学术投稿

重组人KGF基因减毒沙门氏菌菌株的构建及鉴定

张尚弟;哈小琴;胡永浩;刘春杰;李戈;杨志华

关键词:肺损伤, 角质细胞生长因子, 减毒沙门氏菌
摘要:目的 构建携带人角质细胞生长因子(KGF)基因真核表达载体的减毒沙门氏菌,并进行稳定性检测及体外表达鉴定,为探索制备针对高原急性肺损伤的细胞因子保护剂提供理论和实验依据.方法 采用RT-PCR法从正常人皮肤组织总RNA扩增出KGF cDNA全长,测序正确后将其定向插入到pcDNA3.0(+)质粒BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ之间;以电转化法将构建成功的质粒转化入减毒沙门氏菌Ty21a中,获得重组减毒沙门氏菌菌株TPK,并将其在卡那霉素(+)和卡那霉素(-)的LB培养板上分别传代培养40代,每隔10代提取质粒进行PCR及酶切鉴定;TPK菌株转染A549细胞,转染24 h及48 h后以RT-PCR及ELISA法检测KGF基因及蛋白表达水平.结果 成功构建了携带KGF基因的重组减毒沙门氏菌TPK,其可稳定遗传,不因无选择性压力而使质粒丢失,并能在体外稳定表达KGF基因及蛋白.结论 携带KGF基因减毒沙门氏菌TPK的成功构建和体外稳定表达为进一步研究角质细胞因子KGF对肺损伤的保护作用提供了实验依据.
中国现代医学杂志相关文献
  • 胶质瘤中GDNF基因启动子Ⅱ区甲基化修饰发生变化

    目的 检测胶质瘤组织中神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)基因启动子Ⅱ区甲基化修饰水平,以期探讨其与目的基因在胶质瘤组织中高转录的关系.方法 基因测序技术检测胶质瘤组织中GDNF基因启动子Ⅱ区碱基序列是否发生突变;采用BSP检测GDNF基因启动子Ⅱ区的甲基化修饰水平;通过qPCR检测胶质瘤组织中GDNF基因mRNA的表达水平.结果 胶质瘤组织中GDNF基因启动子Ⅱ区没有发生有意义的突变位点;启动子Ⅱ区总甲基化修饰率在正常组、低级别、高级别胶质瘤中分别为:25.57%,15.42%,42.19%,各组间比较均有明显差异(P<0.05);在低级别组中增强子的甲基化水平低,而高级别组中沉默子甲基化水平高;qPCR结果显示胶质瘤组织中GDNF mRNA水平较正常脑组织显著升高.结论 在胶质瘤组织中,GDNF基因启动子Ⅱ区甲基化修饰水平发生显著变化,此甲基化修饰形式的变化可能参与目的基因在胶质瘤组织中的高表达机制.

    作者:王建村;任庆先;高殿帅 刊期: 2012年第30期

  • 肾发育中血管球毛细血管生长曲线的变化

    目的 探讨肾发育中血管球毛细血管长度、表面积和体积的变化规律.方法 应用光镜连续切片技术并结合体视学分析的方法,对不同发育阶段大鼠和小鼠血管球毛细血管长度、表面积和体积的变化规律进行体视学测量.结果 P21d~P40d大鼠血管球毛细血管长度增长快,而表面积和体积在P5d~P7d增长快;小鼠血管球毛细血管的长度、表面积和体积在P5d~P7d增长快.结论 肾发育的早期,肾小体以血管球毛细血管的增生为主,此后则以生长成熟为主.

    作者:宋小峰;郭敏 刊期: 2012年第30期

  • 咪达唑仑复合舒芬太尼在老年腰麻患者中镇静效果的观察

    目的 探讨咪达唑仑复合舒芬太尼用于老年腰麻患者镇静时的佳配伍剂量.方法 选择80例腰麻下行下腹部或下肢手术患者,年龄≥65岁,ASA Ⅰ~Ⅲ级,随机均分为4组:Ⅰ组(S0.1,M10),Ⅱ组(S0.1,M30),Ⅲ组(S0.15,M20),Ⅳ组(S0.2,M10),单位均为μg/kg,每组20例.记录给药前(T0)、给药后5min(T1)、10 min (T2)、30 min (T3)、60 min (T4)时警觉/镇静(OAA/S)评分,SBP、DBP、HR、RR、SpO2、警觉/镇静(OAA/S)评分、遗忘程度及不良反应.结果 4组患者的SBP、DBP、HR、SpO2在均在正常范围内有所降低.Ⅳ组在给药后5 min,10 min的SpO2明显低于其他3组(P<0.05),Ⅱ组给药后5min,10 min的OAA/S评分低于Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ组(P<0.05),Ⅱ组的完全遗忘程度高达50%,明显高于Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ组(P<0.05).结论 咪达唑仑30μg/kg复合舒芬太尼0.1μg/kg镇静遗忘效果好,且呼吸和循环抑制作用少,可作为老年患者理想的镇静配方.

