梁克；谢锐；张万青
目的 观察人Ras同源物基因家族成员B(RhoB)对肾癌细胞株786-O细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建pcDNA3.0-Flag-RhoB真核表达载体,脂质体转染法将其转入肾癌细胞786-O,利用Western blot检测细胞中RhoB的表达.用MTS法和流式细胞仪检测RhoB对肾癌细胞增殖和凋亡效应的影响.结果 真核表达载体pcDNA3.0-Flag-RhoB构建成功,脂质体转染后RhoB在786-O细胞中表达明显升高；在转染后48、72、96h,重组质粒组细胞的增殖速度明显低于空载体组和阴性对照组(P＜0.05)；转染重组质粒细胞凋亡率为(24.05±0.60)％,明显高于空载体组[(1.67±0.30)％]和阴性对照组[(1.22±0.50)％,P＜0.05].结论 RhoB对肾癌细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用.
作者：陈伟浩；张鹏；宋尔霖；高宇；马鑫；张旭 刊期： 2013年第03期
目的 探讨协同刺激分子B7-H3在食管癌中的表达及其临床意义.方法 采用流式细胞术分析人食管癌细胞株TE-1、Eca-109中B7-H3分子的表达,应用免疫组织化学法检测174例食管癌组织中B7-H3分子的表达.结果 流式检测显示B7-H3分子在人食管癌细胞株Eca-109中呈弱表达,在TE-1中呈高表达；免疫组织化学染色评分(H-score)结果显示174例食管癌组织中B7-H3染色的H-score中位值为200.0,小值为0,大值为292.5；食管癌组织中B7-H3表达水平和肿瘤浸润深度明显相关(P＜0.05),B7-H3高表达的患者其术后总生存率显著差于B7-H3低表达的患者[比值比(OR)=1.564,95％可信区间(CI):1.040～2.351,P＜0.05],B7-H3的表达水平和患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移和TNM分期等均无明显相关(P＞0.05).结论 协同刺激分子B7-H3在食管癌组织中高表达,并与肿瘤浸润深度及患者的预后密切相关.
作者：陈俊俊；顾文栋；陈陆俊；李敏；谢军；谈炎；李青；裴红蕾 刊期： 2013年第03期
我们在前期添加细胞因子诱导人脐带间充质干细胞(HUMSCs)的条件下,后期转染肝细胞核因子4α (HNF4α)并检测诱导效果,寻找一种新的肝细胞种子来源.一、材料与方法1.材料:脐带由南京医科大学附属南京医院妇产科提供.2.真核表达载体的构建:设计可以扩增HNF4α全长的引物,上游引物为5'-AGGATCCATGCGACTCTCCAAAACCC-TCG-3',下游引物为5'-AGAATTCCCT-AGATAACTTCCTGCTTGGTG-3'.
作者：禹亚彬；杭化莲；丁爱兴；黄庆峰；卞建民 刊期： 2013年第03期
皮肤创伤修复是多种修复细胞增殖和合成胶原等细胞外基质(ECM)以及新血管形成的过程.新生血管不仅供给修复细胞营养,还提供各种调控因子.因此,新血管形成是皮肤创伤修复的关键.内皮抑素(ES)作为重要的血管形成调节因子之一,可通过调控新血管形成影响皮肤创伤修复的过程.一、ES与新血管形成ES由O' Reilly等首先从鼠血管瘤细胞株的培养血清中分离得到,为XⅧ型胶原蛋白C端非胶原区的酶解片段,相对分子质量约20 ×103.天然ES作为蛋白质,具有体内代谢快、不稳定的特性,使其复性和生产均较为困难.重组人血管ES(商品名:恩度)通过在ES的氨基末端加上9个氨基酸MGGSHHHHH,稳定性和抗肿瘤血管生成等生物活性明显提高,恩度联合化疗已经成为进展期非小细胞肺癌一线标准治疗方案[1].
