乔峤；宋静慧
目的 建立大鼠中空管线栓大脑中动脉(MCA)梗塞模型,并观察经中空管灌洗冷生理盐水达到局部低温的效果. 方法 30只大鼠,分为经典线栓组、中空管线栓组和低温盐水灌洗组.后者是在血液再灌注前10 min,通过特制的中空管注入6 mL 20℃生理盐水到MCA缺血区. 结果 48 h后中空管线栓组脑梗死体积(41.81±2.88)%与经典线栓组(41.92±2.17)%相比差异无显著性意义(P=0.922).经中空管注入冷生理盐水,供血区皮质温度从(37.0±0.1)℃降低至(32.8±0.2)℃,髓质温度从(37.5±0.1)℃降低至(33.2±0.3)℃;脑梗死体积(22.37±1.86)%同中空管线栓组相比,差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 用特制中空管替代传统线栓,能够制作稳定的MCA梗塞模型.在血液再灌注之前,经动脉内注入冷生理盐水,能够诱导缺血脑组织局部轻度低温,并减少脑梗死体积.
作者：赵沃华；吉训明；凌锋；吴浩；赵洪洋；朱贤立 刊期： 2010年第01期
目的 研究壳聚糖对体外培养视网膜神经细胞生长的影响.方法 建立体外培养的SD乳鼠视网膜神经细胞.用MTT法检测0.065%、1.25%、2.5%、5%、10%、15%不同浓度壳聚糖对视网膜神经细胞生长的影响并设立空白对照组.结果 1.25%、2.5%、5%、10%壳聚糖对视网膜神经细胞生长有明显的促进作用,且10%浓度壳聚糖适宜神经细胞生长.结论 壳聚糖有较好的促进视网膜神经细胞生长的作用,有必要对其进行更深入的研究.
作者：杨红；赵燕 刊期： 2010年第01期
目的 研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(serum and glucocorticoid inducible kinase 1,SGK_1)及其下游分子纤连蛋白(fibronectin,FN)在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾皮质中的表达以及血竭素高氯酸盐(dracohodin perchlorate,DP)抑制DN肾纤维化的机制.方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立C57BL/6小鼠糖尿病肾病模型,设正常对照组、糖尿病肾病对照组、胰岛素治疗组及血竭素高氯酸盐5、10、20 mg/(kg·d)3种剂量治疗组,分别干预4周后,用RT-PCR、Western blot或免疫组化方法 检测各组小鼠肾皮质中SGK_1和FN mRNA及蛋白的表达水平.结果与正常组比较,糖尿病肾病模型组中SGK_1和FN mRNA及蛋白的表达水平显著性增高;与糖尿病肾病模型组比较,胰岛素治疗组和血竭素高氯酸盐20 mg/(kg·d)治疗组中SGK_1和FN mRNA及蛋白的表达水平显著降低,血竭素高氯酸盐10 mg/(kg·d)治疗组中SGK_1mRNA及蛋白的表达水平显著降低.结论 血竭素高氯酸盐能抑制高糖/SGK_1/FN通路,这可能是其防治DN小鼠肾纤维化作用的部分机制.
作者：易继飞；王全胜；张丽晓；刘建国；李仁康 刊期： 2010年第01期
目的 对一个常染色体显性遗传的先天性甲状腺功能亢进症家系,进行与已知致病基因TSHR和THRB的连锁分析以确定此家系致病基因是否为这2个已知基因.方法 选择3个与TSHR和THRB紧密连锁的微卫星标记物D14S74、D3S2338和D3S1266,进行微卫星标记的基因连锁分析,采用Genemapper 3.5软件分析数据. 结果 3个微卫星标记物的LOD值均小于1,显示该家系致病基因与这3个位点均不连锁,提示该家系可能存在新致病基因. 结论 常染色体显性遗传类型的先天性甲状腺功能亢进症可能有新致病基因.