    作者:周述芝;杨雪;周军;魏继承 刊期: 2012年第30期

  • 体外树突状细胞疫苗策略抗肿瘤免疫治疗研究进展

    树突状细胞(DCs)在激活天然的免疫反应和获得性免疫反应中具有独一无二的作用,应用DCs为基础的肿瘤免疫治疗已成为肿瘤治疗的研究焦点.改善DCs疫苗的效能的方法有体外DCs策略和体内DCs策略.本文就体外DCs疫苗策略在肿瘤免疫治疗中的研究进展做一综述.

    作者:谢军平;叶小群 刊期: 2012年第30期

  • 经尿道前列腺电切术联合膀胱颈内切开治疗小体积前列腺增生临床疗效分析

    目的 探讨分析经尿道前列腺电切术联合膀胱颈内切开治疗小体积前列腺增生的临床疗效.方法 收集98例小体积前列腺增生患者,按手术方式分为A组与B组,A组采用经尿道前列腺电切术(TURP)联合膀胱颈内切开(TUIBN)治疗,而B组单用经尿道前列腺电切术治疗,观察并随访半年,比较两组患者治疗前后国际前列腺症状评分(IPSS)、大尿流率(Qmax)、残余尿量(RUV)及并发症发生情况.结果 经治疗A组患者IPSS明显低于B组,Qmax高于B组,RUV小于B组,两组相比均有显著性差异(P<0.05);且A组并发症发生率6%明显低于B组14.58%,两组相比亦有显著性差异(P<0.05).结论 经尿道前列腺电切术联合膀胱颈内切开治疗小体积前列腺增生疗效肯定,临床值得推广.

    作者:陈琳 刊期: 2012年第30期

  • 乌司他丁对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤NF-κ Bp65及MMP-2表达的影响

    目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导的失鼠急性肺损伤中肺组织NF-κ Bp65及MMP-2表达的影响.方法 将45只SD大鼠随机分为3组,每组15只.正常对照组尾静脉注射生理盐水2mL/kg;急性肺损伤组尾静脉注射脂多糖5 mg/kg;乌司他丁干预组大鼠腹腔注射乌司他丁100 ku/kg,30 min后尾静脉注射脂多糖5 mg/kg.给药后4h处死大鼠,测动脉血氧分压、肺湿干重比、行肺组织HE染色.采用免疫组化法测定肺组织NF-κ Bp65及MMP-2的表达,并进行统计学分析.结果 与正常对照组相比较,急性肺损伤组和乌司他丁干预组肺组织NF-κ Bp65及MMP-2的表达均增多,差异有显著性(P<0.05),乌司他丁干预组较急性肺损伤组NF-κBp65及MMP-2的表达低,差异有显著性(P<0.05).结论 NF-κ Bp65及MMP-2在急性肺损伤中起着一定的作用,乌司他丁可抑制NF-κ Bp65及MMP-2表达.

    作者:何芳;彭再梅;贺志飚 刊期: 2012年第30期

  • 联合应用吲哚氰绿15分钟储留率与保留肝容积率评估肝脏储备功能的研究

    目的 联合应用吲哚氰绿15 min储留率(ICGR15)及保留肝容积率(RLVR)评估原发性肝癌患者术前肝脏储备功能.方法 回顾性分析2010年1月~2011年1月在中国医科大学附属第一医院行肝脏部分切除术的原发性肝癌患者,术前均进行Child-Pugh评分,应用脉动色素浓度(PDD)法检测ICGR15,应用CT测量保留肝容积率(保留肝容积率=保留肝容积/预计肝容积×100%,预计肝容积=121.75+16.49×体重).根据ICGR15水平将患者分为A(<10%)、B(10%~20%)、C(>20%)三组,依据术后肝功能恢复情况将患者分为肝功能恢复良好组(G组)、肝功能代偿轻度不全组(M组)、肝功能代偿重度不全组(S组).分析术后各肝功能恢复组的ICGR15、Child-Pugh评分之间的关系,不同ICGR15水平组内术后不同肝功恢复情况组的RLVR之间关系.结果 不同肝功恢复情况组的ICGR15之间有差异(P<0.05),Child-Pugh评分之间无差异(P>0.05),A(<10%)、B(10% ~ 20%)两组组内术后不同肝功恢复情况组的RLVR之间存在差异(P<0.05).结论 联合应用ICGR15及RLVR对肝储备功能有很好的预测价值并可以指导确定治疗方案.

