学术投稿

体外培养大鼠骨髓基质细胞分化为成骨细胞新方法的建立和鉴定

毛曦;毛钊;王建军

关键词:骨髓基质细胞, 成骨细胞, 体外培养, 大鼠
摘要:目的改进成骨细胞骨髓培养法并进行鉴定. 方法建立分离和培养大鼠骨髓基质细胞(MSC)的新方法,并用活细胞形态学观察、HE染色、组织化学和放射免疫测定等技术进行观察和鉴定. 结果 MSC呈典型的成纤维样细胞,细胞生长旺盛,增殖能力强.体外培养第40d后碱性磷酸酶、骨钙素量达到高峰,维持至第60d左右开始下降. 结论改进后的成骨细胞骨髓培养法具有分离时间缩短、污染机会减少、工作效率提高等优点,并且有助于MSC分化和增殖为具有良好功能特性的成骨细胞.
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    作者:伍静文;张端莲;王瑞绵;杨勇;刘昱 刊期: 2003年第05期

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    作者:周宜灿;陈晓春;朱元贵;方芳;陈丽敏 刊期: 2003年第05期

  • NT-3基因修饰施万细胞与神经干细胞联合移植治疗全横断脊髓损伤的实验研究

    为探索一种治疗急性脊髓损伤的新策略,本实验先用核荧光标记培养的神经干细胞(NSCs);再用含神经营养素-3基因的腺病毒(AdvNT-3)感染培养的施万细胞(SCs),简称NT-3-SCs.然后建立大鼠全横断脊髓损伤模型,向损伤处分别移植NSCs、SCs+NSCs和NT-3-SCs+NSCs.所有动物存活60d后,进行爬网格测验和BBB评分.接着在脊髓横断处远端组织内注射荧光金(FG),动物再存活7d.在处死动物前检测皮质运动诱发电位(CMEP)和皮质体感诱发电位(CSEP).

    作者:郭家松;曾园山;李海标;李晓君 刊期: 2003年第05期

  • 人前磨牙牙髓牙本质复合体Ⅰ型和Ⅲ型胶原的来源及分布

    目的探讨牙髓牙本质复合体Ⅰ型和Ⅲ型胶原的来源与分布. 方法收集人前磨牙,固定、脱钙、石蜡包埋、切片、用SABC法进行免疫组织化学染色,显示Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白. 结果Ⅰ型胶原在牙髓内十分丰富,聚集成束,根髓中致密,以粗纤维束沿神经血管纵行分布;冠髓中纤维束较细、大量分支、变细,随意分布,交织成疏松的纤维网.从根尖至牙冠,从牙髓中央至周边,纤维束由粗变细,沿途分支,大部分终止于牙髓基质,少部分经成牙本质细胞间进入前期牙本质.此外成牙本质细胞、成纤维细胞与血管内皮细胞亦见Ⅰ型胶原蛋白表达.前期牙本质Ⅰ型胶原染色深,与牙髓基质和成牙本质细胞突起内者相延续,成熟牙本质近髓1/3可见Ⅰ型胶原阳性免疫反应物.Ⅲ型胶原在牙髓牙本质复合体的表达基本与Ⅰ型胶原类似,仅数量和密度略少. 结论牙髓牙本质复合体内的Ⅰ型和Ⅲ型胶原可能由成牙本质细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞产生;不仅牙髓内存在Ⅰ型和Ⅲ型胶原,而且前期牙本质也有Ⅰ型和Ⅲ型胶原.

    作者:朱世柱;丁晓勇;薛敬玲;朱艺;孟杨;王纪 刊期: 2003年第05期

  • 干细胞因子在体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞表达和发育的免疫组织化学研究

    目的观察干细胞因子(SCF)在发育中的体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞中的分布,探讨SCF在大鼠骨骼肌卫星细胞中的作用. 方法原代培养骨骼肌卫星细胞,经两次传代后,取培养2、4、8、16、24、48、72h的细胞行SCF单克隆抗体的免疫组织化学染色. 结果 SCF免疫阳性反应物存在于发育中的骨骼肌卫星细胞中,形成肌管后,细胞核呈强阳性反应. 结论 SCF在发育的骨骼肌卫星细胞中有表达,它可能在骨骼肌的生理发育中起某种调节作用.

    作者:徐忠涛;周长满;鄂玲玲 刊期: 2003年第05期

  • 犬心脏表面主要神经丛降钙素基因相关肽和P物质的免疫组织化学研究

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    作者:赵志英;马东亮;李月英;胡海涛;王唯析;袁秉祥 刊期: 2003年第05期

  • 芳香化酶在胶质母细胞瘤细胞系SHG-44细胞中的表达及调控

    目的研究芳香化酶细胞色素P450(AROM)及雌激素受体(ER-α)在胶质母细胞瘤细胞系SHG-44细胞中的基因表达. 方法细胞培养、免疫细胞化学染色、原位杂交染色及RT-PCR技术. 结果在SHG-44细胞中分别检测到AROM及ER-α的表达,进一步发现SHG-44细胞中AROM的表达是由多个组织特异性启动子驱动基因的转录. 结论可能为中枢神经系统肿瘤发生的激素调节提供新的资料.

