学术投稿

肠道病毒71型外壳蛋白VP1的可溶性表达、纯化及活性鉴定

周亚萍;史伟峰;朱荫昌;曹利民;朱思梅;史梅;李坤;姜庆波

关键词:肠道病毒71型, 组蛋白VP1, 可溶性抗原
摘要:目的 克隆、表达和鉴定肠道病毒71型(EV71)VP1基因,得到可溶性的蛋白VP1,为制备EV71的抗体和诊断试剂的开发打下基础.方法 优化EV71 VP1蛋白基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/VP1,转化大肠杆菌BL21.使用NP亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting检测目的 蛋白.以重组蛋白VP1为抗原,ELISA检测抗原活性.结果 重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量为36 000,与预计大小一致.ELISA实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.结论 本研究成功克隆和表达了EV71 VP1蛋白,并得到可溶性的蛋白,对肠道病毒71型诊断试剂的开发有进一步潜在的应用价值.
热带医学杂志相关文献
  • 流动人口肺结核患者跨区域管理转入地违规重新登记影响因素分析

    目的 初步探讨转入地结核病防治机构违规重新登记原因,为今后流动人口管理工作的顺利开展和相关政策的制定提供科学依据.方法 将南山区2007年10月至2009年9月转入其他地区且2个月内到位治疗的流动人口肺结核患者作为研究对象,收集患者的一般情况、患病情况和跨区域管理相关资料,分别用单变量、多变量统计方法 分析转入地违规重新登记的可能影响因素.结果 多变量统计显示,第一项目年转出患者和痰涂片阳性患者被转入地违规重新登记率较高,差异有统计学意义(P<0.05);第二项目年我区转出患者主动告知率为67.5%,到位率为60.8%,转入地结防机构信息反馈率为95.8%,代管率为41.1%,较第一项目年各项指标均有大幅提高.结论 跨区域管理工作随着开展的深入已初现成效,但由于为完成当地涂阳病人发现和登记治疗管理任务等原因,转入地结防机构违规重新登记现象仍较为严重,政府需对此加强规范管理力度.

    作者:郭旭君;王健;钟涛;卢俊江 刊期: 2011年第09期

  • 肠道病毒71型外壳蛋白VP1的可溶性表达、纯化及活性鉴定

    目的 克隆、表达和鉴定肠道病毒71型(EV71)VP1基因,得到可溶性的蛋白VP1,为制备EV71的抗体和诊断试剂的开发打下基础.方法 优化EV71 VP1蛋白基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/VP1,转化大肠杆菌BL21.使用NP亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting检测目的 蛋白.以重组蛋白VP1为抗原,ELISA检测抗原活性.结果 重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量为36 000,与预计大小一致.ELISA实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.结论 本研究成功克隆和表达了EV71 VP1蛋白,并得到可溶性的蛋白,对肠道病毒71型诊断试剂的开发有进一步潜在的应用价值.

    作者:周亚萍;史伟峰;朱荫昌;曹利民;朱思梅;史梅;李坤;姜庆波 刊期: 2011年第09期

  • 来氟米特联合激素治疗过敏性紫癜性肾炎的疗效观察

    目的 观察来氟米特联合激素治疗伴肾功能不全的紫癜性肾炎,探讨来氟米特的疗效及安全性.方法 选择紫癜性肾炎伴肾功能不全的住院患者77例,随机分为两组,A组39例,B组38例.A组给予口服来氟米特0.8 mg/(kg·d),5d后改为维持量20 mg/d;B组采用环磷酰胺0.75 g/m2静脉滴注,每月1次,总量达到6~8 g;同时,两组均给予泼尼松1 mg/kg,口服8周减量,疗程6个月.观察治疗后各组患者24h尿蛋白定量、尿红细胞计数、Ccr、BUN等指标变化及药物不良反应.结果 用药3、6个月后,两组24h尿蛋白定量、尿红细胞计数以及血肌酐水平较治疗前均显著下降,血浆白蛋白水平显著升高(P<0.05).3个月后,A、B两组间的24h尿蛋白定量、尿红细胞计数及血浆白蛋白水平差异有统计学意义(P<0.05),但两组间的血肌酐水平差异无统计学意义(P>0.05).6个月后,A、B两组间的24 h尿蛋白定量、尿红细胞计数、血浆白蛋白水平和血肌酐水平差异均有统计学意义(P<0.05).结论 来氟米特是治疗过敏性紫癜性肾炎的一种安全有效的药物,优于环磷酰胺,且能延缓肾功能衰竭.

