高红伟；张雪；李素波；檀英霞；鲍国强；王颖丽；徐丽娟；季守平；宫锋
本研究构建miR-20a基因的miRNA海绵载体,建立Jurkat-S稳定细胞株,为进一步研究的miR-20a功能及应用干扰技术治疗奠定基础.设计、合成1对含有2个重复针对miR-20a成熟序列第9-12碱基错配的序列,并带有酶切位点,退火后连接到pCDNA3.0-L表达载体上；载体双酶切后再与退火产物连接,重复4次后进行酶切及荧光素酶活性鉴定；亚克隆到慢病毒表达载体,与psPAX2、PMD2G共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染Jurkat细胞,建立稳定细胞株；应用实时PCR和Western blot技术分别检测Jurkat-S稳定细胞中P21及E2F1 mRNA和蛋白的表达,并与对照组进行比较.结果表明,成功构建了针对miR-20a基因的海绵载体,病毒滴度为5×107TU/ml;建立了稳定转染的Jurkat-S细胞株.有效干扰验证显示,miR-20a海绵能明显上调P21及E2F1的mRNA及蛋白表达水平,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建miR-20a基因的miRNA海绵载体,建立稳定干扰miR-20a表达的Jurkat-S细胞株.
作者：吴顺泉；徐珍珍；林君；战榕 刊期： 2012年第05期
活性氧( ROS)是需氧细胞在代谢过程中产生的一类氧衍生的分子,主要包括超氧化物、羟自由基、烷氧基、过氧化氢、次氯酸、臭氧等.ROS可导致DNA、蛋白质等生物大分子损伤、脂质过氧化,破坏细胞的结构和功能.同时,ROS可通过多种信号途径参与多种致纤维化因子的信号转导,调节细胞的增殖、分化、凋亡等生理功能,并与肝纤维化、肺纤维化等多种组织纤维化疾病的发生发展有关；另外,近年来研究表明,ROS在骨髓纤维化中也可能扮演了重要的角色.因此,ROS在组织器官纤维化中发挥着不可忽视的作用.本文就ROS与常见组织器官纤维化的关系作一综述.
作者：孟娟霞；赵明峰 刊期： 2012年第05期
原发性系统性轻链淀粉样变性(AL)是系统性淀粉样变性疾病中常见的类型,近已明确AL是异常浆细胞导致的恶性肿瘤.这些浆细胞产生过量的免疫球蛋白轻链,形成具有蛋白质毒性的纤维状淀粉样物,通过异常折叠和沉积于多种组织器官,引起多脏器损害.AL诊断较困难,以往主要通过活检组织的刚果红染色.现在使用流式细胞术可以通过患者骨髓浆细胞的免疫球蛋白轻链限制性及异常表型特征检测异常浆细胞克隆,有助于早期确诊AL,并作为诊断AL后临床疗效监测的重要指标.本文就AL的诊断和分型、临床特点、骨髓浆细胞免疫表型的流式细胞术检测,异常浆细胞免疫球蛋白轻链限制性和表型特点等作一简要的综述.
作者：胡旸；朱平 刊期： 2012年第05期
本研究旨在探讨环氧化酶-2(COX-2)特异性抑制剂塞莱昔布(celecoxib)对急性白血病细胞血管新生因子血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子-β(TGF-β)mRNA表达的影响及其意义.采用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测30例急性白血病细胞经塞莱昔布干预前、后VEGF、b-FGF和TGF-β mRNA表达及变化.结果表明,急性白血病细胞存在VEGF、b-FGF和TGF-βmRNA的表达.VEGF mRNA与b-FGF mRNA表达存在正相关(r=0.559,P=0.001),VEGFmRNA与TGF-β mRNA表达存在负相关(r=-0.4,P=0.029).经塞莱昔布(80 μmol/L,48 h)处理后急性白血病细胞的VEGF、b-FGF和TGF-βmRNA表达较对照组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:塞莱昔布通过下调血管新生因子的表达而抑制血管增生,对急性白血病治疗具有辅助作用.
