王斌；傅继华；吴虹；刘传新；钱冬萌；方荣
目的选出适合于治疗性疫苗研制的HPV16 E7突变基因.方法对表达野生型和突变型E7蛋白的重组痘苗病毒所诱发的细胞免疫反应和抗肿瘤活性进行比较研究.结果表达突变型ME7-1(24G26G)的重组痘苗病毒VmE7-1与表达野生型E7的VwE7相同,可诱发特异性抗体和CTL的产生,明显推迟成瘤时间并且保护部分小鼠抵抗肿瘤细胞的攻击;而表达突变型ME7-2(24G26G91G)的重组痘苗病毒VmE7-2免疫小鼠后难以有效的激发细胞免疫反应,在抗肿瘤移植实验中也不具明显的免疫保护作用.结论 E7突变基因ME7-1可作为候选基因用于HPV16治疗性疫苗的研制.
作者：韩立群；任皎；田厚文；骆卫锋；梁雨；阮力 刊期： 2001年第03期
来源于维多利亚水母(Aequorea victoria)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)是近年来发现的一种新的报告基因,由于其具有产生荧光不需任何底物或辅助因子、可以活体观察等特点,因此在目前的基因转移、基因治疗研究中得到了广泛的应用[1].重组腺病毒伴随病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)具有安全性好、可介导外源基因长期稳定表达等特点,是目前比较理想的基因治疗载体.构建表达GFP的rAAV载体(rAAV-GFP)对于应用rAAV进行基因转移和基因治疗研究非常必要,如评估rAAV生产系统的生产效率、估计rAAV的转导效率、研究rAAV进入体内后的分布及表达情况等.
作者：伍志坚；吴小兵；曹晖；牛东滨；王宏；侯云德 刊期： 2001年第03期
目的观察慢性肝炎、重型肝炎患者血清脂多糖结合蛋白(Lipopolysaccharide binding protein,LBP)的变化.方法用酶联免疫吸附法检测16例慢性肝炎患者,15例肝炎肝硬化患者,12例重型肝炎和17例健康对照者血清中LBP水平.结果慢性肝炎组患者血清LBP含量35 166.25 μg/L,显著高于健康对照组18 590.00 μg/L,而慢性肝炎组与重型肝炎组比较,慢性肝炎>肝炎肝硬化>重型肝炎,各组间差异显著,血清LBP含量与血浆PTA水平呈正相关(r=0.395 8,P<0.01),而与血清ALT TBiL水平无明显相关性(r分别为0.164 5和0.189 4,P值均>0.05).结论血清LBP可能作为了解肝脏代偿能力指标之一.
作者：尹彪；于敏；曾争；田庚善 刊期： 2001年第03期
目的对河北省卢龙县农村人口中儿童轮状病毒腹泻流行情况进行调查.方法采用病毒核酸电泳和酶免疫方法对卢龙县1998年轮状病毒腹泻发病季节采集的非菌性腹泻粪便标本进行轮状病毒检测.采用酶免疫和RT-PCR方法对轮状病毒阳性标本进行血清型调查.结果 120份婴幼儿腹泻样本轮状病毒阳性率为39.2%,病毒电泳型全为长型,血清分型发现G3型为流行优势株,占61.7%,其次为G1型占36.2%,G4型占6.4%,轮状病毒腹泻病人小年龄为2月龄,大为2岁,男女之比为1∶1.47.结论卢龙县1998年轮状病毒腹泻流行规律与全国情况基本一致,但流行毒株以G3型为主,与全国以G1型为主不同.
