陈裔英；沈红星；付本升
目的:基因重组腺病毒具有较高的转染率,且宿主范围广.实验拟构建携带人血管内皮细胞生长因子165基因的重组腺病毒载体(Ad.VEGF165),为后续基因转染、微囊化基因工程细胞及其动物模型研究提供实验基础.方法:实验于2007-01/05在解放军第二军医大学长海医院胸心外科研究所实验室完成(国家级重点实验室).①实验材料:pAxCAwt.VEGF165由长海医院胸心外科研究所惠赠.②实验方法:采用脂质体转染法,将pAxCAwt.VEGF165与DNA-TPC共转染人胚肾293细胞,扩增后获得载人血管内皮细胞生长因子165基因的复制缺陷犁重组腺病毒.⑧实验评估:应用聚合酶链反应及酶切证实重组腺病毒中的目的基因.并根据50%组织培养感染剂量法计算病毒滴度.结果:①重组腺病毒Ad.VEGF165的构建:采用脂质体法可使pAxCAwt.VEGF165与DNA-TIC有效转染人胚肾293细胞,扩增出载人血管内皮细胞生长因子165基因的复制缺陷型重组腺病毒.②重组腺病毒Ad.VEGFl65的鉴定:聚合酶链反应的产物进行Nco I酶切鉴定,可得到597 bp、146 bp 2个片段,与GeneTool软件理论上计算的结果完全一致,计算病毒滴度为2.2×1015pfa/L.结论:采用pAxCAwt.VEGF165与DNA-TPC系统经脂质体转染法成功构建的复制缺陷的重组腺病毒Ad.VEGF165滴度高、毒性低、效率高、体外转染安全.
作者：韩焱福；宋建星；刘军 刊期： 2008年第24期
目的:了解中国文化背景下心理治疗师的自我表露特征.方法:调查于2006-10/12进行.选取中国东北、华北、华南、华中、西南、东南各地区21个省市从事心理咨询工作的治疗师为调查对象，要求年龄在20～69岁，进行个体心理治疗并且有至少2年实践经验.采用自编治疗师自我表露调查问卷进行调查，通过E-mail发送问卷，问卷由15道题目组成，其中人口统计学相关题目6道，治疗师自我表露特征的题目共9道，调查心理治疗师自我表露的倾向、内容、方式、原因、影响因素，及其与性别、理论取向间的关系.结果:实际发放问卷390份，回收问卷191份，回收率为49％，其中有效问卷182份，有效回收问卷率为47％.①大部分心理治疗师在治疗中主动运用了自我表露技术，且性别差异显著，男性比女性治疗师主动.②治疗师表露多的是对来访者的情感体验，表露少的是个人的优势或弱点.③大多数治疗师以探索的方式应对自我表露情境.④来访者问题类型和严重程度、治疗阶段、治疗联盟的品质足影响咨询师自我表露的主要因素.⑤治疗师自我表露的主要目的是增加来访者转变观念和选择的意识.⑥与刚开始从业相比较，大部分治疗师的自我表露减少了.结论:无论是在主动，还是在被动自我表露情况下，中国治疗师均显示出了较高的表露倾向，治疗师对不同表露内容的使用频率不同，作为一项治疗技术，治疗师的自我表露是积极而富有成效的.
作者：徐露凝；李林英 刊期： 2008年第24期
背景:肥胖是全世界常见、花费大的代谢性疾病,基因及环境因素已经成为肥胖研究的焦点因素之一,基因芯片技术已被用于脂肪组织的研究.目的:采用基因芯片技术,首次测定中国成年肥胖者的外周血基因表达谱.设计:对照观察.单位:北京中医药大学.对象:由北京中医药大学基础医学院于2003-0812004-05组织,按国际体质量标准在北京市工人疗养院筛选5例肥胖者和3例体质量正常者.5例肥胖者中男4例,女1例,年龄(21±1)岁;3例体质量正常者中男2例,女1例,年龄(26±5)岁.所有受试人员对实验方案均知情同意,且得到医院伦理道德委员会批准.方法:取上述受试者的外周血,提取总RNA并进行扩增和标记,用Test3芯片检测受试样品的质量,用U133A芯片进行基因表达谱观察,并将所得数据进行统计学分析,从基因BANK中查出具有显著差异的序列所标志的基因.主要观察指标:基因表达信号值.结果:与体质量正常者相比,肥胖者外周血基因表达谱显著上调的基因有66个,显著下调的基因有28个;其中上调超过2倍的有11个,下调超过2倍的有6个.肥胖者表达上调超过4倍的基因为HLA-DQAl,CRAT,MAPK813和DKFzP434N1923.其中表达上调超过20倍的基因为HLA-DQAI.结论:首次发现肥胖成人的外周血相关基因表达与体质量正常者有明显差异,肥胖与MHC Ⅱ类抗原HLA-DQAl,HLA-DQBl表达密切相关.