作者：武元元；叶兰萍；张选奋 刊期： 2013年第03期
目的 本课题组前期发现散发性结直肠癌2号染色体存在高频杂合缺失现象,提示可能有抑癌基因的存在,本研究拟在该区域筛选与结直肠癌发生相关的抑癌基因.方法 构建包含2号染色体高频杂合缺失区域的基因芯片,对19例结直肠癌标本进行表达谱分析,并与临床病理特征加以统计学分析,筛选该区域与结直肠癌相关的未知抑癌基因,然后对筛选出的候选基因采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)进行初步验证.结果 在前期研究基础上,通过数据库检索,挑选了17个基因进行相关基因筛选.发现ACVR1C在89.47％ (17/19)的肿瘤组织中表达下调,其中10例肿瘤组织中下调比例超过2倍.通过Fisher's精确法分析,ACVR1C的表达与临床病理特征之间无明显相关.在此基础上,通过Real-time PCR验证结果也发现ACVR1C基因的表达与芯片结果相符,在结直肠癌组织中表达显著下调.结论 通过表达谱芯片和生物信息学分析,并通过Real-time PCR初步验证,推测ACVR1C基因可能是与结直肠癌发生相关的抑癌基因.
作者：周崇治；韩杨；王晓亮；裘国强；彭志海 刊期： 2013年第03期
目的 观察5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌细胞(SW480)株增殖凋亡的影响并探讨其机制.方法 以2.5、5.0、10.0μmol/L的5-Aza-CdR作用于SW480细胞72 h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率；甲基化测序聚合酶链反应(BSP)检测Disable-2 (DAB2)胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)岛的甲基化状态；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测DAB2mRNA的表达；激光共聚焦显微镜检测DAB2蛋白的表达.结果 (1)5-Aza-CdR对SW480细胞生长有抑制作用,用药处理后细胞凋亡率分别为(12.89±0.59)％、(16.74±1.80)％、(33.02±3.30)％,(P＜0.01)；(2) 5-Aza-CdR处理前甲基化程度为89.09％,处理后依次为70.00％、55.45％、10.91％,启动子甲基化水平明显降低(P＜0.01)；(3)5-Aza-CdR处理前RT-PCR可以少量扩增出DAB2 mRNA特异性条带(平均灰度比值为0.266±0.013),5-Aza-CdR处理后可见DAB2 mRNA转录水平增加,且mRNA水平与药物的浓度呈正相关,平均灰度比值2.5 μmol/L组为0.363±0.009,5.0 μmol/L组为0.490±0.021；10.0 μmol/L组为0.753±0.028(P＜0.01)；(4) 5-Aza-CdR处理前有少量DAB2蛋白表达于细胞质及细胞核中(荧光强度为:94.50±13.39),予以5-Aza-CdR处理之后DAB2的表达量增加(荧光强度为:123.75±15.19,P＜0.01).结论 5-Aza-CdR能诱导结肠癌SW480细胞株凋亡的作用,其机制可能是5-Aza-CdR能逆转SW480细胞DAB2启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达.
作者：舒宁波；王亚旭；曾令海；谢凯；张灵敏；毕德利 刊期： 2013年第03期
目的 分选出HepG2中侧群(SP)细胞并探讨其生物学特性.方法 流式细胞仪分选出SP细胞为实验组,同代常规培养HepG2为对照组,利用非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)鼠接种实验、黏附实验、Transwell、迁移实验、成球培养实验检测两者生物学特性差异.结果 接种实验显示2×104个SP细胞即能成瘤；两组细胞黏附能力[(16.19±3.68)％比(25.01±13.97)％]和侵袭能力[(20±4)比(16±3)]差异无统计学意义(P＞0.05)；迁移实验SP细胞穿出细胞数(87±10)比对照组(47±8)多,差异有统计学意义(P ＜0.05)；SP细胞成球数(54 ±9)较对照组(18±3)多(P＜0.05).结论 HepG2中SP细胞具有肿瘤干细胞特性,可能富集了肝癌干细胞.
