学术投稿

两种抗体纯化方法对乙肝核心抗体酶标试剂盒质量的影响

刘琦;张爱华;石磊

关键词:酶联免疫吸附测定, 亲和层析, 离子交换层析, 肝炎核心抗体, 乙型
摘要:采用亲和层析和离子交换层析两种方法从武汉抗乙肝病毒核心抗原鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株wHBC-3腹水中提纯抗-HBc单克隆抗体制备ELISA试剂盒.结果显示亲和层析法提纯的抗体收获率和抗体效价均高于离子交换法,与Abbott ELISA试剂盒对照检测临床标本496份,两种纯化方法制备试剂盒的特异性为l00%,符合率分别为99.80%和97.58%.提示采用亲和层析法纯化抗体所制备的ELISA试剂盒的特异性、敏感性和精密性均具有良好的临床应用价值.
华中科技大学学报(医学版)杂志相关文献
  • CYP2E1、GSTM1基因多态性与肺癌食管癌易感性研究

    研究细胞色素P4502E1基因(CYP2E1)、谷胱甘肽转硫酶M1(GSTM1)基因多态性与肺癌及食管癌易感性的关系,应用PCR-RFLP技术对120例肺癌、98例食管癌进行病例对照研究.发现肺癌组GSTM1 null基因型频率(61.7%)高于正常对照组(44.2%)(χ2=7.38,P<0.01),食管癌组该基因型频率(68.4%)亦高于正常对照组(42.9%)(X2=12.92,P<0.005),携带GSTM1 null基因型个体患肺癌和食管癌的危险性分别是非GSTM1 null基因型个体的2倍和3倍.CYP2E1 RsaI多态性分析研究表明,突变基因型(杂合子+突变纯合子)频率肺癌组(35%)和食管癌组(26.5%)均分别低于正常对照组(52.5%和55.1%,P<0.01).携带CYP2E1野生基因型个体发生肺癌和食管癌的危险性分别是携带CYP2E1突变基因型个体的2倍和3.5倍.认为GSTM1和CYP2E1 RaI多态性均是个体肺癌和食管癌的重要易感因素.

    作者:石云;周新文;周宜开;任恕 刊期: 2002年第01期

  • 口服盐酸万乃洛韦治疗2 3例水痘的临床观察

    应用万乃洛韦治疗23例水痘患者,年龄小于12岁者,按lo mg/(kg@d)分2次口服,疗程6 d;年龄大于12岁者,按300mg/次,每d 2次口服,疗程6 d.结果23例患者痊愈22例,显效1例,治愈率95.65%,有效率l00%,说明万乃洛韦治疗水痘疗效确切.

    作者:宋继权;盛晚香;陈宏翔;郑楷平 刊期: 2002年第01期

  • 果糖在甘氨鹅脱氧胆酸钠致体外培养大鼠肝细胞凋亡中的保护作用

    为探索阻塞性黄疸肝损害的机制及果糖的保护作用,采用胶原酶原位肝灌注法获取大鼠肝细胞,行原代培养,以不同浓度甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)作用肝细胞24 h后,用FCM法分析肝细胞的凋亡比率,用TUNEL技术进行肝细胞凋亡的原位检测;用不同浓度果糖(Fructose)作用于肝细胞,loo μmol/L的GCDC作用后行FCM及TUNEL检测.结果显示GCDC可致肝细胞凋亡,且随GCDC浓度的增加肝细胞的凋亡比率明显增加.经果糖作用后,100μmol/L的GCDC致肝细胞的凋亡率明显减少,且随果糖作用浓度的增加肝细胞凋亡率减少.提示胆盐致肝细胞凋亡,可能是阻塞性黄疸肝损害的机制;果糖在GCDC致大鼠肝细胞凋亡中起保护作用.

    作者:王剑明;邹声泉 刊期: 2002年第01期

  • 蛋白激酶Cα在门脉高压患者肝内外血管的表达

    对34例门脉高压患者的肝内外血管与30例对照组织行HE染色观察形态学变化;行蛋白激酶Cα(PKCα)免疫组化染色并行定量分析.结果发现门脉高压患者肝外血管呈门脉高压性血管病变,肝内有微循环障碍.正常肝内外血管PKCα免疫组化染色呈阴性或弱阳性,门脉高压患者的肝脏和脾动静脉呈强阳性,定量分析二者差异有显著性(P<0.01).提示:PKCα过度表达可能是门脉高压肝内外血管结构改变的重要原因,并可能改变其血管舒缩活性物质的合成及敏感性.

