学术投稿

从组织切片上分离单个细胞的相关技术及其应用前景

杨文涛;许良中

关键词:组织切片, 单个细胞, 相关技术, 方法, 细胞悬液, 分子生物学技术, 提取, 免疫组织化学, 密度梯度离心, 聚合酶链反应, 形态学特征, 相关性研究, 流式细胞仪, 组织形态, 织学技术, 细胞组成, 细胞体积, 细胞筛选, 细胞分离, 微操纵器
摘要:1 从组织切片上分离单细胞方法的建立从组织切片上进行单个细胞分离,并扩增出靶DNA片段的技术是1993年由德国科隆大学的Hansmann等[1]建立起来的一项新技术,并将其称为分子组织学技术(molecular histology).该方法的大优点在于能够针对所需研究的细胞,将组织形态和分子生物学技术密切结合,特别适用于细胞组成复杂的病变.同年,Trumper等用霍奇金病(HD)淋巴结制备细胞悬液,结合免疫组织化学,用微操纵器从细胞悬液中提取单个Reed-Sternberg(RS)细胞,并成功地进行了聚合酶链反应(PCR)[3].两种方法相比较,前者更具优势,因为从组织切片上提取单个细胞,能密切结合形态学特征,更为直观和准确,同时也能将目的细胞与周围微环境中的背景细胞作相关性研究.获得单个细胞还有其他方法,如流式细胞仪、密度梯度离心、高梯度磁性细胞筛选,但细胞体积较大时,这些方法易导致细胞碎裂,而从组织切片上提取单个细胞不存在类似问题[4].
诊断病理学杂志相关文献
  • 腹壁肺吸虫病1例

    患儿男性,10岁.发现腹壁肿块1周.肿块约核桃大小,质地偏硬,无疼痛及其他不适,无破溃,无发热恶心呕吐及腹泻.5个月前曾因左腰部肿块行切除术,术后病理示:肉芽肿性病变伴碎屑样坏死及见大量嗜酸性细胞浸润.查体:腹平,左腹直肌处扪及约1.5cm×1cm×1cm大小肿块,质地偏硬,有轻压痛,肿块边界清,表面光滑,腹直肌紧张时肿块更加明显,遂手术切除.

    作者:李小静;张杰 刊期: 2001年第02期

  • 与判断肿瘤预后有关的免疫组化标志物

    肿瘤标志物是病理学研究的热点之一,当前所涉及的肿瘤标志物种类繁杂,方法多样,结果不一.本文力争从实用性出发,对目前多数医院已能常规开展的免疫组化检测中与判断肿瘤预后有关的标志物进行综述.

    作者:余英豪 刊期: 2001年第02期

  • 应用苯酚处理霉变盖玻片的方法

    盖玻片是病理切片制作中常用的材料,如果长期存放,盖玻片受潮后表面极易滋生霉菌,使用这种盖玻片封固组织切片,显微镜下视野模糊不清呈云雾状,严重影响组织切片的清晰度,给病理诊断带来一定的困难.我们采用6种不同的清洗液清洗霉变盖玻片,并进行比较,后选择5%苯酚水溶液作为日常工作中盖玻片清洗液.

    作者:胥维勇;杨红;李科;杨群 刊期: 2001年第02期

  • 胆囊癌组织p53和PCNA表达及其相关性研究

    目的探讨胆囊癌组织学分级、淋巴结转移与p53、PCNA表达的关系,为临床判断恶性程度及预后提供参数.方法应用SP免疫组化方法,检测51例胆囊癌组织中n53、PCNA的表达水平.结果 p53、PCNA在胆囊癌组织中表达的总阳性率分别为39.2%、56.9%,与胆囊癌的病理分级、转移密切相关(P<0.01).p53表达与PCNA表达呈明显正相关.结论 p53、PCNA是胆囊癌较特异的肿瘤标记物,其表达与胆囊癌淋巴结转移、病理分级有关.