作者：龚海洋；高京宏；王琦 刊期： 2008年第24期
目的:建立胰腺自主神经间接刺激的2型糖尿病动物模型,观察模型大鼠糖代谢、胰岛索水平及胰腺病理的变化.方法:实验于2005-05/2007-05在青岛大学医学附属医院动物实验室完成.①硅胶模型制作:特制的硅胶片.15 mm×1mm×1mm大小,质量(60±3)mg,消毒备用.②分组处理:10周龄雄性SD大鼠52只随机分为4组,左、右侧模型组及双侧模型组各14只,对照组10只.左、右侧模型组分别在左、右T8-12椎间关节神经根处植入硅胶模型,双侧模型组在双侧T8～12椎间关节神经根处植入硅胶模型术,对照组进行背肌切开暴露椎间关节手术,不植入模型.③观察指标:各组大鼠术后45 d字腹血糖、糖耐量、胰岛素、胰腺病理,并观察术后0,28,45 d体质量变化.结果:8只手术过程中死亡,44只进入结果分析.①糖代谢特征:造模后45 d,左侧模型组、双侧模型组血糖明显高于对照组(P<0.05),3个模型组胰岛素水平明显低于对照组(P<0.01).②糖耐星结果;造模后45 d,3个模型组的空腹血糖、服糖30,60,120 min后血糖均明显高于对照组(P<0.05),3组之间差异无显著性意义(尸>O.05).③体质量变化:3个模型组术后28,45 d体质量明显低于对照组(P<0,05).④胰腺病理:模型组大鼠胰岛β细胞内颗粒减少.结论:间接刺激大鼠自主神经会影响大鼠的糖代谢、胰岛素水平及胰腺组织形态,可用于2型糖尿病动物模型的制作.
作者：于兆华；于尉杰；陈福香；王琳 刊期： 2008年第24期
背景:胰岛素抵抗是代谢综合征,糖尿病和动脉粥样硬化的共同病理基础.目的:比较相同体质量不同饮食诱导及不同体质量相同饮食诱导建立胰岛素抵抗大鼠模型的可行性.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-10/2007-09在泰山医学院生命科学研究所完成.材料:SPF级1个月龄雄性SD大鼠20只;胰岛素溶液为江苏万邦生化医药股份有限公司产品,按照4 mU/(kg·min)的滴速标准用前临时配制.方法:按体质量分组4组:体质量在(140±10)g范围的为普通饲料组、高盐高脂饲料组、高糖高脂饲料组,体质量在(180±10)g范围为高糖高脂饲料组,每组5只.主要观察指标:用高脂饮食诱导建立胰岛素抵抗模型;用正常葡萄糖-高胰岛素钳夹试验验证是否有胰岛素抵抗:不同体质量、不同饮食配方与胰岛素抵抗模型的关系.结果:轻体质量和重体质量大鼠在基础血糖、基础血压方面差异无显著性,20只大鼠全部进入结果分析.①高脂喂养4个月后,两组大鼠体质量、肾脏和附睾周围脂肪重量及GIR60-120差异已无显著性意义,血压差异有显著性意义(P<0.05),Ln(FINS)、Ln(SINS)差异有极显著性意义(P<0.01).②体质量(140±10)g大鼠经高脂喂养4个月后,高脂喂养组与普通饲料组体质量差异无显著性意义.肾脏周围脂肪重量、喂养后血压、Ln(FINS)、Ln(SINS)及GIR60-120差异都有极显著性意义(P<0.01);高脂高糖及高脂高盐喂养大鼠除Ln(SINS)差异有极显著性意义外,其他指标之间差异无显著性意义.结论:基础体质量较低的大鼠易出现胰岛素抵抗,高脂饮食能更易成功诱导低体质量大鼠胰岛素抵抗模型,在高脂喂养中,饲料中的高糖与高盐对胰岛素抵抗生成影响的差别不大.
