学术投稿

TGF-β1mRRA荧光实时定量PCR检测初筛方法的建立及初步运用

胡璟谊;李君;季敬璋;吕建新

关键词:逆转录-聚合酶链反应, 转化生长因子-β1, 糖尿病
摘要:目的:建立荧光实时定量检测人转化生长因子异构体(TGF-β1)mRNA的方法.方法:抽取外周静脉血,予EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,在扩增体系中加入SYBR Green Ⅰ,应用FQ-RT-PCR定量检测TGF-β1mRNA.结果:该法检测TGF-β1mRNA的灵敏度达105拷贝/ml,线性范围为105~1011拷贝/ml,Ct值的批内、批间变异系数分别为2.27%~2.56%和4.78%~5.22%.临床应用显示,糖尿病患者PBMC中TGF-β1mRNA的含量显著高于正常对照组(P<0.05).结论:FQ-RT-PCR应用于检测TGF-β1mRNA的初筛方法具有简便、快速等特点,为临床应用提供了方法学依据.
温州医科大学学报杂志相关文献
  • 优质生产程序标准化探讨:骨组织工程骨髓基质干细胞体外原代培养

    目的:探讨其组织工程化骨的种子细胞体外培养的优标准,为将生产程序标准化应用于临床奠定基础.方法:以新西兰免骨髓作为实验材料进行3种不同方案的原代体外培养.结果:原代细胞培养成功高可达几率为75%,应用β-甘油酸钠10 mmol/L、地塞米松10-7 mol/L、L-抗坏血酸50 mg/L为骨髓诱导成骨细胞所必需.培养初期间隔12 h振荡有利于细胞贴壁存活.能够缩短原代培养时间.结论:本实验所采用的振荡、诱导方案,方法简便,质量稳定,可操作性强,具备成为骨种子细胞推广的标准化方法,对于人体组织工程的质量控制和工业化生产有借鉴价值.

    作者:彭磊;万明习;薛恩兴 刊期: 2006年第04期

  • 人工肝支持系统治疗并发症的预防和应急处理

    目的:探讨人工肝支持系统(ALSS)治疗时并发症的预防及处理应急措施.方法:以瑞典金宝PRISMA血液净化仪对80例重症病毒性肝炎患者进行259次治疗,其中血浆置换(PE)167次,血液灌流(HP)36次,血液滤过(HF) 31次,血液透析(HD)25例.观察并发症的发生及处理情况.结果:ALSS治疗中共发生并发症60次,占23.17%,其中以血浆置换的并发症高,达23.95%.并发症中以过敏发生率为高(占11.97%),其次为血压下降(占5.41%),出现并发症均经对症处理后好转.结论:注意预防和有效处理并发症,是提高ALSS治疗成功的重要因素之一.

    作者:赵晓燕;马旭阳;朱碧红;黄晓美 刊期: 2006年第04期

  • 葛根素对家兔肝缺血再灌注损伤时血小板聚集功能的影响

    目的:探讨葛根素对家兔肝缺血-再灌注损伤时血小板聚集功能的影响.方法:30只家兔,随机均分为对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)和葛根素组(Pur组).观察血小板大聚集率(Ptmax)、大聚集时间(PtT)及聚集坡斜率(PtS)的变化.结果:IR组与C组比较,各时间点Ptmax、PtS明显升高,PtT显著缩短,Pur组与IR组相比较,Ptmax明显降低(P<0.01),PtT明显缩短(P<0.05),PtS明显升高(P<0.05).结论:葛根素可通过抑制血小板聚集功能,改善肝脏微循环,从而防治肝脏缺血再灌注损伤.

