HTHV核蛋白诱导产生特异性CTL的实验研究

大肠杆菌突变的thyA基因的克隆及序列分析

目的 研究thyA基因天然缺陷菌株thyA*基因的改变.方法 用PCR插入法将thyA*基因克隆到pUC18上,进行序列测定及分析.结果 突变的thyA基因其第131位碱基T突变为碱基A.结论 thyA基因缺陷的大肠杆菌的thyA基因第131位碱基T突变为碱基A,是导致该基因功能丧失的直接原因.

作者：夏晓滨；刘延清；祁国明；高守一 刊期： 2000年第01期

将抗体库所获抗-HBs Fab转换为全长人IgG

目的 将大肠杆菌表达的抗-乙肝表面抗原(HBs)人Fab转换为真核表达的全长人IgG1.方法 用重叠PCR法将人工合成的人Vκ前导序列拼接到抗-HBs的VH和Vκ上,构建人IgG1真核表达载体,转染真核细胞,通过ELISA、RT-PCR、免疫印迹检测抗-HBs人IgG的表达.结果 用轻链和重链同时表达的单一载体在CHO细胞中获得了抗-HBs人IgG的表达.结论 通过噬菌体抗体库所获Fab段可经拼接人Vκ前导序列在真核获得功能性表达.

作者：王琰；王欲晓；朱迎春；刘晓琳；张海荣；刘群英；化冰；陈晓穗；陈宇萍 刊期： 2000年第01期

喘康平冲剂抗病毒作用的观察

喘康平冲剂(黑龙江中医药大学制备)主要由麻黄、白果、杏仁、黄芩等中药组成,实践证明该方能有效地治疗支气管哮喘.为了探讨喘康平冲剂对病毒的疗效,我们将喘康平冲剂作了体外抗病毒实验.

作者：李竹琴；刘松江；李竹英；张迪 刊期： 2000年第01期

自身免疫病患者外周血γδT细胞系的功能研究

目的 研究自身免疫病人外周血TCRγδ细胞系在微生物及寄生虫抗原刺激下细胞因子的分泌情况.方法 以TCRγδ单克隆抗体固相法体外选择性扩增获得7例胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)及3例类风湿性关节炎(RA)病人外周血TCRγδ细胞系,平均纯度可达(84.7±5.9)%.在体外培养条件下,以植物血凝素(PHA)、结核分枝杆菌(M.tb)、阴道毛滴虫(TV)、人类6型疱疹病毒(HHV-6)刺激24h及48h后,测定细胞因子分泌情况.结果 HHV-6刺激组IL-2的分泌量显著高于其它各实验组;M.tb及HHV-6的刺激可导致IFN-γ的高产量.TNF-α的产生未见有显著性差异.结论 γδT细胞可能通过细胞因子的产生来影响自身免疫病的发生与发展.

作者：李静；何维；胡愉 刊期： 2000年第01期

人乙酰胆碱受体α-亚基在大肠杆菌中的表达

目的 通过将乙酰胆碱受体(AchR) α-亚基与分子伴侣蛋白(Chaperonin)共表达,减少包涵体含量,提高可溶性目的蛋白含量.方法 将乙酰胆碱受体α-亚基结构域基因的重组质粒pPR506与含分子伴侣蛋白GroESL基因的重组质粒pGE60一起转入E.coli DH5α,并在IPTG诱导下共表达.结果 由于分子伴侣蛋白具有协助重组蛋白再折叠的功能,其共表达产物与仅含pPR506的工程菌单一表达产物相比,前者增加了以非包涵体形式的表达.产物经SDS-PAGE、免疫印迹试验与FPLC分离等分析,均表明该工程菌的共表达产物为AchR α-亚基结构域(相对分子质量为13×103)及其与GroES的络合物(23×103).结论 分子伴侣蛋白帮助了重组蛋白在菌体内的正确折叠,提高了目的蛋白的可溶性.

