刘春萍；潘华雄；杨帆；明洁；黄韬
目的 探讨获得足够数量和较高纯度大鼠胰岛的分离和纯化方法.方法 采用V型胶原酶灌注消化法分离成年大鼠胰岛,Ficoll 400非连续密度梯度法纯化胰岛.双硫腙(DTZ)染色鉴定培养的胰岛细胞,锥虫蓝染色检测细胞活性.葡萄糖刺激胰岛素释放试验评价胰岛细胞的功能.结果 分离纯化后大鼠胰岛平均收获量为(480±30)IEQ,纯度大于90%,活性大于90%.在低糖和高糖刺激下,胰岛素分泌量分别为(12.28±0.89)mIU/L、(19.01±1.49)mlU/L,二者相比较.差异有统计学意义(P<0.05),刺激指数为(1.55±0.01).结论 胶原酶V逆行灌注消化胰腺和Ficoll400非连续密度梯度纯化法,可获得高纯度高活率的大鼠胰岛.
作者：侯凌；尹注增；向莹；李俊华；陈实；陈刚；罗小平 刊期： 2009年第03期
目的 探讨磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)在乳腺癌新辅助化疗后行保乳手术中的应用价值.方法 回顾性分析该院2003年6月至2007年8月收治的38例经新辅助化疗后行手术治疗的乳腺癌患者的临床资料.所有病例在新辅助化疗前后均行MRI检查评估肿瘤大小,术后病理检查再次评估肿瘤大小.结果 39.5%(15/38)肿瘤呈向心性缩小,其中10.5%(4/38)肿瘤向心性缩小周围无病灶残留,29.0%(11/38)肿瘤向心性缩小但周围仍有癌灶残留;60.5%(23/38)肿瘤呈筛状缩小.对肿瘤大小的评估,MRI检查肿瘤大小与病理切片呈正相关,相关系数为0.94(P<0.01).结论 MRI可以较准确评估新辅助化疗后残余肿瘤大小,在保乳手术中发挥重要作用.
作者：刘春萍；潘华雄；杨帆；明洁；黄韬 刊期： 2009年第03期
目的 通过检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在正常早、中、晚孕期绒毛及蜕膜组织中的定位及表达情况来探讨其在妊娠期的可能作用.方法 分别采用免疫组化染色法(SP法)及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测早、中、晚孕期绒毛及蜕膜中OPN的表达.结果 OPN在正常早、中、晚孕期绒毛及蜕膜中均有表达,其主要定位于细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞及蜕膜细胞的胞膜和胞质中,此外在绒毛间质及血管中亦呈阳性表达.OPN mRNA及其蛋白表达水平的比较,在绒毛组织中,早孕期低于中孕期(P<0.05),中孕期低于晚孕期(P<0.05);蜕膜组织中,早孕期的表达量高,与中、晚孕期比较差异均有统计学意义(均P<0.05),而在中、晚孕期组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 在胚胎发育进程中.绒毛中OPN的表达量随孕周增加而增加,而蜕膜中以早孕期表达强,推测它在孕早期可能更多是参与调节侵袭作用,而在中晚孕期可能更多的是维持免疫调节作用.
作者：薛菡；李红发 刊期： 2009年第03期
过敏性紫癜(HSP)是一种过敏性系统性坏死性小血管炎,过敏性紫癜性肾炎(HSPN)是仅次于狼疮性肾炎的一种常见继发性肾炎,常表现为血尿、蛋白尿,部分患者可伴有消化道症状、关节痛、高血压和肾功能不全.HSPN患者可因致敏原性质不同、个体反应差异及血管炎累及的器官和病变程度不同,在临床和肾脏病理学上呈现不同的改变,对治疗的反应和预后也有较大差异.