作者：吕阳；许戈良；荚卫东；王伟；夏洪海；刘文斌 刊期： 2013年第03期
目的 探讨Notch信号通路与磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3 K/Akt)信号通路在膀胱癌中的作用及其机制.方法 分别通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测Notch信号通路与PI3 K/Akt信号通路的关键因子在36对膀胱癌及癌旁组织中的表达,然后采用Notch信号通路抑制剂(2S)-N-N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)及PI3K信号通路抑制剂LY 294002分别抑制以上通路,采用MTS法观察2条信号通路对膀胱癌细胞5637与T24增殖的影响,后检测抑制Notch信号通路后Akt的表达变化,观察2条信号通路是否存在相互作用关系.细胞实验各重复3次.结果 Notch信号通路与PI3K信号通路在膀胱癌中呈活化状态.与瘤旁组织比较,肿瘤组织中Notch1受体升高(2.60±0.37)倍,Hes1升高(1.80±0.24)倍(P＜0.05),磷酸化Akt蛋白表达升高.再者,分别抑制2条信号通路后均抑制膀胱癌细胞的增殖.抑制Notch信号通路后Hes1下降(3.60±0.53)倍,第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)表达下降(2.30±0.24)倍(P＜0.05),磷酸化Akt蛋白表达也显著下调.结论 Notch信号通路可能通过调节PI3K信号通路在膀胱癌中起促癌作用.
作者：朱庆国；朱伟 刊期： 2013年第03期
目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对兔心肌梗死后心脏功能及结构重塑的影响.方法 38只新西兰大白兔随机分为两组,于左心耳与心尖连线1/2处结扎左前降支,制备心肌梗死模型.术后24h,实验组G-CSF 10 μg/(kg·),对照组生理盐水0.5ml/(kg·d),共5d均皮下注射.在术前、术后60d二维超声测量心功能,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆脑钠肽(BNP)水平.结果 梗后60d,实验组与对照组超声结果分别为左室射血分数(LVEF)[(73.6±3.7)％、(60.1±12.0)％]、短轴缩短率(FS)[(43.5±3.7)％、(33.1±9.3)％]、左室收缩末期内径(LVESD)[(7.9±0.3) mm、(10.1±1.6) mm]、左室舒张末期内径(LVEDD)[(14.1±0.8)mm、(15.1±1.0) mm]、左房内径(LAD)[(7.14±0.24) mm、(15.1±1.0) mm]、左室后壁厚度(LVPWT) [(2.98±0.25) mm、(3.37±0.44) mm、室间隔厚度(IVST)[(2.91±0.19) mm、(3.28 ±0.42) mm],两组各参数之间差异有统计学意义(P＜0.05).BNP梗后第10天,实验组(113.38±39.40) ng/L,对照组(325.35±96.14) ng/L(P ＜0.05)；梗后60d,实验组:(34.90±13.90) ng/L,对照组:(150.14±37.15) ng/L(P＜0.05).结论 G-CSF可改善急性心肌梗死后心功能,并维持至慢性期,同时能改善心肌结构重塑.
作者：金雅磊；黄从新；程新耀 刊期： 2013年第03期
目的 应用RNA干扰(RNAi)技术,使人乳头瘤病毒18型(HPV18) E6、E7基因表达下调或缺失,观察下调或缺失后的HPV18阳性食管癌细胞株ECA109细胞内的人类白细胞抗原(HLA)-Ⅱ类分子表达.方法 将合成并包装好的含有E6、E7基因片段的短发卡RNA (shRNA)腺病毒载体(shpAd-E6-eGFP、shpAd-E7-eGFP)感染食管癌细胞株,并用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)[E6 siRNA组HLA-ⅡmRNA表达量是空白组的1.27倍,E7 siRNA组HLA-ⅡmRNA表达量是空白组的1.66倍(P＞0.05]和Western blot技术[各组ACTIN蛋白条带灰度基本一致,shRNA-E6、shRNA-E7、无关序列和阴性对照组蛋白表达分别为0.5543、0.7246、0.4452、0.4365,siRNA E6、E7实验组灰度稍高于空白组(P＞0.05)及无关序列组]以β3-actin为内参照,在基因和蛋白水平上检测E6、E7和胞内HLA-Ⅱ类分子的表达.结果 2条含有E6、E7基因片段的shRNA腺病毒载体(shpAd-E6-eGFP、shpAd-E7-eGFP)能有效的抑制ECA109细胞中HPV18 E6、E7的转录及表达,抑制率分别为92％和89％,细胞内HLA-Ⅱ类分子的表达上调,分别是空转染组及无关序列组的1.27和1.66倍,无关序列组和空白对照组HPV18 E6、E7及HLA-Ⅱ的mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HLA-Ⅱ类抗原表达的缺失可能与食管癌中的HPV感染及作用明显相关.