    作者:李中;黄承胜;徐敏;尹莉;刘婷;潭小平 刊期: 2011年第09期

  • 云南省保山市1981-2009年疟疾防治效益分析

    目的 对保山市1981-2009年疟疾防治的经济和社会效益进行分析,科学评价防治成果.方法 运用卫生经济学基本理论,采用效益成本比值法对疟疾防治工作中投入的成本与产生的效益进行分析.结果 1981-2009年共投入疟疾防治成本8 237.84万元,产生总经济效益为322 031.46万元,净效益313 793.62万元;效益成本比值为39.1:1;平均每年净效益为10 820.47万元.趋势分析显示,随着年限的推移,内源性疟疾发病呈逐年下降趋势(rs=-0.515,P=0.004).结论 29年来的疟疾防治工作为保山市取得了巨大的经济效益和社会效益.

    作者:郑维斌;李加全 刊期: 2011年第09期

  • 腹腔镜阑尾切除术几种阑尾残端处理的方式比较

    目的 总结腹腔镜阑尾切除术(LA)阑尾残端处理的几种方法 带来的不同后果,探讨LA阑尾残端处理方法 的优劣性.方法 LA治疗阑尾炎共163例,阑尾残端处理方式有:直接缝扎(A组)43例、套扎线套扎(B组)42例、“威克夹”结扎(C组)38例、钛夹结扎(D组)40例.比较各组的术中、术后并发症,痊愈出院时间,远期效果,并进行统计学处理.结果 A、B、C组残端处理的并发症发生率分别为6.98%、2.38%、2.63%,三组比较差异无统计学意义(P>0.05);D组为25.00%,与A、B、C三组比较差异均有统计学意义(P<0.05).且A、B、C三组病人的住院时间、远期效果、平均费用方面差异无统计学意义(P>0.05),D组与A、B、C三组比较差异则有统计学意义(P<0.05).结论 LA时阑尾残端直接缝扎、套扎线套扎和“威克夹”结扎均是可靠的选择.

    作者:郝永钟;解传仁;朱伟科 刊期: 2011年第09期

  • 深圳市龙岗区2005-2009年法定传染病的流行病学分析

    目的 阐明深圳市龙岗区2005 -2009年5年来法定报告传染病的发生、流行及其变化趋势,分析其流行特征和影响因素,为制定防制策略提供科学依据.方法 采用描述性研究对深圳市龙岗区近5年来法定报告传染病进行系统描述.结果 2005 -2009年深圳市龙岗区累计报告传染病29种,共53 012例,年平均发病率为371.97/10万,死亡65例,年平均死亡率为0.46/10万,总病死率为0.12%.从发病率顺位来看,以其它感染性腹泻、手足口病、梅毒、淋病、肺结核、急性出血性结膜炎和麻疹为主.结论 2005 -2009年龙岗区法定报告传染病总的趋势下降,但在不同时期有不同的流行特点和规律,因此应根据本地传染病发病趋势及时调整防制策略和重点.

    作者:林鹰;李刚;陈清;俞守义 刊期: 2011年第09期

  • 血小板活化因子乙酰水解酶临床治疗研究进展

    血小板活化因子(PAF)是具有多种生物学活性的磷脂,能够活化血小板和其他炎症因子,在变态反应及呼吸、消化等系统的炎症反应中扮演重要的角色.血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)能够水解PAF和相关的氧化磷脂并使之失活,从而发挥有效的调节作用.本文对PAF-AH的结构特性以及对相关疾病的未来治疗进展进行综述.

    作者:吴宜娟;王丽娟 刊期: 2011年第09期

  • 氧化应激性肠上皮细胞损伤与MAPK信号通路的系研究

    目的 观察氧化应激引起肠上皮细胞(IEC-6)损伤后丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路活化的情况,从而探讨氧化应激损伤的机制.方法 采用MTT法检测不同浓度(100、200、300、400、500、800、1 000、2 000μmoL/L)H202对IEC-6生存率的影响;用Western Blot法检测H202作用不同时间(0.25、0.5、1、2、3、4h)下ERK、JNK以及p38磷酸化的激活情况.结果 与正常组相比,随着H202刺激浓度的增加,IEC-6的生存率逐渐降低,呈浓度依赖性.当H202刺激浓度为200 μmol/L时细胞的生存率约为50%.ERK 1/2、JNK1/2、p38在H202刺激0.25 h开始磷酸化,在刺激0.5 h达到高,随后磷酸化水平恢复到基础值.结论 氧化应激早期可通过激活ERK、JNK以及p38的磷酸化引起IEC-6的损伤.