作者：王利；褚宏恩；孙兆峰；夏作理 刊期： 2008年第24期
背景:细胞外基质在肾间质的积聚是肾小管间质纤维化的主要特征.肾小管上皮细胞一肌成纤维细胞转分化在肾间质纤维化发病机制中起了重要作用.目的:从细胞水平观察阿魏酸钠对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及细胞外基质主要成分Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白的影响.设计:以细胞为观察对象,随机对照实验.单位:四川大学华西医院肾脏科.材料:大鼠肾小管上皮细胞株NRK52E来源于American Type Culture Collection(ATCC),由澳大利亚Monash医学中心肾内科实验室提供,本实验所用细胞株为第36代.阿魏酸钠为白色晶体,可溶于水,纯度>98.0%,由成都亨达药业有限公司提供.实验时终浓度分别125,250,500μmol/L.兔抗大鼠α平滑肌肌动蛋白多克隆抗体为武汉博士德产品;EUSA试剂盒为上海森雄公司产品;人重组转化生长因子β1为R&D公司产品:DNA Engine OpticonTM实时荧光定量聚合酶链反应仪为MJResearch产品.方法:将体外培养的细胞株NRK52E分为5组;空白对照组:仅加入含血清的DMEM培养基;转化生长因子β1刺激组:培养液中加入终质量浓度为5ng/L的转化生长因子β1;阿魏酸钠低、中、高浓度组:培养液中加入终质量浓度为5 ng/L转化生长因子β1和125,250,500μmol/L的阿魏酸钠.主要观察指标:应用相差显微镜、实时荧光定量聚合酶链反应、酶联免疫吸附法观察阿魏酸钠对转化生长因子β1诱导的NRK52E细胞转分化的作用及对细胞外基质主要成分胶原Ⅰ胶原Ⅲ和纤维粘连蛋白的影响.结果:①NRK52E细胞形态:与空白对照组相比,转化生长因子β1刺激组细胞在培养3 d后,细胞株NRK52E从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞的形态.阿魏酸钠3个浓度组细胞受转化生长因子β1的刺激而出现的形态学改变得到不同程度的改善,并呈剂量依赖性.②α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达:转化生长因子β15 ng/L诱导6 h后α-平滑肌肌动蛋白mRNA较空白对照组上升,在72 h达高峰;经过不同剂量阿魏酸钠干预72 h后α-平滑肌肌动蛋白mRNA显著下调并呈剂量依赖性(P<0.05).③细胞外基质变化:经转化生长因子β15 ng/L诱导72h后,细胞培养上清中Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白含量明显增加(P<0.05).经过不同剂量的阿魏酸钠干预后,不同程度地抑制了转化生长因子β1促Ⅰ型胶原、Ⅲ犁胶原和纤维粘连蛋白增多的作用,并呈剂量依赖性(P<0.05).结论:转化生长因子β1可以诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化,刺激细胞外基质成分Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白的升高.阿魏酸钠可剂量依赖性地抑制转化生长因子β1所导致的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化作用.
作者：谢席胜；左川；米绪华；李会娟；付平 刊期： 2008年第24期
背景:心房钠尿肤不仅存在于心脏且分布于全身许多部位,心房钠尿肽合成细胞在大鼠胃中形态学定位及在胃黏膜不同分区的分布特点仍处于研究阶段.目的:对心房钠尿肽合成细胞在大鼠胃中进行超微结构定位,观察其在胃不同区域的分布及形态.设计:重复测量实验.单位:承德医学院.材料:实验于2004-10/2007-07在承德医学院中药研究所免疫学实验室(省级重点实验室)完成,选用18只成年Wistar大鼠,体质量175～300 g,雌雄不拘,由承德医学院实验动物科提供.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.实验用心房钠尿肽抗体及血清为美国Santa CruzBiotechnology公司产品,胶体金标记抗体液(胶体金颗粒的直径为15 nm,华美生物工程公司产品),CMTAS多功能真彩色病理图象分析系统由北京航空航天大学研制开发,日本产JEM-1200EX透射电镜.方法:大鼠经麻醉后,剪下胃及右心房(为心房钠尿肽抗体免疫组织化学染色时的阳性对照),沿大鼠胃贲门区、胃底区、幽门区的方向纵行取材.①将右心房作为阳性对照与胃组织在同一条件下进行免疫组织化学染色,观察心房钠尿肽在胃组织中不同部位的分布特点,确定心房钠尿肽合成细胞所在部位.②免疫电镜胶体金标记法对胃黏膜心房钠尿肽合成细胞的超微结构定位,采用CMTAS多功能真彩色病理图象分析系统对心房钠尿肽合成细胞细胞在不同的分布区域(贲门区、幽门区及胃底区)面密度的百分比.主要观察指标:胃心房钠尿肽合成细胞形态、所在部位及胃的不同分区面密度百分比.结果:①心房钠尿肽合成细胞形态及部位:阳性对照大鼠心房肌的心房钠尿肽合成细胞呈现阳性表达.大鼠胃中心房钠尿肽合成细胞也呈阳性表达,主要位于胃黏膜的下1/3.心房钠尿肽合成细胞的形态为圆形、锥体形和烧瓶犁.阴性染色的部位为黏膜表层,黏膜下层和肌层.②心房钠尿肽合成细胞面密度的百分比:胃贲门区面密度的百分比大,各面密度的百分比分布顺序是贲门区>幽门区>胃底区.结论:心房钠尿肽合成细胞主要位于胃黏膜的下 1/3;大鼠胃不同分区心房钠尿肽合成细胞的面密度的百分比不相同,以胃贲门区大.
