李晓东；高兴华；洪玉晓；刘宇博；祝立丽；王雅坤；王晓琴；霍伟；张丽；陈洪铎
目的 获得高纯度的丙型肝炎亚单位融合蛋白并评价其免疫原性.方法 利用原核表达系统,以pET-11d作为载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达获得融合蛋白,之后采用DEAE阴离子交换和镍离子柱亲和层析进行纯化.通过Western Blot验证融合蛋白的抗原活性.同时以该蛋白免疫实验动物后测定血清中的抗体滴度.结果 成功获得很高纯度的丙型肝炎哑单位融合蛋白,EIA显示融合蛋白能够诱生出高滴度的抗体.结论 原核表达系统表达的丙型肝炎病毒亚单位融合蛋白具有较强的免疫原性,为丙型肝炎病毒治疗性和预防性疫苗的研制提供了一条新的途径.
作者：邱丰；贾志远；郭敏卓；陈斯勇；伊瑶；沈立萍；余陶；费永亮；郭瑜；毕胜利 刊期： 2010年第02期
目的 探讨活化Th细胞(CD4~+HLA-DR~+)及HBeAg与慢性乙型肝炎肝脏损伤及纤维化的关系.方法 检测58例慢性乙型肝炎患者和18例既往感染患者(HBsAg阴性而HBcAb阳性者)CD4~+抗原和HLA-DR抗原双阳性淋巴细胞,血小板(PLT)数和血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活度,计算AST/PLT比值.结果 既往感染患者、HBeAg阴性及阳性慢性乙肝患者活化CD4~+细胞数量明显低于对照者(P＜0.05),且呈显著递减(P＜0.05),HBeAg阴性及阳性者AST,ALT以及AST/PLT值明显高于对照者(P＜0.02)和既往感染者(P＜0.02),且HBeAg阳性患者明显高于阴性患者(P＜0.05),此二组活化CD4~+细胞与ALT,AST和AST/PLT呈明显负相关(P＜0.05).结论 活化Th细胞降低可以作为慢性乙肝患者预测肝脏损伤进展的有用指标,HBeAg可以辅助评价肝损伤和纤维化的发展程度.
作者：邵平扬；丁韧烨 刊期： 2010年第02期
目的 通过分析近年中国狂犬病病毒流行株N基因特征和遗传变异状况,探讨我国狂犬病的流行分布与狂犬病病毒遗传变异间的关系.方法 对不同流行地区、不同宿主动物来源的狂犬病标本,进行病毒N基因编码区下游720个核苷酸序列测定、序列同源性比较和种系发生分析.结果 获得相应区段的狂犬病病毒核苷酸序列34份;核苷酸序列同源性87.5%～100%,推导的氨基酸序列同源性93.3%～99.6%,核苷酸序列的变异主要为同义突变.结论 34个病毒标本都属于基因Ⅰ型狂犬病病毒且具有地域性特征.我国狂犬病高发病地区狂犬病病毒来源多样化,且病毒呈现从高发病地区向周边地区的传播和扩散,野生动物与家养动物之间,本国动物与外国动物之间,可能均存在着狂犬病病毒的交叉感染和相互传播.
作者：李浩；陶晓燕；王晓光；雷永良；张海林；王显军；丁淑军；张红；戴德芳；沈蕊华；唐青 刊期： 2010年第02期
目的 观察腺苷蛋氨酸治疗儿童急性药物性肝病淤胆型和混合型的疗效及安全性.方法 治疗组和对照组均予茵栀黄冲剂口服,复方甘草酸苷注射液静脉滴注治疗,治疗组加用腺苷蛋氨酸(思美泰)250～1000 mg静脉滴注治疗28 d.观察患儿瘙痒、生化指标及不良反应.统计学处理:组间比较,计数资料采用X~2检验,计量资料采用t检验.结果 (1)治疗组和对照组在治疗前分别为17例、16例患儿有明显的瘙痒感,治疗2周后治疗组和对照组分别有14例及3例明显减轻(X~2=4.52,P＜0.05).(2)治疗4周后两组的AST比较P=0.0014;黄疸的消退在2周、4周及复常率比较P值分别为0.045、0.007及P＜0.05;TBA的下降在治疗后的2周、4周比较P值分别为0.0014和P=0.0006;γGT在治疗后4周比较P=0.0003.结论 腺苷蛋氨酸在儿童的静脉注射中比较安全.且能显著减轻患儿的瘙痒;加快患儿各种生化指标的复常,促进肝脏的恢复.因此腺苷蛋氨酸(思美泰)治疗儿童肝内胆汁淤积值得进一步推广应用.