    作者:谢小志;高宝辉;张海燕;赵志光 刊期: 2001年第02期

  • 骨Paget病1例

    患者男性,55岁.跌伤右臀部,疼痛、左下肢不能活动24h入院.查体:左大腿上部外侧轻度肿胀,触痛,左下肢外旋畸形,轴向叩击痛,左髋、膝关节活动受限,左足趾活动、皮肤感觉无异常,踝关节活动正常,足背动脉正常,双下肢等长.实验室检查血AKP 155u/L,Ca、P正常.X线摄片示左股骨粗隆下横形骨折,股骨头、股骨颈、股骨干至中下1/3以上骨质异常改变,骨质增生和破坏同时出现.

    作者:周虹;谢余澄;刘文丽;李凯声 刊期: 2001年第02期

  • 菊池(Kikuchi)淋巴结炎的病理诊断

    菊池淋巴结炎,又称菊池病(Kikuchi disease),1972年由日本菊池教授首先报告.亚洲多发,但后来在欧美国家亦有报告.名称较多,有称组织细胞性坏死性淋巴结炎,亚急性坏死性淋巴结炎等.其临床与病理的特点是:①青少年、女性多发.多数伴发热,持续不退,白细胞减少,应用抗生素治疗无效.好侵犯颈部淋巴结,他处淋巴结亦可受累,数周或数月自愈;②淋巴结皮质区单个或多个凝固性坏死灶.坏死灶以组织细胞为主,并有浆样单核细胞,T免疫母细胞等增生,伴不同程度的凝固性坏死;③病灶内见到不定量的核碎片与胞浆颗粒,分布于吞噬细胞内外,这是一个重要特征;④病灶区不见中性白细胞浸润;⑤病因尚未明确,但多数作者认为是病毒等感染导致Ts诱导的变态反应.Kuo(1995)提出菊池淋巴结炎分3型:①增生型(proliferative):病变区主要为增生性组织细胞、浆样单核细胞(T标记)、免疫母细胞(T为主)等,其中非吞噬性(新生性)组织细胞和T免疫母细胞,核可扭曲不规则,易见分裂象.只有少数核碎片而无明显坏死,此型易与NHL相混淆而误诊.但作免疫组化标记显示以组织细胞为主的多细胞成分组成,加上有核碎片、灶性病变、背景为增生淋巴结组织等与NHL可以鉴别;②坏死型(necrolizing):病灶有明显的凝固性坏死,大量核碎片与明显吞噬现象,一般易于确诊;③黄色瘤样型(xanthomatous):病灶中以泡沫样组织细胞为主.此型较少见.3型改变可能是病变的不同阶段,同一淋巴结可见几种类型改变.

    作者:朱梅刚 刊期: 2001年第02期

  • 子宫苗勒管腺肉瘤1例

    患者女性,66岁.绝经16年,阴道出血1周.妇科检查:外阴老年型,阴道通畅血染,宫颈光滑,子宫增大如孕2个月,后壁突出,质硬.双侧附件(-).B超及临床诊断:子宫肌瘤,子宫内膜癌可能.行分段诊刮术.

    作者:谢余澄;周虹;刘文丽;李凯声;郭晋 刊期: 2001年第02期

  • 肾脏原发性恶性淋巴瘤1例

    患者男性,57岁.因无痛性肉眼血尿半个月人院,血尿鲜红色,有血块,无尿频尿急尿痛等.体检两肾区无明显局部隆起、红肿,无叩击痛.B超示右肾中下部74mm×53mm低回声区,诊断右肾占位病变(肾癌可能).CT检查为右肾下极有75mm×55mm边界尚清、边缘不规则之等密度块影,腹膜后、腹主动脉及下腔静脉周围未见异常密度块影.IVP检查为右肾下盏破坏,相应部位肾影增大,略分叶,提示右肾改变符合肾癌.临床诊断:右肾癌.