    作者:陈茜;屠伟峰 刊期: 2011年第09期

  • 低糖诱导人脐静脉内皮细胞一氧化氮与活性氧变化的研究

    目的 观察低浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞一氧化氮(N0)与活性氧(ROS)变化的影响.方法 以体外培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12为研究对象,将实验分为正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、低糖组(2.8 mmol/L葡萄糖)、无糖组(0 mmol/L葡萄糖).分别用2.8、0 mmol/L葡萄糖干预HUVEC-12细胞,经过1、2、4、12h后,硝酸还原酶法测定NO产量,化学比色法测定一氧化氮合成酶(NoS)活性,Dihydroethidium荧光探针法测定细胞内ROS水平.结果 与正常对照组相比,低糖组与无糖组NO水平降低(P<0.01),NOS活性下降(P<0.01),细胞内ROS水平升高(P<0.01),均呈剂量依赖关系.同一浓度组内随着时间的延长,内皮细胞NO水平、NOS活性进一步降低(P<0.01),ROS水平进一步升高(P<0.05),各指标都具有浓度和时间依赖性.结论 低糖可导致内皮细胞功能障碍,NO水平降低,NOS活性下降,其机制可能与低糖导致内皮细胞氧化应激损伤有关.

    作者:连欣;薛耀明;朱波;陆雯;刘宁 刊期: 2011年第09期

  • S系统及时序布尔网络模型构建鼠疫耶尔森菌基因调控网络的初步研究

    目的 应用S幂率系统构建鼠疫耶尔森菌小尺度基因调控网络.方法 收集鼠疫耶尔森菌基因时间序列表达数据,数据经预处理后,分别用布尔网络模型和S幂率系统网络模型构建小尺度基因调控网络,并对两个网络结构进行比较.结果 应用布尔网络模型构建的小尺度基因调控网络中存在2种基因调控模式,而应用S幂率系统网络模型构建的小尺度基因调控网络中存在4种基因调控模式.结论 S幂率系统可用于构建基因调控网络模型.

    作者:江凌晓;江凌云 刊期: 2011年第09期

  • 胎儿纤维连接蛋白检测在早产预测中临床价值的研究

    目的 研究胎儿纤维连接蛋白(fFN)在广州地区孕妇早产预测中的应用价值.方法 随机选择2008年2月至2009年1月于中山大学孙逸仙纪念医院门诊产检或住院的中晚期妊娠孕妇124例为研究对象.取阴道后穹窿分泌物,应用胎儿纤维连接蛋白快速测试条进行检测,同时取样检测白带常规和细菌性阴道病、支原体、衣原体.记录7d、14d、34周、37周内分娩的情况,追踪妊娠结局.分析敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值.结果 124例患者中,7d、14d、34周、37周内分娩分别为2、4、10、18例,其对应敏感性、特异性、阳性预测价值、阴性预测价值分别为(7 d)100%、77.8%、6.9%、100%,(14 d)75%、78.3%、10.3%、98.9%,(34周)50%、78.9%、17.2%、94.7%,(37周)33.3%、78.3%、20.7%、87.4%.排除18例早产后,fFN阳性者23例,其中下生殖道感染者17例,占73.9%; fFN阴性83例,其中下生殖道感染者18例,占21.7%,两者比较差异具有统计学意义(P<0.05).对出现fFN阳性、有先兆早产症状的患者给予宫缩抑制剂及促胎肺成熟的治疗,取得良好效果.实际发生早产的孕妇18例,约占全部分娩孕妇的14.5%,其中34周内分娩的孕妇10例,占8%,除2例由于分娩时孕周不足28周外,其余分娩的患儿全部存活.结论 中晚孕行fFN检测可预测早产,预测早产的阴性预测价值和近期预测价值均较高,但其阳性预测价值和远期预测价值低,其原因与生殖道感染的干扰有关,对fFN检测阴性者避免过度处理,fFN检测阳性者结合临床及时处理.在整个妊娠期间,需连续监测fFN的变化,及早发现异常,对早产进行早诊断,早治疗,减少围产儿的致病率和死亡率.