作者：张彦芳；阮林海；赵小强 刊期： 2012年第05期
本研究通过检测c-MPL在急性髓系白血病(AML)患者骨髓细胞中的表达,探讨c-MPL表达与CD34、CD38的相关性,以确定c-MPL在白血病干细胞的表达.通过流式细胞术检测29例初诊AML患者的c-MPL和CD34、CD38阳性细胞比例；比较患者c-MPL表达水平与正常对照的差别及与临床指标的关系；分析患者的c-MPL表达水平与CD34、CD38各部分细胞分群的关系及它们之间的相关性.结果表明:AML患者骨髓细胞中c-MPL表达水平显著高于正常对照组(P＜ 0.05)；c-MPL的表达与患者的年龄、性别、白细胞计数、AML1 -ETO融合基因、化疗后缓解情况无关；c-MPL在M2和M5分型中的表达显著高于正常对照组(P＜0.05).CD34阳性AML患者组的c-MPL表达水平显著高于CD34阴性AML患者组(P＜0.01).AML患者c-MPL在CD34+细胞中的表达显著高于CD34 -细胞(P ＜0.001)；AML患者中c-MPL在CD34+ CD38+和CD34+ CD38 -两群细胞中的表达无显著性差异(P＞0.05)；c-MPL和CD34的表达呈正相关(r=0.380,P=0.042).结论:c-MPL在AML患者中高表达,且与CD34的表达水平具有一定的正相关性,c-MPL表达于白血病干细胞.
作者：于沛；邱少伟；饶青；林冬；邢海燕；唐克晶；田征；王敏；王建祥 刊期： 2012年第05期
多发性骨髓瘤(MM)是一种浆细胞恶性增殖性疾病,以骨髓中克隆性浆细胞异常增生、积聚,并分泌单克隆免疫球蛋白或其片段(M蛋白)为特征.目前认为,MM仍是一种不可治愈的疾病.近年来MM患者髓外复发的发生率有上升趋势,尤其是在接受造血干细胞移植和新型靶向药物治疗后.本文重点就MM髓外复发的发病率和发病机制、髓外骨髓瘤细胞的特征及其对治疗的反应和预后的研究进展作一综述.
作者：汪娟；傅琤琤 刊期： 2012年第05期
急性淋巴细胞白血病(ALL)是儿童常见的恶性肿瘤,虽然其发病原因现在尚未阐明,但ALL具有遗传基础越来越得到认同,尤其是通过对一些候选基因的关联研究.来自两个独立的大型的全基因组关联研究结果表明,位于10q21.2上的ARID5B基因的5个单核苷酸多态性(SNP),rs7073837、rs10821936、rs10994982、rs7089424、rs10740055,与儿童ALL,特别是B-超二倍体白血病的发病风险上升有关.这些SNP的变异不仅影响ALL特定亚型的发病风险,而且还具有一定的种族及性别特异性.进一步研究ARID5B基因变异影响儿童ALL的机制,不仅具有极大的诊断价值,而且对于临床治疗亦有指导作用,终借以改善疾病的预后.本文就ARID5B基因与儿童ALL的关联研究进展做一综述.
作者：钱锡峰；杨国华；殷辰俞；陈湘；沈云峰 刊期： 2012年第05期
本研究探讨地塞米松用于脐带源间充质干细胞(MSC)体外扩增过程中对MSC免疫抑制功能的影响.采用BrdU方法检测地塞米松对MSC培养增殖的影响；MSC经过14 d低浓度地塞米松的培养刺激后,用流式细胞术检测其表面标记物;与外周血单个核细胞共培养后,检测外周血单个核细胞的激活增殖情况.结果表明,经过14 d低浓度地塞米松( 10 nmol/L)的培养刺激,在MSC特征性细胞表型上实验组和对照组没有明显的差异；但是,在相同的MSC数情况下,经过地塞米松培养的MSC抑制淋巴细胞活化的程度与对照组相比显著地降低.地塞米松预处理的MSC经过干扰素-γ培养12 h后,MSC的免疫调节能力得到一定程度的恢复.结论:地塞米松损害MSC的免疫抑制功能,干扰素-γ能一定程度对抗或逆转地塞米松对MSC免疫抑制功能的损害.因此,在研究MSC的免疫调节能力时,培养液中应该注意或者尽量不使用地塞米松,以避免地塞米松对免疫相关研究结果的影响.