作者：张守焰；王旭；杨钧国；孙图成；刘木根；王擎 刊期： 2010年第01期
目的 研究肾上腺髓质素(ADM)对脓毒性休克大鼠心肌细胞外向钾电流的影响.方法 成年大鼠腹腔注射脂多糖(LPS,10 mg/kg)4 h后,分离心室肌细胞.用全细胞膜片钳的方法 记录瞬时外向钾电流(I_(to)),稳态钾电流(I_(ss))和ATP敏感钾电流(I_(K,ATP)).结果 LPS处理对I_(to)和I_(ss)无影响.休克心肌细胞I_(K,ATP)密度[(2.66 ± 0.56)pA/pF(n=12)]较正常心肌细胞值[(0.27 ± 0.08)pA/pF(n=14)]明显增加(P＜0.01).ADM受体拮抗剂ADM-(22-52)可使增加的I_(K,ATP)得到明显的恢复[(0.69 ± 0.21)pA/pF(n=11),P＜0.01 vs LPS 组].而ADM-(22-52)与100 μmol/L氨基胍联合处理几乎可完全取消I_(K,ATP)的增加.结论 脓毒性休克大鼠心肌细胞I_(K,ATP)被激活.ADM 与NO共同参与了脓毒性休克大鼠心肌细胞I_(K,ATP)的激活.
作者：张晓晖；Jean-Pierre Bourreau；金满文 刊期： 2010年第01期
目的 制备并鉴定兔抗小鼠胚肝血影蛋白3(embryonic liver fodrin 3,ELF3)的多克隆抗体,并探讨其在部分小鼠组织中的免疫定位.方法 合成ELF3氨基端特异性多肽片段,连接载体蛋白钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin,KLH),免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,用ELISA方法 检测抗体效价,Western blot和免疫组织化学方法 检测抗体特异性及在小鼠组织中的表达情况.结果合成ELF3特异性多肽,并连接KLH后免疫实验兔,制备得到兔抗小鼠ELF3多克隆抗体,ELISA及Western blot检测结果显示此抗体效价及特异性高;Western blot和免疫组织化学检测结果显示ELF3在心、肝、肾组织中表达,尤其是细胞膜上表达明显.结论 本实验成功制备ELF3多克隆抗体,并证实ELF3在小鼠心、肝、肾组织细胞膜表达明显,这将为ELF3功能研究提供有力的工具.
作者：汪志军；常莹；吴伟；姚津剑；何星星；林菊生；宋宇虎 刊期： 2010年第01期
目的 调查湖北汉族人群15个STR基因座(D8S1179、 D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、vWA,TPOX,D18S51,D5S818,FGA)的遗传多态性分布.方法 采用Identifiler试剂盒复合扩增305例湖北汉族个体的15个STR基因座,产物经3130遗传分析仪电泳分离和分型检测,分析检验基因座的遗传学参数:基因频率、杂合度、多态信息含量(PIC)、个体识别能力(DP)、非父排除概率(PE)和遗传平衡状态.结果 305名无关个体共检测到15个STR基因座的146个等位基因,各基因座基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05).13个STR基因座的PIC＞0.5,14个STR基因座的DP＞0.8,12个STR基因座的PE＞0.5;累积个体识别力＞0.999 999 999,累积非父排除率＞0.999 998 8.结论 湖北汉族人群15个STR基因座的绝大多数基因座具有较高的遗传多态性,其群体遗传学数据可用于本地人类遗传学、法医亲子鉴定和个体识别等研究领域.
作者：易少华；杨荣芝；梅焜；杨庆恩；余纯应 刊期： 2010年第01期
目的 苏木精-伊红染色病理大切片结合免疫组化指标CK20检测中、低位直肠癌系膜环周切缘癌浸润(CMI)的存在规律,为直肠癌的临床治疗提供病理学依据.方法 随机选取8个月期间中、低位直肠癌患者41例,手术标本制作成苏木精-伊红染色及免疫组化SP法染色的病理大切片进行检测.结果苏木精-伊红染色及免疫组化SP法染色病理大切片检测中、下段直肠癌系膜CMI阳性率分别为21.95%、29.27%.在肿瘤高、中分化组CMI阳性率低于低分化组(P＜0.05).肿瘤下缘距齿线距离＜5 cm组CMI阳性率高于≥5 cm组(P＜0.05).患者性别、年龄、肿瘤大体类型、浸润深度、淋巴结转移情况、手术方法 均与CMI阳性率无明显相关性(均P＞0.05).结论 肿瘤分化程度低、肿瘤位置低是CMI存在的高危因素.对于存在CMI者,术后应行规范的辅助治疗.