    作者:肖岚;蔡文琴 刊期: 2003年第05期

  • CPT-环磷酸腺苷对视网膜节细胞再生的影响

    目的探讨玻璃体内插入外周神经和玻璃体内注射CPT-环磷酸腺苷对轴突损伤的视网膜节细胞再生的影响. 方法 20只成年金黄地鼠随机分4组,每组5只.切断视神经(ON)并缝接坐骨神经为再生对照组(attached graft,AG);ON切断并缝接坐骨神经后再于玻璃体内注射CPT-cAMP和/或插入一小段自体坐骨神经(SN)为实验组.采用逆行示踪标记术,观察视网膜平铺片节细胞数. 结果 1.对照组(AG),视网膜再生的节细胞数为:1428±284个;2.外周神经组(AG+SN):每个视网膜再生的节细胞平均数为2220±415个;3.CPT-cAMP组(AG+cAMP):每个视网膜再生的节细胞平均数为2175±364个;4.外周神经和CPT-cAMP联合组(AG+cAMP+SN):每个视网膜再生的节细胞平均数为4255±820个;其中,AG+SN、AG+CPT组同AG组相比存在差异显著性(P<0.01);AG+CPT+SN组同AG、AG+CPT和AG+SN组相比均有差异显著性(P<0.01). 结论研究结果提示玻璃体内注射CPT+cAMP或联合应用外周神经和CPT-cAMP可大幅提高受损视网膜节细胞的再生.

    作者:朱永红;李海标 刊期: 2003年第05期

  • 绝经后骨质疏松症病人Ⅰ型胶原的变化

    目的研究Ⅰ型胶原合成及代谢在绝经后骨质疏松症发病中的作用. 方法以绝经后骨质疏松性骨折病人股骨头置换术弃去的股骨头为样本;采用苦味酸天狼星红-偏振光及Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)抗体免疫组织化学染色,从蛋白水平观察骨中Ⅰ型胶原的分布和量的变化;地高辛标记的Ⅰ型胶原和MMP-1 cDNA基因探针进行原位杂交,从mRNA水平观察Ⅰ型胶原和MMP-1的分布和量的变化;从骨中提取Ⅰ型胶原测定肽链的羟基化水平,观察Ⅰ型胶原羟基化程度的改变. 结果绝经后骨质疏松性骨折病人胶原含量降低,Ⅰ型胶原蛋白纤维变细、断裂,结构紊乱.而细胞内Ⅰ型胶原和MMP-1 mRNA以及MMP-1蛋白水平均升高.Ⅰ型胶原蛋白赖氨酸羟基化程度升高而脯氨酸羟基化程度不变. 结论Ⅰ型胶原合成及代谢在质和量上的改变在绝经后骨质疏松症发病中起重要作用.

    作者:刘敬;许增禄;徐雁英;仇文颖;王计奎;徐园园;钱晓菁 刊期: 2003年第05期

  • 川芎嗪诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究

    目的用川芎嗪(ligustrazin hydrochloride)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,rMSCs)分化为神经元样细胞. 方法用低糖DMEM冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞悬液,接种在塑料培养瓶中.经体外扩增、纯化,选用第5代后的骨髓间质干细胞进行诱导分化.用10μg/L bFGF预诱导24h,更换成含川芎嗪的无血清培养基DMEM诱导间质干细胞分化为神经元样细胞.用免疫组织化学SABC法鉴定神经丝蛋白(NF-M)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)、微管联合蛋白-2(MAP-2)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达. 结果第5代间质干细胞形态达到均一,呈梭形.用川芎嗪诱导15min到3h,间质干细胞胞体逐渐增大,并伸出细长突起形似神经元样细胞.免疫组织化学显示NF-M、NSE、nestin、MAP-2和GAP-43表达阳性,而GFAP阴性.对照组上述染色均为阴性. 结论川芎嗪可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞.