作者：潘理会；李春辉；杨宗伟 刊期： 2008年第24期
目的:观察磺酰脲类药物格列本脲对平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞内酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)酶活性的影响.方法:实验于2003-06/2005--07在华中科技大学同济医学院实验中心完成.①用组织贴块法培养小鼠主动脉平滑肌细胞,采用两步超速离心法制备低密度脂蛋白后,运用CuCl2氧化法制备氧化低密度脂蛋白,采用100 mg/L的氧化低密度脂蛋白作用于平滑肌细胞72 h.建立泡沫细胞模型.②在平滑肌细胞和泡沫细胞分别加入格列本脲,使终浓度为200μmol/L,孵育24 h,用放射性同位素标记法检测ACAT1酶活性.结果: ①平滑肌细胞转变为泡沫细胞后,ACAT1酶活性上升(P<0.05).②平滑肌细胞被格列本脲干预后,ACAT1酶活性无明显变化(P>0.05);肌源性泡沫细胞加入格列本脲后,ACAT1酶活性下降(P<0.05)结论:格列本脲能抑制肌源性泡沫细胞内ACAT1的酶活性,抑制平滑肌细胞向泡沫细胞的转化,有可能成为防止动脉粥样硬化的有效药物.
作者：狄鸣；成蓓；郑琼莉 刊期： 2008年第24期
背景:研究证实,艾灸有可能通过细胞因子调节环氧合酶2及前列腺素E2表达、影响细胞凋亡.目的:实验拟观察环氧合酶2、Bcl-2、Bax的表达及前列腺素E2的含量与溃疡性结肠炎的关系,探讨灸疗的影响作用并比较隔药灸和温和灸治疗作用的差异.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-04/2007-03在上海中医药大学实验动物中心和国家中医药管理局针灸免疫实验室完成.材料:SPF级雄性SD大鼠40只,体质量(140±20)g,采用免疫学方法加局部刺激制备溃疡性结肠炎大鼠模型.方法:40只大鼠随机数字表法分为正常组、模型组、隔药灸组、温和灸组,每组10只.正常组:不做任何治疗.模型组:只作与各治疗组相同的抓取固定.温和灸组:选取天枢、气海穴悬灸,每次每穴灸10min.隔药灸组:选取天枢、气海穴隔药灸,每次每穴灸2壮.疗程:1次/d,共灸14次.主要观察指标:免疫组织化学法检测溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中环氧合酶2、Bcl-2、Bax的表达;放射免疫法测定溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中前列腺素E2的含量.结果:纳入SD大鼠40只,造模过程有1只大鼠死亡,解剖见结肠明显扩张,未见穿孔,39只进入结果分析.模型组大鼠结肠组织环氧合酶2、Bcl-2的表达及前列腺素E2的含量高于正常组(P<0.01);而Bax的表达低于正常大鼠(P<0.01).经过灸治后,与模型组比较,隔药灸组和温和灸组环氧合酶2、Bcl-2的表达及前列腺素E2的含量均显著降低(P<0.01);隔药灸组Bax的表达上调(P<0.05).结论:灸疗干预可调节溃疡性结肠炎大鼠结肠组织环氧合酶2、Bax、Bcl-2的表达并降低前列腺素E2的含量,隔药灸的作用优于温和灸.
作者：崔云华；周爽；吴焕淦；王晓梅；谭琳蓥；刘慧荣 刊期： 2008年第24期
目的:以往关于运动训练对组织抗氧化能力影响的研究主要集中在耐力训练,在此基础上,进一步观察大鼠在不同功能状态下骨骼肌抗氧化能力与运动训练的关系,认识生物体对运动训练所产生的适应性变化机制.方法:实验于2003-04/06在曲阜师范大学体育科学学院生理实验室完成.①分组干预:选取雄性Wistar大鼠56只,随机分为对照组和训练组2组各28只,训练组进行8周的跑台训练,对照组不干预.然后两组分别在塑料桶中进行2 d适应性游泳,第3天,两组大鼠分别于安静状态、定量负荷运动后、力竭运动后即刻、力竭运动24 h后麻醉处死,每个时相点7只大鼠.②观察指标:观察不同功能状态下大鼠骨骼肌中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性以及总抗氧能力变化.结果:56只大鼠进入结果分析.①在安静状态、力竭运动24 h后,对照组骨骼肌中超氧化物歧化酶的活性、总抗氧能力、谷胱甘肽过氧化物酶活性都明显低于训练组(P<0.05).②定量负荷运动后,对照组骨骼肌中总抗氧能力明显低于训练组(P<0.05),而骨骼肌中超氧化物歧化酶的活件明显高于训练组(P<0.05).③力竭运动后训练组骨骼肌中超氧化物歧化酶的活性、总抗氧能力都明显高于对照组(P<0.05).结论:运动训练能提高大鼠安静状态下骨骼肌中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性以及总抗氧化能力可因,抑制因力竭运动导致的超氧化物歧化酶活性、总抗氧能力的下降.
