶向抑制大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)中胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)基因表达有效的短发夹RNA(shRNA),为基因沉默IGFBP-3治疗大鼠勃起功能障碍提供依据.方法 构建4对靶向IGFBP-3的短发夹RNA(shRNA)质粒和阴性对照,体外原代培养CCSMC,分6组:空白对照组、转染pGPU6/GFP/Neo-IGFBP-3 (611)组、转染pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP-3 (526)组、转染pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP-3 (866)组、转染pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP-3 (710)组和转染pGPU6/GFP/Neo-shNC阴性对照组;转染48h后各组分别用实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot方法检测靶向沉默IGFBP-3的效果.结果 CCSMC转染后实时定量PCR和Western blot检测发现,pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-526、pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-611、pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-866均有明显的沉默效果,与空白对照组和转染pGPU6/GFP/Neo-shNC组比较差异有统计学意义,而其中pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-526沉默效果明显,实时定量PCR和Western blot结果显示分别可以抑制72%和79%.结论 靶向IGFBP-3基因的shRNA能够高效抑制大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞中靶基因的表达,为进一步体内实验奠定基础.
作者：蒲小勇；周香雪；肖恒军；林楚琪；彭伟华；毕学成；李东；刘久敏 刊期： 2017年第08期
目的 探讨不同剂量程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对脓毒症大鼠心肌保护作用的量效关系.方法 50只SD大鼠按随机数字表法分为5组(n=10):空白组、模型组、Nec-1小剂量组、Nec-1中剂量组、Nec-1大剂量组,采用鼠尾静脉注射内毒素方法建模,在建模6h后收集标本,通过光镜观察心肌组织形态学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组血浆肌钙蛋白(cTnI)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6),采用Western blot法检测心肌组织中受体作用蛋白1(RIP1)、受体作用蛋白3(RIP3)的表达.结果 与空白组比较,模型组血浆cTnI[(7.58±0.46)比(1.06±0.17)ng/ml]、TNF-α[(937.86±53.36)比(236.95±28.68)pg/ml]、IL-6[(776.13±17.94)比(168.35±20.60)pg/ml]活性均增高(t=-30.561,P=0.000;t=-32.122,P=0.000;t=-39.684,P=0.000),RIP1、RIP3蛋白表达(1.22±0.14比0.41±0.11,t=-17.480,P=0.000;1.15±0.02比0.18±0.08,t=-52.463,P=0.000)均增高.与模型组比较Nec-1干预组cTnI[(7.24±0.41)、(4.43±0.84)、(1.26±0.17)比(7.58±0.46)ng/ml;t=1.622,P=0.112;t=14.765,P=0.000;t=29.606,P=0.000]、TNF-α[(878.73±70.24)、(437.43±59.26)、(273.44±23.745)比(937.86±53.36)pg/ml;t=2.637,P=0.012;t=22.221,P=0.000;t=29.235,P=0.001]、IL-6[(719.18±49.83)、(381.89±28.69)、(221.93±42.58)比(776.13±17.94)pg/ml;t=3.722,P=0.000;t=25.743,P=0.000;t=36.184,P=0.000],RIP1、RIP3蛋白表达(0.83±0.09、0.70±0.09、0.55±0.09比1.22±0.14;t=8.598,P=0.000;t=11.297,P=0.000;t=14.511,P=0.000;0.94±0.02、0.73±0.01、0.53±0.04比1.15±0.02;t=10.961,P=0.000;t=22.405,P=0.000;t=33.414,P=0.000),且随着Nec-1剂量升高表达依次下降.心肌病理损伤在Nec-1大剂量组表现轻.结论 大剂量Nec-1能改善脓毒症时心肌组织的病理性炎症损伤;Nec-1能抑制脓毒症心肌组织RIP1、RIP3蛋白表达.
作者：孙小聪；佟琳；伍海斌；黄河；观春明 刊期： 2017年第08期
目的 比较3款常用图像分析软件对细胞因子矩阵(Cytokine Array)相同任意蛋白点表达的差异,优选出适图像分析软件.方法 从本实验室获得的一对Cytokine Array图像,任选图上4个蛋白点,以3款图像分析软件(Gel-Pro analyzer/Labwork、Quantity One和Image J)反复分析其蛋白丰度,比较其复杂性和可重复性,并针对入选蛋白,行酶联免疫吸附试验(ELISA)对比验证其吻合程度.结果 3款分析软件分析过程的复杂程度由简到繁依次为Gel-Pro analyzer/Labwork、Quantity One和Image J;可重复性从大到小(即变异系数从小到大)依次为Gel-Pro analyzer/Labwork(0.00%)、Quantity One(5.07%)和Image J(9.75%);若以ELISA(81.49%)结果为标准参考值,则吻合度从高到低依次为Quantity One(71.61%)、Image J(67.27%)、Gel-Pro analyzer/Labwork(62.31%).结论 各种软件均具备独自特点,如果仅作定性分析,推荐Gel-Pro analyzer/Labwork;如果作半定量分析,推荐Quantity One.若综合可重复性、分析过程的复杂程度、与ELISA结果的吻合程度,则推荐Quantity One.
作者：黄金浩；高闯；张志飞；苏万强；王鹏；魏文桂；孙健；江荣才 刊期： 2017年第08期
我们通过大鼠孕期暴邻苯二甲酸二丁酯(DBP)观察其对生殖结节(GT)细胞凋亡的影响.一、材料与方法1.分组:清洁级4个月龄SD大鼠(苏州大学实验动物中心:SCXK(苏)2007-0007),雄性(280±10)g,雌性(240±10)g,1:1的比例交配,分为对照组(n=10)和实验组(n=10).妊娠(GD)13～19d,实验组给予750mg/kg的DBP(美国Sigma公司,524980),对照组给于玉米油(美国Sigma公司,C8267).