作者：唐景裕；郝玉军；宁剑；赵振梅；胡海宽；高凤洁；王秀军；方肇寅；杨辉；齐锦；章菁；谢华萍；林思恩 刊期： 2001年第03期
目的对1例来自华东地区HIV1分离株(WWBH7)的前病毒env基因C2-V3区进行序列分析.方法以HIV1感染者外周血单个核细胞基因组为模板进行套式PCR扩增HIV1 env基因C2-V3区片段,将此扩增产物插入T-Vector,酶切鉴定重组质粒,使用ABI737自动DNA序列测定仪测定序列并用DNASIS软件进行分析.结果 DNA序列资料显示该毒株属于HIV1 B亚型衍生株.但与HIV1 B亚型的标准株如SF2株相比,该HIV1毒株的env基因V3区下游有192 bp的重复插入突变,使得该毒株的膜蛋白PND编码基因呈现双V3区的变异,该段DNA序列已登录于GenBank(AF220245).结论该分离株是1个在膜蛋白PND编码基因有大片段插入突变的HIV1变异株.
作者：王斌；傅继华；吴虹；刘传新；钱冬萌；方荣 刊期： 2001年第03期
因为病程超过半年即为慢性肝炎,但起病不到半年的重型病毒性肝炎,判断为急性还是慢性,有一定的困难.由于两者的临床特点及预后,有较大的差别,有必要将他们加以区别.基于以上考虑,特将302医院1997年至1999年收治的起病不到半年的,后诊断为慢性重型病毒性肝炎120例患者的临床特点进行分析,供临床医师参考.
作者：邹正升；陈菊梅；辛绍杰；邢汉前；李建宇；沈宏辉；刘艳萍 刊期： 2001年第03期
目的增强造血细胞对化疗药物的耐药表型,探讨逆转录病毒介导的基因转移效率及耐药基因的特性和在造血细胞保护性基因治疗中的作用和意义.方法应用RT-PCR从人肝组织中获得编码六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)cDNA,将其克隆于pGEM-T质粒载体并构建了逆转录病毒载体G1Na-MGMT,应用脂质体Lipofect AMINE基因转移法将后者导入GP+E86和PA317病毒包装细胞,以BCNU加压筛选后的阳性克隆上清经乒乓效应后继而感染K562细胞和人造血细胞.应用PCR,Southern blot,RT-PCR,Western blot及MTT法检测人MGMT基因在细胞中的转移和表达.结果酶切鉴定及DNA测序证实其MGMT cDNA克隆的正确性,脂质体介导方法成功将其导入病毒包装细胞,BCNU加压筛选和乒乓感染法使病毒效价达8.6×106 CFU/ml,逆转录病毒载体介导的MGMT基因在K562细胞及人造血细胞中获得有效转移和表达.结论 MGMT耐药基因的成功克隆并导入骨髓造血细胞且获高效表达对开展肿瘤基因治疗的临床研究奠定了实验基础.
作者：王季石；夏学鸣；陈子兴；阮长耿 刊期： 2001年第03期
目的研究山东省丙型肝炎病毒(HCV)流行株的基因型别.方法用反转录套式聚合酶链反应(PCR)方法分别扩增山东省HCV流行株C区(432 bp)NS5区(319 bp)的两个基因片段,将其克隆入T载体上并自动测序,进行同源性分析及基因型别鉴定.结果 4株HCV C区基因片段有3株为1b基因亚型,1株为2a基因亚型,10株NS5区的基因片段分析均为1b基因亚型,并且与GenBank中多个1b亚型代表株核苷酸序列同源性达90%以上.结论山东省HCV流行株以1b亚型为主,兼有2a亚型.同一亚型中也有较大的变异,NS5区1b亚型中基因离散率可达5%以上.
作者：张文卿；于红；王笑峰；王芹；吕锐；王海青；邵济钧 刊期： 2001年第03期
我们对我国北方某地区健康献血员血浆中的庚型肝炎病毒(Hepatitis G virus/GB virus C,HGV)HGV RNA及抗-HGV抗体进行了检测,初步探讨了我国北方地区单采浆献血员血浆中HGV感染情况.