作者：李涛 刊期： 2008年第24期
目的:大强度运动不利于人体脂蛋白的改善,只有低强度、长时间的有氧运动能有效地改善脂蛋白水平,防止疾病的发生.实验观察白藜芦醇对大强度运动训练大鼠血浆脂质过氧化水平和血脂含量的影响.方法:实验于2004-03/06在陕西师范大学运动人体科学实验室完成.①实验动物:选择雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、运动组、白藜芦醇+运动组,每组10只.实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求.②实验方法:运动组大鼠于动物跑台上进行8周的大强度运动训练,每天训练30 min,每周6天,坡度为0,跑速每周递增,分别为15 m/min,22 m/min,27 m/min,31 m/min,35 m/min,38 m/min,40 m/min,42 m/min.白藜芦醇+运动组每天按50 mg/kg体质量的剂量灌喂白藜芦醇,其他两组灌喂同剂量的牛理盐水.末次训练结束后,禁食8 h,乙醚麻醉,股动脉取血,肝素抗凝,制备血浆.③实验评估:测定血浆中超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛含量,三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇含量.结果:30只大鼠均进入结果分析.运动组、白藜芦醇+运动组大鼠血浆丙二醛、低密度脂蛋白胆固醇水平较运动组分别下降47.7%(P<0.01)和15.0%(P<0.05),血浆谷胱甘肽过氧化物酶、高密度脂蛋白胆固醇水平较运动组分别升高10.1%(P<0.05)和16.6%(P<0.05).结论:白藜芦醇对大强度运动所引起的抗氧化能力下降和脂质代谢紊乱有明显的改善作用.
作者：张琳；武胜奇；熊正英；邓树勋 刊期： 2008年第24期
背景:组织工程骨的血管化是构建过程中的关键环节.目的:动态观察带蒂筋膜瓣包裹组织工程骨的血管化过程,以及其修复大段骨缺损的一般规律.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-10/2006--04在南方医科大学南方医院创伤骨科实验室完成.材料:6月龄健康新西兰大白兔12只双侧髂骨抽取骨髓分离骨髓基质干细胞诱导分化成骨细胞.圆柱状(3×15)mm多孔β-磷酸三钙为法国贝奥路公司产品.方法:将成骨细胞与β-磷酸三钙复合培养7 d后细胞量达到1×109 L-1为组织工程骨,实验组兔左侧前肢内侧剥离带蒂筋膜瓣(2×1.5)cm包裹圆柱状组织工程骨植入1.5锄桡骨缺损处,对照组于同一只兔右侧桡骨1.5 cm骨缺损处植入未包裹组织工程骨.主要观察指标:植入后2,4,6,8,12周进行大体观察、组织学、放射学、骨密度和放射性核素骨显像检测.结果:①从第4周以后各时间点实验组修复效果均优于对照组,X射线相对阻射值定量分析实验组的评分高于对照组(P<0.05),骨密度值高于对照组(P<0.05),放射性强度高于对照组(P<0.05).②从第4周以后各个观察点实验组在血管化程度、新骨形成量、材料降解速度、骨缺损修复时间、骨修复改建质量都优于对照组.结论:采用蒂筋膜瓣包裹组织工程骨修复骨缺损,4周后,在血管化程度、新骨形成量、材料降解速度及骨缺损修复时间方面均优于无筋膜包裹的组织工程骨,提示早期的快速血管化直接影响到骨缺损修复的全过程.