    作者:王光;陈旭春;吴刚;刘永锋 刊期: 2012年第30期

  • 重组人白介素-11(Ⅰ)治疗急性白血病化疗后血小板减少的疗效观察

    目的 观察重组人白介素-11(Ⅰ)治疗急性白血病化疗后血小板减少的疗效及安全性.方法 68例急性白血病患者强化治疗后出现血小板减少,分为治疗组35例,对照组33例.治疗组使用重组人白介素-11(Ⅰ)治疗,25μg/kg·d皮下注射,直至血小板连续2 d>50×109/L或>100×109/L.对照组不使用任何升血小板药物.结果 治疗组血小板减少持续时间缩短,血小板输注量减少,血小板绝对值较对照组高,差异有显著性.主要不良反应为乏力、头痛、肌痛和浮肿.结论 重组人白介素-11(Ⅰ)治疗急性白血病化疗后血小板减少疗效显著,且不良反应轻微,值得推广.

    作者:蒋锐;谢明;王龙;杨波;江炳东 刊期: 2012年第30期

  • 剖宫产疤痕部位妊娠13例临床分析

    目的 探讨剖宫产疤痕妊娠的临床特点,早期诊断及适宜治疗方法.方法 回顾分析2000年1月~2011年12月本院收治的剖宫产疤痕部位妊娠患者的临床资料及治疗结果.结果 13例患者均有剖宫产术手术史,并都有停经后阴道流血史,且经盆腔彩超检查提示剖宫产疤痕部位妊娠可能.13例中3例行甲氨蝶呤联合米非司酮及中药保守治疗下清宫术,3例行介入治疗+甲氨蝶呤化疗+B超引导下清宫术,4例行介入治疗+米非司酮口服+B超引导下清宫术,2例行介入+子宫下段疤痕病灶切除+子宫修补术,1例行子宫切除术.结论 剖宫产疤痕部位妊娠应尽早确认,并及时中止妊娠,以降低不良妊娠带来的危害,并且要求根据患者的具体情况给予个体化治疗.

    作者:范艳兰;吴仕元 刊期: 2012年第30期

  • 经外侧裂入路大骨瓣减压在基底节区脑出血的临床应用

    目的 探讨应用大骨瓣开颅减压,经外侧裂入路手术清除基底节区脑出血的疗效.方法 回顾性分析90例基底节区脑出血患者的临床资料、手术方法和随访资料.术后按格拉斯哥预后评估(GOS)标准评定预后.结果 治疗组:预后良好10例,轻度残疾24例,重度残疾5例,植物状态6例,无死亡病例;对照组:预后良好8例,轻度残疾12例,重度残疾13例,植物状态9例,死亡3例.结论 大骨瓣开颅减压,采用外侧裂入路是治疗重型基底节区脑出血的安全有效的方法,有利于术中清除血肿和术后功能恢复.但需要术者具备熟练的显微外科操作技术.

    作者:付华 刊期: 2012年第30期

  • 重组人KGF基因减毒沙门氏菌菌株的构建及鉴定

    目的 构建携带人角质细胞生长因子(KGF)基因真核表达载体的减毒沙门氏菌,并进行稳定性检测及体外表达鉴定,为探索制备针对高原急性肺损伤的细胞因子保护剂提供理论和实验依据.方法 采用RT-PCR法从正常人皮肤组织总RNA扩增出KGF cDNA全长,测序正确后将其定向插入到pcDNA3.0(+)质粒BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ之间;以电转化法将构建成功的质粒转化入减毒沙门氏菌Ty21a中,获得重组减毒沙门氏菌菌株TPK,并将其在卡那霉素(+)和卡那霉素(-)的LB培养板上分别传代培养40代,每隔10代提取质粒进行PCR及酶切鉴定;TPK菌株转染A549细胞,转染24 h及48 h后以RT-PCR及ELISA法检测KGF基因及蛋白表达水平.结果 成功构建了携带KGF基因的重组减毒沙门氏菌TPK,其可稳定遗传,不因无选择性压力而使质粒丢失,并能在体外稳定表达KGF基因及蛋白.结论 携带KGF基因减毒沙门氏菌TPK的成功构建和体外稳定表达为进一步研究角质细胞因子KGF对肺损伤的保护作用提供了实验依据.