作者：于滨；于跃明；赵文和 刊期： 2010年第01期
目的 探讨RNA干扰AKT2对人胰腺癌细胞株裸鼠移植瘤对吉西他滨敏感性的影响.方法 构建荷胰腺癌裸鼠模型,采用腹腔给药和瘤内注射方式,以吉西他滨配合AKT2 siRNA表达载体对荷瘤鼠进行联合干预治疗,对比观测裸鼠肿瘤生长情况,RT-PCR检测肿瘤细胞AKT2 mRNA的表达,免疫组织化学法检测肿瘤AKT2蛋白表达,DNA末端原位标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡指数. 结果化疗+AKT2-siRNA组移植瘤组织中AKT2 mRNA及AKT2蛋白表达明显低于空白对照组、化疗组、化疗+空白质粒组.化疗+AKT2-siRNA组瘤重、肿瘤体积显著低于其他各组.化疗+AKT2-siRNA组抑瘤率、凋亡指数显著高于其他各组.结论 RNA干扰AKT2明显提高人胰腺癌细胞株对吉西他滨化疗的敏感性.
作者：彭涛；周峰；杨鹏；王春友 刊期： 2010年第01期
目的 研究siRNA 对大鼠肾细胞(NRK)Ppif 基因的抑制作用.方法 根据大鼠Ppif 基因序列设计并化学合成3对siRNA 及1对阴性对照siRNA,并在5′端标记FAM 羧基荧光素,以Lipofectamine~(TM)2000 转染入大鼠肾细胞,用RT-PCR 和Western blot 分别检测Ppif 基因和蛋白表达量的改变,验证所设计的siRNA 的抑制效应.结果以Lipofectamine~(TM)2000转染所设计的siRNA 进入NRK 细胞,转染效率＞90%.起始于405、556位点的siRNA 在基因水平对Ppif 无明显抑制效应(P＞0.05),起始于198位点的siRNA 在基因和蛋白水平均有明显的抑制效应,基因水平下降75.25%(P＜0.05);蛋白水平下降72.13 %(P＜0.05).结论 起始于198位点的siRNA 对大鼠肾细胞的Ppif 基因有明显的抑制效应.
作者：胡威；陈志强；夏忠禹；叶章群 刊期： 2010年第01期
目的 分析宫颈癌根治术并卵巢移位术术后患者的卵巢功能状况及其与血流阻力指数的关系.方法 1997年8月至2004年9月间收治22例年龄26~40岁宫颈癌Ⅰa~Ⅱa期患者,均行宫颈癌根治术加单侧卵巢腹膜外移位术,按术后是否放疗分为放疗组 12 例,未放疗组 10 例,术后通过检测血清性激素水平,B超下测定卵巢血流阻力指数(RI)来评定移位卵巢的功能.结果放疗组术后24个月与术前相比,卵泡刺激素(FSH)升高,雌二醇(E_2)明显降低,差异有统计学意义(均P＜0.01);未放疗组术后各月与术前相比血清性激素水平差异无统计学意义(均P＞0.05).术后24个月两组激素水平比较,放疗组FSH升高,E_2降低,与未放疗组相比差异有统计学意义(均P＜0.05).两组移位卵巢的血流阻力指数(RI)于术后24个月出现明显差异,放疗组的RI明显高于未放疗组(P＜0.05),且放疗组RI与E_2呈负相关(r=-0.901,P＜0.01),与FSH呈正相关(r=0.895,P＜0.01).结论 年轻宫颈癌患者行宫颈癌根治术并卵巢移位术后,监测卵巢功能与RI,RI与E2呈负相关,与FSH呈正相关,因此RI可作为监测卵巢功能的重要指标,并且术后辅助放疗是影响移位卵巢RI和内分泌功能的主要因素.
作者：乔峤；宋静慧 刊期： 2010年第01期
目的 构建并鉴定针对LRIG3 基因的小干扰RNA(LRIG3-siRNA)腺病毒表达载体,为膀胱癌基因治疗的研究提供有效的实验工具.方法 设计可形成小发夹结构的LRIG3-siRNA模板cDNA 序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pSilencer-U6neo,构建LRIG3-siRNA表达质粒pSilencer-LRIG3.鉴定正确后,将pSilencer-LRIG3转染至HEK293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒pAd-LRIG3.大量扩增pAd-LRIG3,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度.pAd-LRIG3 感染人膀胱癌细胞T24,RT-PCR法检测LRIG3 mRNA的表达.结果酶切分析、测序鉴定表明pSilencer-LRIG3构建成功,PCR分析表明pAd-LRIG3含有LRIG3-siRNA 序列.pAd-LRIG3可抑制 LRIG3 mRNA的表达.结论 含有LRIG3-siRNA 的重组腺病毒构建成功,且具有抑制LRIG3基因mRNA 表达的功能.