作者：王汉裕；高伟；刘拥军；庞天翔 刊期： 2012年第05期
本研究探讨与评估应用间期荧光原位杂交技术(FISH)检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)遗传学异常的价值.应用间期FISH技术检测32例初诊CLL患者的del( 13q14.3)、del(11q22.3)、del( 17p13.1)、del(13q14)和12号染色体三体,同时对免疫表型不典型的10例初诊患者检测IGH/CCND1融合基因.结果表明,在32例病例组中FISH检测出26例(81.3％)基因异常,包括D13S25缺失14例,RB1缺失11例,12号染色体三体9例,P53缺失6例,ATM缺失4例；涉及1种基因异常的12例,其中12号染色体三体7例,D13S25缺失3例,P53缺失1例,ATM缺失1例；涉及2种基因异常的11例,其中D13S25/RB1缺失的7例,另4例均包含P53缺失；涉及3种以上基因异常的病例3例；10例免疫表型表达CD5+ CD23 -的初诊患者中2例IGH/CCND2(+).结论:应用间期FISH技术检测CLL基因组的异常,可大大提高异常染色体的检出率,各基因异常有其不同的特点；IGH/CCND1融合基因的检测在CLL诊断中有重要意义.
作者：吴蔚；顾健；马莉；王红；倪军；吉薇；沈连军 刊期： 2012年第05期
CCAAT增强子结合蛋白A(CEBPA)基因及其编码的转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)通过促进造血干/祖细胞向粒系分化并抑制细胞增殖,在造血系统早期分化过程中起重要作用.CEBPA基因的突变及其在转录、翻译及翻译后水平受到的异常调控可引起C/EBPα蛋白结构或表达异常,导致粒系分化成熟障碍、不成熟粒系前体细胞异常增殖,是急性髓性白血病(AML)的重要发病机制.CEBPA基因突变和表达异常调节对AML患者的预后有重要影响,并可作为诱导分化治疗的靶点.本文就CEBPA基因突变与AML、C/EBPα蛋白表达调控异常与AML及C/EBPα蛋白与靶向治疗进行综述.
作者：王丽朦朦；肖浩文 刊期： 2012年第05期
本研究旨在调查南京地区无关健康人群人类血小板抗原1 -18(HPA-1 - 18)等位基因频率,为输血患者寻找相容性血小板提供可靠依据.使用PCR-SSP方法对300例南京地区非血缘健康志愿者血液样品进行人血小板抗原1 -18(HPA-1 - 18)等位基因分型.结果表明,南京地区300例非血缘人群HPA等位基因频率分别为:HPA-2a0.9183和-2b 0.0817；HPA-3a 0.6100和-3b 0.3900；HPA-5a 0.9733和-5b 0.0267；HPA-6a0.9883和-6b0.0117;HPA-15a 0.5250和-15b 0.4750.HPA-1a,-4a,-7a - 14a和HPA-16a -18a均是纯合子.结论:HPA抗原等位基因频率存在种族和地域差异.南京地区HPA抗原等位基因频率显示具有自身特点.HPA-3和HPA-15是常见的杂合子,因此必须关注HPA在血小板临床输血中的作用.