作者：冯彪；邓彦超；伊地力斯·阿吾提；买地尼也提·尼亚孜；哈德提·别克米托夫；李德生；居来提·艾尼瓦尔；张力为 刊期： 2013年第03期
目的 观察肝脏胰岛素抵抗对胆结石形成的诱导作用.方法 使用肝脏胰岛素受体敲除小鼠作为研究对象(模型鼠),分别研究致结石饮食条件下胆结石的发生；胆酸的分泌量和胆固醇7-羟化酶(Cyp7a1)、胆固醇12α羟化酶(Cyp8b1)、胆固醇7α羟化酶(Cyp7b1)和胆固醇27α羟化酶(Cyp27a1)的表达以及法尼酯衍生物X受体(FXR)的表达；肝胆固醇的含量以及胆固醇转运体三 磷酸腺苷结合盒转运体G5(Abcg5)和G8(Abcg8)的表达.结果 使用致结石饮食后模型小鼠胆结石发生率达到了100％,是正常小鼠的8倍；模型小鼠粪便胆酸含量为9.2 μmol/g,显著低于正常小鼠的14.9 μmol/g,FXR和Cyp7a1、Cyp8b1、Cyp7b1以及Cyp27a1的表达受到抑制；模型小鼠每克肝组织的胆固醇含量为2.2 mg,高于正常组的1.2 mg,其Abcg5和Abcg8表达也显著增高(P＜0.05).结论肝脏胰岛素抵抗小鼠体内FXR和Cyp7a1、Cyp8b1、Cyp7b1以及Cyp27a1的表达受到抑制,Abcg5和Abcg8表达增高,引起胆固醇比例升高,胆酸水平下降,引起胆结石.
作者：徐健；徐良；李林涛；查斯洛 刊期： 2013年第03期
目的 探讨同源异形盒基因HOXB7在结肠癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测73例结肠癌及其相应正常黏膜组织中HOXB7蛋白的表达水平.结果 HOXB7在结肠癌组织中的表达率高于相应正常黏膜组织的表达率(64.38％比27.40％,P＜0.01).与临床T分期(P＜0.01)、AJCC分期(P＜0.01)、远处转移(P＜0.05)以及细胞核增殖抗原(Ki-67,P＜0.01)相关.结论 HOXB7过表达可能是结肠癌发生发展过程中的重要分子事件.
作者：王冬清；严东旺；唐华美；彭志海；于振海 刊期： 2013年第03期
谷胱甘肽转硫酶(GSTs)是与毒物或致癌物的解毒代谢有关的酶类,其中谷胱甘肽转硫酶M1(GSTM1)、谷胱苷肽-S-转移酶T1(GSTT1)缺失基因型和谷胱甘肽转硫酶P1(GSTP1)变异型可导致酶活性丧失或降低[1].多项研究报道了在人原发性肝癌中具有高频率的GSTP1基因启动子区胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)岛的高甲基化[2];前列腺癌中GSTP1基因启动子区域高甲基化可导致该基因表达沉默[3].我们选择3种人结肠癌细胞株,探讨GSTP1基因的表达及其启动子区甲基化.