作者：李卓玉；袁静明 刊期： 2000年第01期

轮状病毒北京地方株VP4基因的序列分析和原核系统的初步表达

A组轮状病毒是引起婴幼儿重症腹泻的主要病原[1],结构蛋白VP4是A组轮状病毒感染后刺激机体产生保护性抗体的主要抗原之一.由于VP4仅占病毒毒粒蛋白的1.5%,对VP4的高效表达将非常有助于进行其多肽的功能性、抗原性和免疫原性的研究.我们先前的工作发现A组轮状病毒在我国的流行以P1A型为主,本文初步探讨了轮状病毒P1A型我国地方株VP4基因的一级结构特点及通过序列分析预测血清型的分子基础,并且将地方株VP4完整基因在原核系统中进行了表达.

作者：霍云雯；钱渊；李国华；肖玮 刊期： 2000年第01期

男性类风湿关节炎性激素异常的探讨

半个多世纪前人们就已注意到不少风湿病有明显的性别差异,近年来随着免疫内分泌学的飞速发展,人们发现性激素可在免疫应答的多个水平上产生明显的影响.流行病学等资料表明类风湿关节炎(RA)的发病率男女比例为1:3,男性在45岁以后RA的发病率较高.为探讨男性RA患者性激素水平的改变,对近3年收治的男性RA患者进行了性激素的检测,并与同年龄组正常男性性激素水平进行对比.

作者：于波；王健敏；侯广庆；李铁声；于孟学 刊期： 2000年第01期

白念珠菌在肠腔中的增殖与局部IgA抗体分泌的关系

目的 观察白念珠菌(白念菌)在肠腔内增殖与局部粘膜免疫反应的关系.方法 采用无特殊病原菌动物经口喂入白念菌,在不同时相处死后,观察肠内白念菌总数及肠粘膜表面白念菌粘附数量;取肠系膜淋巴结做白念菌选择培养,观察移位体内发生率;采用Brdu体内掺入显示局部粘膜淋巴细胞的增殖情况;流式细胞计数潘伊尔氏结细胞表面IgA(SmIgA)阳性率;免疫组化染色后计数固有层中IgA浆细胞数量变化;ELISA法测定肠粘液中特异抗白念菌IgA含量.结果 肠内白念菌总量及粘膜表面粘附数量随给菌后时间延长而明显下降;移位主要发生于给菌后早期;给菌后固有层淋巴细胞增殖活跃,分泌IgA浆细胞数量明显增加;粘液层中特异抗白念菌IgA含量在给菌后上升明显.结论 带菌动物首次白念菌肠内给入后以固有层中淋巴细胞反应为主,增殖及分化均增加;白念菌总量和粘附数量减少与局部粘膜免疫反应及特异IgA抗体含量上升的关系十分密切.

作者：白晓东；刘贤华；肖光夏 刊期： 2000年第01期

人外周血NK细胞3种纯化方法的比较

NK细胞是机体抵抗肿瘤生长和病毒感染的重要的免疫监视细胞.近年来,关于NK细胞本质及其功能和机制的研究已成为免疫学研究的热点内容之一.但国内NK细胞的研究大多是检测NK细胞毒活性和NK细胞数量,很少直接观察NK细胞的特征及其功能特点,NK细胞分离纯化,是进行NK细胞基础与临床研究的基础和基本手段.我们分别采用Percoll不连续密度梯度离心法、单抗铺皿法(Panning)及补体依赖的细胞毒法对人外周血NK细胞进行了初步分离纯化,现将结果报告如下.