    作者:蔡瑞霞;陈洁晴 刊期: 2001年第02期

  • 纵隔巨大支气管囊肿1例

    患者女性,23岁.无诱因呼吸困难一年,夜眠时仰卧明显,侧卧缓解.发现左下颈部肿块2个月.查体:发育正常,营养差,颈部无抵抗,气管左偏,胸骨上凹和左侧锁骨上凹消失,有一肿块膨出,左偏、质韧、表面光滑、无压痛、不活动,不随吞咽上下移动,无血管杂音.CT示纵隔巨大囊性占位,直径约20cm,左侧肺组织膨胀不全.

    作者:范瑞;高峰;王欣勤;吴光峰;付先勇;孙征 刊期: 2001年第02期

  • 泪腺腺癌2例

    例1男性,72岁.因右眼球外突伴视力下降1年余入院.查体:右眼球外突,角膜混浊,向颞上方活动受限,右眶外上方触及肿物如花生米大,活动度小,无痛.心肺(-),腹平软,未触及肿块,左眼及其他部位无异常.

    作者:许艳梅;武培敬 刊期: 2001年第02期

  • 肠系膜癌肉瘤1例

    患者男性,63岁.腹部包块2月余入院.B超示上腹部巨大实质性占位病变,轮廓清楚,肝、胆、脾、胰、肾正常.术中见肿物位于结肠上区,起自肠系膜根部,与大网膜、肝、结肠系膜关系密切.

    作者:廖言辉;任淑菊;李建民 刊期: 2001年第02期

  • 生物芯片在病理诊断中的应用

    生物芯片技术作为电子学和生命科学结合产生的高科技杰作,虽然诞生仅仅几年的时间,却引起人们的广泛关注.本文对生物芯片技术在病理诊断中的潜在作用予以简介.

    作者:纪小龙;尹彤 刊期: 2001年第02期

  • HPV6B/11型病毒原位分子杂交检测方法的改进与应用

    原位分子杂交与病理免疫组化相比有定位更准确、特异性更强、敏感性更高、无内源性干扰等特点,从分子生物学水平为病理诊断、鉴别诊断和预后判定提供了更可靠的指标,从而受到广泛重视.然而此项技术又因实验步骤繁杂、技术要求高、耗时长、影响因素多,在基层医院推广应用受到一定限制.为此,我们对原始操作法的一些主要技术步骤进行了探索性改进.通过30例标本2种方法的对比检测,其结果准确一致,仅需35h即可完成,比原始方法所需时间缩短一倍.应用2年多来效果较好,介绍如下.

    作者:梁化印;郭瑞峰;杜双存;陈健 刊期: 2001年第02期

  • 白细胞介素18在慢性淋巴细胞性甲状腺炎中的表达

    白细胞介素18(IL-18)是新近克隆成功和命名的一个早期致炎性细胞因子[1,2].为了研究IL-18在慢性淋巴细胞性甲状腺炎发病中的表达,我们在国内率先对IL-18免疫组化染色方法进行了摸索和改进,现介绍如下.

    作者:杨京平;洪天配;裴斐 刊期: 2001年第02期

  • 肛管直肠恶性黑色素瘤12例临床病理分析

    恶性黑色素瘤不常见,大部分发生于皮肤,发生于肛管直肠少见,恶性程度也更高.本文对12例肛管直肠原发恶性黑色素瘤的形态学、免疫表型和综合治疗进行研究,结合复习文献,对其与预后的关系进行简要讨论.

    作者:谢明;刘铁牛 刊期: 2001年第02期

  • 用泡沫塑料溶剂封固切片的探讨

    日常各种病理切片染色后,多采用中性树胶进行封固,我科经过反复实验,自制了一种泡沫塑料溶剂,封固效果较好,现将其介绍如下.1 材料与方法选择洁净泡沫塑料30g,二甲苯100ml,混匀静悬后使用.