作者：朱世殊；董漪；甘雨；唐红梅；徐志强；陈大为；贾文峥；王丽敏；张鸿飞 刊期： 2010年第02期
目的 观察Novalac~((R))宝怡乐~(TM)亲宁~(TM)止泻配方奶粉治疗小儿轮状病毒肠炎的临床疗效.方法 选入无脱水酸中毒的20例轮状病毒肠炎患儿,给子食用Novalac~((R))宝怡乐~(TM)亲宁~(TM)止泻配方奶粉1周.结果 显效率100%.其中48 h内粪便恢复正常、全身症状消失17例,占治疗总数的85%(17/20);72 h内大便恢复正常、全身症状消失3例,占治疗总数的15%(3/20).结论 Novalac~((R))宝怡乐~(TM)亲宁~(TM)止泻配方奶粉治疗小儿轮状病毒肠炎疗效显著.
作者：刘玉华；李靖 刊期： 2010年第02期
对HIV-1和HCV等重大传染性疾病传统疫苗研制的失败,让科学家们把目光转向开发新型疫苗研制策略.其中之一就是用减毒的重组病毒载体表达外源抗原来免疫,可以保护个体免受相应病原体的暴露威胁.一种新的手段就是从cDNA克隆拯救单股负链RNA病毒,这一技术为弹状病毒科成员用于疫苗载体和生物医学工具打开了一扇窗.
作者：杜加亮；唐青 刊期： 2010年第02期
目的 分析手足口病低龄儿童病例的肠道病毒71型(EV71)感染状况.方法 采集手足口病(HFMD)病例的血样,通过ELISA间接法检测EV71 IgG和IgM抗体并分析年龄、性别分布情况.结果 收集到159例HFMD儿童病例的血样和资料,年龄为1～5周岁,平均EV71 IgG抗体阳性率为63.5%,无性别差异,平均IgM抗体阳性率为12.0%;EV71 IgG阳性率随着年龄增长而呈降低趋势,男奄的IgM阳性率显著高于女童.结论 本次HFMD疫情的病原体是EV71,男性儿童的EV71感染发病率高于女性儿童,结果可为HFMD防治提供参考依据.
作者：巨昆；姜林恩；李伟；任惠芹；井绪花；金宝辉 刊期： 2010年第02期
目的 探讨山西省的HPV61、83和84型分离株MY片段中核苷酸及氨基酸的突变情况以及山西省分离株与α3中其他型别的同源性,制备三型别包含MY片段的标准品.方法 使用HPV通用引物MY09/11对我国HPV61、83和84型分离株进行PCR扩增,并连接至pMD18-T载体,所得质粒进行序列分析,应用BioEdit生物学软件进行核苷酸水平和氨基酸水平的分析.结果 HPV61和83型分离株分别与参考株序列U31793和AFl51983比对,在核苷酸水平完全一致;HPV84型分离株与参考株序列AF293960比对,在核苷酸水平发生4个点突变,分别为C6760T、T6931C、T6951C和C6987A,其中C6987A导致D441E氨基酸残基的突变;MY-PCR反应对HPV61、84和83型标准品检测的灵敏度依次降低.结论 我国HPV61和83型分离株与参考株序列相比较未发现突变,HPV84型与标准株相比存在着核酸和氨基酸水平的突变;MY09/11通用引物检测HPV61型标准品的灵敏度高于HPV83和84型.