    作者:撒亚莲;李海标 刊期: 2003年第05期

  • 吗啡对大鼠脊髓Ⅱ板层中受损伤坐骨神经的传入纤维终末的影响--抗氟化物酸性磷酸酶组织化学研究

    目的探讨吗啡对钳夹损伤坐骨神经后其传入纤维终末在脊髓Ⅱ板层分布的影响. 方法用显示抗氟化物酸性磷酸酶(FRAP)组织化学方法,借助图像分析仪测量损伤坐骨神经后15d和30d吗啡组和对照组大鼠脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应物面积. 结果损伤坐骨神经后吗啡组和对照组大鼠脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应区均有不同程度的缺失;对照组损伤坐骨神经后30d的FRAP阳性反应物面积比15d的FRAP阳性反应物面积增大40%.吗啡组损伤坐骨神经后30d的FRAP阳性反应物面积比15d的FRAP阳性反应物面积增大22%;同时也比对照组损伤坐骨神经后30d的FRAP阳性反应物面积增大19%. 结论随着损伤坐骨神经后大鼠存活时间延长,其脊髓Ⅱ板层FRAP阳性反应物面积呈恢复性增大;吗啡能使坐骨神经损伤大鼠脊髓Ⅱ板层的FRAP阳性反应物面积明显增大.

    作者:张惠君;曾园山;聂俊辉;张伟 刊期: 2003年第05期

  • 5种肽激素在黄鳝消化道内分泌细胞中的分布特点

    目的探索黄鳝消化道黏膜中5种内分泌细胞的定位及分布. 方法采用免疫细胞化学技术中的链霉亲合素-生物素过氧化物酶复合物(SABC)法. 结果在黄鳝消化道黏膜中至少分布着5种免疫活性内分泌细胞,它们是:胃泌素(Gastrin,Gas)、生长抑素(Somatostatin,Som),五羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)、胰岛素(Insulin,Ins)和神经丝蛋白-免疫活性内分泌细胞(Neurofilament-immunoreactive cell,NF).其中Gas和Som细胞分布在食道复层扁平上皮与杯状细胞之间:贲门处有少量Gas细胞分布,胃底上皮和胃腺中有大量的Som细胞分布,而Ins、NF和5-HT细胞则分别分布在幽门上皮和幽门腺管上.黄鳝的肠中则未见到上述任何一种免疫活性阳性反应.另外,胰高血糖素在黄鳝消化道任何部位均未见到免疫活性阳性反应.以上各免疫活性内分泌细胞均为深褐色,形状不规则,胞突较短而粗,胞核呈空泡状,常夹于食道和胃上皮之间或分布于腺上皮之间,将胞突伸向胃腔或腺腔. 结论作为低等脊椎动物,黄鳝的消化道具有复杂的内分泌功能.

    作者:方之平;潘黔生;赵雅心;潘玉善;王翔凌 刊期: 2003年第05期

  • 干细胞常用词汇(续四)

    作者: 刊期: 2003年第05期

  • 镉对长江华溪蟹肝胰腺细胞超微结构的影响

    目的观察低浓度镉(39μmol/L)处理长江华溪蟹(Sinopotamon yangtsekiense)后,其肝胰腺细胞超微结构的变化. 方法实验组30只雄蟹培养在浓度为39μmol/L的氯化镉(CdCl2)溶液中;对照组30只雄蟹培养在已放置2d的自来水中,分别在镉处理后5d、15d、30d三个不同时间段活体解剖雄蟹,电镜下观察肝胰腺细胞超微结构. 结果镉对肝胰腺细胞内的主要细胞器影响表现为:核膜从弥散状到后解体;线粒体膜通透性改变,肿胀变形,嵴减少或消失,后完全空泡化;粗面内质网先裂解为大小不同的小泡,尔后小泡上的核糖体开始脱落,直至变成同心圆状板层结构;出现大量滑面内质网;溶酶体数量随镉处理时间的延长而增多,形成空泡、自噬体或髓样体;微绒毛出现脱落和部分空泡化. 结论镉使长江华溪蟹肝胰腺细胞的解毒功能丧失,破坏了肝胰腺细胞的细胞核、线粒体、粗面内质网等主要细胞器的结构与功能的完整性,影响了肝胰腺细胞的正常生理机能.

    作者:王兰;王定星;王茜;杨秀清 刊期: 2003年第05期

  • 自体嗅黏膜移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

    目的观察自体嗅黏膜植入大鼠脊髓后的变化及其对轴突再生的修复作用.探索临床自体嗅黏膜移植修复脊髓损伤的可能性. 方法成年雄性Wistar大鼠随机分为嗅黏膜移植组和对照组各20只.嗅黏膜移植组取鼻中隔后部的嗅黏膜组织(1mm2)植入自体大鼠脊髓颈1节段后索内的皮质脊髓束缺损处(2mm×1.5mm);对照组取鼻腔呼吸区黏膜植入脊髓同样的损伤处.4~6周处死动物,移植区冰冻水平切面,免疫荧光双标神经丝蛋白(NF)和神经生长因子受体蛋白(NGFRp75),Confocal显微镜下观察,另行免疫组织化学染色观察移植嗅黏膜与周围组织的生长情况. 结果对照组大鼠的损伤处有明显空洞,呼吸区黏膜内未见p75染色;嗅黏膜移植组可见p75标记的植入的嗅黏膜与周围组织愈合良好,空洞明显减少,被标记的嗅成鞘细胞向神经组织浸润生长,在移植物内有大量被标记的纤细的不分叉的NF纤维穿过. 结论自体嗅黏膜有可能成为临床嗅成鞘细胞修复脊髓损伤的供体.