作者：刘勇；裴国献；江汕；梁双武；赵培冉 刊期： 2008年第24期
背景:大多数证据支持关节炎症时滑膜表面形成血管翳与血管内皮细胞生长因子及其基质金属蛋白酶有关.目的:实验拟验证不同剂量内皮抑素对佐剂性关节炎模型大鼠血管内皮细胞生长因子、基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶9表达的影响.设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-01106在桂林医学院完成.材料:清洁级雄性Wistar大鼠40只,鼠龄6～8周,体质量146～153 g,建立佐剂性关节炎大鼠模型,内皮抑索为烟台麦得津生物工程股份有限公司产品.方法:造模后第6天选出右后足和两前足关节炎指数之和≥6的30只大鼠,随机数字表法分为4组.模型对照组以10mL/(kg·d)生理盐水14 d灌服,小剂量内皮抑素治疗组以终浓度2.5 mg/(kg·d)加2～4 mL生理盐水14 d灌服,大剂量内皮抑素治疗组以终浓度10 mg/(kg·d)加2～4mL生理盐水14 d灌服,不加干预的10只正常Wistar大鼠作为正常对照组,每组大鼠均10只.主要观察指标:模型组动物停止灌服后第6天应用酶联免疫吸附法检测各组血清血管内皮细胞生长因子、基质金属蛋白酶3及基质会属蛋白酶9的表达:滑膜炎症的组织病理学评分:关节炎症评分和关节X射线评分.结果:①小剂量和大剂量内皮抑素治疗组人鼠关节滑膜无明显肿胀等炎症表现,模型对照组关节滑膜增厚的炎症现象明显,3组关节滑膜组织病理学评分比较差异有显著性意义(P<0.01).②与模型对照组相比,正常对照组、小剂量及大剂量内皮抑素治疗组血管内皮细胞生长因子、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9表达均降低(P<0.01),且下降幅度与内皮抑素的浓度呈正相关.结论:内皮抑素能下调佐剂性关节炎滑膜细胞血管内皮细胞生长因子、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9的水平.
作者：周润华；莫汉有；朱姗姗；杨敏；覃央 刊期： 2008年第24期
背景:已有实验证实,人热休克蛋白22(Heat shock protein22,HSP22)存在于人的多种组织中,但构建其真核表达质粒是否可转染人血管内皮细胞并完整表达.目的:构建pEGFP-N1/HSP22真核表达质粒并观察在内皮细胞中的表达.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-03/10在南昌大学第二附属医院分子中心完成.材料:pEGFP-N1真核表达质粒及DH5α为南昌大学第二附属医院分子中心保存,MCF-7细胞来源于南昌大学生化实验室馈赠,人脐静脉血管内皮细胞(HUvEC)株购至南京基凯牛物技术公司.方法:采用反转录聚合酶链式反应从人MCF-7细胞中扩增热休克蛋白22基凶,将热休克蛋白22基因连接到真核表达载体pEGFP-N1中,并转化DH5α,获得阳性克降进行双酶切和测序鉴定.用脂质体法将重组质粒转染人脐静脉血管内皮细胞.主要观察指标:荧光显微镜、反转录一聚合酶链反应法及Western blot检测热休克蛋白22在人脐静脉内皮细胞中的表达.结果:①琼脂糖凝胶电泳检测聚合酶链反应扩增产物,热休克蛋白22基因片段长约613 bp,与预期分子量相符,测序结果证实克隆完全正确:其阳性克隆进行酶切鉴定与热休克蛋白22理论值相符.②反转录-聚合酶链反应法检测转染的人脐静脉血管内皮细胞中有热休克蛋白22mRNA表达;Western blot检测可见一特异性热休克蛋白22蛋白条带存在.结论:成功构建了携带人热休克蛋白22及pEGFP-N1真核表达质粒.并验证已在人脐静脉血管内皮细胞中表达.
作者：鲍慧慧；程晓曙；陈琦；洪葵；李萍；王玲 刊期： 2008年第24期
背景:研究表明柯萨奇B4病毒感染与1型糖尿病发病有关,但目前尚未明确其关系的确切机制.目的:构建柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C与质粒PQE-4.0的重组质粒,转入大肠杆菌中表达,并对表达产物进行功能鉴定.设计、时间及地点:随机对照实验,于2007-03/08在吉林大学免疫学教研窒完成.材料:CVB4、HeLa细胞病毒均为吉林大学病原生物教研室保存;菌株E.coli DH5α与M15为东北师范大学遗传所保存;质粒PUCm-T载体、PQE4.0载体由东北师范大学曾宪录教授惠赠.方法:提取柯萨奇B4病毒总RNA,经反转录一聚合酶链反应扩增非结构蛋白P2C基因,与PUCm-T载体连接,将PUCm-T-P2C质粒进行BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切,同收目的片断并定向克隆到PQE4.0表达载体中酶切鉴定.将PQE4.0-P2C 阳性重组质粒转化大肠杆菌M15,在IPTG诱导下表达.主要观察指标:①以十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳检测柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C的表达.②采用淋巴细胞转化实验和酶联免疫吸附实验检测大肠杆菌M15细胞重组蛋白粗提物.结果:①反转录-聚合酶链反应扩增得到的987 bp的cDNA片段,克隆入PUCm-T载体,酶切释放出长度约2773 bp和987 bp的两条片段,其中一条与非结构蛋白P2C的聚合酶链反应扩增产物片段大小基本一致,序列分析与Genbank 报道的序列一致.目的片段克隆入PQE4.0载体,酶切释放出长度约3 400 bp和987 bp的两条片段,其中一条与非结构蛋白P2C的聚合酶链反应扩增产物片段大小基本一致,获得PQE 4.0-P2C重组表达质粒.②十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示未诱导组无明显蚩白带,而诱导组在31 000位置均出现较明显的蛋白带,且随着诱导时间延长蛋白表达量也随之增加.③淋巴细胞转化实验与酶联接免疫吸附试验测定结果表明,表达产物具有良好的抗原性与特异性.结论:柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C在大肠杆菌中高效表达,且表达产物具有一定的免疫活性.