作者：李秋月；杨柳；张莉；周静 刊期： 2009年第03期
目的 检测转化生长因子β1、β2(transforming growth factorβ1、β2,TGF-β1、TGF-β2)在分泌性中耳炎(secre-tory otitis media,SOM)动物模型鼓室黏膜中的表达,探讨TGF-β1、TGF-β2在SOM发病机制中的作用及意义.方法 应用灭活肺炎链球菌注入豚鼠中耳腔,制作SOM动物模型,采用免疫组织化学方法检测致病鼠鼓室黏膜上皮在注入细菌后6 h、1 d、3 d、7 d、14 d及30 d后TGF-β1、TGF-β2的表达.结果 SOM动物模型的鼓室黏膜上皮中TGF-β1、TGF-β2早期就有表达.TGF-β1在术后7 d表达明显增强,第30天时达高峰,TGF-β2在术后24 h即有表达,14 d时达高峰.结论 灭活肺炎链球菌致SOM中,TGF-β1、TGF-β2在鼓室黏膜中出现过度表达,TGF-β1可能与SOM慢性迁延有关,TGF-β2在SOM早期起主导作用.
作者：袁琨；张帆；喻慧岭；贺海霞；向芳；郑婕 刊期： 2009年第03期
目的 从大鼠胰岛细胞INS-1中克隆胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)的编码序列,构建原核表达载体并在大肠埃希菌中表达.方法 培养INS-1细胞.提取细胞总RNA,经RT-PCR技术扩增出GLP-1受体的编码序列.然后将其连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,并进行酶切、测序鉴定.将获得的pGEX-4T-1-GLP-IR转化大肠埃希菌感受态细胞BL21(D3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,后通过SDS-PAGE对收获的融合蛋白进行鉴定.结果 成功获得了GLP-1R编码序列,构建了原核表达载体pGEX-4T-1-GLP-1R并在大肠埃希菌BL21(D3)中表达.表达的融合蛋白主要存在于上清液中,分子量大小约为83 kD.结论 本实验为获取GLP-1R大量蛋白样品制备抗体提供了可能;GLP-1R的克隆也为建立2型糖尿病的新药筛选平台提供了条件.
作者：杨红旺；刘洋；孟雁 刊期： 2009年第03期
目的 探讨主动脉夹层(AD)的临床特点、诊断方法、治疗及预后,提高对本病的认识.方法 对2002年1月至2008年5月在随州市中心医院确诊为主动脉夹层的42例患者的临床资料进行回顾性分析.结果 42例患者确诊后其中20例Stanford B型主动脉夹层行覆膜支架植入均取得成功,6例行外科主动脉置换术,16例内科保守治疗.住院存活39例,死亡3例.结论 主动脉夹层以突发剧烈疼痛为主要症状,CT对本病的诊断意义重大.控制血压、心率是治疗的关键,进行介入或外科治疗可降低病死率,对Stanford B型夹层应用覆膜支架行腔内隔绝治疗是安全有效的方法.
作者：姚维；钱进；蒋从清；张振建；操传斌；蒋守涛 刊期： 2009年第03期
目的 探究异戊巴比妥(amobarbital)心肌保护作用的内在分子机制.方法 把体外再灌注鼠心分为3组:平衡组(CON组,平衡90 min),缺血组(ISC组,平衡15 min,缺血25 min,再灌注50 min),药物组[AMO组,以3种不同浓度(1.25、2.50、3.75 mmol/L)的异戊巴比妥于缺血之前给药,余与ISC组相同].测量心脏功能,活性氧族(reactive oxygen species,ROS)生成量,心磷脂含量,线粒体复合体Ⅰ活性以及线粒体膜通道孔(mitochondrial permeability transi-tion pore,mPTP)的开放等指标.结果 异戊巴比妥使心脏功能明显改善.与CON组相比,其它2组线粒体复合体Ⅰ活性分别降低44%(ISC组)和20%(AMO组),ROS生成增加86%(ISC组)和18%(AMO组),心磷脂含量降低34%(ISC组)和11%(AMO组).而且异戊巴比妥可以抑制环孢素A敏感的线粒体膜通道孔的开放.结论 异戊巴比妥对缺血再灌注心肌有保护作用.