    作者:李德旭;周晟;王新保;李大鹏;邓小荣;杨镇;裘法祖 刊期: 2002年第01期

  • PKA对跨膜型与分泌型TNF-α诱导中性粒细胞功能的影响

    为研究PKA(蛋白激酶A)对跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)与分泌型TNF-α(S-TNF-α)诱导中性粒细胞呼吸爆发的影响,采用放免法及化学发光法观察两型TNF-α及联合应用腺苷酸环化酶激活剂在体外对中性粒细胞呼吸爆发及环磷酸腺苷(cAMP)水平的影响.结果显示S-TNF-α可明显诱导中性粒细胞呼吸爆发,同时使其cAMP水平降低(P<0.05);但TM-TNF-α却对之无明显影响.腺苷酸环化酶激活剂Foskorlin(50μmol/L)可明显提高中性粒细胞的cAMP水平(P<0.01),使S-TNF-a对中性粒细胞呼吸爆发的促进作用受到约15%的抑制(P<0.05),但对TM-TNF-α的作用无影响.提示PKA途径参与S-TNF-α诱导的中性粒细胞呼吸爆发的信号传导,而TM-TNF-α与之无关.

    作者:李莉;李卓娅;龚非力;姜晓丹;徐勇;冯玮 刊期: 2002年第01期

  • 多聚乙二醇化f蒜酶的特性研究

    采用酶活性测定及双扩散法研究了蒜酶及修饰度为53%的多聚乙二醇(PEG)化蒜酶的某些理化性质、抗原性和免疫原性及在体外和小鼠体内的活性半衰期.结果显示:在75%的乙醇中,蒜酶完全失活,而PEG化蒜酶仍保持了50%的活性.蒜酶和PEG化蒜酶适温度均为40C.与蒜酶相比,PEG化蒜酶在更宽的pH范围内具有催化活性,蒜酶的适pH为7,而PEG化蒜酶在pH为6~7范围内均具有强的催化活性.蒜酶与其抗血清形成明显沉淀线,而PEG化蒜酶既不与蒜酶的抗血清也不与自身的抗血清形成沉淀.在血清中PEG化蒜酶的半衰期为90 h,是蒜酶的45倍.PEG化蒜酶的小鼠体内半衰期达2.58 d,而蒜酶在小鼠体内30 min后,已测不出催化活性.多次应用PEG化蒜酶的小鼠体内,相邻两次应用的PEG化蒜酶半衰期无显著性差异.

    作者:戴华成;梁小勇;李仁利;石朝周;袁静;孙明辉 刊期: 2002年第01期

  • 乳酸林格氏液、高渗盐水和全血对失血性休克犬血液动力学的影响

    以失血性休克犬为研究对象,比较乳酸林格氏液(LR)、高渗盐水(HS)和全血(wB)对其血液动力学的影响.经右颈外静脉插人Swan-Ganz飘浮导管,分别在全身氧供(DO2)恢复至休克前水平时,以及液体复苏后5、10、15、30、60和1 20 min时测量动物的各项血液动力学指标.结果显示,HS仅需要11.83 ml/kg的液体量,在4.97 min时即可使休克犬的DOz恢复至休克前的水平,而LR组和WB组则分别需要52.08 ml/kg和23.33 ml/kg的液体量,在20.83 min和9.33 min时才能使休克犬的DO2恢复至休克前的水平.3组动物在DO2恢复至休克前水平时其血液动力学指标均能恢复至休克前的水平.提示高渗盐水比乳酸林格氏液和全血更适合失血性休克患者的早期紧急液体复苏治疗.