作者：王宝晨；王晓莉；薛凤霞；刘宏图 刊期： 2010年第02期
目的 分析吉林省延边地区朝鲜族与汉族丙型肝炎病毒(HCV)基因型特征.方法 采用荧光定量PCR方法和探针反向杂交技术对延边地区收治的62例朝鲜族和57例汉族慢性丙型肝炎患者进行HCV病毒载量检测和HCV基因型分析,比较HCV基因型在朝鲜族与汉族之间的分布差异,并分析HCV基因型与病毒载量、2型糖尿病和肝病严重程度之间的相关性.结果 朝鲜族HCV基因型显示,1b型占45.16%(28/62)、2a型占38.71%(24/62)、未分型占16.13%((10/62);汉族HCV基因型显示,1b型占45.61%(26/57),2a型占40.35%(23/57),未分型占14.14%(8/57),朝、汉族之间各基因型分布差异无统计学意义(P＞0.05).HCV各基因型之间HCV病毒载量差异和合并2型糖尿病分布差异之间无统计学意义(P＞0.05),而HCV 1b型在中、重度慢性丙型肝炎患者与轻度慢性丙型肝炎患者中所占的比例差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 ①吉林省延边地区HCV基因型中以1b型多,2a型次之,还有少数其他基因型;②HCV基因型在朝、汉民族之间分布无差异;③HCV基因型与HCV-RNA载量无关;④HCV基因型在合并糖尿病者与未合并糖尿病者之间分布无差异;⑤1b型HCV感染者病情相对较重.
作者：李钟燮；孟繁平；申钢铁；金丹；冯相伟 刊期： 2010年第02期
目的 比较狂犬病快速荧光灶抑制试验(RFFIT)方法中狂犬病免疫球蛋白WHO标准品和狂犬患者免疫球蛋白国家标准品为参照所得结果的差异.方法 在同一次RFFIT试验中同时设置WHO标准品参照和国家标准品参照,同时测定12份待测人血清,比较两种标准品所产生荧光灶的百分比;按照中和抗体滴度计算公式计算不同标准品参照所得12份待测血清抗体滴度,比较其差异.结果 结果显示WHO标准品和国家标准品的50%感染量均出现在第5孔和第6孔之间,但国家标准品荧光灶百分比低于WHO标准品;以WHO标准品做参照所得到的同一份血清滴度略高于国家标准品.结论 WHO标准品和国家标准品在RFFIT方法中存在差异,但不影响结果判定.
作者：于鹏程；申辛欣；吕新军；单虎；唐青 刊期： 2010年第02期
目的 了解浙江沿海地区人群TTV与HPV混合感染状况,探讨TTV传播途径.方法 建立巢式聚合酶链反应方法(nPCR),对健康体检和患宫颈疾病妇女150例宫颈病变细胞学标本及其平行97例血清标本进行TTV DNA及TTV病毒滴度的nPCR检测;应用导流杂交方法检测95例宫颈病变细胞学标本的HPV基因型.结果 TTV DNA在55例健康妇女宫颈细胞标本中检出率52.7%(29/55),与其平行42例血清样本中检出率50.0%(21/42).在患有疾病妇女宫颈细胞中TTV DNA检出率(74.7%)高于健康体检对照组(P=0.005).TTV DNA在患者血清样本中检出率51%(28/55).在宫颈细胞及其平行血清中均检测出TTV基因亚型G1b°TTV病毒滴度在宫颈细胞中高于在其平行血清10～1000倍.HPV在患者组中检出率98.9%(94/95),在健康组中检出率27.3%(15/55).HPV基因型是高危型HPV16、18、33和低危型HPV6.HPV阳性标本TTV DNA检测率明显高于HPV阴性标本(P=0.02).结论 TTV在宫颈细胞中具有高检出率,在宫颈细胞中TTV病毒滴度高于其平行血清.TTV与HPV随性传播感染人群,并在女性生殖道内繁殖.TTV与HPV协同作用有待研究.
作者：郑美云；林颖；李丹军；阮海波；陈怡；吴婷婷 刊期： 2010年第02期
目的 探索新型有效的HBV治疗性疫苗研制的策略.方法 构建含S与PreS1融合基因的HBV DNA疫苗,采用两次蛋白疫苗(含不同佐剂)肌内注射初免,一次DNA疫苗皮内电转免疫加强的联合免疫方式,在小鼠中分析比较了各疫苗所引起的体液与细胞免疫应答.结果 HBVDNA疫苗皮内注射加电转可明显增强表面抗原(S)特异的细胞免疫应答(IFN-γ ELISpot分析)及PreS1特异性抗体水平,并以蛋白疫苗加铝佐剂初免组细胞免疫增强效果明显.结论 HBSS1 DNA疫苗结合皮内注射+电转方式可明显加强含S-PreS1颗粒的蛋白疫苗在小鼠中免疫效果,明显高于蛋白疫苗单独应用.这些研究结果为新型HBV治疗性疫苗的研制与应用提供了依据.