作者：袁晓奕；包世新；杨为民；叶章群 刊期： 2010年第01期
目的 探讨软骨组织工程方法 中修复软骨缺损理想的种子细胞和支架材料. 方法 免疫磁珠分离纯化新生大鼠前软骨干细胞(PSCs),分别采用KLD-12自组装肽纳米凝胶三维培养(实验组)和普通培养瓶平面培养(对照组),用转化生长因子β3(TGF-β_3)诱导两组PSCs向软骨细胞特性方向分化.利用RT-PCR、免疫组化等方法 测定其向软骨细胞特性方向分化过程中特异性细胞外基质Ⅱ型胶原(collagen Ⅱ)和聚集蛋白聚糖(aggrecan)表达的情况. 结果 RT-PCR和免疫组化检测结果表明KLD-12自组装肽纳米凝胶组细胞在诱导7、14 d后均有collagen Ⅱ和aggrecan表达,且RT-PCR检测结果表明KLD-12自组装肽凝胶组细胞的collagen Ⅱ和aggrecan mRNA表达水平较对照组高,其差异有统计学意义(均P＜0.05). 结论 TGF-β_3诱导后的PSCs可向成软骨方向分化,诱导后的PSCs与KLD-12自组装肽凝胶复合有望构建组织工程化软骨,KLD-12自组装肽纳米凝胶是较好的软骨组织工程细胞支架.
作者：孙凯；游洪波；陈安民；郭风劲；祁军；徐志刚；丁然 刊期： 2010年第01期
肝脏是葡萄糖代谢的重要器官,各种原因引起的肝脏功能损害均有可能导致葡萄糖代谢紊乱,出现糖耐量异常甚至糖尿病.
作者：张萍；杨雁 刊期： 2010年第01期
目的 阐述灵敏度和特异度双变量Meta分析模型对于诊断试验的评价效果,为选择更好的诊断试验评价方法 提供依据. 方法 通过近发表的评价2种血吸虫免疫学诊断方法 的Meta分析数据来阐述双变量随机效应模型分析方法 .结果双变量模型可直接得出待比较的几种诊断方法 的logit灵敏度、特异度及诊断优势比(DOR)均值及各自的95%CI,还可得出灵敏度均值、特异度均值以及DOR均值在2种诊断方法 间有无统计学差异,同时还能合并估计不同研究间灵敏度和特异度可能存在的关联性.结论 双变量模型保留了数据的二维特性,可以将灵敏度和特异度的效应分开估计,这比传统的SROC法得出诊断优势比的净效应更加合理.因此,双变量模型用于诊断试验评价是恰当的、灵活的,可作为经典SROC法的改进与补充.
作者：祝慧萍；方龙；夏欣；林嵩艺；宇传华 刊期： 2010年第01期
目的 构建人Fas(hFas)和人TNFR1(hTNFR1)基因的真核表达质粒pcDNA3.0-hFas、pcDNA3.0-hTNFR1和microRNA(miRNA)干扰质粒p-hFasmiRNA、 p-hTNFR1miRNA,初步验证其在体外细胞系对Fas和TNFR1基因表达的干预效应.方法 从人肝癌细胞HepG2细胞中获得模板cDNA,通过PCR扩增出hFas和hTNFR1全长片段,将目的 片段通过T载体过渡克隆至表达载体pcDNA3.0,得到重组质粒pcDNA3.0-hFas和pcDNA3.0-hTNFR1.利用miRNA设计软件,针对Fas和TNFR1基因分别设计3对pre-microRNA(pre-miRNA)序列,通过T4连接酶将pre-miRNA克隆至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA表达载体,同时构建非相关干扰质粒.构建成功的p-hFasmiRNA1、p-hFasmiRNA2、p-hFasmiRNA3和p-hTNFR1miRNA1、p-hTNFR1miRNA2、p-hTNFR1miRNA3分别与pcDNA3.0-hFas和pcDNA3.0-hTNFR1共转染至人293T细胞,通过Real-time PCR和Western blot检测转染48 h后对基因表达的干预效应.结果通过测序鉴定表明Fas和TNFR1基因的真核表达载体和miRNA干扰质粒均构建成功. Real-time PCR结果显示干预组的Fas和TNFR1基因的表达与对照组比较明显减少,抑制效率分别可达到87%和80%.Western blot结果也同样证实干预组的Fas和TNFR1基因的蛋白表达量与对照组比较明显减少.结论 成功构建了hFas和hTNFR1的真核表达载体和microRNA干扰质粒,并初步证实构建的microRNA干扰质粒在细胞水平对hFas和hTNFR1的表达具有特异性的抑制效应.