作者：张彩；田志刚；王郡甫；刘金生；张建华；许晓群；孙汭 刊期： 2000年第01期

斯奇康(卡介苗多糖核酸注射液)临床应用学术研讨会征文通知

作者： 刊期： 2000年第01期

系统性红斑狼疮临床表现与HLA Ⅱ类单倍型关联的研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)易感基因致病的模式.方法 利用多聚酶链反应/特异序列寡核苷酸探针杂交(PCR/SSOPH)方法检测113例确诊SLE病人的HLAⅡ类基因型并进行单倍型分析.结果 SLE病人的单倍型具有特定的结构特征,即以2个或3个重型SLE相关基因共同组成1个单倍型;反之,2个或3个轻型SLE相关基因组成另1个单倍型;重型基因和轻型基因之间很少有强连锁不平衡.DQA1*0301-DQB1*0302、DRB1*1501-DQA1*0102-DQB1*0303和DRB1*1501-DQA1*0103-DQB1*0303与肾损害正相关,DQA1*0501-DQB1*0301和DRB3*0202-DQA1*0501-DQB1*0301与肾损害负相关;DRB1*1501-DQA1*0301-DQB1*0601与狼疮性神经精神症状正相关;DQA1*0201-DQB1*0201与白细胞减少正相关;均Pc<0.05.结论 特异单倍型可能是影响SLE亚型临床表达的决定性因素.

作者：谢尚葵；冯树芳；沈福民 刊期： 2000年第01期

儿童慢性淋巴细胞性甲状腺炎T细胞CD40L表达及其与细胞因子失衡的关联研究

为研究慢性淋巴细胞性甲状腺炎(CLT)患儿发作期T细胞CD40L mRNA表达及其与TH1/TH2细胞因子失衡的关系,以8例CLT患儿为研究对象,采用RT-PCR技术和ELISA法分别检测在丝裂原诱导下外周血T细胞CD40L mRNA的表达及单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ、IL-4的水平.

作者：董文斌；王菁；邓存良；肖大成 刊期： 2000年第01期

人朊病毒多肽抗体的制备及应用

目的 利用人工合成人朊病毒蛋白(PrP)多肽制备特异性抗PrP抗体,以期用于朊病毒相关疾病的临床诊断.方法 根据PrP基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA及Western blot鉴定.结果 ELISA检测表明所制备的抗血清可同多种PrP发生阳性反应;Western blot结果显示抗血清可与正常组织PrPc和病理组织的PrPsc反应;用蛋白酶K处理,可鉴别二者.此外,人、小鼠和兔的脑组织细胞膜提取物在Western blot中显示一相对分子质量约30×103的条带,而相应肝、脾细胞膜提取物中无此条带出现.结论 所制备的PrP多肽抗血清可识别正常的PrPc和病理的PrPsc,合成肽抗原是制备抗朊病毒PrP抗体的一条有效的途径,可用于临床病例的检测.

作者：孙宪锋；董小平；张宝云；周伟；王长安；赵同兴；洪涛 刊期： 2000年第01期

TT病毒在肝炎患者中的检测及意义

自1997年底,日本学者报道TT病毒(TTV)以来,国内外已相继有TTV感染的报道.为了解西安地区TTV感染情况,我们采用PCR法检测了25例肝炎患者并对3例进行序列分析,证实西安地区也存在TTV感染.

作者：陈天艳；张树林；王少扬；周育森；王海涛 刊期： 2000年第01期

丙型肝炎病毒血清学分型应用的研究

为了探讨丙型肝炎病毒血清学分型的可行性,对148份抗-HCV阳性标本进行血清分型和基因分型.血清分型应用EIA技术,采用HCV核心区第65～81氨基酸合成多肽,血清1型为RPKARRPEGTWAQPGY,血清2型为IPKDRRSTGKSWGKPGY,可将HCV分为血清1型和2型;基因分型应用型特异性PCR法,设计3条通用引物和4条分型引物,可将HCV分为基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型.