作者：陈红；张陵林；谭文杰；邓瑶；王文；殷霄；文波；管洁；阮力 刊期： 2010年第02期
中国人间狂犬病自1996年以来一直持续上升,2007年报告3293个狂犬病死亡病例,为1996年狂犬病死亡病例数(159)的20.7倍.狂犬病的持续上升引起了国家有关部门的高度重视.为了尽快控制住狂犬病的流行,卫生部、农业部和中国疾控中心于2005-2009年先后发布了一系列预防控制狂犬病的指导性文件、规范和标准.
作者：唐青 刊期： 2010年第02期
目的 冰冻切片染色法观察重组狂犬病病毒对乳鼠脑的感染和定位.方法 将本实验室构建并拯救成功的人用狂犬病疫苗株重组病毒(CTN-GFP)脑内接种1日龄乳鼠和4周龄成年鼠,待感染乳鼠发病后至濒死期,通过心内灌流方法固定并制作脑组织冰冻切片,观察重组病毒在感染鼠的大脑海马组织中的绿色荧光蛋白的表达及分布.结果 DAPI将所制作的冰冻切片中脑组织内细胞的胞核染成蓝色,在共聚焦显微镜下观察到受感染乳鼠的脑组织海马回位置有大量绿色荧光蛋白的表达.结论 通过制作脑组织冰冻切片的方法可以清楚的观察到病毒的感染及其在海马回中的位置,同时为追踪病毒在体内的移行过程提供了一种新方法.
作者：黄莹；龚锴；唐青 刊期： 2010年第02期
应用转染人肝再生增强因子(hALR)基因的Hep G2细胞筛选出一株肝细胞作为生物材料,并建立生物人工肝支持系统,经检测具有良好生物合成及转化功能.我们采用离线混合生物人工肝治疗慢加急性肝衰竭1例,报道如下.
作者：游绍莉；荣义辉；刘鸿凌；胡燕；侯俊；刘婉妹；貌盼勇；辛绍杰 刊期： 2010年第02期
目的 分析一起新型甲型H1N1流感疫情患者的临床和实验室特点.方法 某部集体发病患者35例,均由核酸检测方法确诊;回顾调查患者的密切接触史、实验室检测结果、治疗和预后等.结果 本次疫情收治的35人,密切接触平均1.7 d出现临床症状,首发症状为发热占97.1%(34/35),咽痛65.7%(23/35),咳嗽51.4%(16/35),肌肉酸痛31.4%(11/35),头痛28.6%(10/35).病毒核酸检测阴性的平均天数为4.5 d,奥司他韦治疗,5 d标准疗程,所有患者7 d后痊愈出院.结论 本次疫情为比较典型的新型甲型H1N1流感.
作者：冯艳青；郭桐生；刘立明；李永利；李波；刘志国；孙志强；赵敏；毛远丽；李伯安 刊期： 2010年第02期
目的 研究蚯蚓体腔液(Earthworm coelomic fluid,ECF)体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法 以Hep-2细胞为宿主细胞,利巴韦林作为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应(CPE)和MTT染色法来研究蚯蚓体腔液体外抗RSV的作用.结果 ECF和利巴韦林对Hep-2细胞的CC50分别为3.11 mg/ml和1.35 mg/ml.在直接杀灭作用实验中,IC50为184.1 μs/ml,SI值为16.87;在抑制病毒复制实验中,IC50为1555.8 μg/ml,SI值为1.99;在阻断病毒侵入实验中,没有观察到抗病毒的作用.结论 蚯蚓体腔液具有直接杀灭和抑制RSV复制的作用,其中直接杀灭作用的抗病毒效果较明显,但不具有阻断RSV入侵的作用.