作者：高红；陈东；弭杰；伍美；肖楠；王维林 刊期： 2013年第03期
目的 建立一种改良的Wistar大鼠梗阻性黄疸肝切除术后肝衰竭模型.方法 通过切断胆总管建立梗阻性黄疸模型,探索佳梗阻时间.在梗阻14 d后,行胆道内引流,分离出70％肝脏分别阻断0、15、30、45 min,切除未行阻断的余肝,建立肝衰模型,观察生化指标、病理改变及生存率.结果 梗阻14d组更加适合下一步造模.随着阻断时间的延长肝功能进行性下降,各组间差异有统计学意义(P＜0.05),其中30 min组24h死亡率达80％,有典型肝衰症状,组织病理学符合肝衰特点.结论 对梗阻性黄疸大鼠行肝脏血流阻断及肝切除可建立能较大程度模拟临床过程的外科型肝衰竭模型.
作者：任波；沈世强；张爱民；闫瑞承；林福生；马忠林 刊期： 2013年第03期
我们应用RNA干扰技术敲低水通道蛋白(AQP)-5表达,观察对结肠癌肿瘤细胞体外药敏性及多药耐药性(MDR)因子的影响.一、材料和方法1.材料:噻唑蓝(MTT),美国Sigma公司;荧光定量逆转录-聚合酶链反应(FQ-PCR)试剂盒,美国Promega公司;抗体均为美国Santa Cruz公司产品.2.AQP-5小干扰RNA(siRNA)转染:参照文献[1]设计AQP-5-siRNA及对照NS-siRNA序列.HT-29细胞购自中国科学院上海细胞所,按说明书进行转染.
作者：吴胜春；石晓明；唐雷；杨永斌；吕柏楠；邢珊珊 刊期： 2013年第03期
目的 探讨视网膜母细胞瘤结合蛋白-6(RBBP6)基因对结肠癌发生、发展的意义及其与结肠癌临床病理特征的关系.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测40例结肠癌患者肿瘤组织、配对的癌旁正常组织RBBP6基因的mRNA表达水平,通过免疫组织化学的方法检测72例结肠癌及其癌旁正常组织RBBP6基因的蛋白表达水平.结果 Real-time PCR结果显示肿瘤组织中RBBP6 mRNA的表达平均值为4.88,正常组织中RBBP6 mRNA的表达平均值为3.49,结肠癌组织RBBP6 mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(P＜0.01).免疫组织化学结果显示RBBP6在正常组织无表达或弱表达[6.9％(5/72)],在肿瘤组织中高表达[68.1％ (49/72)].RBBP6的表达量与区域淋巴结转移(P＜0.05)、肿瘤远处转移(P＜0.001)、肿瘤分期(P＜0.01)和分化(P＜0.05)高度相关.结论 RBBP6基因在结肠癌组织中有较高的表达水平,可能参与结肠癌的发生、发展.
作者：陈健；严东旺；吴泽华；姜韬；薛英明；彭志海 刊期： 2013年第03期
目的 探讨唑来膦酸诱导结肠癌HCT116细胞凋亡的线粒体途径.方法 分别采用浓度25μmol/L和50 μmol/L的唑来膦酸孵育HCT116细胞48 h,流式细胞仪分析凋亡细胞比例；将标志线粒体膜电位的染料JC-1与唑来膦酸作用24、48、72 h的HCT116细胞避光孵育15 min,荧光显微镜和流式细胞仪观察其红色荧光强度的变化；Western blot分析唑来膦酸作用后48、72 h细胞线粒体和胞质细胞色素C(Cyclin C)含量的改变,细胞线粒体和细胞质Cyclin C的改变.结果 HCT 116细胞和唑来膦酸25μmol/L和50 μmol/L作用48 h后,出现凋亡,凋亡比例分别为(11.6±0.5)％、(49.2±3.4)％(P＜0.01)；唑来膦酸浓度25 μmol/L时,24、48、72 h后JC-1被激发出红色荧光的细胞比例为(96.49±2.10)％、(86.13±3.20)％、(74.23 ±5.30)％ (P ＜0.01)；Western blot显示唑来膦酸作用下,Cyclin C从线粒体内释放至细胞质.结论 线粒体途径是唑来膦酸介导的结肠癌HCT116细胞凋亡的信号途径之一.