作者：高随；习东；郭健文；严伟明；罗小平；宁琴 刊期： 2010年第01期
目的 通过观察表皮生长因子(EGF)与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合使用对大肠癌细胞Caco-2的作用效果,进一步研究EGF潜在的抗肿瘤特性.方法 通过MTT比色法检测EGF、5-FU及其联合使用对肿瘤细胞生长的影响,同时Western blot检测EGF对肿瘤增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,以及流式细胞周期检测分析其对细胞周期变化的影响. 结果 EGF能够诱导肿瘤细胞增殖,随着其浓度的升高,G0期细胞明显减少,PCNA表达明显增加,100 ng/mL和1 000 ng/mL组与对照组比较差异具有统计学意义(均P＜0.05),并且联合治疗组对肿瘤细胞的抑制率明显高于单独使用5-FU组(P＜0.05).结论 EGF与5-FU联合使用增加了化疗敏感性,可能与其诱导静止期细胞增殖有关.
作者：叶霖；王国斌；陶凯雄 刊期： 2010年第01期
目的 建立大鼠机械通气肺损伤(VILI)动物模型,研究VILI对肺组织急性炎症、氧化应激及细胞凋亡的影响.方法 40只雄性SD大鼠,随机均分成A、B、C、D 4组,每组各10只.A组为空白对照组;B组为大潮气量(V_T＝40 mL/kg)通气1 h组;C组为大潮气量通气2 h组;D组为大潮气量通气4 h组.B、C、D组通气频率均为40次/min.观测各组肺组织病理改变;凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测肺组织细胞NF-κB的活性,Western blot检测肺细胞核内NF-κB亚基P65蛋白表达水平;采用DNA断端末端标记(TUNEL)法检测肺细胞的凋亡;同时检测肺湿干重比值(W/D)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);检测肺灌洗液中总蛋白、白细胞计数的水平.结果和A组相比,B、C、D组急性肺损伤(ALI)评分、W/D比值、MPO活性、总蛋白、白细胞计数、凋亡指数(AI)、肺组织MDA值、NF-κB的活性及P65蛋白的表达均显著增高(均P＜0.01);而SOD值显著下降(P＜0.01).和B组比较,C、D组上述指标均显著增高(均P＜0.05);而D组SOD值显著下降(P＜0.05).和C组比较,D组上述指标明显增高(均P＜0.05);而SOD值明显下降(P＜0.05). 结论 大潮气量机械通气产生了明显的VILI,表现为渗透性肺水肿、急性炎症反应、氧化应激反应的激活以及广泛的肺细胞凋亡,其程度随着通气时间的延长而加重.
作者：朱宏飞；冯丹；姚尚龙；武庆平 刊期： 2010年第01期
目的 研究组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases-1,HDAC-1)siRNA对宫颈癌HeLa细胞HDAC-1蛋白表达、细胞生长和凋亡的影响.方法 HDAC-1 siRNA沉默HDAC-1蛋白;Western blot技术检测HDAC-1蛋白;MTT法和克隆形成实验检测细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 HDAC-1 siRNA转染48 h可明显下调HeLa细胞HDAC-1蛋白表达;下调HDAC-1 表达明显降低HeLa细胞克隆形成率,抑制细胞增殖;下调HDAC-1诱导HeLa细胞凋亡.结论 HDAC-1 siRNA可能通过诱导凋亡抑制HeLa细胞生长.
作者：李娜；于世英 刊期： 2010年第01期
目的 探讨MACC1基因在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床意义.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测42例肝癌组织、对应癌旁肝组织以及17例正常肝组织中MACC1 mRNA的表达情况,并分析MACC1基因的表达与相关临床参数的关系.结果 MACC1基因在肝癌组织的表达水平显著高于癌旁肝组织(P＜0.01),在癌旁肝组织的表达水平显著高于正常肝组织(P＜0.05),且MACC1基因的表达水平与肝癌的TNM分期、肝内或淋巴结转移、门静脉癌栓等均明显相关(均P＜0.05),而与肿瘤个数、血清甲胎蛋白(AFP)水平、有无肝硬化等无明显关系(均P＞0.05).结论 MACC1基因可能在肝细胞癌的侵袭转移中发挥着重要作用,有可能成为肝癌治疗的新靶点之一.
作者：刘清泉；刘青光；昝献峰；郭成；宋涛；姚英民 刊期： 2010年第01期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