作者：李方；王建华；张建林；钟儒刚；牛勃 刊期： 2010年第02期
目的 探讨不同局部温热条件对人乳头瘤病毒(HPV)感染皮损朗格汉斯细胞(LCs)CD1a/CD83表达变化的影响,为病毒疣的治疗提供理论依据.方法 采用共聚焦显微镜检测正常皮肤组织和尖锐湿疣皮损内LC CD1a/CD83的表达变化;利用37℃,42℃,45℃不同温热条件处理正常皮肤组织和尖锐湿疣皮损,采用流式分析技术检测游走至培养液中CD1a~+/CD83~+LC的数量变化.结果 正常皮肤组织和尖锐湿疣皮损内只见CD1a~+LC,无CD83~+LC;正常皮肤组织和尖锐湿疣组织游走细胞中CD1a~+/CD83~+LC的百分比均随局部温度升高而逐渐增多.温热对尖锐湿疣组织游走LC中CD1a'CD83表达影响显著高于正常皮肤组织.结论 局部温热可能通过促进LC的迁移和成熟,在局部细胞免疫应答中发挥作用.
作者：李晓东；高兴华；洪玉晓；刘宇博；祝立丽；王雅坤；王晓琴；霍伟；张丽；陈洪铎 刊期： 2010年第02期
目的 探讨乙型肝炎病毒所致慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血中CD8+T细胞上PD-1(Programmed death-1)的表达以及对CD8+T细胞的影响.方法 收集60例HBV-ACLF患者外周血;应用流式细胞仪检测外周血中CD8+淋巴细胞上的PD-1、CD95、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、CD107a的表达以及CD14细胞上PD-L1的表达;根据不同病情分期和不同预后比较各分子的表达差异;设15名肝硬化患者及15名健康人为对照组.结果 (1)HBV-ACLF患者CD8~+T细胞上PD-1较肝硬化组和健康组表达上调(P＜0.05);好转组PD-1表达率低于无效组(P＜0.05);早、中、晚三期PD-1表达率呈上升趋势(P＜0.05);(2)PD-L1在好转组及病情早期表达相对低;(3)PD-1与CD95在死亡组表达明显升高;穿孔素、颗粒酶及CD107a在死亡组表达升高,但PD-1在这三类细胞上表达率非常低.结论 PD-1在HBV-ACLF患者外周血CD8~+T细胞上表达上调,且与病情严重程度呈正比.其上调表达可能促进总CD8~+T细胞的凋亡,但对于具有杀伤活性的CD8~+T细胞抑制作用相对较弱.
作者：刘晓燕；石峰；赵鸿；王慧芬 刊期： 2010年第02期
目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)高胆红素血症患者氧化损伤的情况.方法 75例血清总胆红素(TBIL)高于正常上限值(ULN)的CHB患者,按TBIL为ULN的倍数分为A、B、C、D、E五组.测定患者血清丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、维生素C(V_C)、维生素E(V_E)浓度,并做出统计分析.11例健康志愿者为正常对照组,16例乙肝表面抗原(HBsAg)携带者为携带者组.结果 各患者组与正常对照组比较:MDA、XOD浓度升高,差异有统计学意义(P＜0.05),V_C、V_E浓度降低,差异有统计学意义(P＜0.05);携带者组与正常对照组比较:XOD浓度升高,差异有统计学意义(P＜0.05),MDA、V_C、V_E浓度差异无统计学意义(P＞0.05).在CHB高胆红素血症患者中,MDA、XOD浓度与TBIL水平呈正相关(r=0.670,P＜0.01;r=0.737,P＜0.01);V_C、V_E浓度与TBIL水平呈负相关(r=-0.463,P＜0.01;r=-0.247,P＜0.05).各患者组间的比较:除A、B组间外,其余各组间MDA浓度差异有统计学意义(P＜0.05);A、B、C组与D、E组间XOD浓度差异有统计学意义(P＜0.05);A组与D、E组,B、C、D组与E组间V_C浓度差异有统计学意义(P＜0.05);A、B组与E组间V_E浓度差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CHB高胆红素血症患者体内存在氧化-抗氧化功能障碍,血清TBIL水平升高时氧化损伤程度加重.HBsAg携带者体内氧化损伤程度不高.抗氧化损伤可能有助于CHB高胆红素血症患者的治疗.
作者：蔡森；王凯；韩利岩；范玉琛；葛剑；于淑霞；李凤彩；王丽媛；韩婕 刊期： 2010年第02期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