作者：孙小燕；张凯伦；蒋雄刚；孙图成；李师亮 刊期： 2009年第03期
目的 观察莲房原花青素和银杏内酯联用对小鼠学习记忆能力的影响.方法 采用Morris水迷宫筛选空间学习记忆能力相近的昆明种雄性小鼠50只,随机分为5组,即正常对照组、模型组、低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组,每组10只;行为学测试开始前10 min腹腔注射东莨菪碱,建立小鼠记忆获得障碍模型;3个治疗组分别灌胃50 mg/kg莲房原花青素+10 mg/kg银杏内酯、100 mg/kg莲房原花青素+20 mg/kg银杏内酯、150 mg/kg莲房原花青素+30 mg/kg银杏内酯;其余两组灌胃生理盐水.喂养30 d后以行为学实验(Morris水迷宫法、跳台法)为指标观察莲房原花青素和银杏内酯的联合作用.结果 在东莨菪碱所致小鼠记忆障碍模型中,莲房原花青素和银杏内酯联用在Morris水迷宫中可缩短潜伏期,减少游泳距离;在跳台实验中可以延长平台停留期,显著减少错误次数.结论 莲房原花青素和银杏内酯联用能够改善东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍.
作者：张丽；许继取；荣爽；谢笔钧；孙智达；张允建；刘烈刚 刊期： 2009年第03期
目的 观察转染RECK基因对人骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及细胞侵袭力的影响.方法 以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含RECK全长基因的真核重组表达质粒pcDNA3-RECK转染入MG-63细胞,RT-PCR、流式细胞术检测目的 基因的表达,明胶酶谱法、Matrigel侵袭实验分别检测MG-63细胞MMP-2活化比例及细胞侵袭力变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和细胞生长曲线法观察转染质粒DNA对细胞的毒性作用.结果 转染后RECK基因在MG-63细胞Mrna和蛋白水平分别有稳定高表达;明胶酶谱显示重组质粒转染组MMP一2的活化比例均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.01),Matrigel侵袭实验显示重组质粒转染组穿透Matrigel的细胞数目均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.05);而MTT法测重组质粒转染组细胞生长曲线与正常对照组、空载质粒转染组无明显差异(均P>0.05).结论 RECK基因过表达可显著减少骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及其侵袭能力,RECK基因可能成为肿瘤治疗的新靶点.
作者：徐亮；郭君红；郭向飞；刘冠军；杨述华 刊期： 2009年第03期
目的 探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)与老年高血压病(EH)患者颈动脉粥样硬化的相关性.方法 采用酶联免疫吸附分析方法(ELISA法)测定125例老年EH患者及70例健康老年人血清AGEs浓度.同时测量血压,并使用B型动脉超声测定颈动脉内中膜厚度(IMT)及斑块,根据IMT将EH患者分为非IMT增厚组(40例)和IMT增厚组(85例),根据斑块严重程度EH患者分为0～3级4组.结合AGEs、IMT对各组进行比较和综合分析.结果 EH两组患者血清AGEs均显著高于健康老年人(均P<0.01),非IMT增厚组与IMT增厚组比较差异亦有统计学意义(P<0.01),血清AGEs水平随着斑块严重程度的加重而升高.斑块分级4组之间AGEs水平组间比较差异有统计学意义(P<0.05),并且IMT与AGEs及脉压(PP)呈显著正相关,IMT增厚组相关系数分别为0.742和0.638(均P<0.05),非IMT增厚组相关系数分别为0.553和0.425(均P<0.05),所有患者相关系数分别为0.679和0.538(均P<0.05).进行逐步回归分析,结果显示,AGEs、PP与IMT增厚密切相关.结论 血清AGEs水平升高与老年EH患者动脉硬化发病密切相关.