作者：张天泰；张庶民；高评；谢晨；陈青锋；庄辉 刊期： 2000年第01期

第六届全国红细胞免疫学术大会在黄山市召开

作者： 刊期： 2000年第01期

抗HBV佳反义寡核苷酸片段的体外筛选

目的 寻找抗HBV佳反义寡核苷酸区段. 方法合成4种互补于HBV不同区段的反义硫代寡核苷酸(asON),加入HBV基因转染的肝癌细胞模型HepG22.2.15,以ELISA法测定HBsAg、HBeAg含量.结果 互补于pre-S2翻译起始区的asON(序列Ⅰ)抗HBV基因表达作用强(P<0.02),对HBsAg、HBeAg的高表达抑制率分别为66%和91%,针对增强子Ⅱ(ENⅡ)的序列Ⅲ也有较强的抑制作用(52%、56%).asON抗HBV作用具有明显时相性,其抑制作用随时间延长而有反跳,且针对增强子Ⅱ的反义序列Ⅲ和针对S基因起始区的反义序列Ⅱ的抑制作用规律相似,并在时相上与序列Ⅰ互补.结论 4种asON中,序列Ⅰ抗HBV基因表达作用强,而且序列Ⅰ与Ⅲ或Ⅱ配伍有望成为理想的抗HBV基因药物.

作者：马春红；孙汶生；刘素侠；丁培芳；张利宁；曹英林；宋静 刊期： 2000年第01期

HTHV核蛋白诱导产生特异性CTL的实验研究

目的 建立稳定表达核蛋白(NP)的P815细胞株,并以此作为CTL的靶细胞,研究汉滩病毒(HTHV)诱导产生的NP抗原特异性CTL.方法 脂质体介导pEF-BOS/HTHV-NP和pDORneo质粒DNA共转染P815细胞株,用免疫组化染色法证实NP在胞浆中的表达.分别取HTHV感染小鼠的脾细胞和pEF-BOS/HTHV-NP质粒DNA免疫小鼠的脾细胞,经体外抗原和IL-2再刺激诱导产生CTL效应细胞,进行4h 51 Cr释放实验.结果 杀伤试验结果表明,无论通过病毒感染还是基因免疫获得的CTL效应细胞,均可以特异性杀伤NP基因转染的靶细胞.结论 HTHV NP可以有效诱导CTL的产生,该研究结果为进一步设计HTHV合成肽疫苗或基因疫苗提供了重要实验依据.

作者：张婷婷；朱勇；金伯泉；刘飞；孙忱；陈丽华 刊期： 2000年第01期

1999年度国家自然科学基金生命科学部免疫学学科受理项目评析

1999年度国家自然科学基金委员会免疫学学科共受理面上项目298项,其中自由申请项目223项,青年基金70项,地区基金5项.受理项目的研究内容主要涉及四大领域,即基础免疫学、应用免疫学,临床免疫学和移植免疫学.本文将具体介绍所受理基金项目的研究方向、研究基础、专家评价等情况,希望能为2000年免疫学科研工作者申报国家自然科学基金项目提供参考.

作者：吕群燕 刊期： 2000年第01期

白血病患儿巨细胞病毒感染的PCR与抗原检测方法比较

目的 对不同种类标本应用PCR检测巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)DNA,并与外周血白细胞CMV抗原检测比较,以了解PCR方法在诊断白血病患儿活动性CMV感染时的意义.方法 实验组为31例白血病患儿,对照组为31例免疫功能正常儿童,两组儿童的年龄、性别无差异.应用PCR方法检测血清、尿液和脑脊液CMV DNA,间接免疫荧光方法检测外周血白细胞CMV抗原,ELISA方法检测血清抗CMV IgG.结果 实验组CMV感染率为100%(31/31例CMV IgG阳性),对照组CMV感染率为83.9%(26/31例CMV IgG阳性),两者之间无差异(P=1).实验组检测CMV抗原,有9例阳性且均发生了活动性CMV感染,活动性感染率为29.1%,对照组活动性感染率为0%,两者之间差异有非常显著性(P=0.002).与CMV抗原检测相比,PCR方法检测尿、血清和脑脊液CMV DNA诊断白血病儿童活动性CMV感染的敏感性为(88.9～100)%,特异性为(68.2～81.8)%.结论 白血病患儿易发生活动性CMV感染.在诊断CMV感染时,应用PCR方法检测CMV DNA的敏感性较高,但要注意区分活动性感染和潜伏性感染.

作者：安菁；申昆玲；吴敏媛；江载芳 刊期： 2000年第01期