    作者:张汉生;袁世荧;姚尚龙 刊期: 2002年第01期

  • 贞芪扶正胶囊抗大鼠肝癌机制的研究

    以二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌为模型,运用免疫学和病理学技术观察贞芪扶正胶囊对4组诱癌大鼠血清白细胞介素2、肿瘤坏死因子浓度,自然杀伤细胞活性及肝脏形态改变的影响.结果显示:服用贞芪扶正胶囊8周后再加致癌剂的大鼠,其自然杀伤细胞活性明显高于单纯服用致癌剂的大鼠(P<0.01),血清白细胞介素2、肿瘤坏死因子浓度与单纯致癌组相比有增高趋势,致癌剂对肝脏的毒性损伤也明显低于其它实验组.提示贞芪扶正胶囊可增强化学诱癌时大鼠的抗癌能力,减轻致癌剂对肝脏的毒性损伤和延缓肝癌发生.

    作者:官阳;周泽斌;阮幼冰;武忠弼 刊期: 2002年第01期

  • 重组人α1 b干扰素滴眼液对单纯疱疹病毒性角膜炎的治疗作用

    为观察重组人α1b干扰素滴眼液的治疗作用,用家兔制作单纯疱疹病毒性角膜炎模型,与阿昔洛韦滴眼液进行对照研究.结果显示,重组人α1b干扰素滴眼液能缩短单纯疱疹病毒性角膜炎的病程,防止角膜出现深层病变,改善预后,不留瘢痕.研究表明,重组人α1b干扰素滴眼液对家兔单纯疱疹病毒角膜炎有一定疗效.

    作者:曲玲;王维亭;李俊;郭莲军 刊期: 2002年第01期

  • 聚合酶链反应对耐甲氧西林葡萄球菌的监测

    为了解同济医院临床各科室分离的金黄色葡萄球菌对甲氧西林类抗生素耐药性的状况,收集同济医院临床各科室1999年分离的金黄色葡萄球菌84株,通过设计的引物,利用扩增耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因,用地高辛标记的特异性探针与PCR扩增产物杂交.84株金黄色葡萄球菌中获得8株扩增产物为阳性的菌株,用这些阳性产物与地高辛标记的探针进行Southern blot分析,杂交结果与PCR结果一致,故同济医院1999年金黄色葡萄球菌对甲氧西林耐药率为8.8%.将聚合酶链反应技术用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),其敏感性、特异性较高,且重复性好,准确率比实验室常用纸片法更高,为指导临床应用抗生素提供了一个切实可行的方法.

    作者:肖江;田德英;申正义;孙自镛 刊期: 2002年第01期

  • 补肾通脉方对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响

    为观察补肾通脉方对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响,采用链脲佐菌素(STZ)静脉注射(30 mg/kg)并给予高热量饮食的方法复制2型糖尿病大鼠模型,以补肾通脉方、二甲双胍分别进行治疗10周,测量体重、空腹血糖、胰岛素、胰岛素敏感指数、血脂等指标.结果表明:模型组体重、血脂高于正常对照组,胰岛素敏感指数明显低于正常对照组:与模型组比,补肾通脉方、二甲双胍组体重、血脂降低,胰岛素敏感指数升高.提示补肾通脉方具有增加胰岛素敏感性和降血脂作用.

    作者:陆付耳;杨明炜;邹欣;徐丽君 刊期: 2002年第01期

  • P21/Wafl调节血管紧张素Ⅱ的抗增生作用

    为了研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的抗内皮细胞增生作用及其分子生物学调节机制,将健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第3代,用AngⅡ培养并在不同时间计数细胞密度.用TUNEL或ELISA方法证明AngⅡ或CGP42112A诱导内皮细胞凋亡.用RT-PCR和Western Blot检测p21/waf1 mRNA和P21蛋白的表达并测定条带的光密度.结果表明,在Ang I培养后不同时间,细胞密度比对照减少30%左右(P<0.01).AngⅡ作用后可以诱导典型的凋亡,阳性率极显著高于阴性对照组并具有剂量依赖性.AngⅡ组或CGP42112A组的p21/waf1 mRNA表达分别是对照组的(473.69±39.97)%和(391.58±48.24)%(P<0.01).Ang Ⅱ组的P21蛋白表达比对照组极显著地增加并具有时间依赖性.认为Ang I具有抗内皮细胞增生作用,其细胞内机制是同时诱导凋亡和p21/waf1 mRNA与p21蛋白的高表达,使细胞发生G1期阻滞,增殖受抑.