    作者:王青;许冬武;王万铁 刊期: 2006年第04期

  • 多巴胺诱导白血病细胞系K562凋亡的实验研究

    目的:观察多巴胺对白血病细胞系K562的诱导凋亡作用.方法:采用液体培养实验、MTT实验、集落培养实验观察多巴胺对K562细胞增殖的影响,采用瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化和流式细胞术检测多巴胺作用后K562细胞凋亡峰的出现,三方面评价多巴胺对K562细胞的诱导凋亡作用.结果:液体培养结果,MTT及集落培养结果显示多巴胺能抑制K562细胞增殖;瑞氏-吉姆萨染色显示的形态学结果及流式细胞术结果显示多巴胺诱导K562细胞亚二倍峰的出现,表明多巴胺有诱导K562细胞凋亡的改变.结论:多巴胺有诱导K562细胞凋亡的作用.

    作者:袁琳波;何群 刊期: 2006年第04期

  • 血液分析仪检测有核红细胞异常增多一例

    患者,男,72岁.因面色苍白,黑便4次入院.入院时全身浅表淋巴结未及肿大,中度贫血貌,心肺(-),腹软,胸骨无压痛,反跳痛.

    作者:叶映月;陈小剑 刊期: 2006年第04期

  • 银杏叶提取物对糖尿病大鼠血液、睾丸组织中内皮素和一氧化氮水平的影响

    目的:探讨银杏叶提取物(EGb)对糖尿病大鼠血液、睾丸组织中内皮素(ET)和一氧化氮(NO)水平的影响.方法:将SD大鼠分为三组:正常对照组、糖尿病组、EGb治疗组.EGb治疗5 w后,分别测定三组大鼠血液中葡萄糖、胰岛素、ET和NO水平以及睾丸组织中ET、NO水平和一氧化氮合酶(NOS)活性.结果:EGb治疗组与糖尿病组大鼠比较血糖明显降低(P<0.01),血清胰岛素水平轻度升高(P>0.05).各组大鼠血浆中ET水平无明显差异(P>0.05),血浆NO水平糖尿病组显著高于对照组,而EGb治疗组明显低于糖尿病组(P<0.05).睾丸组织中ET水平糖尿病组显著高于对照组(P<0.05),EGb治疗组低于糖尿病组(P>0.05);EGb治疗组大鼠睾丸组织中N0水平、NOS和iNOS活性显著低于糖尿病组(P<0.01和P<0.05).结论:EGb可通过降低糖尿病大鼠血液中葡萄糖和NO水平及睾丸组织中ET、N0水平和NOS活性,从而减轻糖尿病对睾丸组织所造成的损害.

    作者:吴步猛;李旭升;陈三妹;毛孙忠;陈筱菲;李安乐;陈国荣 刊期: 2006年第04期

  • 室温离子液体中的Knoevenagel缩合反应

    目的:研究在以室温离子液体为介质时Knoevenagel缩合反应的效果.方法:在不同室温离子液体中,进行芳香醛与丙二酸二乙酯等活泼亚甲基化合物的Knoevenagel缩合反应,离子液体回收后重复利用.结果:在室温离子液体中,芳香醛与活泼亚甲基化合物以85%~93%的产率生成缩合产物,其产率较高,无需催化剂,产物易纯化,离子液体可回收重复使用.所使用的离子液体阳离子部分相同,阴离子不同,作为反应介质时产率相差不大.结论:以离子液体为介质时Knoevenagel缩合反应条件温和,产率高,离子液体可反复利用,对环境污染少.

    作者:杨新宇;杨丽珠;王建光 刊期: 2006年第04期

  • IgG抗C抗体引起新生儿ABO溶血病患儿溶血严重程度分析

    目的:探讨IgG抗C抗体引起新生儿溶血病患儿溶血的严重程度.方法:以微柱凝胶抗球蛋白法检查新生儿溶血病,用吸收放散试验检测抗体类型,以贝克曼LX-20型生化仪检测胆红素值.结果:103例患儿中由IgG抗C抗体引起的ABOHDN占18.5%,由IgG抗C和IgG抗A(B)共同引起的ABOHDN占33.0%,而单独由IgG抗A或IgG抗B引起的ABOHDN为48.5%;IgG抗C、IgG抗C和IgG抗A(B)及IgG抗A(B)引起的新生儿溶血病患儿血清胆红素升高出现时间差异无显著性(HC=0.42,P>0.05);胆红素升高时间大部分在第2和第3天(分别占56.0%、58.8%、63.2%),胆红素值升高亦差异无显著性(HC=0.43,P>0.05).结论: IgG抗C抗体是引起新生儿AB0溶血病的主要的抗体,其引起的溶血病患儿血清胆红素升高出现时间和患儿病情严重程度与IgG抗A或IgG抗B引起的溶血病无差别.