作者：李秀玲；刘香萍；孔健；王小宁 刊期： 2001年第03期
目的了解Bcl-2对HSV-1感染原代培养神经元的调节作用.方法用流式细胞术(FCM)和Western blot(WB)方法检测正常组、病毒组、山梨醇组及山梨醇加病毒组在不同时间、不同条件下Bcl-2变化情况.结果病毒组较正常组、山梨醇加病毒组较山梨醇组Bcl-2蛋白表达上调,且与病毒毒力有关.正常组随培养时间延长,Bcl-2蛋白表达含量降低.结论 HSV-1感染培养小鼠皮层神经元时,Bcl-2蛋白表达上调,阻止细胞凋亡并延长细胞寿命.
作者：王佳伟；王得新；冯子敬；王瑞金；卢炎；沈静；徐雍 刊期： 2001年第03期
本院自1997年10月至2000年4月收治老年戊型病毒性肝炎154例,现分析如下:1 一般资料以年龄60岁以上患者为老年组,154例患者中男性105例,女性49例,高年龄84岁,平均年龄65.4岁.对照组患者年龄33～50岁,平均年龄42岁;120例中男性82例,女性38例.诊断与分型参照1995年北京第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的标准.老年组诊断为急性无黄疸型3例,急性黄疸型115例,淤胆型肝炎30例,重症肝炎6例;对照组诊断为急性无黄疸型7例,急性黄疸型109例,淤胆型肝炎2例,重症肝炎2例.老年组中HBV重叠感染24例,肝炎肝硬化5例,酒精性肝病4例.对照组有HBV重叠12例,HAV重叠6例,酒精性肝病1例,肝炎肝硬化1例.2 临床表现老年组有发热69例,乏力146例,纳差137例,腹胀124例,厌油37例,恶心68例,呕吐41例,腹泻32例,皮肤瘙痒56例,肝肿大72例,脾肿大54例.对照组发热89例,乏力104例,纳差110例,腹胀83例,厌油52例,恶心82例,呕吐48例,腹泻12例,皮肤瘙痒6例,肝肿大83例,脾肿大65例.
作者：梁晓岳；周加新 刊期： 2001年第03期
1998年7月～1999年11月,我们应用腺苷蛋氨酸治疗病毒性肝炎,现将临床疗效报告如下.1 材料和方法1.1 病例选择本组病例包括急性黄疸型肝炎39例,慢性黄疸型肝炎30例,肝炎肝硬化46例,均为住院治疗的患者.男85例,女30例;年龄20～78岁(40.9±11.4)岁.诊断按1995年北京全国传染病和寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案进行.病例随机分为腺苷蛋氨酸治疗组和茵栀黄注射液,两组病例情况相近,有可比性(t检验,P均>0.05).
作者：李莉；段学章；金波；夏杰 刊期： 2001年第03期
目的探讨小柴胡汤(XCT)分解剂在体外抗CoxB3病毒(CVB3m)及保护细胞的作用.方法采用微量细胞培养技术和中性红摄入法,以细胞病变及细胞活性为判定药物细胞毒性及病毒增殖的指标,观察不同浓度的XCT及分解1、2号抗CVB3m的作用及对细胞活性的影响.结果低于大无毒剂量浓度的XCT和分解1号、2号对细胞活性未见明显影响,并在一定浓度范围内有促细胞生长、增强细胞活性的作用.治疗组,XCT及其分解1、2号对CVB3m增殖均有明显抑制作用,尤以分解1号作用明显,抑制率为107.6%;同等浓度下,预防治疗组药物抑病毒率明显高于治疗组,高可达128.1%;抑病毒吸附组也有明显抑病毒作用.结论通过比较XCT及其分解1、2号作用细胞与病毒的不同环节,提示XCT具有保护细胞减轻病毒感染功能及直接杀伤CVB3m的作用.
