吴鸳鸯；施卫星；陈枢青
目的:制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ(SEI)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定.方法:以SEI蛋白免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,经ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株;采用杂交瘤细胞免疫小鼠,制备并纯化了单克隆抗体,并对所获得的单克隆抗体进行性质鉴定.结果:终获得了两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞8F7与D8,两者分别为IgG2b型与IgG1型;亲和常数分别为9.215×108 L·mol-1和1.968×1010 L·mol-1;两者均有较强的特异性,与纯化的SEG、SEE、SEC及金黄色葡萄球菌上清液均未有交叉反应;相加实验表明两个单克隆抗体识别的为相同表位.结论:单克隆抗体的成功制备,为初步建立肠毒素SEI的双抗夹心测定方法奠定了基础.
作者：徐君英；丁丁；孙红颖；陈枢青 刊期： 2009年第03期
目的:为探索慢性原发性失眠的人格特征及听觉诱发电位(auditory evoked potential,AEP)的强度依赖性.方法:本研究比较了37名慢性原发性失眠患者(失眠组)与44名健康自愿者(对照组)的AEP对声音刺激的强度依赖性.采用Zuckerman感觉寻求量表(Zuckerman's sensation seeking scales,SSS)、Zuckerman-Kuhlman人格问卷(Zuckerman-Kuhlman's personality questionnaire,ZKPQ)测量受试者的人格特征,Plutchik-van Praag's 抑郁问卷(Plutchik-van Praag's depression inventory,PVP)测量受试者的心境状态.结果:与对照组比较,失眠组患者神经质-焦虑、PVP得分偏高(P<0.01),冲动、攻击-敌意也偏高(P<0.05);AEP的N1- P2幅度随着刺激强度的增加而增加,在70、80、90、100 dB之间存在差异(P<0.01);ZKPQ活泼得分与80 dB时的N1潜伏期、100 dB时的P2潜伏期呈低等程度相关(r=0.270和r=0.276,P<0.05);感觉寻求量表总分与70、90 dB时的N1-P2幅度有中等程度相关(r=0.3746和r=0.35329,P<0.01);经历寻求与70、80、90 dB时的N1-P2幅度也呈中等相关(r=0.539、r=0.3439,P<0.01),经历寻求与100 dB时的N1-P2幅度呈明显相关(r=0.439、r=0.3278,P<0.05);不甘寂寞与ASF斜率呈低等程度负相关(r=-0.282998,P<0.05),危险和冒险寻求与90 dB时的N1-P2幅度有相关(r=0.2789,P<0.05);PVP与70 dB时的N1-P2幅度、80 dB时的N1潜伏期呈负相关(r=-0.3434、r=-0.3158,P<0.05).结论:慢性原发性失眠患者具有神经质-焦虑、抑郁、攻击-敌意和冲动等人格特质得分增高,且与AEP强度依赖性有关.
作者：沈健；水仁德；冯磊；刘榆红；何畏；黄静怡；王伟 刊期： 2009年第03期
目的:探索微透析探针对单胺类神经递质的回收率受环境温度影响的程度.方法:通过改变微透析探针回收率测量时灌注液温度与待测物质标准液的温度,调节微透析探针的工作环境温度.这分为三种状态,即室温条件:灌注液及标准液温度均调节为室温(24℃);常规条件:灌注液温度调节为室温,标准液温度调节为体温(37.5℃);体温条件:灌注液及标准液温度均调节为体温.用相同的自制4 mm膜长微透析探针分别在三种状态下进行单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)混合溶液进行微透析实验,灌注液流速为2 μl/min.透析液中单胺类神经递质的含量采用高效液相色谱仪电化学法进行分析,并分别计算微透析探针对三种物质在三种状态下的回收率.结果:在室温条件下,探针对NE的回收率为18.3%,DA的回收率为19.6%,5-HT的回收率为16.9%;在常规条件下,探针对NE、DA、5-HT的回收率分别为29.6%、30.7%、24.3%;在体温组条件下,探针对NE、DA、5-HT的回收率变为49.2%、47.5%、37.2%.方差分析表明,在各温度条件下,探针对三种物质的回收率的总体均数均有显著性差异(P<0.01).结论:由灌注液温度及其流量和标准液温度决定的微透析探针工作环境温度,显著影响探针对物质的回收率,且对不同物质的影响程度也不同.这提示在进行微透析实验时,为减少温度对微透析探针回收率的影响,要对灌注液、标准液采取适当恒温措施,使微透析探针透析膜工作在恒温环境下进行.