    作者:郭仲杰;董涛威;陈慧;付帅;刘颖琳;张建平 刊期: 2011年第09期

  • IL-6预处理保护H2O2致心肌细胞损伤作用机制初探

    目的 初步探讨IL-6预处理对H2O2致心肌细胞氧化应激损伤的作用机制.方法 采用心肌细胞原代培养方法,以H2O2刺激心肌细胞,建立细胞氧化应激模型;采用MTT法检测细胞活力;AnnexinV-FITC染色法和流式细胞术检测细胞凋亡率;检测心肌细胞内谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的表达情况.结果 H2O2可降低心肌细胞存活率并能增加其凋亡,IL-6预处理后能显著改善细胞活力及凋亡情况,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05).低浓度IL-6能明显增加细胞内GSH与SOD的水平,并降低MDA的含量,随着IL-6浓度的增加,这种效应逐渐消失.结论 IL-6预处理能保护H2O2致心肌细胞损伤作用,这可能与IL-6调节细胞GSH、SOD、MDA表达有关.

    作者:周凤华;贾钰华;李丽君;杨萍;李杰 刊期: 2011年第09期

  • 2009H1N1流感病毒神经氨酸酶基因克隆与表达

    目的 制备2009 H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)重组蛋白,为建立H1N1快速检测方法 和神经氨酸酶抑制剂筛选模型奠定基础.方法 采用MDCK细胞方法 分离2009 H1N1流感病毒,提取病毒RNA,RT-PCR生成NA基因,构建原核表达载体PET- 102/D-TOPO-NA,IPTG诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳、Werstern Blotting鉴定重组蛋白.结果 成功分离2009H1N1流感病毒,NA蛋白119、152、275、292位氨基酸分别为Glu、Arg、His和Cys.SDS-PAGE凝胶电泳蛋白分子相对分子质量约为64 000,与预期一致.Western Blotting证实该蛋白具有神经氨酸酶抗原活性.结论 IPTG诱导原核表达神经氨酸蛋白的适浓度为0.1 mmol/L.实验得到的蛋白尚需进一步纯化.

    作者:张玲;魏绍静;肖春花;钟剑波;陈伟烈;张复春 刊期: 2011年第09期

  • 晚期血吸虫病门脉高压症的治疗进展

    由日本血吸虫病引起的门静脉压力增高导致食管胃底静脉曲张和/或出血、脾大及脾功能亢进、腹水等一组综合征称之为晚期血吸虫病门脉高压症.晚期血吸虫病门脉高压症在发病机制 、病理、临床表现及预后等与其它原因引起的门脉高压症有所不同,因而治疗也有其特殊性.本文将重点介绍有关晚期血吸虫病门脉高压症的治疗进展.

    作者:邓维成;杨镇 刊期: 2011年第09期

  • 不同年龄组基孔肯雅热患者的临床表现比较

    目的 分析不同年龄组基孔肯雅热患者的临床表现.方法 130例基孔肯雅热患者,按年龄分为三组:<30岁、30~岁、≥60岁组,分析其临床症状的差异.结果 三组患者均出现发热,皮疹的发生率分别为86.8%、91.4%、90.9%,关节痛的比例分别为86.8%、91.4%、95.5%,关节痛持续时间超过14d的比例分别为2.6%、30.0%、36.4%;与<30岁组比较,30~岁和≥60岁组患者出现关节痛持续时间超过14 d以及累及3个或以上关节的比例高,差异均有统计学意义(x2= 13.026,P=0.001;x2=6.792,P=0.034).结论 基孔肯雅热主要表现为发热、皮疹、关节痛,中、老年组患者出现关节疼痛持续时间较长,累及的关节多.

    作者:翟洁卿;吴福全;黄育波;李鸿超;陈桂轩;林炳亮 刊期: 2011年第09期

  • 阿尔茨海默病早期检查的生物学标志物的研究进展

    阿尔茨海默病(AD)又称老年性痴呆症,是一种多发于老年人,以进行性认知障碍和记忆能力损害为主的中枢神经系统退行性疾病.随着我国人口老年化的加快,AD发病率呈逐年升高的趋势.由于早期临床干预可以改善其预后,故早期诊断就显得尤为重要,本文就该病早期诊断的生物学标志物检测进展予以综述.