作者：王雪峰；刘芳；王永梅；魏克伦 刊期： 2001年第03期
目的对HIV-1感染者进行病毒分离.方法采集福建艾滋病病毒感染者肝素抗凝血10份,分离外周血单核细胞(PBMC),用共培养方法分离HIV,用P24抗原ELISA试剂盒做检测.结果分离到9株HIV-1,分离率达90%,将其中的4株感染MT4细胞,均可引起细胞融合.3株表现为一过性感染MT4细胞,属慢/低病毒,1株为持续性感染MT4细胞,已传至15代,属快/高病毒.结论成功分离到HIV-1病毒.
作者：王惠榕；严延生；陈舸 刊期： 2001年第03期
目的从基因水平对一肠道病毒分离株进行分析鉴定.方法提取病毒RNA,以锚定随机引物反转录合成双链cDNA,用锚定特异引物进行随机扩增,扩增产物进行克隆、测序和序列分析.结果随机扩增的病毒基因在电泳上呈典型的smear带型;11个随机克隆经GenBank检索,与肠道病毒成员具有高的同源性且同源率超过80%;11个克隆随机分布于病毒的基因组中,排定后的序列形成4个毗连序列群,共计2 261个碱基,涵盖病毒基因组的30%;部分序列与柯萨奇病毒B6型氨基酸同源率达97.3%;参照测定序列合成的引物能够特异性地扩增病毒基因.结论经序列分析证实小RNA病毒XJ90株为肠道病毒科成员.
作者：杜桂鑫；潘文胜；陈万荣；王海涛 刊期： 2001年第03期
目的掌握中国单纯乙型肝炎疫苗免疫后携带者和未免疫携带者表面抗原基因变异的流行状况及特点.方法以直接测序和特异基因序列固相聚合酶链反应(SS-SPPCR)方法,分别检测97例单纯乙型肝炎疫苗免疫后携带者、88例未免疫育龄妇女和95例未免疫儿童携带者,乙型肝炎病毒α抗原决定簇氨基酸置换的流行率.结果直接测序检测的乙型肝炎疫苗免疫后携带者氨基酸置换流行率显著高于未免疫育龄妇女和儿童携带者对照,流行率分别为30.9%(30/97),10.2%(9/88)和5.3%(5/95).145、126和133是常见的氨基酸酸置换位点.应用更为敏感的SS-SPPCR法分别检测145和126位氨基酸点突变的流行率,各组间差异不明显,其中145位氨基酸置换的流行率分别为39.2%,33.0%和32.6%.经直接测序法检测,免疫后携带者基因变异流行率高于未免疫携带者5.41倍.按基因型和血清亚型分层分析,基因型B和adw2血清亚型携带者受免疫选择后出现基因变异的风险显著较高,分别为34.55和33.39;而基因型C和adr血清亚型携带者基因变异风险较低,分别为2.73和2.45.结论单纯乙型肝炎疫苗具有免疫选择表面抗原基因变异株的作用;基因变异株在未免疫携带者中主要是弱势准种;基因变异风险与病毒基因型和血清亚型有关.
作者：夏国良；贾志远；王继杰；刘洪斌；李荣成；曹惠霖；刘崇柏 刊期： 2001年第03期
目的观察疗效确切的抗病毒药物和免疫调节剂,叠加伍用对慢性乙型肝炎病人HBV复制和变异的影响.方法应用拉米夫定、干扰素α-2b、黄芪注射液三联叠加疗法,对慢性乙型肝炎病人进行抗病毒治疗,并与单独应用拉米夫定的抗HBV效果进行比较评价.检测HBV DNA阴转率和HBeAg-抗HBe血清转换率;血清HBV DNA浓度;HBV DNA的YMDD变异率和前C区变异率.结果 A组(叠加用药组)与B组(拉米夫定单药组)比较,HBV DNA阴转率分别在第12周、36周及48周差异有显著性(P<0.05),HBeAg阴转率在第36周、48周差异有显著性(P<0.05),抗HBe阳转率仅在第48周差异有显著性(P<0.05);两组患者血清HBV DNA浓度比较,治疗12周时降低程度差异有显著性(P<0.05),治疗第36周和48周时差异有非常显著性(P<0.01);治疗后12周,A组出现前C区BCP变异;疗后24周、36周和48周,两组均出现YMDD和前C区变异.结论与拉米夫定单独用药比较,三联叠加疗法可增加慢性乙型肝炎患者HBV DNA阴转率和HBeAg-抗HBe血清转换率,更显著降低血清HBV DNA浓度,并减少YMDD变异,故其抗HBV疗效优于拉米夫定单独用药.