作者：张恒义；施弘毅；王恩禹 刊期： 2009年第03期
目的:考察佐米曲坦对大鼠肝细胞色素P450 CYP3A1/2的诱导是否由孕烷X受体(PXR)介导.方法:在构建的基于PXR的荧光素酶报告基因上,观察不同浓度佐米曲坦(10、50、100 μmol·L-1)对大鼠肝细胞色素P450 CYP3A1/2的诱导作用.以经典的诱导剂16α-氰基孕烯醇酮(PCN)作为阳性对照,空白溶剂(DMSO)作为阴性对照.结果:与阴性对照组相比,阳性对照组、佐米曲坦在100 μmol·L-1浓度时,对CYP3A1有明显的诱导作用,活性分别增加了1.93、1.96倍(P＜0.05);阳性对照组、佐米曲坦10 μmol·L-1、50 μmol·L-1浓度组对CYP3A2也有明显的诱导作用,其活性分别增加了2.51、2.10、1.63倍(P＜0.01、＜0.05).结论:PXR通路是佐米曲坦诱导大鼠CYP3A1/2的一个重要途径.
作者：邢峰；余露山；曾苏 刊期： 2009年第03期
目的:构建肺炎链球菌调控感受态形成的二元信号传导系统(TCS)基因comD/comE/comC的原核表达系统,探讨ComD和ComC封闭后细菌耐药性变化.方法:采用PCR扩增全长comD、comE和comC基因,并用常规基因工程技术建立其原核表达系统.采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组蛋白rComD、rComE和rComC表达量.免疫家兔制备rComD、rComE和rComC抗血清.检测肺炎链球菌菌株ComD和ComC被抗血清封闭后对青霉素和头孢胺噻耐药性的变化.结果:与报道序列比较,所克隆的comD、comE和comC基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.4%～99.3%和99.1%～100%.所构建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-comD、E.coli BL21DE3pET42a-comE和E.coli BL21DE3pET32a-comC能有效表达目的重组蛋白rComD、rComE和rComC,其产量分别为细菌总蛋白的28%、25%和35%.rComD、rComE和rComC抗血清免疫双扩散效价分别为1∶4、1∶4和1∶8.ComD和/或ComC被抗血清封闭后,头孢胺噻敏感菌株可出现耐药性,但耐药菌株耐药性无明显改变,也不影响各菌株对青霉素的耐药性.结论:本研究成功地构建了肺炎链球菌comD/come/comC基因原核表达系统,为深入研究感受态形成相关TCS与耐药性关系奠定了基础.ComD和ComC与肺炎链球菌对头孢胺噻耐药性有关.
作者：樊欢；孙爱华；夏肖萍；孙琦；严杰 刊期： 2009年第03期
目的:建立一种同时检测人尿样中β-雌二醇(β-E2)、双酚A(BPA)、己烯雌酚(DES)和沙丁胺醇(SAL)含量的GC/MS分析方法.方法:采用GC/MS法,EI检测器,色谱柱为DB-5MS毛细管柱.进样前尿样分别经过cleanert PCX 和cleanert PEP固相萃取,吹干后衍生化.结果:β-E2在1～300 ng·ml-1呈线性关系,BPA在1～200 ng·ml-1呈线性关系,DES在2～300 ng·ml-1呈线性关系,SAL在0.01～1.2 μg·ml-1呈线性关系,低检测限分别为0.15 ng·ml-1、0.19 ng·ml-1、0.23 ng·ml-1和1.0 ng·ml-1,回收率分别为93.4%～110.5%、84.7%～104.9%、87.0%～105.4%和81.8%～96.8%.结论:本实验室合并了β-E2、BPA、DES和SAL这两类环境污染物的检测方法,而且低检测限与单个检测方法相当,可用于同时监控和测定β-E2、BPA、DES和SAL对人体的危害.
作者：吴鸳鸯；施卫星；陈枢青 刊期： 2009年第03期
磁共振成像(MRI)技术是目前头颈部疾病常用的影像学诊断技术之一.金属及合金在口腔科应用非常广泛,在MRI中形成的伪影可造成信号强度减弱、图像变形及无信号区,严重影响图像质量,这些材料的使用限制了磁共振成像在头颈部的应用.文中就口腔常用金属材料对磁共振影像的影响,阐述了核磁共振成像伪影的产生及原理,口腔内金属修复体所形成的伪影对磁共振成像的影响,核磁共振序列选择及不同的图像权重与伪影的关系,以及如何预防和减小伪影,以供临床实践参考.