    作者:杨晓梅;陈庆山;周长满;杨磊;于恩华 刊期: 2003年第05期

  • 氯化钴预处理减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡

    目的研究氯化钴(CoCl2)预处理对大鼠海马神经元缺氧-复氧后凋亡的影响及其机制. 方法用CoCl2处理原代培养大鼠海马神经元,并使其暴露于无氧环境.用TUNEL染色法和激光共聚焦显微镜分别检测缺氧后细胞凋亡率以及细胞线粒体膜电位和胞内游离钙. 结果 CoCl2预处理明显减少海马神经元在缺氧-复氧后的凋亡数,并对急性缺氧期间海马神经元的细胞内Ca2+浓度和线粒体膜电位具有稳定作用. 结论 CoCl2预处理对急性缺氧引起的海马神经元凋亡可能具有保护作用,其机制可能与其稳定缺氧时细胞内Ca2+浓度和线粒体膜电位有关.

    作者:赵彤;于顺;徐艳玲;吴丽颖;马子敏;丁爱石;王福庄;范明 刊期: 2003年第05期

  • 神经再生素对PC12细胞凋亡的影响

    目的研究神经再生素(NRF)对PC12细胞凋亡的影响并初步探讨其机制. 方法通过观察细胞形态的变化、MTT微量比色法、流式细胞仪Annexin V和caspase-3活力检测等方法,了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响.NGF和RPMI1640作对照. 结果培养细胞的突起生长数量和长度、MTT微量比色的A值、Annexin V-PE/7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase-3活力的检测等指标,在NRF组和NGF组间无明显差异;而与空白对照组间差异有显著性意义. 结论神经再生素对低血清培养下PC12细胞的凋亡有抑制作用.

    作者:陈罡;王晓冬;张沛云;丁斐 刊期: 2003年第05期

  • 人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合研究

    目的探讨用杂交瘤技术制备树突状细胞疫苗的方法.研究树突状细胞/肿瘤细胞之融合细胞的形态及表型特征. 方法用PEG法将免疫磁珠法分离获得的人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞株LTEP78融合,瑞氏-姬姆萨染色观察树突状细胞、LTEP78细胞及其融合细胞的形态结构,SP免疫细胞化学染色法检测融合细胞的分子表达. 结果分离的树突状细胞能高表达HLA-DR分子,而LTEP78细胞则不表达;将树突状细胞与LTEP78细胞按10∶1比例融合后,两者的细胞膜、细胞质依次融合,获得的融合细胞仍能表达HLA-DR分子. 结论人树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合是一个动态过程,通过将两者融合,人肺癌细胞获得了人树突状细胞表达的HLA-DR分子,从而增强了其免疫原性,为人树突状细胞疫苗的研制奠定了基础.

    作者:伊焕发;唐军民;唐岩;甄昱;孙红亚;戴燕;秦屹 刊期: 2003年第05期

  • 促性腺激素释放激素类似物对大鼠胃肠道5-羟色胺分泌的影响

    目的研究GnRH对胃肠道内5-HT分泌的影响. 方法胃腔直接注射GnRH类似物阿拉瑞林(Alarelin GnRH-A)以模拟外分泌产生的GnRH,并以免疫组织化学、高压液相色谱电化学检测(HPLC-ECD)的方法对阿拉瑞林刺激后胃及十二指肠内5-HT免疫反应细胞、血清中5-HT含量进行检测. 结果胃腔内注射GnRH-A后,大鼠胃及十二指肠内5-HT免疫反应阳性细胞密度显著增多,但血清中5-HT含量显著减少. 结论外分泌的GnRH对于5-HT的释放起明显抑制作用,但对5-HT的合成可能不产生影响.

    作者:朱晓东;王玉珍;刘晓宁;黄威权 刊期: 2003年第05期

  • 距骨临床X线测量

    目的研究距骨生长发育规律并建立出生后幼儿至成人正常距骨X线测量值. 方法对1765例正常儿童、青少年右足距骨X线照片进行测量. 结果两岁以前,距骨的生长速度快,与体格发育(如体重、身高等)相一致.以后不出现明显的增长高峰.到青春发育期,距骨也不出现增长高峰. 结论 X线测量值不但用于某些先天性或后天性疾病所致距骨形态改变的正常对照,而且也用于其他方面(如人类学、法医学)的研究.

    作者:马钦华;陈琦;芦爱萍;郭琪;陈志刚;钱致中 刊期: 2003年第05期

解剖学报杂志

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主办:中国解剖学会