    作者:朱碎永;朱燕英 刊期: 2006年第04期

  • TGF-β1mRRA荧光实时定量PCR检测初筛方法的建立及初步运用

    目的:建立荧光实时定量检测人转化生长因子异构体(TGF-β1)mRNA的方法.方法:抽取外周静脉血,予EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,在扩增体系中加入SYBR Green Ⅰ,应用FQ-RT-PCR定量检测TGF-β1mRNA.结果:该法检测TGF-β1mRNA的灵敏度达105拷贝/ml,线性范围为105~1011拷贝/ml,Ct值的批内、批间变异系数分别为2.27%~2.56%和4.78%~5.22%.临床应用显示,糖尿病患者PBMC中TGF-β1mRNA的含量显著高于正常对照组(P<0.05).结论:FQ-RT-PCR应用于检测TGF-β1mRNA的初筛方法具有简便、快速等特点,为临床应用提供了方法学依据.

    作者:胡璟谊;李君;季敬璋;吕建新 刊期: 2006年第04期

  • P波离散度对房颤电复律后短期内复发的预测价值

    目的:观察房颤电复律后短期内复发率是否与P波离散度(Pd)值有关.方法:入选56例持续性房颤并成功转复的患者,按短期有无复发分成两组,比较测定大P波时限(Pmax)、小P波时限(Pmin)及Pd.结果:短期复发组(30例)Pmax、Pd值显著大于未复发组(P<0.05);以Pd≥40ms作为异常指标,其敏感性为90%,特异性为88.5%,阳性预测值为90%,准确性为89.3%.结论:电复律后即刻Pd对房颤短期复发率有一定的预测价值.

    作者:胡公义;兰华欣;王征;乔建洪;冯湘君 刊期: 2006年第04期

  • 三羟异黄酮对大鼠肠缺血再灌注损伤的保护作用

    目的:研究三羟异黄酮对肠缺血再灌注损伤的影响.方法:24只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(S组)、肠缺血再灌注损伤组(IIRI组)和三羟异黄酮组(G组).观察三组肠组织病理学变化,测定比较肠组织湿/干重比(W/D)、髓过氧化物酶(MP0)活性、细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子-1(CINC-1)含量和血浆D-乳酸含量.结果:与S组比较,IIRI组肠损伤严重,W/D、MP0活性、CINC-1含量和血浆D-乳酸含量升高(P<0.01);与IIRI组比较,G组肠损伤明显减轻,W/D、MPO活性、CINC-1含量和血浆D-乳酸含量降低(P<0.05或P<0.01).结论:三羟异黄酮对肠缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与其下调CINC-1的表达而抑制中性粒细胞在肠组织的聚集有关.

    作者:占恭豪;李兴旺;张冰;尚游 刊期: 2006年第04期

  • 急性自体血栓肺栓塞大鼠动物模型制备

    目的:用自体血栓模拟自然发生的静脉血栓注入肺动脉,制备急性肺栓塞大鼠动物模型.方法:采用改良右心导管法将大鼠自体血栓注入肺动脉导致急性肺栓塞的发生.通过控制注入血栓的数量、速度,同时动态监测肺动脉压、体动脉压变化.用肺灌注扫描显像(emission computed tomography,ECT)和苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色组织光镜来观察判断造模成功与否.以肺系数法测肺水肿程度.结果:PE组0.5~4 h大鼠肺动脉压显著升高,体动脉压显著降低,PE组与C组比较差异有显著性(P<0.01);PE组2~4 h和C组比较,肺系数显著升高(P<0.01);ECT显像见肺组织明显呈放射性充盈缺损和稀疏,HE染色光镜下见注入血栓团块.结论:本模型各项变化符合急性肺栓塞的病理生理基础变化,是一有效、稳定的肺栓塞动物模型.