    作者:单守勤;张立营;赵权;孙英姿;董洪强 刊期: 2011年第09期

  • 新疆昌吉部分地区动物感染恙虫病东方体调查

    目的 了解新疆昌吉部分地区野生动物自然感染恙虫病东方体(0t)的情况.方法 采用多种方法 捕鼠类,提取DNA,应用巢式PCR检测Ot-Sta56基因;阳性核苷酸序列片段测序,通过美国国家生物技术信息中心网站对基因序列进行BLAST比较分析.结果 共捕获鼠432只、鸟类53只,仅在木垒县的鼠类、鸟类脾样本中检测到阳性片段,感染率分别为5.3%、11.1%;其他县市未检测到阳性.DNA序列分析表明,鼠类、鸟类阳性标本中扩增产物的核苷酸序列相同,碱基长度均为442 bp.BLAST表明目的 基因与Karp型的碱基序列同源性高(98.5%),应属于Karp型.结论 新疆昌吉地区木垒县啮齿类及鸟类动物中可能存在Ot感染.

    作者:任立松;党荣理;刘晓明;高金拽;马德新 刊期: 2011年第09期

  • ABO血型不合对HLA相合异基因外周血干细胞移植的影响

    目的 在非血缘移植比例增加、移植物抗宿主病(GVHD)发生率增加、免疫抑制剂用量加大的情况下,分析ABO血型不合对HLA相合异基因外周血干细胞移植(aUo-BPSCT)的影响.方法 将43例ABO血型不合的allo-PBSCT患者与同期49例ABO血型相合的受者进行比较.结果 ABO血型不合组与相合组输注红细胞量分别为(7.73±7.61)u和(4.33±3.24)u (P=0.040),ABO血型不合组与相合组血红蛋白恢复到100g/L的时间分别为( 54.08±45.24)d和(32.46± 16.95)d(P=0.009).ABO血型不合组较相合组红细胞输注量多,红系恢复时间长.两组间移植相关并发症差异无统计学意义.结论 ABO血型不合不影响造血干细胞移植的植活、主要合并症及预后.ABO血型不合组较相合组红细胞输注量多,红系恢复较慢.

    作者:宋晓玲;孙竞;范志平;刘启发;江千里;李敏 刊期: 2011年第09期

  • 非清髓异基因造血干细胞移植治疗低增生性MDS1例并文献复习

    目的 探讨非清髓性异基因外周血造血干细胞移植治疗低增生性骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效,观察其植入及并发症的发生情况.方法 我院诊断为低增生性MDS患者1例,采用氟达拉滨+阿糖胞苷+环磷酰胺的非清髓预处理方案,环孢素A+甲氨蝶呤+骁悉预防移植物抗宿主病.结果 STR-PCR证实移植后30 d及3个月骨髓植人为完全供者型,移植后3个月发生多发性脑梗塞,6个月出现面部皮疹及口腔溃疡,通过调整免疫抑制剂及输注间充质干细胞(5×107/次,2次)后症状明显好转.结论 非清髓性异基因外周血造血干细胞移植治疗低增生性MDS获得较好的疗效.

    作者:范蕊芳;刘相富;李旭东;林东军 刊期: 2011年第09期

  • 连州市2005-2010年HIV/AIDS流行病学分析

    目的 分析连州市艾滋病流行病学特征,为探讨有效的防制策略提供科学依据.方法 收集连州市2005-2010年艾滋病疫情资料和个案调查表进行描述性流行病学分析.结果 2005-2010年连州市累计报告HIV/AIDS病例50例,其中HIV感染者28例,艾滋病病人22例,累计报告死亡病例11例.疫情主要集中在市中心区域和北部乡镇.男女性别比为3.17:1,年龄介于17~82岁,20~49岁青壮年占74.00%.职业以农民、家务及待业和工人为主,初中及以下文化程度者占70.00%,已婚占64.00%,异性传播占74.00%.其它就诊者检测、术前检测和检测咨询是发现HIV抗体阳性者的主要途径,合计占病例总数的62.00%.结论 连州市艾滋病疫情仍处于低度流行期,传播途径以异性传播为主,必须采取综合性预防控制策略,以遏制艾滋病的扩散和蔓延.

    作者:潘雪梅;陈振波;陈卓彤;邓友良 刊期: 2011年第09期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会