作者：薛敏；刘衍春；魏鹏 刊期： 2012年第05期
本研究探讨同种异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后患者外周血NK细胞、NKT细胞与慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的发生发展及与病情严重程度的相关性.回顾性研究广东省人民医院2001年3月～2009年9月64例allo-HSCT植入成功患者,无cGVHD发生21例,43例发生cGVHD,其中轻度cGVHD 15例,中度cGVHD 18例,重度cGVHD 10例.采用流式细胞术分析患者外周血NK细胞、NKT细胞在淋巴细胞中的百分比,结合全自动血常规分析仪测定的淋巴细胞数得到NK细胞、NKT细胞的绝对值,分析non-cGVHD组与cGVHD组间及不同分级状态下cGVHD组间的NK细胞及NKT细胞百分比和数量是否存在差异.结果表明:与non-cGVHD组相比,cGVHD患者NK细胞百分比和数量明显减低(P＜0.05),NKT细胞在两组间差异无统计学意义；随着cGVHD分级程度的加重,NK细胞百分比和数量逐渐下降,重度cGVHD组与轻度cGVHD组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:allo-HSCT患者外周血NK细胞与cGVHD的发生发展有密切关系,对该细胞的检测有助于cGVHD的早期诊断,并为临床评估cGVHD的病情严重程度提供依据,NKT细胞似不影响cGVHD的发生发展.
作者：周茂华；王春苗；龚彩平；罗盈；张敏 刊期： 2012年第05期
本研究旨在探讨嗜酸性粒细胞增多患者的细胞遗传学和分子生物学特征.通过间期荧光原位杂交(FISH)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法对79例嗜酸性粒细胞增多(嗜酸性粒细胞计数≥1.5×109/L)患者的PDGFRA/B和FGFR1基因重排进行检测,并对44例患者的T细胞受体(TCR)基因重排进行了检测.结果显示:79例患者中检出FIPIL1/PDGFRA( F/P)融合基因阳性19例,检出CHIC2缺失19例,检出PDGFRB基因重排4例,未检测到FGFR1基因重排患者.按照2008年WHO分类修订诊断后,有42％( 20/48)的高嗜酸性粒细胞综合征(HES)和83％ (5/6)的慢性嗜酸性粒细胞白血病(CEL)患者更正诊断为伴PDGFRA/B重排的髓系肿瘤,17％(1/6)的CEL更正诊断为慢性嗜酸性粒细胞白血病,非特指型(CEL-NOS).染色体核型分析检出克隆性细胞遗传学异常4例,1例为CEL-NOS,3例为伴PDGFRB重排的髓系肿瘤,所有21例伴PDGFRA重排的患者均未检测出4q12异常.伴PDGFRA/B重排的髓系肿瘤、HES和继发性嗜酸性粒细胞增多3组患者的克隆性TCR基因重排检出率分别为33％(5/15)、40％(6/15)和36％(5/14),3组间无明显差异.结论:在既往诊断HES和CEL的患者中存在较高比例的PDGFRA/B基因重排,通过间期FISH和PCR方法可以提高伴PDGFRA/B重排的髓系肿瘤的诊断.
作者：曲士强；艾小菲；李承文；李庆华；徐泽锋；秦铁军；张悦；肖志坚 刊期： 2012年第05期
本研究旨在探讨不同时期的胎盘组织悬液对脐血造血干细胞体外扩增的作用,进一步了解随着胎龄的增长胎盘造血功能发生的变化.应用早期(B组)、中期(C组)和足月(D组)胎盘绒毛组织悬液,并设定空白对照(A组),以共培养的方式分4组进行体外扩增脐血造血干细胞并培养观察扩增后的集落形成能力.结果表明,以接种初浓度为对比,共培养7d后A组细胞呈逐渐衰减趋势,B组扩增效果不明显,仅为扩增前的1.40±0.20倍,C组和D组造血干细胞均能有效扩增,扩增倍数分别为2.93±0.50和4.80±0.40.集落培养14 d后的结果显示,C、D组集落形成总数明显高于A、B组,C组CFU-GM、CFU -GEMM、BFU-E集落数均略高于D组.结论:在没有外源性细胞因子存在的情况下,不同时期的胎盘绒毛组织悬液均可以支持造血干细胞的体外扩增,且随着胎盘发育其支持造血的功能呈不断增强的趋势.扩增后的造血干细胞的集落形成能力却呈先增强后减弱的现象,中期胎盘培养扩增后的干细胞集落形成能力强,略强于足月期胎盘扩增后的造血干细胞.