作者：高翔；江波；张婷；邹士涛；吴小红；游庆军；华东 刊期： 2013年第03期
目的 探讨自体组织工程骨软骨复合体修复关节软骨缺损的可行性,评价修复效果.方法 体外培养扩增猪关节软骨细胞及成骨细胞,分别接种于聚乳酸聚羟基乙酸聚合物(PLGA)和磷酸三钙(TCP)上培养2周后,缝合成骨软骨复合体.复合体植入关节软骨缺损为实验A组,单纯工程软骨为对照B组,不做处理为空白C组.回植3个月后检测修复效果.结果 A组缺损修复组织表面光滑平坦,与周围软骨整合良好.B组和C组的修复组织呈纤维组织和无修复.组织学显示A组结构致密,细胞外基质分布更均匀,与周围软骨及软骨下骨整合良好.A组GAG含量为(571.50±12.77) μg,优于B组(410.67±17.36) μg、C组(308.17±19.34) μg,差异有统计学意义(P＜0.01)、A组Ⅱ型胶原染色面积为(90.07±2.45)％,优于B组(79.53±4.72)％、C组(66.17±2.94)％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 骨软骨复合体移植物能实现早期固定并有效修复关节软骨缺损.
作者：陈刚；钱明权；朱国兴 刊期： 2013年第03期
目的 观察化学脱细胞异体神经对大鼠坐骨神经缺损的修复效果.方法 成年雄性SD大鼠23只,其中5只取其双侧坐骨神经用于制备脱细胞异体神经,剩余18只随机分为自体神经移植组(A组)和脱细胞异体神经移植组(B组).所有实验动物均建立左侧坐骨神经1 cm缺损模型,暴露右侧坐骨神经作为正常对照.术后分4、8、12周3个时间点分批进行大体观察,检测坐骨神经功能指数(SFI)；术后12周,行肌电图,苏木素-伊红(HE)染色,神经丝蛋白200免疫组织化学和免疫荧光检测.结果 术后两组大鼠伤口愈合良好,移植神经的吻合口光滑且无膨大；各时间点的SFI检测结果(A组-83.7、-63.25、-48.6;B组-86.58、-70.69、-57.43),A组均优于B组,但差异无统计学意义(P＞0.05)；术后12周,A组小腿三头肌湿重恢复率[A组(66.16±19.58)％,B组(45.20±17.17)％]和峰-峰波幅[A组(8.10±2.74) mV,B组5.34±2.67)mV]大于B组,且差异有统计学意义(P＜0.05)；术后12周,潜伏期[A组(1.80±0.35) ms,B组1.95 ±0.44)ms]和神经传导速度[A组(27.76±9.84)m/s,B组(22.12±5.98) m/s],A组结果均高于B组,但差异无统计学意义(P＞0.05)；苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学观察B组新生的神经纤维与A组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 化学脱细异体神经与自体神经比较,对坐骨神经缺损的修复效果接近.
作者：张雁儒；尚燕；刘宏建；周明武；王义生 刊期： 2013年第03期
目的 探讨周期性应力下大鼠髓核细胞中整合素的表达和意义.方法 体外分离培养大鼠髓核细胞,接种于玻片上,随机分为对照组和加压组.加压组在0～ 200 kPa,0.1 Hz的周期性应力下培养6h.使用荧光实时定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测两组细胞中整合素不同亚基、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达.结果 加压组Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达明显增加,分别为对照组的5.04和4.52倍,同时整合素α1亚基的表达为对照组的1.71倍(P＜0.05).结论 周期性压力对髓核细胞的代谢具有促进作用,整合素α1亚基在压力传导中起信号传递作用.
作者：高共鸣；徐南伟；蒋羽清；卢耀军；农鲁明；周栋 刊期： 2013年第03期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