作者：张宸豪；张扬；周静；马爱新 刊期： 2008年第24期
背景:目前制备慢性支气管炎模型的方法主要有二氧化硫吸入法、脂多糖注入法,两种方法均不能直接反映吸烟与慢性支气管炎的关系.目的:建立小鼠熏烟致慢性支气管炎模型并探讨成模机制.设计、时间及地点:随机分组设计、对照动物实验,于2005-09/2006--01在广东医学院药理学教研室实验室完成.材料:选择健康4周龄昆明种小鼠40只,按随机数字表法分为2组,正常对照组和熏烟模型组,每组20只.方法:以单一烟丝为刺激物制备慢性支气管炎模型.熏烟模型组置于自制熏烟箱中进行熏烟,4次/d,0.5 h/次,连续60d.每次熏烟燃烧3g烟丝,烟雾用换气扇抽入熏烟箱.正常对照组小鼠不熏烟,后.次熏烟后24h麻醉后处死小鼠.主要观察指标:左肺组织苏木精-伊红染色行组织形态学观察,支气管肺泡灌洗液蛋白含量检测并进行白细胞计数和分类;血浆和肺组织匀浆超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量和总抗氧化能力检测.结果:40只小鼠均进入结果分析.与正常对照组比较,熏烟模型组小鼠支气管壁炎性细胞浸润.分泌物增多;肺泡灌洗液中蛋白含量、白细胞总数显著增加(P<0.01),血浆和肺组织匀浆中超氧化物歧化酶活性、总抗氧化能力降低,丙二醛含量增加(P<0.05).结论:成功建立了小鼠熏烟致慢性支气管炎模型,成模机制可能与氧化应激过强有关.
作者：覃冬云；吴铁；廖芸芸；王勤；陈志东 刊期： 2008年第24期
目的:骨形态发生蛋白2是目前研究为广泛、诱导成骨活性强的骨形态发生蛋白之一.实验拟构建绿色荧光蛋白标记的人骨形态发生蛋白2(human Bone Morphogenetic Protein-2,hBMP2)真核表达载体,为在真核细胞的高效表达和基因治疗打下基础.方法:实验于2006-03/2007-03在天津医科大学卫生部激素与发育重点实验室完成.①实验材料:含完整人骨形态发生蛋白2基因片段的pcDNA3.1/CT-hBMP2质粒由李曦铭博士惠赠;双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS(Invivogen公司),Zeo(Invivogen公司):pTA2R-T Easy(鼎国生物技术有限公司).②实验过程及评估:以重组质粒pcDNA3.1/CT-hBMP2为模板,结合已设计好的特异性引物,采用聚合酶链反应方法亚克隆出人骨形态发生蛋白2目的片段,将该片段分别与克隆载体pTA2-T-easy和双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的蘑组表达载体pSELECT-GFPzeo-hBMP2,并进行测序鉴定.结果:①聚合酶链反应获得长度约1 216 bp的目的片段,与预期片段相符.②经与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的骨形态发生蛋白2cDNA序列(NM-001200)100%匹配.结论:成功构建含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2真核表达载体.
作者：苗军；刘春蓉；黄鸿超；夏群；石可松 刊期： 2008年第24期
目的:胰岛素样生长因子Ⅰ通常被认为是软骨生长和稳定中关键的生长因子之一,可以促进软骨细胞合成Ⅱ型胶原和蛋白多糖.应用携带人胰岛素样生长因子Ⅰ基因的重组腺病毒(Adenovirus-human insulin like growth factor-Ⅰ transgene construct,Ad-hIGF-Ⅰ)体外转导培养关节软骨细胞,探讨其在体外促进软骨细胞外基质成分生成的能力.方法:实验于2005-01/2007-04在大连医科大学附属四院骨科实验室完成.分离培养3周龄兔膝关节及股骨头软骨细胞,将受测细胞随机分为转导组与未转导组,以500感染复数的Ad-hlGF-I转导第1代软骨细胞,转导组中的第1,3,5,7代细胞分别为转导后48 h,3周,7周和9周的软骨细胞.采用样本碱水解法、阿利新蓝法和酶联免疫吸附方法检测转导组和未转导组的第1,3,5,7代细胞羟脯氨酸、糖胺多糖、胰岛素样生长因子I蛋白浓度.结果:①倒置显微镜观察,转导组兔关节软骨细胞生长增殖稳定,至第7代仍旧以三角形、梭形及纺锤形细胞为主,偶见长梭形和树根形细胞,且轮廓清晰,透亮度大,折光性强;而末转导组细胞培养至第4代时即己出现长梭形细胞,自第5代细胞形态几乎全部变成长梭形.②随着培养时间延长和传代次数增加,软骨细胞上清液中胰岛素样生长因子I蛋白、羟脯氨酸和糖胺多糖浓度的逐渐降低,转导组软骨细胞均高于同代未转导组细胞(P<0.05).结论:携带人胰岛素样生长因子I基因的重组腺病毒体外转导的关节软骨细胞,可以稳定产生内源性的胰岛素样生长因子I,并进而促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原和蛋白多糖.