作者：马坤；姚慧；张敏；郭晶晶；程琳；李嘉惠；刘志杰 刊期： 2012年第05期
本研究检测原发性免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中Th17细胞比例和IL-17水平的变化,并探讨其临床意义.应用流式细胞术和ELISA方法分别检测48例ITP患者及28例对照组外周血中Th17细胞比例及IL-17水平.结果显示,ITP患者Th17细胞比例为(1.40±1.35)％,较对照组升高(P＜0.05),Th17细胞比例在糖皮质激素治疗组低于未使用糖皮质激素治疗组(P＜0.05).ITP患者Th17分泌的IL-17量为(19.624±5.187) pg/ml,较正常对照组升高(P＜0.05),但IL-17水平在糖皮质激素治疗组与未使用糖皮质激素治疗组的差异无统计学意义.结论:Th17细胞在ITP发病中可能发挥一定作用,糖皮质激素可能通过抑制Th17细胞发挥治疗作用.
作者：段晓娟；杨林花；张丽；任方刚；张睿娟；陈剑芳；秦秀玉；梁弘正 刊期： 2012年第05期
本研究旨在分析多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓中B细胞活化因子(BAFF)、增殖诱导配体(APRIL)的含量,B细胞、初始B细胞和记忆B细胞表面BAFF受体的表达,以探讨MM骨髓中B细胞的特点.采用流式细胞术检测19例初治MM(初治组)、17例平台期MM(平台期组)、10例对照组骨髓中B细胞(CD19+)、初始B细胞(CD19+IgD+)、记忆B细胞(CD19+ CD27+)的表面BAFF受体(BAFF-R、TACI)的表达,ELISA法测定各组骨髓上清中BAFF、APRIL的含量.分析各组结果数据的差异及它们之间的相互关系.结果表明,初治组患者CD19+细胞表面BAFF-R受体表达明显高于平台期组和对照组；初治组患者CD19+ IgD+细胞表面BAFF-R受体表达与平台期组无差别,但明显高于对照组；初治组患者CD19+ CD27+细胞表面BAFF-R受体表达明显高于平台期组和对照组;各种B细胞表面BAFF-R受体表达在平台期组与对照组之间无差别；TACI受体表达总体水平低,初治组患者与平台期组、对照组比较,CD19+细胞、CD19+ IgD+细胞、CD19+ CD27+细胞表面TACI受体表达均无明显差异；初治组骨髓上清中BAFF含量明显高于平台期组和对照组,但平台期组与对照组间无明显差异；各组骨髓中APRIL的含量均无明显差异.结论:MM患者骨髓中BAFF含量增高,CD19+细胞、CD19+ IgD+细胞和CD19+CD27+细胞表面BAFF受体的表达均增加,这可能有助于促进B细胞的增殖,因而可能与MM发病机制有关.
作者：周振海；张玲；潘倩影；黄蓓辉；郑冬；刘俊茹；李娟；罗绍凯 刊期： 2012年第05期
为探究分化阶段的骨间充质干细胞对于破骨细胞的影响,将小鼠密质骨来源的间充质干细胞体外诱导分化,研究其对于破骨细胞发育的调控作用.从小鼠密质骨中分离培养得到间充质干细胞,将其进行成骨和成脂肪诱导1周,分别将成骨分化和成脂肪分化的间充质干细胞与CD11b+的单核细胞共同培养,并以抗酒石酸的酸性磷酸酶染色鉴定破骨细胞.结果表明:向成骨分化和成脂肪分化的间充质干细胞均可以调节单核细胞向破骨细胞分化.与未分化的间充质干细胞相比,成骨分化的间充质干细胞促进破骨细胞发育的作用减弱,而成脂肪分化的间充质干细胞促进破骨细胞发育的作用增强.结论:间充质干细胞调节破骨细胞发育的能力在其分化为不同种类细胞后发生相应变化,提示间充质于细胞通过分化为子代细胞而对破骨细胞发育发挥选择性的调节.