    作者:张尚弟;哈小琴;胡永浩;刘春杰;李戈;杨志华 刊期: 2012年第30期

  • 儿童手足口病合并中枢神经系统损害临床特点分析

    目的 探讨手足口病并发中枢神经系统损害的临床特点、治疗方法及预后.方法 回顾性分析中国医科大学附属盛京医院2010年4月~2011年7月收治的215例手足口病并发中枢神经系统损害病例的临床资料.结果 中枢神经系统损害主要表现为发热、呕吐、颈抵抗、嗜睡、肌阵挛、抽搐和急性弛缓性瘫痪等.3例死亡,2例出院时遗留有神经系统表现.结论 手足口病并发中枢神经系统损害多发生在3岁以下幼儿,脑干脑炎患者病情为严重,可导致死亡或遗留神经系统症状.

    作者:赵宁;张凤山;李智伟 刊期: 2012年第30期

  • 柴胡加龙骨牡蛎汤配合颈椎牵引治疗颈性眩晕20例的TCD观察

    目的 观察柴胡龙骨牡蛎汤配合颈椎牵引治疗颈性眩晕的TCD疗效.方法 选择40例颈性眩晕患者,采用区组随机化方法及异体配对设计,分为治疗组和对照组,每组各20例.治疗组予柴胡龙骨牡蛎汤配合颈椎牵引治疗,对照组予盐酸氟桂利嗪胶囊配合颈椎牵引治疗,治疗4周进行疗效评估,两组治疗前后均对患者进行TCD检查.结果 治疗组治疗后VA及BA的Vm与治疗前比较均明显提高(P<0.01),PI明显降低((P<0.01),对照组治疗后VA及BA的Vm与治疗前比较也有提高(P<0.05),PI降低(P<0.05);2组治疗后比较,治疗组的VA及BA的Vm均高于对照组(P<0.05),治疗组的VA及BA的PI均低于对照组(P<0.05).结论 柴胡龙骨牡蛎汤配合颈椎牵引对颈性眩晕有较好的治疗效果.

    作者:温子龙;刘佳;曾国禄;卢志锋;黄新 刊期: 2012年第30期

  • E-选择素和细胞间黏附分子-1检测与急性冠状动脉综合征的相关性

    目的 探讨E-选择素(E-selectin)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)检测在急性冠状动脉综合征(ACS)发展中的作用.方法 将197例住院患者分成三组:稳定性心绞痛组(SAP)(n=62)、急性冠状动脉综合征(n=90)、对照组(n=45).采用酶联免疫吸附试验E-selectin和ICAM-1的血清学变化进行分析.结果ACS组的E-selectin和ICAM-1的血清学水平显著高于其它两组,差异有显著性(P<0.01),ICAM-1的血清学水平在SAP组和对照组中,差异有显著性(P<0.01).E-selectin和ICAM-1的血清学水平呈正相关性.结论 E-selectin和ICAM-1联合检测对诊断急性冠状动脉综合征的病变程度具有重要临床意义.

    作者:唐甜甜;王宝权;张蕴莉 刊期: 2012年第30期

  • 木犀草素对COPD患者血清TNF-α及肺功能的影响

    目的 探索木犀草素对慢性阻塞性肺疾病(COPD)的防治作用及可能的抗炎机制.方法 本研究以木犀草素治疗COPD急性加重期患者为研究对象(A组),常规用药治疗为阴性对照组(B组),采用酶联免疫吸附法测定患者前后血清TNF-α水平,同时进行MRC呼吸困难评分及肺功能FEV1(pred%)、FEV1/FVC、MVV、PEF测定,比较观察木犀草素治疗COPD患者前后血清TNF-α及肺功能的变化,并对其变化进行相关性研究.结果 ①A组治疗后血清TNF-α水平浓度明显下降(P<0.01),MRC呼吸困难评分明显降低(P<0.01),肺功能FEV1 (pred%)、FEV1/FVC、MVV、PEF有明显改善(P<0.01或P<0.05);②A组治疗前后血清TNF-α的差值及MRC呼吸困难评分、肺功能与B组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.05).结论 木犀草素治疗能明显下降COPD急性加重期患者血清TNF-α水平,明显改善呼吸困难及肺的通气功能,由于其价格便宜,可能会大大降低COPD的治疗成本,这将会为COPD防治带来新的内涵.