作者：李兵；向定成 刊期： 2009年第03期
目的 总结主动脉缩窄合并心内畸形的外科治疗经验.方法 武汉协和医院心血管外科2003年1月至2008年1月用3种术式共行主动脉缩窄合并心内畸形矫治18例.分期手术4例,一期主动脉缩窄修复,Ⅱ期室间隔缺损闭合(组Ⅰ);双切口一期手术8例,在循环阻断或局部灌注心肺转流下行主动脉缩窄修复和室间隔缺损闭合(组Ⅱ);正中切口一期手术6例,正中开胸非心肺转流下缩窄修复.同期闭合室间隔缺损(组Ⅲ).结果 组Ⅰ中死亡3例,1例出血心跳骤停,2例术后低心排综合征.组Ⅱ2例死于术后多器官功能衰竭.组Ⅲl例死于术后低心排综合征.12例术后随访6个月～4年,残余轻度主动脉缩窄,组Ⅱ2例、组Ⅲ1例,均无症状且无需再次手术.各组均未发现体循环高血压、动脉瘤形成和主动脉瓣返流等并发症.结论 主动脉缩窄合并心内畸形的外科手术策略主要根据心内畸形和缩窄病变特点决定.能一期手术矫治者好一期手术,其效果优于分期手术.
作者：刘成珪；肖诗亮；董念国；孙宗全；杨辰垣；周诚；邱雪峰 刊期： 2009年第03期
目的 检测哮喘患者诱导痰炎性细胞中Tim-3 mRNA的表达,并分析其与上清液中IL-4、IFN-γ的水平及肺功能的相关性,探讨Tim-3 mRNA在哮喘发生发展中的作用.方法 2007年10月至2008年5月在华中科技大学同济医院哮喘门诊或住院患者中收集哮喘缓解期患者25例,轻至中度急性发作期患者28例,利用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测哮喘患者诱导痰炎性细胞中Tim-3 mRNA的表达并做半定量分析,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中IL-4、IFN-γ的水平,并测定所有患者的肺功能,分析Tim-3 mRNA与IL-4、IFN-γ的水平及肺功能的相关性.结果 哮喘发作期诱导痰炎性细胞中Tim-3 mRNA吸光度值为(0.48±0.07),与缓解期的(0.21±0.04)和对照组(0.09±0.03)比较.差异均有统计学意义(均P<0.05),缓解期与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);哮喘发作期诱导痰上清液中IL-4的水平为(39.71±8.37)pg/ml,与缓解期的(21.63±9.18)pg/ml,和对照组(16.24±7.56)pg/ml比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),缓解期与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);哮喘发作期诱导痰上清液中IFN-γ的水平为(32.64±6.45)pg/ml,与缓解期的(78.51±8.62)pg/ml和对照组(86.47±9.31)pg/ml比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),缓解期与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).哮喘发作组诱导痰炎性细胞中Tim-3mRNA的表达水平与IL-4呈正相关(r=0.65,P<0.05),与IFN-γ和肺功能分别呈负相关(r=-0.89,r=-0.78,均P<0.01).结论 诱导痰炎性细胞中Tim-3 tuRNA表达增高可能参与哮喘的发生与发展.
作者：陆小霞；胡维琨；熊盛道；熊维宁；徐国鹏 刊期： 2009年第03期
目的 观察尼莫地平脑池局部给药治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的疗效.方法 动脉瘤性蛛网膜下腔出血的患者.随机分为脑池局部给药组和静脉给药组,通过经颅多普勒检测两种给药方式治疗脑血管痉挛后脑血流速度的变化,评价脑池局部给药的疗效.结果 脑池局部给药组手术后7 d内脑血流速度与术前相比没有明显的变化,且全身血压没有受到影响.静脉给药组术后3 d内脑血流速度比术前加快,4 d以后脑血流速度逐渐恢复正常.静脉给药组术后发生了低血压反应.结论 尼莫地平脑池内给药治疗脑血管痉挛的疗效优于静脉给药,且没有全身低血压反应的发生.