作者：朱恒；刘元林；陈继德；李红；刘雨潇；徐芬芬；江小霞；张毅；毛宁 刊期： 2012年第05期
本研究旨在探讨SET-NUP214融合基因在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中的表达,分析伴有SET-NUP214的T-ALL的临床及分子生物学特征.运用RT-PCR检测58例T-ALL患者骨髓标本中SET-NUP214的表达,以间期荧光原位杂交( FISH)及微阵列比较基因组杂交(Array-CGH)检测9q34缺失,基因测序法检测PHF6和NOTCH1基因突变.结果表明,仅在6例T-ALL患者中检测到SET-NUP214融合基因的表达.除T系抗原标记外,这些患者均表达髓系抗原CD13和(或)CD33,其中4例患者经FISH检测到9q34缺失,3例患者经Array-CGH检测到del(9)( q34.11q34.33).6例SET-NUP214阳性的T-ALL患者中有4例检测到PHF6基因突变,5例检测到NOTCH1基因突变.结论:SET-NUP214融合基因多由染色体9q34的缺失所致,SET-NUP214阳性的T-ALL常伴有PHF6及NOTCH基因突变.
作者：戴海萍；王谦；吴丽丽；平娜娜；吴春晓；解珺丹；潘金兰；薛永权；吴德沛；陈苏宁 刊期： 2012年第05期
本研究旨在探讨vWF基因A1381T(rs216311)和- 1793G/C( rs7966230)单核苷酸多态性(SNP)在中国裕固族、藏族、汉族之间的异同及其对血浆vWF浓度的影响,了解3个民族对vWF相关疾病的易感性.抽取322位裕固族、399位藏族及120位汉族正常人的外周静脉血,提取DNA,采用PCR-限制性酶切片段长度分析vWF基因A1381T、- 1793G/C SNP,测序验证.用ELISA试剂盒测定血浆vWF水平.结果表明,vWF基因A1381T位点和- 1793G/C位点的基因型分布在裕固族、藏族和汉族中均有差异(P＜0.05),其中A1381T位点中的GG基因型在裕固族中占69.9％,远高于藏族和汉族中的56.6％及53.3％(P＜0.01),A1381T AA型表达vWF水平较低.- 1793G/C中CG型在裕固族中所占的比例远高于汉族,CC型基因型表达较高vWF水平.血浆vWF水平随民族和vWF基因多态性的不同而明显不同.结论:vWF基因A1381T和- 1793G/C位点基因多态性分布在中国裕固族、藏族和汉族中有明显差异；基因多态性影响血浆vWF表达水平；裕固族和藏族血浆vWF水平比汉族高,这与环境和生活习惯因素也有关系.
作者：傅玉；朱平；卜定方；张英；王明英；龚艺文；白德成 刊期： 2012年第05期
本研究通过建立原发性免疫性血小板减少症(ITP)外周血细胞微小RNA(miRNA)表达谱,探讨miRNA在ITP患者和正常健康对照者外周血细胞中的表达差异.应用Exqion miRCURYTM芯片分析ITP患者和正常对照者外周血白细胞miRNA差异表达；分层聚类分析ITP患者和正常对照者之间miRNA表达谱的差异；应用实时PCR方法对表达差异miRNA进行验证.结果表明,在ITP患者与正常对照者外周血白细胞间有159个差异表达的miRNA,其中79个表达显著上调,80个表达显著下调.分层聚类分析显示,ITP存在特异性miRNA表达谱.实时PCR检测结果与芯片分析结果一致.结论:ITP患者外周血细胞存在miRNA表达异常,提示miRNA表达变化可能参与了ITP的发病.
作者：沈卫章；任立参；金立方；崔红花；李小丰；赵岩；李景贺；王秀丽；徐文 刊期： 2012年第05期
中国实验血液学杂志
主管:实验血液学杂志
主办：中国科学技术协会