    作者:熊先智;张建初;刘纬;杨卫兵;陶晓南;傅薇;向敏;彭毅 刊期: 2002年第01期

  • Par4在去势大鼠腹叶前列腺中的表达

    为探讨Par4在去势大鼠腹叶前列腺中表达的规律及其与前列腺凋亡的相关性,将90只大鼠随机分为9组,分别于去势后0、1、2、3、5、7、10、14、21 d处死,取前列腺石蜡包埋切片后行免疫组化检测Par4和增殖抗原(PCNA),末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记术(TUNEL)测定前列腺凋亡,并作连续切片,行计算机图像重建技术比较Par4与凋亡及PCNA表达的关系.结果表明:正常大鼠前列腺Par4表达较少,去势后则显著增加,与凋亡的变化及分布规律相似,其表达的阳性率与凋亡阳性率呈正相关(r=0.7605,P<0.01).Par4的表达和PCNA无明显相关(r=-0.4894,P>0.05).Par4在去势大鼠腹叶前列腺表达增高,与凋亡呈正相关,提示有促凋亡的作用.

    作者:蓝儒竹;叶章群;陈春莲;陈杰;杜广辉;刘继红;周惜才 刊期: 2002年第01期

  • 值夜班对不同体质人体昼夜生理节律影响的研究

    探讨轮班对不同中医阴阳体质人体昼夜节律特征的影响,为轮班不适应证的中医药防治提供实验基础.用统一的中医阴阳体质分型,选出25名不同阴阳体质的男青年(阴不足组14人,阳不足组11人),按Moog's法连续执行11个夜班,于夜班前及连续夜班期的不同阶段,在隔离室内进行昼夜高频次的体温、心率、脑电监测,对所得数据进行余弦法处理和t检验.发现:①各测试日体温、心率和睡眠存在节律性(P<0.05).②轮班后体温、心率和睡眠的节律的相位发生转移,但转移的速度不同.阳不足组体温节律的相位日平均转移0.55 h,快于阴不足组的0.29 h;两组人睡眠节律相位的转移速度相似,致使阳不足组轮班后体温与睡眠节律失同步.③体温节律的振幅阳不足组轮班后减小,而阴不足组增大.提示:阳不足的人可能更难于适应轮班,调理阴阳可能有利于轮班不适应证的防治.

    作者:胡汉波;邵山;宋开源 刊期: 2002年第01期

  • 牛磺胆酸钠滴眼剂的制备及药效学初步研究

    以胆酸为原料合成牛磺胆酸钠,制备了牛磺胆酸钠滴眼剂,并对其pH值、渗透压及稳定性等理化性质进行了测定.通过动物实验证实,该滴眼剂无明显刺激性.在此基础上,以家兔为实验动物,采用兔眼石灰碱烧伤模型进行药效学观察,结果表明,牛磺胆酸钠滴眼剂有较显著的疗效.提示:用人工合成的方法制备的牛磺胆酸钠滴眼剂对治疗眼科疾病具有一定的临床意义和开发价值.

    作者:王凯平;张玉;石朝周;梅和珊;李沙 刊期: 2002年第01期

  • 两种抗体纯化方法对乙肝核心抗体酶标试剂盒质量的影响

    采用亲和层析和离子交换层析两种方法从武汉抗乙肝病毒核心抗原鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株wHBC-3腹水中提纯抗-HBc单克隆抗体制备ELISA试剂盒.结果显示亲和层析法提纯的抗体收获率和抗体效价均高于离子交换法,与Abbott ELISA试剂盒对照检测临床标本496份,两种纯化方法制备试剂盒的特异性为l00%,符合率分别为99.80%和97.58%.提示采用亲和层析法纯化抗体所制备的ELISA试剂盒的特异性、敏感性和精密性均具有良好的临床应用价值.