作者：李祥；李晋昊；周云；张亚 刊期： 2017年第08期
本研究旨在观察微小RNA(miRNA,miR)-223对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和迁移的影响及靶基因FBXW7的调控作用,现报道如下.一、材料与方法1.材料:胰腺癌BxPC-3细胞株、模拟物和对照物(上海艾博思生物技术有限公司);鼠抗人FBXW 7(美国Hyclone公司);Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司);双荧光素酶报告基因检测试剂盒(美国Promega公司);噻唑蓝(MTT)试剂盒(上海碧云天生物技术公司);反转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒(大连宝生物工程有限公司).
作者：黄成；熊龙辉；许毓敏；胡钶；马广念；陈新斌；刘大威；贺德 刊期： 2017年第08期
目的 检测三阴性乳腺癌(TNBC)中长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)的相对表达,探讨其与乳腺癌恶性程度及进展的关系.方法 选取TNBC患者组织样本43例,非TNBC患者组织样本78例(均留取癌灶及癌旁正常乳腺组织),采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)的方法检测癌灶及其配对癌旁正常乳腺组织中HOTAIR的相对含量,比较其表达差异;检测TNBC与非TNBC癌灶中HOTAIR的相对含量,比较其表达差异;同时分析TNBC癌灶中HOTAIR的相对含量与肿瘤临床病理分期的关系.结果 TNBC和非TNBC组织样本中,癌灶与癌旁组织比较HOTAIR的相对表达显著升高(0.59±0.50比0.41±0.32,P=0.001);HOTAIR的相对表达在TNBC中较非TNBC中高(0.78±0.59比0.48±0.41,P=0.004);TNBC样本中,晚期样本较早中期样本HOTAIR相对表达水平升高(1.03±0.63比0.54±0.44,P=0.006).结论 HOTAIR在癌灶中表达TNBC较非TNBC明显升高,与TNBC的临床病理分期明显相关.
作者：程苒；崔军威；方征宇；刘晓岭；韦伟 刊期： 2017年第08期
目的 探讨肝素在脂多糖诱导急性损伤大鼠血管内皮细胞损伤中的作用,以及核因子(NF)-κB、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平变化.方法 选择120只SD大鼠随机分为脂多糖组、肝素组和对照组,各40只.脂多糖组和肝素组大鼠均按照10mg/kg经腹腔注射脂多糖溶液以建立脓毒症大鼠模型,肝素组在注射脂多糖溶液前1h注射300IU/kg肝素溶液.对照组大鼠按照10mg/kg经腹腔注射NaCl溶液.观察造模6h时各组大鼠肺组织形态学变化.采用酶联免疫法检测3组大鼠静脉血中NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α等的变化.应用伊文思蓝(EB)检测各组大鼠肺血管通透性改变情况.结果 (1)肝素组大鼠肺结构改变少于脂多糖组,炎性细胞浸润也明显低于脂多糖组;(2)脂多糖组和肝素组0~6h时的NF-κB活性显著升高,脂多糖组由0h的(2.51±0.49)U/L升至6h的(18.85±2.97)U/L,肝素组由0h的(2.39±0.34)U/L升至6h的(3.37±0.82)U/L,脂多糖组NF-κB活性增加水平与肝素组比较更为显著(P=0.021);6~12h时两组NF-κB活性明显降低,其中脂多糖组由0h的(18.85±2.97)U/L降至6h的(13.47±2.19)U/L(P=0.022),肝素组由0h的(3.37±0.82)U/L降至6h的(2.25±0.34)U/L(P=0.048),但仍显著高于对照组和0h时的水平(P=0.000);0h时3组血液IL-1β、IL-6、TNF-α水平差异无统计学意义(IL-1β:P=0.940;IL-6:P=0.626;TNF-α:P=0.948),0~6h,脂多糖组和肝素组大鼠血液中各指标迅速升高(组内比较,与0h比较,6h时脂多糖组IL-1β:P=0.039;IL-6:P=0.018;TNF-α:P=0.000;肝素组IL-1β:P=0.036;IL-6:P=0.036;TNF-α:P=0.012),12h各指标水平显著回落(组内比较,与6h比较,脂多糖组IL-1β:P=0.042;IL-6:P=0.027;TNF-α:P=0.008;肝素组IL-1β:P=0.047;IL-6:P=0.045;TNF-α:P=0.034);脂多糖组大鼠6h和12h时的血液IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著高于肝素组(脂多糖组:肝素组6h,IL-1β:P=0.031;IL-6:P=0.023;TNF-α:P=0.000;12h,IL-1β:P=0.046;IL-6:P=0.038;TNF-α:P=0.017).(3)肝素组大鼠肺EN含量为(1.21±0.18)mg/ml,也明显低于脂多糖组的(1.92±0.20)mg/ml(t=8.344,P=0.000),表明肝素组大鼠肺血管通透性优于脂多糖组.结论 肝素可能够通过抑制脓毒症大鼠NF-κB、IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低其对血管内皮细胞的损伤,从而发挥对脓毒症的抗炎作用.
作者：马可；王中英；孙喜伟；孙思翘；程志华 刊期： 2017年第08期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