    作者:唐文辉;朱荣辉;李远航;刘灼帆;宛太 刊期: 2012年第30期

  • 保留子宫在全盆底重建手术中的应用价值探讨

    目的 探究保留子宫在全盆底重建手术中的临床应用价值.方法 采用回顾性研究,对患有Ⅲ~Ⅳ度盆底脏器脱垂并于2008年1月~2010年2月期间行手术治疗的患者362人作为研究对象.根据其手术方式将其分为两组:组1,保留子宫的全盆底重建手术(应用植入网片)共230人;组2,阴式切除子宫同时行全盆底重建手术(采用植入网片)共132人.比较两组患者术前一般情况,术前POP-Q分期,围手术期情况,术后18个月POP-Q分期及术后随访并发症产生情况.结果 两组患者术前一般情况及POP-Q分期无明显差异,组1手术时间、术中出血量和住院时间均明显少于组2(P=0.000,0.000,0.001),术后18个月随访结果,组1中C点水平明显高于组2(P=0.020).其它各点无明显差异.组1中出现补片暴露概率明显少于组2(P=0.001).结论 保留子宫的全盆底重建手术可使患者损伤更小、恢复更快、术后效果更好、并发症发生率降低,在生殖器官健康的前提下,保留子宫的全盆底重建手术可使患者获得更大的收益.

    作者:尹一童;夏志军;赵颖;胡清 刊期: 2012年第30期

  • 新霉素氧化锌糊的制备及质量控制

    目的 制备新霉素氧化锌糊剂,建立其质量控制方法.方法 取处方量羊毛脂、凡士林加热熔化,至70℃时,在搅拌下加入已过筛且混匀的淀粉、氧化锌及硫酸新霉素,冷凝,即得新霉素氧化锌糊.采用抗生素微生物检定法和配位滴定法分别测定新霉素和氧化锌的含量.结果 新霉素氧化锌糊处方工艺合理可行;新霉素在4.0155~24.0930 u/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9997),其平均回收率为95.09%,RSD为0.22%;氧化锌在0.02504~0.1252g/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),其平均回收率为98.96%,RSD为0.38%.结论 本制剂处方工艺合理、简单、可行,质量可控,稳定性良好,临床应用安全有效.

    作者:李健和;李晓燕;刘新义;向大雄;张郁葱;唐方;彭六保;易利丹 刊期: 2012年第30期

  • 钼酸盐对人肝癌细胞抑制增殖和诱导凋亡作用的实验研究

    目的 观察钼酸氨对体外培养人肝癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用.方法 应用CCK-8法检测不同浓度钼酸氨对HepG2细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率.结果 钼酸氨能明显抑制HepG2细胞增殖、诱导细胞凋亡、影响细胞周期,并存在剂量-效应关系和时间-效应关系,随着钼酸氨浓度升高和作用时间延长,凋亡细胞和G0/G1期细胞比例逐渐增加,S期及G2/M期细胞减少,并出现凋亡峰.结论 钼酸氨能抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,影响细胞周期,将细胞特异性地阻滞在G1期.

    作者:吴银侠;陈新胜;宋少武;王淑媛 刊期: 2012年第30期

  • RNA联合干扰对肝癌细胞CDC20和HPSE表达的影响

    目的 探讨RNA联合干扰(RNAico)对肝癌细胞株Hepa1-6中丝裂原调控子20(CDC20)和乙酰肝素酶(HPSE)表达的抑制作用.方法 设计针对小鼠肝癌细胞Hepa1-6 CDC20和HPSE mRNA的小干扰RNA,以阳离子脂质体包埋后转染鼠肝癌细胞Hepa1-6,即RNAico;转染48 h后,采用RT-PCR和Re-a1-Time PCR测定CDC20、HPSE mRNA表达的变化.结果 联合干扰组CDC20和HPSE mRNA表达明显抑制,与其他各组相比,在统计学上有显著性差异(P<0.05).结论 RNAico可同时显著抑制小鼠肝癌细胞Hepa1-6中CDC20和HPSE mRNA的表达.

    作者:廖允军;王成友;罗成蓉;孙亮;夏荣;庄礼钊;刘美洲 刊期: 2012年第30期

  • 磁力导航髓内钉治疗胫骨干骨折32例临床分析

    目的 观察磁力导航髓内钉治疗胫骨干骨折的效果.方法 用磁力导航髓内钉治疗胫骨干骨折32例:其中胫骨干骨折上段7例,中段22例,下段3例.结果 随访6~36个月,平均15个月,28例正常愈合,4例延迟愈合.骨折愈合时间2~11个月,平均3.5个月.伤肢功能评价优良率93.8%.结论 磁力导航髓内钉治疗胫骨干骨折符和BO生物力学固定的理论,定位准确,不用透视,创伤小,术后愈合好,较传统内固定方法有明显优势.

    作者:刘洪琪 刊期: 2012年第30期

中国现代医学杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:中南大学,中南大学肝胆肠外科研究中心