    作者:郭琦 刊期: 2001年第02期

  • 右拇指末节骨内表皮样囊肿1例

    患者男性,25岁.无明显诱因出现右拇指末节肿痛.查体:右拇指肿胀、压痛,功能正常.X线示:右拇指末节骨破坏.临床诊断:右拇指末节内生软骨瘤.行肿物刮除术,刮出淡黄色鳞片状瘤体,瘤腔约1cm×0.5cm,壁坚硬.

    作者:傅福来;周晓军;马恒辉 刊期: 2001年第02期

  • 特殊类型乳腺癌(三)

    作者主要对乳腺乳头状移行细胞癌、伴有黑色素细胞分化的乳腺癌、富于肌上皮的乳腺癌,乳腺腺泡细胞癌、伴横纹肌样瘤分化的乳腺癌、伴绒毛膜癌分化的乳腺癌和伴反应性内芽肿的乳腺癌的形态学特点和鉴别诊断进行讨论.这些都是十分少见的乳腺癌,其中有些是否可作为单独的类型还有争议.

    作者:丁华野;皋岚湘 刊期: 2001年第02期

  • 马尾的原始神经外胚层肿瘤

    (英)Plillip A……∥Hu Path,2000,31(8):999-1001本文报道了一例原发于马尾的原始神经外胚层肿瘤(PNETs).患者男性,52岁.主诉为进行性背痛、行走困难6个月,尿失禁、鞍区麻木2周.体检证实L4~S2分布的左边区域与S1~S2分布的右边区域针刺感觉减退.特征性的有肛门括约肌张力减退,双侧直腿抬高受限,左大腿背屈减弱为3/5级,双侧膝跳反射减弱.急诊脊柱MRI和钆加强扫描显示一10cm长的椎内肿瘤从L2~3椎间盘尾部延伸至15前部.肿瘤为包围而非转移至脊神经根但并没有侵犯脊髓.大脑MRI和钆加强扫描正常.术中证实有萎缩的硬脊膜下松软、易碎的椎内肿瘤.肿瘤包绕脊神经根并且浸润一侧的部分神经根和其他神经根的背面.冷冻切片显示为坏死性未分化的圆形细胞肿瘤,在保存的HE染色切片上,肿瘤的特点为小的未分化细胞含有清晰但是空染的胞浆和染色质丰富的胞核,表现为染色质边集和核仁不清.偶见有由未分化的圆细胞形成的HomerWright菊形团,未见有室管膜型的血管周围菊形团形成.分裂象与凋亡的肿瘤细胞均易见.局灶性肿瘤细胞含有糖原,胞浆内PAS阳性细胞颗粒在淀粉酶消化后消失.未见有胶质细胞.圆形细胞对synaptophysin,CD99和vimentin显示为强(+),GFAP、NSE和S-100为局灶(+),CD20、CD45RO、CD57、CKM5.2 、 chromogranin、 desmin、 EMA 、 LCA、 NF、 serotonin 和 Somatostatin都为(-).以上组织学和免疫组织化学特点都支持诊断这种未分化的圆形细胞为PNET.PNETs是侵袭性生长的肿瘤,其与Ewing's肉瘤之间的区分尤为重要,因为PNETs预后更差.对脊髓和马尾的PNETs没有标准的治疗方案,许多患者经过化疗、放疗和外科手术的综合治疗,预后仍然欠佳,生存率几乎不超过2年.该患者正接受密切的随访,以期找到肿瘤复发的证据.(解放军307医院病理科袁顺宗摘李晓兵校)

    作者: 刊期: 2001年第02期

  • 胰腺囊性实性肿瘤4例报告

    胰腺囊性实性肿瘤(solid-cystic tumor of pancreas)又称乳头状-囊性肿瘤.多发于青春期及青年女性.临床一般无特殊症状或仅有上腹不适,肿瘤较大时可有上腹部肿块,该瘤大多表现为良性生物学行为,手术切除治愈率高,但有报道该瘤偶有复发甚至转移[1],故须引起重视.

    作者:周会行;寇育红;田学智 刊期: 2001年第02期

诊断病理学杂志

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主管:北京军区联勤部卫生部

主办:北京军区总医院