作者：江海良；夏青；魏振；黄爽；贾静 刊期： 2008年第24期
背景:抗骨增生胶囊在治疗骨关节疾病方面有很好的疗效,基础研究多集中于颈椎病等骨关节疾病上.目的:拟观察抗骨增牛胶囊含药血清对白细胞介索1β引起的软骨细胞增殖凋亡及基质金属蛋白酶分泌的影响.设计、时间及地点:分组对照体外细胞学实验,于2007-03/09在河北医科大学解剖教研室细胞培养中心完成.材料:新生1周sD大鼠,用于培养软骨细胞;体质量200 g左右SD大鼠10只,以中药水溶液灌胃后定时取血制备含药血清.方法:采用胶原酶NB4消化法从大鼠关节软骨中分离出软骨细胞并进行原代和传代培养,实验分为3组:空白血清组:90%L-DMEM+10%空白血清,每口给予同等量的生理盐水;白细胞介索1β组(90%DMEM+10%空白血清+自细胞介素1β);中药血清+白细胞介素1β组(90%DMEM+10%中约血清+白细胞介素1β).白细胞介素1β加入量为5μg/L,培养72 h.将实验用细胞消化传代后制成单细胞悬液,以1×108L-1的密度接种于96孔培养板,100μL/孔,每组6孔.主要观察指标:倒置显微镜下观察中药含药血清对软骨细胞增殖的影响:四甲基偶氮唑盐比色法检测其各孔吸光度变化;流式细胞仪分析凋亡细胞百分率;基质金属蛋白酶13 Elisa试剂盒检测不同组基质金属蛋白酶13分泌情况.结果:在正常培养基条件下,细胞形态均匀,死亡脱落细胞较少.空白血清组软骨细胞的增殖速度缓慢,细胞较稀疏.白细胞介索1β组细胞明显稀疏,部分细胞胞浆中窄泡增多,细胞核形态不规则.在中药血清培养基作用下,软骨细胞增殖的速度较白细胞介素1 B组快,胞体显著增大,细胞核形态规则.白细胞介素1β组细胞增殖数量减少,凋亡细胞百分率增加,其培养的细胞上清液中基质金属蛋白酶13含量升高,抗骨增生胶囊含药血清可对抗白细胞介素1β对软骨细胞的影响.结论:体外条件下,抗骨增生胶囊含药血清能够抑制白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡:降低基质金属蛋白酶13水平.
作者：宋永周；刘会玲；崔慧先；郭威；李莎 刊期： 2008年第24期
目的:为寻找一种操作简便、结果稳定可靠的组织处理及切片染色技术,尝试应用组织切片手工显微切割后快速提取DNA的方法,观察提取的DNA质、量是否能满足后续分子水平研究的需要.方法:实验于2004-07/2007-07在广东医学院病理学实验室完成.取广东医学院附属医院病理科提供的子宫颈癌石蜡包埋组织切片,将切片贴于载玻片长时间完全脱蜡后,用苏木精对细胞核进行淡染,再在倒转置显微镜下进行显微切割,将切割下的组织放入装有提取缓冲液的EP管中,整个过程不需更换EP管,不经过复杂的酚一氯仿抽提,采用细胞裂解并蛋白酶K消化的方法,快速、简便提取DNA.结果:经分光光度计检测提取的DNA浓度为0.14～5.25 g/L,A260A280值在1.6-1.8i PCR检测扩增出了预期长度为231 bp的目的片段.结论:手工组织显微切割后快速DNA提取法可以提供足量浓度的DNA,PCR反应模板结果稳定可靠,可满足后续分子水平研究的需要.
作者：唐泽立；罗泊涛；苏维勇；胡新荣；郑晓娟 刊期： 2008年第24期
中国组织工程研究杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