    作者:叶瑞海;陈少贤;王良兴;陈彦凡;张琦;李焕斌;范小芳 刊期: 2006年第04期

  • HPV16E749-57及其修饰肽对小鼠肿瘤生长特性和转移规律的影响

    目的:探讨人乳头瘤病毒16型E7抗原表位E749-57及其修饰肽是否能够在体诱导特异性细胞毒性T细胞杀伤效应,以及是否具有相应的治疗作用.方法:以HPV16E749-57及其修饰肽免疫荷瘤小鼠,研究小鼠肿瘤的生长特性和转移规律.结果:经修饰肽和原有表位HPV16E749-57免疫的荷瘤小鼠,瘤细胞的转移率显著降低,平均存活时间明显延长.结论:修饰肽具有特异性细胞毒性T细胞诱导活性,并且能够起到一定的治疗作用.

    作者:徐云升;林治华;郝飞;李秉煦;林霖霖 刊期: 2006年第04期

  • 半导体激光加牵引治疗颈性眩晕的疗效观察

    颈性眩晕是因为颈源性因素引起的眩晕综合征,主要见于椎动脉型颈椎病,是中老年人的一种常见病症.我科自2004年8月至2005年8月采用半导体激光穴位照射加牵引治疗,取得显著疗效,报告如下.

    作者:董海欣;倪蓓;谢文霞 刊期: 2006年第04期

  • 急性下肢深静脉血栓形成的诊治分析

    目的:总结急性下肢深静脉血栓形成(DVT)的诊治.方法:回顾分析2000年1月至2005年10月65例DVT的临床资料.结果:二维彩色多普勒超声显像诊断DVT正确率达94.5%.65例经过抗凝、溶栓、手术等综合治疗,显效38例,有效22例.结论:二维彩色多普勒超声检查是DVT的首选诊断方法.抗凝、溶栓、祛聚与手术二者相互结合的综合治疗,效果满意.

    作者:叶永根;梅丽珍;钟准;牟莉;金晓波 刊期: 2006年第04期

  • 饮水型砷暴露地区人群皮肤损害的剂量-反应关系

    目的:确认暴露人群的皮肤症状特征以及与暴露量的关系.方法:选择饮水型砷暴露病区村民125人及对照村村民48人,进行饮水砷含量测定及问诊和皮肤病诊查.结果:砷暴露地区水井中平均砷含量158.3 μ g/l,高浓度为197.26 μ g/l;对照村水井中未检出超标砷含量.砷暴露村民中皮肤病患病率45.6%,70%以上的病人年龄分布在40岁以上;对照村村民皮肤病患病率12.5%,年龄分布在30~50岁范围.调整性别和年龄后,皮肤病患病率随饮水砷浓度的增高而上升.水砷浓度在51~150 μ gg/L组和150 μ g/L以上组的患病率分别为24.3%(0R=9.97,95%CI:1.54-64.47)及46.2%(0R=10.21,95%CI:2.71-38.51);另外,在调整性别、年龄和砷暴露水平后,与饮水时间低于5年组相比,饮水时间高于5年或更长的分组中,皮肤病患病率没有显著性差异(0R=1.00,95%CI:0.06-15.99,OR=1.00,95%CI:0.10-9.83).结论:砷中毒皮肤损害与饮水中的砷暴露水平有相关性,与饮水时间的相关没有显著差异.