作者：吴力克；刘宏；薛佩莲；吕志国；杜奎芳 刊期： 2001年第03期
目的探讨乙型肝炎肝硬化患者脑组织中乙型肝炎病毒(HBV)感染的状况及意义.方法应用免疫组织化学链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法(S-P法)对70例乙型肝炎肝硬化死亡患者脑组织进行了HBsAg、HBcAg检测,分析HBV抗原的表达与临床、病理的关系.结果 HBV抗原患者30例(42.89%),其中HBsAg阳性24例(34.29%),HBcAg阳性18例(25.71%).抗原主要定位于细胞质,分布于神经元、神经胶质细胞及血管内皮细胞内.阳性细胞呈单个、散在或灶性、小片状分布.HBV抗原的表达与血清HBV水平无关,而与肝性脑病(HE)的有无及HE患者脑组织病理损害的程度相关.结论乙型肝炎肝硬化患者脑组织中存在HBV感染,并可能存在复制.脑组织中HBV感染,可能对乙型肝炎肝硬化患者HE的发生发展具有重要作用.
作者：商庆华；张光曙；徐传镇；陈崇兴；于建国；闫承玉 刊期： 2001年第03期
目的了解乙型肝炎病毒表面S+前S1融合重组DNA(乙型肝炎重组DNA)整合到中国地鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶阴性突变株细胞(CHO dhfr-)染色体的变化及致瘤性.方法应用分子克隆技术构建含HBsAg的表面抗原S+前S1基因的质粒经转染、克隆、加压(MTX和MSX)筛选出高效表达乙型肝炎表面S+S1融合抗原的转基因细胞株(GdSS1-18)进行染色体制片,同时将制备的细胞、细胞DNA和细胞匀浆皮下接种裸鼠观察3周.结果整合了外源乙型肝炎重组DNA的转基因细胞系(GdSS1-18)不同的传代均发生染色体结构畸变,畸变率为11%,56%及29%,而未整合外源乙型肝炎重组DNA的对照CHO dhfr-细胞为6%,二者的染色体众数无明显变化,均为20条.整合与未整合外源重组DNA的细胞接种裸鼠以后观察3周均无肿瘤生长.结论整合有外源乙型肝炎重组DNA的细胞株(GdSS1-18)其染色体结构畸变率高于未整合的CHO-dhfr-对照细胞,但二者的染色体众数仍为20条;不同代数GdSS1-18细胞产物接种裸鼠后未见肿瘤的生长.
作者：田淑芳；阮薇琴；王秀平；张陵林；杨芙蓉；宗芳；阮力 刊期： 2001年第03期
目的研究乙型肝炎的远期免疫效果.方法采用单纯随机方法连续13年对1986年出生并接种乙型肝炎疫苗的儿童进行隔年随访,采血检测HBsAg、抗-HBs、抗-HBc.结果 13年间HBsAg阳性率在0.46%～0.97%之间,未随免疫时间的延长而上升,乙型肝炎疫苗的远期保护效果为81.67%,与近期免疫效果相当.结论免疫后13年仍无需加强免疫.
作者：吴维寿；孙超美；姜铭波；徐元；张国华；刘崇柏；曹惠霖；林曦敏；徐志一 刊期： 2001年第03期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