作者：金玲燕；林军 刊期： 2009年第03期
目的:建立三种大鼠反流性食管炎动物模型,探讨模型制作的方法和经验.方法:8周龄雄性Sprague Dawley大鼠70只,随机分为A、B、C、D 4组,A组20只采用食管空肠吻合,B组20只采用食管十二指肠吻合,C组20只采用全胃切除加食管空肠吻合,三种手术方式建立大鼠胃空肠食管反流、胃十二指肠食管反流、空肠食管反流动物模型,D组10只为假手术组.结果:完成实验后,大鼠的存活率为72.9%(51/70).A组死亡6只,B组死亡7只,C组死亡6只,三组动物模型死亡率无显著性差异.术后第12周,炎症发生率三组均为100.0%;糜烂、溃疡发生率分别为:A组11/14(78.6%),B组10/13(76.9%),C组3/14(21.4%);鳞状上皮异型增生发生率为:A组10/14(71.4%),B组10/13(76.9%),C组5/14(35.7%);Barrett食管发生率:A组6/14(42.9%),B组5/13(38.5%),C组1/14(7.1%);A组发生食管腺癌1例;D组组织学未见异常.结论:食管空肠吻合、食管十二指肠吻合、全胃切除加食管空肠吻合三种手术方式均可导致大鼠反流性食管炎,并有Barrett食管的发生,其中食管空肠吻合和食管十二指肠吻合方式病变的发生率要高于全胃切除加食管空肠吻合方式.良好的麻醉控制,正确的吻合方式,细心的操作,及时处理并发症及术后护理是成功建立模型的关键.该类模型稳定可靠,为进一步研究反流性食管炎、Barrett食管和食管腺癌打下了基础.
作者：王瑞华；欧阳钦；陈曦；李国栋；向军英 刊期： 2009年第03期
目的:建立一种同时检测人尿样中可的宁(COT)、苯乙醛酸(PA)和苯乙醇酸(MA)含量的GC/MS分析方法.方法:采用GC/MS法,EI检测器,色谱柱为DB-5MS毛细管柱.进样前尿样先经过氯仿萃取,吹干后用MSTFA衍生化.结果:COT在0.0002～3.5 μg·ml-1呈线性关系,PA和MA在1.25～160 μg·ml-1呈线性关系,定量限分别为0.0002 μg·ml-1、1.25 μg·ml-1和1.25 μg·ml-1,回收率分别为89.53%～102.4%、84.88%～91.46%和83.46%～113.6%.结论:本实验室合并了尼古丁和苯乙烯这两种环境污染物的检测方法,而且定量下限与单个检测方法相当,可用于同时监控和测定尼古丁和苯乙烯对人体的危害.
作者：吴鸳鸯；施卫星；陈枢青 刊期： 2009年第03期
目的:探索细胞骨架蛋白基因转录是否涉及全反式维甲酸(RA)促胚胎干(ES)细胞早期定向分化神经元样细胞,以此构建快速评价药物对ES细胞定向分化神经元的促进或抑制作用.方法:采用悬滴培养法模拟体内胚胎发育状态,形成拟胚体,进而贴壁向神经细胞分化.利用RT-PCR法评价神经元呈特征性表达的一类细胞骨架蛋白基因微管相关蛋白(Mtap2)、神经丝(Nefm)和微管蛋白(β-tubulin Ⅲ)转录水平,作为RA促ES细胞定向分化神经元指标,结合光镜和免疫荧光法鉴定神经细胞的形成,由此构建快速评价体系.并在此基础上进一步评价合成化合物库内6个小分子对细胞骨架蛋白基因转录的影响.结果:RA诱导ES细胞定向分化神经元过程, Mtap2和Nefm转录水平均呈上调趋势,其中以Mtap2为甚,增加了1.27倍,并与同期细胞表型改变相一致,但β-tubulin Ⅲ无明显变化.6个合成小分子均使Mtap2转录受到抑制,但Nefm转录水平有不同程度上调,1号和3号化合物尤甚,分别增加了1.4和1.2倍,该上调作用与同期细胞表型改变不尽一致.结论:RA诱导ES细胞定向分化神经元早期,Mtap2和Nefm转录水平均呈上调趋势,其中Mtap2的表达与否与早期细胞表型改变相一致.
作者：许敏华；吴佳莹；欧丽丽；朱丹雁；俞永平；楼宜嘉 刊期： 2009年第03期
目的:评估促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-ant)方案在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的超促排卵过程中存在卵巢低反应风险患者中的应用价值.方法:回顾性分析48例存在卵巢低反应风险的IVF-ET周期,其中24例周期使用GnRH-ant方案,24例周期使用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)长方案.比较两组的降调节天数、促排卵的时间和剂量,分析两组hCG日E2峰值、获卵数、受精率、获得胚胎数、优质胚胎数、移植新鲜胚胎数、冷冻胚胎数、新鲜胚胎移植周期胚胎着床率、新鲜胚胎移植周期临床妊娠率、胚胎复苏率、冷冻胚胎移植周期临床妊娠率、累计临床妊娠率.结果:GnRH-ant方案组所需降调节天数、促排卵天数、Gn用量均少于GnRH-a长方案组(P<0.001、<0.05、<0.05),hCG日E2峰值、获卵数低于GnRH-a长方案组(均P<0.05),但获得的胚胎数、优质胚胎数、移植新鲜胚胎数、冷冻胚胎数、新鲜胚胎移植周期胚胎着床率、新鲜胚胎移植周期临床妊娠率、胚胎复苏率、冷冻胚胎移植周期临床妊娠率、累计临床妊娠率两组无统计学差异.结论:与GnRH-a长方案相比,GnRH-ant方案用于存在卵巢低反应风险的患者可减少促排卵天数及Gn用量,虽然hCG日E2峰值及获卵数降低,但并不影响胚胎着床率和临床妊娠率.