    作者:朱红叶;叶晓蕾;郭小娟;武克恭;尤林贵;伊力奇;罗金汉 刊期: 2006年第04期

  • 实时荧光定量分析SK-N-SH细胞中β-actin mRNA的半衰期

    目的:探讨和分析SK-N-SH细胞中β-actin mRNA的半衰期.方法:建立包含β-actin基因片断的pMD-T载体的梯度稀释曲线,应用VIC标记的Taqman-MGB探针进行检测,用Opticon2.02软件分析结果.以不同浓度和不同时间的放线菌素D阻断SK-N-SH细胞转录,提取总RNA并予荧光定量RT-PCR检测β-actin mRNA.结果:SK-N-SH细胞中β-actin mRNA的半衰期为4 h.与未处理组相比,4 h组β-actin的拷贝数差异有显著性(P<0.05),12 h和24 h组β-actin拷贝数差异有极显著性(P<0.01).不同浓度之间放线菌素D对β-actin拷贝数的影响差异不大(P>0.05).结论:应用实时荧光定量RT-PCR,通过比较mRNA与总RNA的拷贝数,建立了一种准确方便地检测mRNA衰减的方法.同时β-actin不适合做放线菌素D处理实验中的内参照.

    作者:胡昕;吕建新 刊期: 2006年第04期

  • 锁孔入路显微手术治疗颅内肿瘤

    目的:探讨锁孔入路显微手术治疗颅内肿瘤的手术方法和临床经验.方法:针对各例颅内肿瘤,进行个体化的手术方案设计,分别采用经眶上、翼点、颞下及纵裂四种锁孔入路手术.结果:本组16例颅内肿瘤显微镜下全切,1例侧脑室内肿瘤作大部分切除.手术时间明显缩短,出血量减少.未出现与入路相关的并发症,无一例死亡.结论:锁孔入路手术能清晰显露肿瘤和瘤周相关的结构,并为切除肿瘤提供足够的操作空间,具有脑暴露少,创伤小,恢复快等优点.

    作者:叶锦平;王保平;林伟;梅祎民;张翼;何士科;麻伟兴;余峰 刊期: 2006年第04期

  • B7/CD28在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞中的表达及意义

    目的:探讨B7/CD28分子在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者外周血淋巴细胞中的表达及意义.方法:采用流式细胞仪检测69例AS患者和50例健康对照者外周血淋巴细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD19的表达情况,检测CD28在CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞上的表达以及B7-1和B7-2在CD19+B细胞上的表达情况.用ELISA法测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的水平.结果:AS患者CD3+、CD3+CD4+、CD19+细胞较正常对照组增高(P<0.05),CD3+CD8+T细胞较正常对照组降低(P<0.05);AS患者CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞上的CD28、CD19+B细胞上B7-1和B7-2的表达较正常对照组增高(P<0.05);AS患者血清中IgG、IgA的水平较正常对照组显著增高(P<0.01).结论:B7/CD28分子的异常表达可能与AS患者T淋巴细胞和抗原呈递细胞(APC)的功能变化有关.B7-1低水平与B7-2的高水平表达表明,AS患者T细胞的活化可能主要是通过CD28与B7-2的交联传递共刺激信号,介导以Th2型反应为主的免疫应答反应,产生大量的免疫球蛋白.

    作者:韩义香;章圣辉;吴建波 刊期: 2006年第04期

  • 前列腺组织中细菌16S rRNA基因和IgA的表达

    目的:探讨慢性前列腺炎(CP)的细菌学病因.方法:前列腺标本取自140例意外死于非前列腺疾病的器官捐献者,年龄20~35岁.取前列腺周围带组织,分成两块,一块做常规病理检查和抗IgA抗体组化染色,另一块用PCR方法检测细菌16S rRNA基因(16S rDNA).结果:32.9%(46/140)的组织病理呈CP,其中轻度灶性间质炎42例,轻度灶性间质伴腺体周围炎3例,轻度灶性腺体周围炎1例.16S rDNA阳性率为19.3%(27/140).其中前列腺炎标本阳性率为48.9%(22/46),非前列腺炎标本阳性率为5.3%(5/94),前列腺炎标本阳性率高于非前列腺炎标本(x2=36.910,P<0.01).在CP标本中,16S rDNA阳性组IgA表达高于16S rDNA阴性组(Z=-3.85,P<0.001).结论:细菌感染可能是引起CP的重要原因.

    作者:谢辉;黄慧聪;杨亦荣;吴建波;何秋香;朱启建;陈建欧;王思齐;李澄棣;夏鹏;沈龙捷 刊期: 2006年第04期

温州医科大学学报杂志

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