作者：陈劲草；夏涛；刘斌；李正伟；冯雨；王在责 刊期： 2009年第03期
目的 通过建立糖尿病小鼠模型,观察同种小鼠胰岛细胞移植前后血糖、胰岛功能的变化,探索胰岛细胞分离、纯化、移植的方法及有效性.方法 采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)复制糖尿病小鼠模型,经胆囊注入V型胶原酶水浴消化胰腺并进行密度梯度离心以分离纯化胰岛细胞,并在消化液和Ficoll分离液中加入了大豆胰酶抑制剂(STI)和牛血清白蛋白组份V(BSA),用双硫腙(DTZ)法判定胰岛纯度,锥虫蓝排斥试验评估胰岛存活率;糖尿病小鼠行同种异体胰岛细胞移植后,检测受体血糖、胰岛素及C肽变化,以判定胰岛功能.结果 糖尿病小鼠模型胰腺形态有明显病理变化,同种小鼠胰岛纯化后细胞形态完好,使分离纯化后的胰岛产量由原来方法的(40.7±13.2)个提高到了(263.5±32.I)个(P<0.01),活性在95%以上,胰岛移植后,实验组48 h后血糖明显下降,C肽水平上升.结论 采用加用STI、BSA小鼠胰岛细胞分离纯化方法可增加胰岛细胞产量,同种小鼠胰岛细胞移植能明显降低糖尿病小鼠血糖水平,改善胰岛功能,从而达到治疗目的 .
作者：王芳；杨业新；胡清；李雪锋；朱大菊；李元涛 刊期： 2009年第03期
目的 研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因型和等位基因频率分布,探讨MTHFR基因多态性与湖北地区汉族人冠心病发病的关系.方法 采用病例-对照研究方法,选取冠心病病例和与之年龄、性别匹配的对照各942例.应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time PCR)技术检测基因型,同时检测研究对象的空腹血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、血压、身高、体重及腰围(WC)等临床参数,并计算体重指数(BMI).结果 冠心病组MTHFR(C677T)基因CC基因型频率为36.0%、CT基因型频率为45.0%、TT基因型频率为19.0%;正常对照组的3种基因型频率分别为36.7%、43.3%和20.0%.冠心病组MTHFR(C677T)基因各基因型分布频率与正常对照组相比差异均无统计学意义(均P>0.05).Logistic回归分析结果提示,在吸烟者、活动少、有高血压史、糖尿病史和冠心病家族史的人群中患冠心病的危险性增加,反之则危险性降低.结论 MTHFR(C677T)基因多态性与中国湖北地区汉族人患冠心病的危险性无关,可能不是冠心病遗传危险因素之一.
作者：吴晓芬；程龙献；何美安；邬堂春；张存泰 刊期： 2009年第03期
目的 观察抗肿瘤新药重组人血管内皮抑素注射液联合化疗治疗晚期结直肠癌的有效性和安全性.方法 经组织学或细胞学确诊的晚期结直肠癌患者31例接受重组人血管内皮抑素加常规化疗药物联合治疗,重组人血管内皮抑素剂量为8.3～10.0 mg/m2,总量15 mg,加入生理盐水500 ml中缓慢静脉滴注3～4 h,滴注过程中给予心电监护,第1～14天连续给药;同时联合给予NCCN指南推荐的化疗药物治疗,每3周重复1次.按照RECIST标准评价近期客观疗效,按照NCI CTC 3.0版的分级标准评价药物毒性.治疗1周期后评价毒性,2周期后评价疗效.结果 所有31例患者均可评价疗效,其中部分缓解(PR)12例,稳定(SD)11例,疾病进展(PD)8例.临床有效率为38.7%(12/31),临床受益率为74.2%(23/31),未出现严重不良反应.结论 重组人血管内皮抑素联合化疗治疗晚期结直肠癌耐受性好,可以提高化疗的有效率,用于一线治疗时疗效提高更为显著.