作者：孙瑜；朱依敏 刊期： 2009年第03期
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)为典型的受体酪氨酸激酶,能够与多种配体结合,在细胞增殖、存活、黏附、分化和凋亡等生命活动中发挥重要作用.EGFR及其介导的信号通路的异常与肿瘤的发生发展密切相关.很多环境理化因素可通过影响EGFR磷酸化、或其结构功能和细胞分布、或其配体和其它相关分子表达,干预EGFR信号转导过程、影响靶基因的表达从而终影响细胞生命活动.文中就此做一简要综述,以期更好地理解环境理化因素引起的细胞应激以及致突变致癌的表遗传分子机理.
作者：王巧玲；邵吉民 刊期： 2009年第03期
目的:纯化HSA/IL1ra融合蛋白并对其生物学活性进行检测.方法:采用亲和层析及离子交换层析分离纯化HSA/IL1ra融合蛋白,检测其对IL1引起的对A375 S2的杀伤保护作用.结果:获得的HSA/IL1ra融合蛋白HPLC纯度在98%以上,并且具有与天然IL1ra相似的、对IL1杀伤A375 S2细胞的保护作用.结论:获得高纯度的HSA/IL1ra融合蛋白并且具有相应的生物学活性.
作者：沈其；陈枢青 刊期： 2009年第03期
目的:探索刀豆蛋白 A(Con A)致小鼠免疫性炎症时,脑内花生四烯酸和谷胱甘肽代谢膜关联蛋白(MAPEG)家族蛋白的mRNA表达谱,及免疫抑制剂环孢素A(Cs A)对其表达的调控.方法:雄性Balb/c小鼠尾静脉注射Con A,20 mg/kg,制备免疫性炎症模型.另设尾静脉注射Cs A 150 mg/kg预给药.采用RT-PCR检测小鼠大脑皮层内MAPEG家族蛋白在mRNA水平的基因表达情况.结果:采用RT-PCR测得未经Con A处理小鼠大脑皮层内,mGST1、mGST3、LTC4S、FLAP和mPGES-1 mRNA均有不同程度表达,但未见mGST2 mRNA表达.给Con A后8 h,无论是否以Cs A预处理,脑内mGST1 mRNA表达显著增加,达到未处理组的1.2～1.5倍;而LTC4S、FLAP和mPGES-1 mRNA表达均未明显受Con A影响.结论:小鼠尾静脉注射Con A可诱导大脑皮层mGST1 mRNA表达上调,但未明显影响MAPEG其它5个成员;同时Cs A未能抑制该变化,提示Con A诱导的免疫性炎症对脑内花生四烯酸类炎症介质代谢影响不明显,但可能涉及氧化应激病理过程.
作者：张翔南；齐罗扬；朱丹雁；楼宜嘉 刊期： 2009年第03期
目的:探讨小儿经食管超声(TEE)引导室间隔缺损(VSD)镶嵌治疗的价值.方法:封堵器型号根据TEE所测的VSD大小(mm)+1～2 mm.在非体外循环下小切口入胸,经TEE全程监测,在跳动的右心室表面导入封堵器关闭VSD.结果:6例患儿VSD成功封堵,4例膜周部VSD,2例肌部VSD,缺损大小3～10 mm,其中1例伴肺动脉高压.1例多发性肌部VSD合并完全性大血管转位患儿,因封堵器影响二尖瓣开放改为直接手术修补;1例患儿术后出现束支传导阻滞,未经特殊治疗自行恢复正常,余未见其他手术并发症.平均手术时间30 min,术中出血5～20 ml,平均ICU住院时间24 h.患儿术后1～2 d出院,中期随访效果佳.结论:TEE在镶嵌治疗VSD中发挥重要价值,能全程监测和引导镶嵌治疗的进行及评价治疗效果.在TEE指导下,非体外循环镶嵌治疗肌部和膜周部VSD是安全可行的.
作者：叶菁菁；蒋国平；张泽伟；李建华；舒强 刊期： 2009年第03期
浙江大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：浙江大学