    作者:刘琦;张爱华;石磊 刊期: 2002年第01期

  • 低氧时NF-кB和P53在大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡中的变化

    对培养的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)用免疫细胞化学、western blot和原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)进行检测.免疫细胞化学染色发现无血清培养基(SFM)组中PASMC核因子-кB(NF-кB)阳性指数明显低于低氧48 h(H48h)组(P<0.05),H48h组P53阳性指数与SFM组相比有增高趋势.增殖细胞核抗原阳性指数(PI)在SFM组明显低于H48h组(P<0.05),SFM组抑制性-кBα(I-кBα)的含量是H48h组的2.5倍,SFM组的凋亡指数(AI)明显高于H48h组(P<0.05);NF-кB阳性指数与AI呈负相关(r=-0.737,P<0.05)而与PI呈正相关(r=0.802,P<0.05).提示:低氧时PASMC中NF-кB活性明显增加,表明NF-кB可能抑制PASMC的凋亡并促进其增殖;低氧时P53有增高的趋势,其对PASMC增殖和凋亡的影响可能被激活的NF-кB抑制.

    作者:敖启林;熊密;郝春荣;王迪浔 刊期: 2002年第01期

  • 乙醇固定对肿瘤细胞的蛋白质提取及Western印迹的影响

    为研究乙醇固定后肿瘤细胞的蛋白质提取及western印迹的可行性.于低温(4℃)或常温条件下裂解经75%冷乙醇固定的肿瘤细胞(HL-60细胞和Molt-4细胞),提取细胞蛋白质进行SDS-PAGE凝胶电泳和western印迹.结果显示经预处理后的肿瘤细胞中提取的蛋白质不论是在SDS-PAGE后的考马斯亮蓝染色,还是转膜后的Western印迹均可得到可分析的蛋白质条带.提示75%冷乙醇固定的肿瘤细胞仍适用于SDS-PAGE和western印迹,并可结合流式细胞术对肿瘤细胞蛋白质进行细胞周期定性、定量和定时相的同步分析.

    作者:陈义发;龚建平;裘法祖 刊期: 2002年第01期

  • 卵巢未成熟畸胎瘤43例综合治疗疗效分析

    为探讨不同手术方式及化疗方法对卵巢未成熟畸胎瘤的疗效及相关影响因素,对43例卵巢未成熟畸胎瘤患者进行回顾性分析.手术方式分为:保守性手术(患侧附件、大网膜切除术+盆、腹腔腹膜结节切除术+盆腔淋巴结清扫术)及根治性手术(全子宫、双附件及大网膜切除术+肿瘤细胞减灭术+盆腔淋巴结清扫术).术后采用VAC(长春新碱,阿霉素,环磷酰胺)方案、BEP(博莱霉素或平阳霉素,足叶乙叉甙,顺铂或卡铂)方案或VBP(长春新碱,博莱霉素或平阳霉素,顺铂或卡铂)方案进行联合化疗.患者5年生存率根治性手术为44.4%,保守性手术为64.0%,差异无显著性.VAC方案与BEP(或VBP)方案的5年生存率分别为33.3%和77.3%(P<0.01).疗程数≥4患者的5年生存率为73.9%,明显高于疗程数<4患者的38.9%(P<0.05).认为对于有生育要求的卵巢未成熟畸胎瘤患者,可仅行保守性手术,术后辅以联合化疗.BEP(或VBP)方案对患者长期生存率的改善明显优于VAC方案.术后化疗的疗程数与疗效有关,对长期生存率的影响较明显.

    作者:王世宣;唐雄志;王常玉;马丁 刊期: 2002年第01期

  • 人乳头瘤病毒感染与女性生殖器尖锐湿疣发病的相关性

    为探讨人乳头瘤病毒(HPV)感染与女性生殖器尖锐湿疣的相关性,随机选择协和医院性病专科门诊有临床疣者30例(A组),无临床疣者53例(B组),采用PCR技术检测HPV.另从HPV阳性者中选择36例,采用PCR技术检测淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)及解脲支原体(UU).结果A组HPV阳性率显著高于B组(P<0.01).36例HPV阳性者16例为NG或CT或UU感染,而非尖锐湿疣,6例为尖锐湿疣与NG或CT或UU混合感染.提示为了提高尖锐湿疣的正确诊断率,须将传统的病理组织学检查与现代的PCR技术结合运用.

    作者:何丽萍;邱红玉;蒋晓薇;孙永玉 刊期: 2002年第01期

华中科技大学学报(医学版)杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:华中科技大学