作者：胡广原；张路；梅齐；胡国清 刊期： 2009年第03期
目的 探讨逆行性胰胆管造影(ERCP)在胆管良性疾病治疗中的作用及临床价值.方法 226例胆管良性疾病患者中,胆总管蛔虫1例,Oddi括约肌运动功能障碍12例,胆管炎性狭窄13例,手术损伤继发胆管狭窄2例,胆漏3例,胆总管结石195例,通过ERCP了解胆管良性疾病的类别、部位与性质,再采用内镜下乳头肌切开术(EST)、取石术、胆管扩张术、内镜鼻胆管引流术(ENBD)、内镜逆行胆管引流术(ERBD)等方法治疗.结果 226例患者中有223例成功,成功率98.7%,手术相关的并发症16例(7.08%).结论 ERCP及相关技术治疗胆管良性疾病成功率高、并发症少、安全,是治疗胆管良性疾病的首选方法.
作者：张姮；黄晓东；吴杰；王萍；刘文敏 刊期： 2009年第03期
目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在糖尿病周围血管病患者内皮祖细胞(EPC)中的表达及其意义.方法 将36例糖尿病患者分为周围血管病组(A组)和无周围血管病组(B组)各18例.对照组(C组)14例为来院体检的健康人.分离培养外周血EPC,采用MTT法检测EPC增殖率,RT-PCR法检测HIF-1α的基因表达,Western blot法检测其蛋白表达,并加以比较.结果 A组和B组EPC增殖率[分别为(13.3±5.1)%和(17.7±4.8)%]低于C组(23.7±5.2)%,差异均具有统计学意义(均P<0.05),而A组低于B组,差异具有统计学意义(P<0.05).HIF-1α的mRNA水平由低到高分别为A组、C组和B组[其mRNA相对表达强度分别为(0.57±0.12)、(0.925±0.15)和(1.25±0.21)],差异具有统计学意义(均P<0.05).A组与B组HIF-1α蛋白表达水平均高于C组,且A组低于B组,差异具有统计学意义(均P<0.05).结论 HIF-1α表达减低可能在糖尿病周围血管病的发生中起一定作用.
作者：赵湜；王红祥；毛红；李亚蓉；丁胜；王利 刊期： 2009年第03期
目的 构建针对富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,建立稳定转染的细胞株,观察其对目的 基因表达的影响.方法 根据GenBank中LRIG2基因序列设计2条RNA干扰序列,命名LRIG2-shRNA1、LRIG2-shRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照.据此设计合成各自的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil 2载体,转化扩增后进行序列测定.用不同浓度的G418作用于GL15细胞,得到G418对于GL15细胞的筛选浓度.3种重组表达载体转染胶质瘤细胞系GL15细胞,用G418筛选后挑单克隆后扩增获得稳定株.逆转录RT-PCR和Western印迹法分别在mRNA和蛋白水平上检测LRIG2的表达.结果 3种重组表达载体(pGenesil 2-LRIG2-shRNA1、pGenesil 2-LRIG2-shRNA2和pGenesil 2-negative shRNA)经限制性酶切及DNA测序分析证明序列插入正确.G418对于GLl5细胞的筛选浓度为600μg/ml,筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil 2-LRIG2-shRNA2组细胞LRIG2 mRNA和蛋白表达明显低于转染pGenesil 2-LRIG2-shRNA1、pGenesil 2-negative shRNA组.结论 成功构建了针对LRIG2基因的shRNA表达载体(pGenesil 2-LRIG2-shRNA2),转染细胞后可抑制LRIG2基因表达,为研究LRIG2基因的功能提供了基础.
作者：王宝峰；蔡明俊；陈如东；韩林；郭东生；雷霆 刊期： 2009年第03期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
